过表达Tg737基因对肝癌细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨Tg737基因过表达对人肝癌细胞株细胞周期和凋亡的影响及可能的机制。方法:将肝癌HepG2和MHCC97-H细胞分别用脂质体法转染pcDNA3.1-Tg737质粒(Tg737过表达组)或pcDNA3.1空载体(空载体组),或单纯脂质体孵育(脂质体组),以各自未处理的细胞为空白对照。48h后分别用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡,Hoechst33342染料法检测细胞核形态,Westernblot法检测cyclinA、Bax、Bcl-2表达。结果:与各自的空白对照组比较,Tg737过表达组HepG2和MHCC97-H细胞的S期细胞数量与细胞凋亡率均明显增加(均P0.05),且细胞核均出现明显凋亡形态学改变,同时伴随cyclinA、Bax的表达上调和Bcl-2的下调(均P0.05);空载体组、脂质体组HepG2和MHCC97-H细胞镜下未见明显的凋亡形态学变化,且上述指标差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:Tg737基因过表达可以抑制肝癌细胞周期进程、促进其凋亡,机制可能与Tg737参与调节cyclinA、Bax、Bcl-2有关的信号通路有关。     

雷帕霉素纳米粒对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:观察雷帕霉素( RAPA)聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米微粒(RAPA-PLGA-NPs)对血管平滑肌细胞( VSMCs)增殖的抑制作用.方法:原代培养大鼠VSMCs,并采用α-肌动蛋白免疫组化染色进行鉴定;透射电镜观察VSMCs对RAPA-PLGA-NPs的摄取;分别用MTT法和Western blot法检测RAPA-PLGA-NPs对VSMCs增殖的抑制作用以及RAPA靶蛋白(mTOR)下游蛋白表达的影响,并同时以游离RAPA作为对照.结果:成功培养VSMCs并鉴定;透射电镜显示RAPA-PLGA-NPs可被VSMCs大量摄取于细胞质中;MTT结果显示,RAPA-PLGA-NPs(1,10,100 ng/mL)能浓度依赖性地抑制VSMCs增殖(均P＜0.05),且1 ng/mL的RAPA-PLGA-NPs与10 ng/mL游离RAPA的抑制作用相似(p＞0.05);Western blot结果显示,2个浓度(1,10 ng/mL)的RAPA-PLGA-NPs均能降低VSMCs中S6K1和4E-BP1磷酸化水平,且作用均较游离RAPA( 10 ng/mL)明显.结论:RAPA-PLGA-NPs穿透力强,能迅速被细胞摄取,生物学效应明显强于其游离药物.     

雷帕霉素联合罗格列酮对脓毒症大鼠肺损伤的影响

目的 评价雷帕霉素联合罗格列酮对脓毒症大鼠肺损伤的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠120只,2月龄,体重250～ 300 g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=24):假手术组(S组)、盲肠结扎穿孔组(CLP组)、雷帕霉素组(RPM组)、罗格列酮组(RGZ组)和雷帕霉素+罗格列酮组(RPM+ RGZ组).CLP组、RPM组、RGZ组和RPM+ RGZ组采用盲肠结扎穿孔术法制备大鼠脓毒症模型.术前30 min RPM组于皮下注射雷帕霉素0.4 mg/kg,RGZ组股静脉注射罗格列酮0.3 mg/kg,RPM+ RGZ组皮下注射雷帕霉素0.4 mg/kg联合股静脉注射罗格列酮0.3 mg/kg,CLP组给予等容量生理盐水.于术后2、6、24和48 h时分别处死6只大鼠,取肺组织,行HE染色,光镜下观察,进行肺损伤评分;采用分光光度法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;采用凝胶阻滞电泳分析法检测肺组织信号转导和转录激活因子3(STAT3) DNA结合活性.结果 与S组比较,CLP组、RPM组、RGZ组和RPM+ RGZ组肺损伤评分、肺组织MPO活性和STAT3 DNA结合活性升高(P＜0.05);与CLP组比较,RPM组、RGZ组和RPM+ RGZ组肺损伤评分、肺组织MPO活性及STAT3 DNA结合活性降低(P＜0.05);与RPM组及RGZ组比较,RPM+ RGZ组肺损伤评分、肺组织MPO活性及STAT3 DNA结合活性降低(P＜0.05).结论 与雷帕霉素或罗格列酮单独用药比较,二者联合应用减轻脓毒症大鼠肺损伤的效应更明显,其机制与抑制STAT3信号通路激活有关.     

