脐血HLA-AB分型方法探讨

目的 探讨脐血HLA-AB分型方法。方法 分别采用血清学方法和PCR-SSP基因定型方法对102份脐血HLA-A、B位点进行检测。结果 两方法对比分析结果显示血清学近18.6%不能得出满意结果，HLA-A、B位点错定率分别为6.1%和10.8%，总错误率16.9%。结论 脐血HLA表达水平低，单个核细胞反应弱及部分交叉反应是造成血清学不能确定或错定的主要原因。     

影响脐血HLA分型因素的探讨

脐血造血干细胞因其独特的生物学特性 ,来源丰富等特点 ,是一个具有潜力的造血干细胞来源 ,但供受体之间ＨＬＡ的配合程度仍是影响移植成功的重要因素。人们在采用外周血做ＨＬＡ分型方面已积累了一些经验 ,但是否适用于脐血的ＨＬＡ分型 ?为此 ,我们随机采集了 15份足月顺产的新生儿脐血 ,根据脐血的特点对细胞分离等容易影响ＨＬＡ分型的因素进行改进 ,完善脐血的ＨＬＡ分型方法 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　脐血采集　采用密闭式采血法 ,胎儿娩出后 ,立即穿刺脐静脉抽取 ,ＡＣＤ抗凝 ,2 4ｈ内完成细胞的分离。1 2　试剂　ＨＬＡ Ⅰ…     

脐血HLA-Ⅰ类抗原血清学分型与基因分型的比较研究

目的　探讨血清学分型方法在脐血HLA分型中的应用价值。方法　对 180 0份脐血的HLA AB分型结果进行分析 ,并与其中随机抽取的 36份标本的聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)分型结果进行比较分析。血清学分型分别以T免疫磁珠和淋巴细胞分层液分离细胞。结果　T免疫磁珠分离的T淋巴细胞比淋巴细胞分层液分离的单个核细胞活性更好 ;体外搁置时间较长 (2 4～48h)的脐血须用T免疫磁珠分离细胞 ;与外周血单个核细胞相比 ,脐血细胞的血清学反应强度偏低。除 2 8份因细胞分离后量少或活性低外 ,1772份脐血标本的HLA AB血清学分型中 17.5 % (310份 )有不能确定的抗原 ,其主要原因依次为交叉反应及部分分型试剂特异性不高、部分抗原反应弱、细胞活性低所致的高本底及非特异反应。 36份标本PCR SSP分型均获成功 ,与之对照 ,血清学分型有 16 .8%的错误率 ,13.9%分辨率低于PCR SSP分型。结论　血清学分型方法虽快速简便 ,但有一定的误差 ,用基因分型作为补充是必要的。     

脐血HLA分型的影响因素

脐血含丰富的造血干细胞,造血干细胞移植是治疗多种危重疾病患者的有效手段。收集脐血造血干细胞移植自１９８９年第１例ＨＬＡ全相合同胞获成功起,至今全世界已超过２３８例。脐血移植前的ＨＬＡ分型是决定其移植成功的重要环节之一。然而由于脐血在收集过程中时间、部...     

寡核苷酸芯片用于HLA-A基因分型的研究

目的 应用寡核苷酸芯片分型方法，对HLA-A基因进行分型研究。方法 采用不对称PCR方法，扩增HLA-A基因的第2，3外显子，荧光标记扩增产物，作为杂交模板。设计分型检测寡核苷酸探针，制备HLA-A基因分型检测芯片。采取差异选择法，筛选强杂交信号和高特异性的分型探针。探索了探针长度、探针位置等对杂交信号的影响。杂交结果经荧光扫描，并用分型软件分析判断阳性探针和HLA-A基因型。结果 30例临床样本芯片分型结果与PCR-SSP及DNA测序分型结果相符。结论 采用寡核苷酸芯片技术对HL-A基因分型是种好的方法，具有测速快、成本低、高通量的优点。     

脐血干细胞移植的现状与我国建立健全脐血干细胞库的对策

造血干细胞移植(HSCT)已被广泛地应用于各种恶性血液病、实体肿瘤、遗传性疾病、重症联合免疫缺陷病以及重度放射病等顽疾的治疗中,并已公认是医治上述疾病最有效的手段之一.     

