瘤体内注射OK—432和白细胞介素2治疗原发性肝癌的实验研究

本实验分组观察了不同给药方法时，ＯＫ－４３２和白细胞介素２（ＩＬ－２）对荷瘤鼠外周血ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明：ＯＫ－４３２和ＩＬ－２单独瘤体内注射对ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性均有明显增强作用；联合给药时，ＯＫ－４３２和ＩＬ－２可产生明显的协同作用，这种协同作用以先注射ＯＫ－４３２接着注射ＩＬ－２或ＯＫ－４３２、ＩＬ－２同时注射时最强。     

OK—432和IL—2联合用药对C57BL／6小鼠Lewis肺癌的抑制作用及Bc1—2表达的影

目的 研究Ａ组溶血性链球菌冻干生物制剂ＯＫ－４３２联合白细胞介素２（ＩＬ－２）对小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）生长的抑制作用及对Ｂｃ１－２表达的影响。方法 将４０只Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤ＬＬＣ小鼠分４组,分别用生理盐水、ＯＫ－４３２、ＩＬ－２和ＯＫ－４３２联合ＩＬ－２处理,观察用药后肿瘤生长的状况,用抗鼠ｂｃ１－２单克隆抗本进行ＳＡＢＣ免疫组化技术半定量测定Ｂｃ１－２在Ｌｅｗｉｓ肺癌原发灶中的表达。结果 ＯＫ－４３２／ＩＬ－２抑制肿瘤作用强,抑瘤率为６０％,（Ｐ〈０．０５）。对照组中的Ｂｃ１－２的表达明显高于联合用药组（Ｐ〈０．０５）。结论 ＯＫ－４３２与ＩＬ－２有明显的协同抗肿瘤活性,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击,并促进体内多种反应细胞相互作用,其机制可能与抑制Ｂｃ１－２基因的表达、诱导瘤     

重组白细胞介素－2治疗晚期肺癌和肺转移癌

观察了应用小剂量重组白细胞介素－２（ＩＬ－２）静脉点滴治疗晚期肺癌，胸腔内注射治疗肺转移癌。在治疗前后分别测定其自然杀伤细胞（ＮＫ）和淋巴因子活化杀伤细胞（ＬＡＫ）活性。结果显示小剂量ＩＬ－２静脉点滴治疗晚期肺癌有一定疗效，治疗后ＮＫ活性和ＬＡＫ活性显著升高。     

重组白细胞介素—2治疗晚期肺癌和肺转移癌

观察了应用小剂量重组白细胞介素－２（ＩＬ－２）静脉点滴治疗晚期肺癌，胸腔内注射治疗肺转移癌。在治疗前后分别测定其自然杀伤细胞（ＮＫ）和淋巴因子活化杀伤细胞（ＬＡＫ）活性。结果显示小剂量ＩＬ－２静脉点滴治疗晚期肺癌有一定疗效，治疗后ＮＫ活性和ＬＡＫ活性显著升高。     

OK—432联合IL—2抑制C57BL／6小鼠Lewis肺癌的生长及PCNA的表达

目的 研究ＯＫ－４３２与ＩＬ－２抑制Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）生长及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。方法 ４０只Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤ＬＬＣ小鼠,雌雄各半,分４组,分别用生理盐水、ＯＫ－４３２与ＩＬ－２处理,观察用药后对肿瘤生长的抑制及用抗鼠ＰＣＮＡ单克隆抗体进行ＳＡＢＣ免疫组化技术半定量测定ＰＣＮＡ在Ｌｅｗｉｓ肺癌原发灶中的表达。结果 二者联合后明显增强抑瘤率（Ｐ〈０．０５）,对肿     

小檗胺对BALB／c小鼠的免疫调节作用

报告小檗胺对正常ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠体内和体外ＮＫ细胞活性的影响及对ＩＬ－２产生能力的影响。结果表明：小檗胺在２００μｇ／ｍｌ时对小鼠体外ＮＫ细胞活性有明显促进作用，在体内外对ＩＬ－２产生均有促进作用。     

卡介克蟹对人胎胸腺和脾脏细胞LAK活性的调节作用

卡介克蟹是ＢＣＧ的提取物。应用ＭＴＴ法观察了卡介克蟹对人胎儿胸腺和脾脏细胞ＬＡＫ活性的影响，结果显示：人胎胸腺及脾脏细胞经ＩＬ－２诱导后均能产生明显的ＬＡＫ细胞杀伤活性；卡介克蟹能协同增强ＩＬ－２诱导的胸腺及脾脏细胞ＬＡＫ杀伤活性；且卡介克蟹与ＰＨＡ和ＩＬ－２三者联合诱导的ＬＡＫ细胞杀伤活性不仅高于ＰＨＡ和ＩＬ－２和及ＩＬ－２卡介克蟹联合诱导的ＬＡＫ活性，更明显高于仅用ＩＬ－２单独诱导的胸腺和脾细胞ＬＡＫ杀伤活性。提示卡介克蟹可能成为ＬＡＫ治疗中的生物反应调节剂（ＢＲＭ）。     