上调miR-449a表达对肝癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的:探讨miR-449a在肝癌(HCC)细胞中的表达及其对HCC细胞生物学行为的影响。方法:用qRT-PCR检测miR-449a在正常肝细胞L02和4种HCC细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)的表达。用脂质体法将miR-449a模拟物或阴性对照序列转染HCC细胞后,分别用CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室实验检测细胞增殖、细胞周期、侵袭能力的变化,并观察以上两种不同转染的HCC细胞在裸鼠体内的成瘤情况。结果:miR-449a在4种HCC细胞株的表达水平均明显低于L02细胞(均P0.05),其中在Bel-7402细胞表达的水平最低。与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞增殖活性明显降低、G_1/S期阻滞明显增加、穿室细胞数明显减少(均P0.05);与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞在裸鼠体内成瘤后的移植瘤质量与体积均明显减小(0.748 g vs.1.234 g;33.667 mm~3 vs.1 400.500 mm~3,均P0.05)。结论:HCC细胞中miR-449a表达降低,上调miR-449a表达可以抑制HCC细胞在体内外的生长。     

分泌型凋亡素真核表达载体的构建及对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的 构建含有NT4和HA2-TAT的分泌型VP3真核表达载体,并观察其表达对人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3的影响.方法 构建了含鸡贫血病毒VP3基因和NT4、HA2-TAT基因的分泌型真核表达载体--NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体.体外转染人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3,用MTT法和流式细胞学,检测凋亡素融合基因诱导细胞凋亡的效果.结果 携带融合基因的重组腺相关病毒感染人肝癌HepG2细胞48 h后,显示了很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力.而对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞无明显凋亡作用.结论 分泌型NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体转染细胞后能够被正常分泌、穿膜并特异性诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供了新的思路.     

马钱子对人肝癌细胞生长的影响及其作用机制

目的 探讨马钱子对人肝癌细胞生长影响及作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,分别加入5％、10％、20％的马钱子药物血清,噻唑蓝(MTT)比色法测定对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用.20％马钱子药物血清作用肝癌细胞SMMC-77210、24、48 h后,分别收集细胞,提取蛋白和总RNA,应用Westem blot和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Fas、Cyclin D1、PCNA蛋白和mRNA表达.结果 20％马钱子药物血清对人肝癌细胞72 h的生长抑制率为(54.94±8.19)％,与5％、10％浓度抑制率(19.928±7.653)％、(29.020 ±6.100)％比较差异有统计学意义(F=18.23,P＜0.01).药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Fas蛋白表达分别为(0.302±0.009)、(0.399±0.021),与对照组(0.226±0.022)比较,差异有统计学意义(F=68.25,P＜0.05);药物血清作用48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 PCNA蛋白表达为(0.7457±0.0386),与对照组、24 h(0.8529±0.0099、0.9016±0.0139)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1 mRNA表达分别为0.045 680 ±0.038 130、0.026 714±0.019934,与对照组(0.145246±0.048543)比较,差异有统计学意义(F=8.671,P＜0.05);药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1蛋白表达,PCNA、Fas mRNA表达变化差异无统计学意义(F =68.25,P＞0.05).结论 马钱子具有抑制人肝癌细胞增殖作用,其抑制效应与药物血清浓度成正相关;通过上调肝癌细胞Fas蛋白和下调PCNA蛋白及Cyclin D1 mRNA表达,是马钱子抑制肝癌细胞增殖的机制之一.     