HLA-A、B、DR血清学分型与基因分型的比较研究

目的比较研究HLA-Ⅰ、Ⅱ血清学分型与基因分型结果,分析HLA-A、B、DR血清学分型误定规律,提高移植配型的准确性。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对240名骨髓资料库中已用血清学分型的自愿者进行HLA-A、B、DR基因分型,并对血清学分型与基因分型结果进行低分辨水平的比较研究。结果HLA-A特异性血清学分型错误率在纯合子与杂合子中分别占30.65%与11.52%,总错误率14.35%;HLA-B特异性血清学分型错误率在纯合子与杂合子中分别占42.22%与16.15%,总错误率18.85%;HLA-DR特异性血清学分型错误率在纯合子与杂合子中分别占37.50%与14.58%,总错误率18.63%。HLA-A特异性血清学分型假阴性16.55%,假阳性1.44%,错误指认特异性7.42%,HLA-B分别为20.32%,1.84%和13.56%,HLA-DR分别为13.33%,2.21%和10.05%。结论HLA-A、B、DR纯合子血清学分型错误率明显高于对应的杂合子分型,HLA-B,DR特异性血清学分型错误率显著高于HLA-A特异性;为了提高移植配型的准确性,骨髓资料库中自愿者HLA-A、B、DR位点须重新用基因分型方法分型。     

天津地区3000份脐血HLA-DR等位基因多态性分析

目的　了解天津地区汉族人群HLA DR位点基因多态性和HLA单倍型特点。方法　采用反向聚合酶链反应 序列特异性寡核苷酸探针 (PCR SSOP)杂交的方法 ,对来源于天津地区汉族产妇的 30 0 0份脐血进行HLA DR位点基因分型 ,对分型结果进行分析 ,并与欧洲白种人、西安汉族人群进行比较。结果　天津地区HLA DR等位基因以DRB1 15最为常见 ,其后依次为DRB1 0 9,DRB1 0 7,DRB1 12和DRB1 0 4。主要单倍型依次为A 0 2 DRB1 0 9,A 0 2 DRB1 15 ,B 13 DRB1 0 7,A 0 2 DRB1 12 ,A 30 DRB1 0 7,B 4 6 DRB1 0 9。DRB1 12和DRB1 0 9在天津地区汉族人群中出现频率明显高于欧洲白种人 ,而DRB1 0 1与DRB1 0 3则明显低于欧洲白种人 ,与西安地区汉族人群比较 ,本资料除DRB1 0 4 ,DRB1 13低以外 ,其余均无显著差异。结论　天津地区汉族人群HLA DR位点等位基因多态性与北方汉族人群 (如西安 )分布相近。     

PCR-SSP行HLA-DR分型在脐血库中的应用

目的 寻找一种简便、有效的方法对脐血样本作HLA-DR分型。方法 采用异硫氰酸胍法抽提DNA,应用PCR-SSP方法进行HLA-DR分型。结果 检出DRB1等位基因15个,未见DRl3．2。结论 异硫氰酸胍法抽提DNA快速、简便,PCR-SSP方法行HLA-DR分型准确、可靠,能用于脐血标本的HLA-DR分型。     

脐血红细胞的渗透性特点

近年来,脐血作为造血干细胞来源已成为研究热点[1,2],脐血中含有高于成人的红细胞、血红蛋白、血小板,有更年青的红细胞[3],还含有多种造血因子[4],具有巨大的潜在临床应用价值,脐血输注辅助治疗已在国内使用[5,6].笔者在开发、研究脐血资源的过程中,为进一步了解脐血红细胞,尤其是年轻红细胞的特点做了一些实验,发现脐血红细胞的渗透脆性与正常成人红细胞的渗透脆性有明显的不同之处,现报告如下.     