肺癌常用化疗药物对IL－2诱导LAK细胞活性的影响

选用３Ｈ－ＴｄＲ释放法及掺入法分别检测ＬＡＫ细胞活性、ＬＡＫ细胞增殖功能及９种临床常用肺癌化疗药物对ＬＡＫ细胞抗肿瘤活性的影响。结果显示，不同化疗药物对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性的影响不同，同种化疗药物不同浓度间的影响也有差异。卡铂（Ｃａｒｂｏ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）有增强作用；环磷酰胺（ＣＴＸ）、顺铂（ＣＤＤＰ）、长春新碱（ＶＣＲ）、甲氨喋呤（ＭＴＸ）对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性无明显影响；阿霉素（ＡＤＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）在较高浓度时，抑制ＬＡＫ细胞活性产生。除ＣＴＸ外的８种药物均显著抑制ＬＡＫ细胞增殖功能。实验表明：常规剂量的化疗不会抑制ＬＡＫ细胞活性的产生，５－Ｆｕ、Ｃａｒｂｏ、ＶＰ１６与ＩＬ－２结合抗癌可望产生协同疗效．ＩＬ－２先于化疗给药并维持至化疗后一定时间，其联合抗癌效果可能更佳。     

成纤维细胞介导的白细胞介素2基因疗法的免疫增强作用及其抗肿瘤效果

为了使白细胞介素２（ＩＬ－２）在体内持续有效地发挥生物学效应，作者探讨了成纤维细胞为介导途径的ＩＬ－２基因疗法以及该疗法在小鼠体内的抗肿瘤作用。将基因转染后、高分泌ＩＬ－２的成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋）包裹入胶原后移植入小鼠腹腔内，可使小鼠血清中持续性地存在一定水平的ＩＬ－２，并能非常显著地增强小鼠脾细胞的增殖反应、天然杀伤细胞（ＮＫ）活性和淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性、分泌细胞因子（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、ＩＬ－２）的水平，尤其有意义的是诱导出内源性的ＬＡＫ活性。ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＬ－２＋腹腔内移植后对腹水型肝癌小鼠有较显著的治疗效果，当与ＬＡＫ细胞腹腔内注射联合应用后，治疗效果更佳，表明成纤维细胞介导的ＩＬ－２基因疗法能通过增强机体的免疫功能发挥显著的抗肿瘤作用，而且当其与ＬＡＫ细胞过继回输合用后抗肿瘤作用更强。     

黄芪对小鼠免疫功能的影响

目的：观察黄芪对小鼠免疫功能的影响。方法：通过灌胃给药，建立免疫抑制模型，测定黄芪对三种细胞因子的影响。ＮＫ细胞活性用ＬＤＨ－释放法、ＴＮＦ－α用双抗体夹心法、ＩＬ－２用ＭＴＴ比色分析法测定。结果：黄芪可明显提高ＮＫ细胞活性、ＴＮＦ－α和ＩＬ－２水平。结论：黄芪对免疫功能有正向调节作用。     

OK-432和IL-2联合用药对C57BL/6 小鼠Lewis肺癌的抑制作用及Bcl-2表达的影响

目的 研究A组溶血性链球菌冻干生物制剂OK-432联合白细胞介素2（IL-2）对小鼠C57BL/6Lewis 肺癌（LLC）生长的抑制作用及对Bcl-2表达的影响。方法 将40只C57BL/6荷瘤LLC小鼠分4组,分别用生理盐水、OK-432、IL-2和OK-432联合IL-2处理,观察用药后肿瘤生长的状况, 用抗鼠bcl-2单克隆抗体进行SABC免疫组化技术半定量测定Bcl-2在Lewis肺癌原发灶中的表达。结果 OK-432/IL-2抑制肿瘤作用强,抑瘤率为60%,（P<0.05）。对照组中的Bcl-2的表达明显高于联合用药组（P<0.05）。结论 OK-432与IL-2有明显的协同抗肿瘤活性,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击,并促进体内多种反应细胞相互作用,其机制可能与抑制Bcl-2基因的表达、诱导瘤细胞的凋亡有关。     