野生型Parkin基因对肝癌细胞生长的影响

目的 探讨野生型及突变型Parkin基因表达对人肝癌细胞株Huh-7在体内外生长情况的影响.方法 利用脂质体介导的基因转染法将野生型及突变型Parkin基因真核表达载体转染肝癌细胞株Huh-7,筛选稳定表达细胞株,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行鉴定并送测序分析.细胞增殖实验和裸鼠致瘤性实验检测各稳定表达株的体内外生长情况.结果 成功建立了稳定表达野生型和突变型Parkin基因的Huh-7细胞株.以转染空载体的Huh-7细胞作为对照,野生型Parkin基因的表达可明显抑制肝癌细胞在体外的生长(t=3.875,P=0.031),可显著减缓裸鼠皮下瘤的生长速度并减小其体积(t=8.228,P=0.003).突变型Parkin基因的表达对肝癌细胞的生长影响不大(P＞0.05).结论 野生型Parkin的重表达有助于肝癌细胞恶性表型的逆转.野生型Parkin基因是一个肝癌相关的抑癌基因.     

分泌型凋亡素真核表达载体的构建及对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的 构建含有NT4和HA2-TAT的分泌型VP3真核表达载体,并观察其表达对人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3的影响.方法 构建了含鸡贫血病毒VP3基因和NT4、HA2-TAT基因的分泌型真核表达载体--NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体.体外转染人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3,用MTT法和流式细胞学,检测凋亡素融合基因诱导细胞凋亡的效果.结果 携带融合基因的重组腺相关病毒感染人肝癌HepG2细胞48 h后,显示了很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力.而对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞无明显凋亡作用.结论 分泌型NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体转染细胞后能够被正常分泌、穿膜并特异性诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供了新的思路.     

分泌型凋亡素真核表达载体的构建及对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的 构建含有NT4和HA2-TAT的分泌型VP3真核表达载体,并观察其表达对人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3的影响.方法 构建了含鸡贫血病毒VP3基因和NT4、HA2-TAT基因的分泌型真核表达载体--NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体.体外转染人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3,用MTT法和流式细胞学,检测凋亡素融合基因诱导细胞凋亡的效果.结果 携带融合基因的重组腺相关病毒感染人肝癌HepG2细胞48 h后,显示了很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力.而对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞无明显凋亡作用.结论 分泌型NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体转染细胞后能够被正常分泌、穿膜并特异性诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供了新的思路.     

分泌型凋亡素真核表达载体的构建及对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的 构建含有NT4和HA2-TAT的分泌型VP3真核表达载体,并观察其表达对人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3的影响.方法 构建了含鸡贫血病毒VP3基因和NT4、HA2-TAT基因的分泌型真核表达载体--NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体.体外转染人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3,用MTT法和流式细胞学,检测凋亡素融合基因诱导细胞凋亡的效果.结果 携带融合基因的重组腺相关病毒感染人肝癌HepG2细胞48 h后,显示了很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力.而对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞无明显凋亡作用.结论 分泌型NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体转染细胞后能够被正常分泌、穿膜并特异性诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供了新的思路.     

蓝莓花青素对HepG2细胞凋亡及组蛋白乙酰化修饰的影响

目的:探讨蓝莓花青素对人肝癌HepG2细胞凋亡及组蛋白乙酰化修饰的影响。方法:从贵州麻江蓝莓中提取花青素,用高效液相色谱法检测花青素的含量并鉴定。观察蓝莓花青素孵育后,HepG2细胞的形态变化、细胞增殖与凋亡情况,以及细胞组蛋白H3K9、H3K14、H3K18、H3K27乙酰化修饰的情况。结果:与无处理的对照组HepG2细胞比较,不同浓度蓝莓花青素(50、100、150、200、300μg/mL)处理HepG2细胞48 h后,HepG2细胞体积明显缩小,细胞增殖明显抑制(均P0.05),凋亡明显增加,且作用呈随浓度增加而增强;不同浓度蓝莓花青素(50、100、200μg/mL)孵育48 h后,HepG2细胞组蛋白H3K9、H3K14、H3K18、H3K27乙酰化修饰明显增加(均P0.05),且呈浓度依赖性。结论:蓝莓中花青素对HepG2有抑制增殖的作用,其机制可能通过增加组蛋白乙酰化修饰而促进细胞凋亡有关。     