脐带血HLAⅠ类定型研究

分别采用血清方法和PCR-SSP基因定型方法对102份脐带血HLA-A,-B位点进行了检测,经对比分析结果显示血清学近18.6%不能得出满意结果,HLA-A,-B位点错定率分别在6.1%和10.8%,总错误率16.9%。我们设计了16条引物,以PCR-SSP方法特异性扩增B15等位基因,并与血清学做了比较,发现大多数B15裂解物的血清学检测结果是错误的。     

HLA-B27 PCR-SSP基因分型及血清学结果比较

采用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术检测３９份样本的ＨＬＡ－Ｂ２７基因并研究甘油在Ｂ２７基因扩增中的作用，同时与血清学结果比较。７份样本血清学难以判定结果或与ＰＣＲ结果不一致。ＰＣＲ技术与血清学方法比较有快速、简便、准确性高等优点。     

HLA 高分辨分型在非亲缘双份脐血移植中的应用价值简

本研究探讨人类白细胞抗原（HLA）高分辨在脐血移植中的应用价值及对移植预后的影响.对34名患有恶性血液病患者行非亲缘双份脐血移植,采用DNA序列测序方法（SBT）、序列特异性寡核苷酸探针（SSOP）和高分辨序列特异性引物（SSP）分型方法,对供、患者双方行低分辨HLA-A,B,DRB1及高分辨HLA-A,B,Cw,DRB1,DQB1配型,对比分析其在优势脐血植入、造血重建时间、急性移植物抗宿主病（aGVHD）及移植后感染之间的差异.结果表明,总有核细胞（TNC）中位数为6.0×10 7/Kg,当TNC≥5×107/kg时,可缩短中性粒细胞植入时间（P＜0.05）,HLA高分辨（6-10）/10组在脐血优势植入、血小板植入时间、aGVHD发生方面优于（4-5）/10组（P＜0.05）.高分辨HLA-Ⅰ＋Ⅱ类位点错配、HLA-DRB1、DQB1位点不合,能延长血小扳植入时间（P＜0.05）.低分辨HLA （5-6）/6组与4/6组相比,在优势脐血植入无显著性差异（P＞0.05）,但在血小板植入时间及aGVHD的发生方面HLA-5/6优于4/6组（P＜0.05）.供受体性别、血型等对造血重建、优势脐血重建、GVHD的发生均未见统计学差异及与血小板及中性粒细胞植入时间均无相关性.结论：对非亲缘脐血移植受体和移植物进行HLA高分辨配型有利于遴选最佳脐血,在促进造血重建及降低移植后并发症方面具有重要的临床应用价值.     

应用PCR—SSP进行HLA—AB基因分型及与血清学方法的比较

目的 建立HLAⅠ类基因分型技术并应用于骨髓七配型。方法 采用序列特异性聚合酶链反应（PCR－SSP）进行HLA－AB基因分型，并与HLAⅠ类血清学分型（微量淋巴细胞毒试验）进行比较。结果 运用PCR－SSP技术共对22例需骨髓移植的病人和48例供者进行基因分型，2例病人确认了HLA 新缘骨髓供者，其中1 已成功进行了骨髓移植；基因分型和血清分型比较，43例结果完全一致（61.4%），血清分型错误率高达38.6%(27/70)。结论 PCR－SSP分型技术具有准确性高，简便快速等优点，将取代传统的血清学方法。     

脐血库HLA匹配机率分析

对广州脐血库 1998年以来保存的 30 0 0份脐血和 10 6 0名患者进行回溯分析 ,分析患者在脐血库中搜寻非亲缘脐血的HLA匹配结果 ,以探讨患者找到适于移植的非亲缘脐血的可能性。结果表明 ,6 /6HLA全相合的患者有 119人 (11.2 3% ) ,4 /6以上相合的患者高达 992人 (93.5 8% )。其中 ,分别有 6 1.2 9% ,89.79%的患者可以找到总有核细胞 (TNC)剂量≥ 3.7× 10 7/kg ,≥ 2 .0× 10 7/kg的 4 /6以上HLA相合脐血 ,相应的体重最高者分别为 79kg和 175kg。结论 :脐血库容量在 30 0 0份以上就可以有HLA 93%的匹配率。由于不同体重对脐血TNC数量要求更高 ,广州脐血库能够满足 30 % - 80 %成人患者的需要。在为患者寻找造血干细胞移植非亲缘供者时 ,无论成人或儿童患者 ,在寻找骨髓供者的同时 ,都有必要寻找适宜的脐血供者。     