Dose-finding study of anti-CD25 antibody for targeting regulatory T cells in locoregional immunotherapy of malignant effusion

Effects of low-dose anti-CD25 antibody on targeting regulatory T (Treg) cells in vitro and in vivo were investigated. Human-mouse chimeric anti-CD25 monoclonal antibody basiliximab was administered into the effusion cavity, followed by locoregional immunotherapy using OK-432 on day 7. Peripheral blood mononuclear cells and effusion lymphocytes (ELs) were collected before and after the basiliximab administration and subjected to further investigations. Surface phenotypes, IFN-gamma production, cytotoxic activity and foxp3 expression of ELs were assessed by flow cytometry, ELISA, 51Cr-releasing assay, and RT-PCR analysis, respectively. We observed that a low concentration of 0.01 microg/ml basiliximab effectively targeted CD4+CD25(bri) Treg cells while preserving CD4+CD25(dim) activated T cells in vitro. This concentration of basiliximab significantly augmented interferon (IFN)-gamma production of ELs when interleukin (IL)-2 was added on day 0 or on day 1 after basiliximab. In the clinical study, intracavitary administration of basiliximab on day 0 followed by OK-432 on day 7 was as safe, well-tolerated, and effective as using OK-432 alone, and a low-dose of 0.002-0.005 mg/kg basiliximab could target CD4+CD25(bri) cells for at least 3 days while relatively preserving CD4+CD25(dim) cells. Foxp3 expression of ELs was not changed definitely by the intracavitary basiliximab. These results suggest that low-dose basiliximab can target Treg cells in vitro and in vivo, and subsequently augment the activation of ELs. Locoregional immunotherapy of malignant effusion using the Treg cell-conditioning regimen with low-dose basiliximab followed by OK-432 administration on day 0 or on day 1 should be evaluated for clinical efficacy in the next phase II trial.     

MyD88在OK-432诱导树突状细胞成熟中的作用

目的探讨小鼠骨髓树突状细胞（Dcs）髓性分化蛋白88（MyD88）在OK-432诱导DCs成熟中的作用机制。方法分离小鼠骨髓单核细胞（BMMCs）,在含10％胎牛血清、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）、重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）的培养体系中诱导培养,所得的细胞即为DCs。于培养的第5天,将细胞分为3组：对照组不加OK-432和MyD88siRNAOK-432组加入终浓度为5μg／mL的OK-432;RNA干扰组加入MyD88siRNA12h后,再加入5μg／mLOK-432刺激。半定量RT-PCR法检测DCs中MyD88的表达;ELISA法检测各组DCs分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和IL-12的能力;MTT法检测DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性。结果OK-432组DCs的MyD88高表达、TNF-α和IL-12释放明显增加并能诱导较强混合淋巴细胞反应,而用MyD88siRNA干扰后以上效应均降低（P〈0．05）。结论靶向MyD88siRNA可明显抑制小鼠DCs中MyD88的表达和OK-432诱导的DCs成熟,表明MyD88介导OK-432诱导的DCs成熟。     

沙培林联合顺铂治疗恶性胸腔积液疗效观察

目的:观察沙培林联合顺铂治疗恶性胸腔积液化气的疗效。方法:将收治的46例恶性胸水患者随机分为两组,治疗组23例采用沙培林加顺铂治疗;对照组23例单用顺铂治疗。结果:治疗组有效率86.9%,对照组有效率65.1%,治疗组的疗效明显好于对照组。结论:沙培林联合顺铂治疗恶性胸腔积液疗效好,毒副作用少,有较高临床应用价值。     

A型链球菌制剂联合顺铂治疗恶性胸水疗效分析

目的探讨胸腔内注入A型链球菌制剂和顺铂治疗恶性胸水的方法和疗效。方法经病理细胞学证实的恶性胸腔积液49例,经采用中心静脉管行胸腔引流术排尽胸腔积液后,随机分两组,治疗组：26例患者采用胸腔内注入顺铂及A型链球菌制剂,对照组：23例患者仅用顺铂胸腔内注入,2周后复查,最多3次观察疗效及毒副反应。结果总有效率：治疗组为84.6%,明显高于对照组的52.2%（P〈0.05）,治疗组仅发热较对照组多,但差异无统计学意义（P〉0.05）。而胃肠道反应,骨髓抑制差异有统计学意义（P〈0.05）。结论A型链球菌制剂与顺铂联合腔内注射治疗恶性胸水是有效低毒可行的方法,较单药顺铂疗效好。     

溶血性链球菌制剂OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导的树突状细胞瘤苗对小鼠前胃癌的抑瘤作用