水通道蛋白9 对肝癌细胞迁移能力的影响

目的：通过油酸诱导肝癌HepG2细胞水通道蛋白9（AQP9）的表达观察后者对HepG2细胞株迁移能力的影响。 方法：HepG2细胞经不同处理后（0、250、500 μmol/L油酸处理或AgNO3+500 μmol/L油酸处理）,用Western blot法检测AQP9蛋白的表达,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。 结果：经油酸处理后,HepG2细胞AQP9蛋白表达增加,细胞迁移能力增强,且呈浓度依赖性（均P<0.05）,油酸的上述作用被预先给予水通道蛋白抑制剂AgNO3所取消。 结论：肝癌HepG2细胞的迁移能力与其AQP9表达有关,AQP9表达越高细胞的侵袭力越强。     

下调CD133表达对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨下调CDl33基因的表达对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将合成的CDl33小干扰核糖核酸分子(si RNA)转染至肝癌SMMC7721细胞并检测转染效率;分别以无转染与转染随机si RNA序列的SMMC7721细胞为空白对照和阴性对照,观察CDl33 si RNA转染后CDl33基因沉默效果,以及SMMC7721细胞主要生物学行为的变化。结果:转染24 h后,转染效率可达到(80.8±9.1)%;与空白对照组比较,CDl33 si RNA转染后的SMMC7721细胞CD133 m RNA及蛋白表达量分别降至空白对照组的10%与35%、细胞增殖活性明显降低、细胞凋亡率明显增加(41.3%vs.25.3%)并出现明显的S期阻滞,集落形成能力明显降低(均P0.05)。阴性对照组与空白对照组各指标无统计学差异(均P0.05)。结论:CDl33在肝癌细胞中可能起了癌基因作用,下调其表达能抑制肝癌的恶性生物学行为。     

抑制survivin 表达对肝癌细胞阿霉素化疗敏感性的影响

目的:探讨survivin基因沉默对人肝癌耐药株阿霉素化疗敏感性的影响.方法:针对人survivin基因设计并合成3条siRNA序列,分别用脂质体法转染人肝癌BEL-7402细胞(3组).以未转染的BEL-7402细胞为对照,分别用RT-PCR法,免疫细胞化学技术及MTT法检测各组细胞survivinmRNA与蛋白的表达,及对阿霉素敏感性.结果:与对照组比较,各转染组细胞survivin mRNA与蛋白的表达均明显降低(均P＜0.05);对照组细胞对阿霉素的IC50值为(20.60±2.86) μg/mL,各转染组细胞对阿霉素的IC50值分别为(11.53±1.46) μg/mL,(14.13±1.82) μg/mL,(15.53±0.46) μg/mL,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:抑制survivin基因的表达能增加BEL-7402细胞阿霉素化疗敏感性.     

氯喹对肝癌细胞体内外生长的影响及其与自噬的关系

背景与目的:氯喹是一种广泛应用于疟疾、类风湿性疾病治疗的药物,同时还是一种自噬抑制剂,而且多项研究表明,氯喹能抑制包括肝癌在内的多种肿瘤细胞的生长。本研究在体外细胞实验与荷瘤鼠模型上进一步观察氯喹对肝癌的抑制作用及其与自噬的关系。方法:不同浓度的氯喹(0、25、50 μmol/L)体外作用于肝癌Huh7细胞后,用MTT法检测细胞的增殖情况。将75只裸鼠皮下接种Huh7细胞建立肝癌裸鼠移植瘤模型后,随机均分为3组,于接种后7 d(均已成瘤)分别腹腔注射生理盐水(对照组)、25 mg/kg氯喹(低剂量氯喹组)、50 mg/kg氯喹(高剂量氯喹组),1次/d,连续30 d。期间记录各组肿瘤生长情况,实验结束时,收集移植瘤标本,分别用免疫组化与Western blot法检测移植瘤内自噬相关蛋白(LC3、p62)的表达。结果:MTT检测结果显示,与对照组比较(0 μmol/L),两个浓度氯喹均能明显抑制肝癌Huh7细胞的增殖,并呈明显的时间、浓度效应(均P0.05)。荷瘤鼠模型中,两个剂量氯喹组的肿瘤生长均较对照组明显抑制,且高剂量氯喹组较低剂量氯喹组的肿瘤生长抑制更为明显(均P0.05);免疫组化与Western blot结果显示,两个剂量氯喹组肿瘤组织中LC3、p62的表达水平均较对照组明显升高,且高剂量氯喹组的升高水平明显大于低剂量氯喹组(均P0.05)。结论:氯喹体外与体内均能抑制肝癌细胞的生长,其作用机制可能与其调节自噬相关蛋白的表达抑制肝癌细胞自噬有关。     