中国人HLA-A和B位点血清学分型错误的分析

对27例HLA—A和—B位点血清学分型错误进行分析。结果表明，HLA—A和—B位点的误检型错误均高于漏检型错误(P＜0．05)，A和B位点分型间别无显差别。中国人分型错误频率高的有A1(66．7％)，A3(50.0％)，A11(13．5％)，A9(11．8％)和A19(7．1％)及B16(50．0％)，B48(43．9％)，B15(16．7％)，B40(11．1％)，B13(10．0％)和B17(9．1％)等抗原。结论：血清学分型方法应与基因分型技术互为补充。     

新生儿脐血AB0血型鉴定结果质量控制方法探讨

本研究探讨一种新生儿脐带血ABO血型鉴定的质量控制方法。采用血型血清学试验对脐血标本作ABO血型鉴定,对不能定出结果的疑难血型采用聚合酶链反应-序列特异性引物（Sequence Specific Primer PCR,PCR—SSP）作进一步确认。结果表明：在76120例脐血AB0血型正定型鉴定中,检出78例ABO血型弱抗原反应和难以判定血型结果的疑难标本（1％。）,经复查排除了弱凝集反应30例。检测260例脐血ABO血型反定型,相符血型148例（56．92％）,不相符血型112例（43．08％）。PCR—SSP基因分型检测58例中45例血清学表型结果与基因分型结果一致,3例表型结果与基因定型结果不相符,10例正反定型不相符标本,基因分型结果与正定型完全一致。结论：采用红细胞抗原（正定型）方法结合DNA基因分型技术检测新生儿脐带血抗原反应弱、抗体效价低的ABO血型质控效果好,是一种高效、灵敏的质量控制方法,适用于新生儿脐血AB0疑难血型的鉴定。     

婴儿ABO血型的鉴定及应用于临床输血

为了研究6个月内婴儿ABO血型正确定型方法及影响因素，采用常规血清学法、凝胶柱法及PCR-SSP3种方法对6个月以内的婴儿进行血型鉴定。结果表明：在使用不同方法检测婴儿ABO血型结果不符的33例中，常规血清学方法32例红细胞定型与血清定型不符，1例是由细菌感染产生类B抗原所致的假相合。凝胶柱法可正确定型27例，正确率84.4%。PCR-SSP法可对所有标本做出正确定型。凝胶柱法与PCR-SSP法有显性差异。结论：对6个月以内的婴儿进行ABO血型鉴定，推荐采用凝胶柱技术。凝胶柱法红细胞定型与血清定型相符的婴儿输血采用同型输注，但若婴儿患有感染性疾病时，应考虑到类B抗原引起的假相合。凝胶柱法红细胞定型与血清定型不符的婴儿输血时使用O型洗涤红细胞等成分血，待PCR-SSP法分型结果做出后，改为同型输血。     

用分子生物学技术鉴定新生儿脐血ABO疑难血型

目的用分子生物学技术对新生儿脐血ABO疑难血型鉴定。方法新生儿产出后断脐带时留取脐血血样,先用传统的试管法对脐血标本作ABO血型鉴定,不能定出血型的标本用微柱凝胶技术鉴定,仍不能定出血型者再用分子生物学方法(聚合酶链反应-序列特异性引物分析PCR-SSP)作进一步鉴定。结果传统的试管法仅能对83.98%(4561/5431)的脐血血样正确定出ABO血型,用微柱凝胶技术仍有1.77%(96/5431)的标本不能定出ABO血型,对以上疑难标本用分子生物学技术容易地定出了ABO血型。结论微柱凝胶技术敏感,应取代试管法ABO血型定型方法,分子生物学技术鉴定新生儿脐血ABO疑难血型是一种有效的手段。