目的观察溶血性链球菌制剂（OK-432）联合肿瘤冻融抗原诱导的树突状细胞（DCs）瘤苗对小鼠前胃癌的体内抑瘤作用。方法分离小鼠骨髓单个核细胞（BMMCs）,并在含10%胎牛血清、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）、重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或OK-432冲击,透射电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原CD83和CD86的表达情况。建立小鼠前胃癌移植瘤模型,随机分4组,分别从小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS对照组）、未经肿瘤冻融抗原刺激的DCs（BM-DCs组）、经肿瘤冻融抗原刺激的DCs（TL-DCs组）和经OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导的DCs（OK-DCs组）,观察各组小鼠肿瘤体积及质量,并计算抑瘤率。结果于培养的第7天收集各组的DCs,OK-DCs呈典型成熟形态,其表面CD83和CD86的表达率高于BMMCs、BM-DCs、TL-DCs。体内实验显示,OK-DCs组移植瘤生长缓慢,瘤体积和质量均显著小于PBS对照组、BM-DCs组、TL-DCs组,体内抑瘤率为55.32%。结论 OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导DCs成熟的方案制备的DCs瘤苗可明显抑制荷瘤小鼠前胃癌的生长。     

OK-432: An effective sclerosing agent for the treatment of lymphangiomas of head and neck.

Objective: The basic objective of this study was to find out the efficacy of OK-432 for the conservative treatment of lymphangiomas of head and neck regions at the Department of ENT-Head & Neck Surgery of Tribhuvan University Teaching Hospital (TUTH), Kathmandu, Nepal. Methods: It was a hospital based prospective, cross-sectional, case series, conducted among the patients suffering from different lymphangiomas of head and neck regions and treated with intra-lesional injection of OK-432, from March, 2005 to September 2006. Altogether eleven patients were enrolled in this modality of treatment out of which one patient was excluded from the study, which was treated surgically due to very ugly scar at the site of lesion resulting from previous surgery for the same. The data were analyzed by using simple mathematical tools like percentage and frequency. Results: Out of ten patients treated with intralesional injection of OK-432, absolute response, i.e. total resolution of swelling was found in nine patients (90%) after the first dose. Remaining one patient also responded well on the treatment but some residual swelling was in situ for which second dose was given. After the second dose it was also totally resolved. In this way we achieved 100% response after the second dose of OK-432. Conclusion: The results of this study so far indicate that OK-432 is an effective and safe tool for the treatment of lymphangioma of head and neck region. As the procedure can be done in an out patient department, without hospitalization and has got minimal side effects, it can be proposed as the first line treatment of lymphangiomas of head and neck. Key words: Lymphangioma, OK-432, Sclerotherapy, Sclerosing agent, Head and Neck.     

脐血LAK细胞活性的诱导及调节

应用~(51)Cr释放试验研究了人脐血LAK细胞对K562细胞及Raji细胞的杀伤率,以及OK-432、干酪乳酸杆菌对脐血LAK细胞的调节作用。结果表明,rIL-2可诱导人脐血淋巴细胞产生LAK细胞活性,杀伤Raji细胞的能力由10%增至50%,对K562细胞的杀伤力也明显增强,统计学处理有显著意义。培养4天的LAK细胞杀伤力最强,杀伤率随效靶比例的增加而增强。OK-432及干酪乳酸杆菌均能增强rIL-2诱导的脐血LAK细胞的抗瘤活性。     

沙培林联合顺铂治疗恶性胸腔积液的观察与护理

目的:探讨沙培林联合顺铂治疗恶性胸腔积液的临床观察与护理方法,以达到减轻药物毒副反应和提高病人的生存质量的目的。方法:将96例恶性胸腔积液病人,随机分为两组。治疗组:在做好临床观察与护理的同时,胸腔注入沙培林和顺铂前,常规应用地塞米松、止痛剂、止呕剂,以预防药物的毒副反应;对照组:不作预防性用药,待到出现不良反应时做相应处理。分别观察两组毒副反应及体力状况。结果:治疗组发热、胸痛及恶心、呕吐症状发生率分别为12.5%(6/48),10.4%(5/48),10.4%(5/48),均明显低于对照组的31.3%(17/48),27.1%(13/48),25.0%(12/48),两组有显著的统计学差异(P<0.05)。卡氏体力评分≥60分治疗组则明显高于对照组(P<0.01)。结论:在沙培林联合顺铂治疗恶性胸腔积液中,经预防性用药,病人毒副反应轻,机体康复快,容易接受治疗,值得临床推广应用。