DHA对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对人肝癌细胞株Bel-7402增殖和凋亡的影响及其机制。方法：用不同浓度的DHA（0,25,50,100,200 μmol/L）分别作用人肝癌Bel-7402细胞24,48,72 h后,用MTT法检测细胞的增殖情况、Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,并分别用流式细胞仪、real-time PCR和caspase-3活性检测试剂盒检测上述梯度浓度的DHA作用 Bel-7402细胞48 h后的凋亡情况、Bim基因表达和caspase-3活性。结果：不同浓度、不同时间DHA作用后,Bel-7402细胞增殖明显抑制,呈浓度和时间依赖性（均P<0.05）;细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低,呈明显浓度依赖性（均P<0.05）,但无明显时间依赖性（均P>0.05）。不同浓度DHA作用48 h后,Bel-7402细胞凋亡率、Bim基因表达和caspase-3的活性均明显增加,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。结论：DHA可抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

miR-18a-3p在肝癌中的表达及其调控ADCY1表达对肝癌细胞侵袭及增殖的影响

背景与目的 研究表明多种microRNA（miRNA）可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用,其作用机制仍值得进一步研究和探讨。因此,本研究从已报道的肝癌差异表达miRNA中进一步筛选关键miRNA,并验证和探讨其作用机制。方法 从已发表的研究中筛选出肝癌组织及肝癌患者血清/血浆中与正常肝组织及正常血清/血浆中共同的差异表达miRNA;用qRT-PCR在正常肝细胞与肝癌细胞中对筛选出的目标miRNA表达情况进行验证;用过表达和抑制的方法观察目标miRNA对肝癌细胞侵袭能力（Transwell实验）与增殖能力（MTT实验）的影响,以及在30例临床标本中检测目标miRNA的表达并通过KM plotter网站分析其对肝癌患者生存的影响;通过miRDB和GEPIA数据库预测和分析目标miRNA的靶基因,并用逆转实验和双荧光素酶报告实验进一步验证。结果 在肝癌组织（vs.正常肝组织）及肝癌患者血清/血浆（vs.正常人血清/血浆）中共同高表达的miRNA有4个（miR-18a-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-224-3p）,共同低表达的miRNA有2个（miR-26a-3p、miR-125b-3p）。qRT-PCR实验证实,与正常肝细胞比较,miR-18a在肝癌细胞中高表达,miR-26a在肝癌细胞中低表达（均P<0.05）。过表达/抑制miR-18a-3p表达能促进/降低肝癌细胞的侵袭及生长能力（均P<0.05）,而过表达/抑制miR-26a-3p对肝癌细胞的侵袭及生长能力影响无不法确定。分析结果显示,ADCY1是miR-18a-3p的靶基因,过表达ADCY1能部分逆转miR-18a-3p对肝癌细胞的上述作用,同时,表达上调的miR-18a-3p能通过结合到ADCY1 mRNA 3''UTR抑制ADCY1的表达。结论 miR-18a-3p可能在肝癌的发生发展中起了关键作用,其在肝癌中表达上调,并能通过抑制下游靶基因ADCY1的表达增强进肝癌细胞的侵袭和增殖能力。     

姜黄素对HepG-2细胞增殖与凋亡的影响

目的：检测姜黄素对肝癌HepG-2细胞增殖及细胞凋亡的作用,以及对核转录因子κB（NF-κB）表达的影响。方法：不同浓度（10,25,50,100 μmol/L）姜黄素处理肝癌HepG-2细胞不同时间后（16,24,48 h）,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;50 μmol/L的姜黄素处理HepG-2细胞24 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同浓度（10,25,50,100 μmol/L）姜黄素处理肝癌HepG-2细胞24 h后,用Western blot方法检测NF-κB p65蛋白的表达。结果：姜黄素能明显抑制HepG-2细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性（均P<0.05）;姜黄素作用后,HepG-2细胞凋亡率较对照组明显增高（P<0.05）;姜黄素能浓度依赖性抑制地HepG-2细胞 NF-κB p65蛋白的表达。结论：姜黄素能抑制HepG-2细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能系通过阻断NF-κB信号通路有关。

     

二甲双胍对肝癌细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的 观察二甲双胍对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡及裸鼠皮下瘤生长的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法分别检测二甲双胍作用于细胞后其细胞活力及生长抑制率;流式细胞术检测二甲双胍作用后细胞周期时相、凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白的表达;将Hep-G2细胞接种于裸鼠,观察不同浓度二甲双胍对裸鼠皮下瘤生长的影响.结果 20mmol/L二甲双胍作用细胞48h时,细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(20.57±3.16)%;Western blot检测显示bcl-2、bcl-xl蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,Bid蛋白表达随着药物浓度增加而增加.高剂量二甲双胍组及联合用药组裸鼠皮下瘤体积显著小于对照组,20d时两组抑瘤率分别为40.8%、72.8%.结论 二甲双胍通过线粒体介导的凋亡通路途径来诱导人肝癌细胞发生凋亡,并抑制肝癌细胞裸鼠瘤生长.

Abstract：

Objective To investigate the effect of metformin on proliferation, apoptosis of Hep-G2 cells and tumor growth in nude mice. Methods Hep-G2 cells were treated with metformin at different concentrations, and cell viability was measured by using methyl thiazol tetrazolium (MTT) method. Cell cycle and apoptosis rate were assayed by flow cytometry. The expression of apoptosis-related protein were detected by Western blotting.Nude mice were transplanted with Hep-G2 cells, and tumor growth inhibition rate was detected. Results After Hep-G2 cells were treated with 20 mmol/L metformin for 48 h, the growth cycle was arrested in G0/G1 phase, the apoptosis rate was (20.57±3.16)%, the expression of bcl-2 and bcl-xl proteins was down-regulated after metformin treatment, while the Bid protein was significantly increased, tumor size in the high-dose metformin group, cisplatin combined with metformin group were significantly reduced as compared with control group, and the inhibition rates in the high-dose metformin group, cisplatin combined with metformin group was 40.8% and 72.8% respectively. ConclusionMetformin inhibits proliferation of Hep-G2 cells, and induces apoptosis in vitro and significantly inhibits the growth of hepatocellular carcinoma in nude mice.     

西罗莫司对肝癌肝移植术后肿瘤复发的抑制作用

目的探讨联合西罗莫司的联合免疫抑制方案对肝癌肝移植术后肿瘤复发的抑制作用。方法选用Wistar大鼠40只,建立大鼠肝癌肝移植术后肿瘤复发模型,实验组予(SRL MP CSA),对照组(MP CSA),观察60 d,死后剖腹探查取病理检查。对比结果。结果实验组荷瘤大鼠荷瘤肝重为(12.5±0.2)g,较对照组(14.4±0.3)g轻,差异有统计学意义(P<0.05);实验组荷瘤大鼠荷瘤肝重比为(0.0613±0.0006),较对照组(0.0708±0.0013)小,差异有统计学意义(P<0.05);实验组复发率为90%,对照组为95%,差异无统计学意义(P>0.05);实验组生存时间为(25.0±1.9)d,对照组为(14.8±2.3)d,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠PCNA指数为(64.1±2.1)%,较对照组(80.8±1.0)%低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用联合西罗莫司的联合免疫抑制方案虽然对肿瘤复发率改善不明显,但能够有效抑制肿瘤的生长速度、延长带瘤生存时间。