Caspase-8和Caspase-3在大鼠急性心肌损伤中的作用及药物预处理对其影响

目的:研究半胱天冬酶-8(caspase-8 )、半胱天冬酶-3(caspase-3)在异丙基肾上腺素(isoprenaline,Iso)致大鼠急性心肌损伤心肌细胞凋亡中的作用及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)预处理对其影响.方法:将Wistar大鼠随机分成三组:对照组、Iso损伤组和bFGF预处理组,光镜观察心肌组织病理变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化和RT-PCR法检测caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平,底物降解法测定酶活性.结果:损伤组心肌坏死较重,心肌细胞凋亡显著,且caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显升高,酶活性增加;预处理组心肌坏死明显减轻,细胞凋亡减少,caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显下降,酶活性受抑制.结论:bFGF预处理可能通过抑制caspase-8 、caspase-3的表达及酶活性以减少心肌细胞凋亡从而减轻大鼠心肌损伤.     

心肌细胞凋亡与Fas/FasL基因表达变化及牛磺酸的影响

目的 观察大鼠缺血心肌细胞凋亡与Fas／FasL基因表达变化及牛磺酸对其的影响。方法 结扎冠状动脉制备心肌缺血模型，缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞，免疫组织化学法检测Fas／FasL蛋白水平．RT—PCR法分析Fas基因mRNA表达变化。结果 缺血后心肌细胞凋亡指数、Fas／FasL蛋白阳性染色细胞指数及Fas基因的mRNA表达水平均明显增加．心肌组织SOD活性和MDA含量升高．Ca^ -ATP酶活性降低。牛磺酸能明显降低心肌细胞凋亡指数，Fas基因mRNA表达及Fas／FasL蛋白阳性染色细胞指数．抑制心肌组织MDA的生成．提高Ca^2 -ATP酶活性。结论 牛磺酸对缺血心肌细胞凋亡与Fas／FasL基因表达水平增高均有较好的拮抗作用。     

川芎嗪对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 观察川芎嗪对缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的保护及初步机制.方法 采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型.以TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化法分析心肌细胞Fas/FasL、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达变化.荧光分析法测定Caspase-3活性.结果 凋亡组(心肌缺血1h,再灌注24 h)心肌细胞凋亡指数为16.3±4.52,较对照组(0.43±0.04)有显著性升高,Fas/ FasL及Caspase-3蛋白水平也均显著高于正常对照组(P＜0.05).川芎嗪保护组的心肌细胞凋亡指数、Fas/ FasL、Caspase-3蛋白水平及Caspase-3活性均显著性低于凋亡组.结论 川芎嗪对缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡有较好的保护作用, 其机制可能与降低Fas死亡受体通路中相关蛋白酶水平及其活性有关.     

几种ACEI对实验性糖尿病大鼠心肌细胞凋亡和Caspase-3及Fas、FasL基因表达影响的类效应

目的:探讨几种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利、培哚普利、咪达普利、贝那普利、福辛普利对糖尿病大鼠左室心功能及心肌细胞凋亡和凋亡相关蛋白影响的类效应。方法:将48只SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病模型,随机分为5个给药组和1个糖尿病组(每组8只),另选8只做正常对照组。给药组每日分别灌胃给予卡托普利(50 mg/kg),培哚普利(雅施达4 mg/kg),咪达普利(达爽10 mg/kg),贝那普利(洛汀新10 mg/kg),福辛普利(蒙诺10 mg/kg),糖尿病组给予生理盐水灌胃,共8周。对照观察心肌细胞凋亡、心肌组织Fas、FasL蛋白、Caspase-3及其Fas mRNA表达的变化。结果:与正常对照组相比,糖尿病给药组及未给药组的心肌细胞凋亡指数明显增高(均为P<0.05);Caspase-3阳性蛋白表达率明显增高(均为P<0.05);Fas蛋白阳性染色指数增高(均为P<0.05);Fas的mRNA表达明显增高(均为P<0.05)。但糖尿病给药组的较未给药组低(均为P<0.05)。所有各组的FasL蛋白阳性染色指数差异不明显(均为P>0.05)。各种ACEI治疗组之间差异无显著性(均为P>0.05)。结论:糖尿病心肌病的发生、发展过程中有心肌细胞凋亡的变化和Caspase家族及Fas、FasL系统的参与;糖尿病大鼠心肌细胞凋亡指数、心肌组织Fas蛋白以及Fas的mRNA表达水平、Caspase-3蛋白表达水平增高。ACEI干预糖尿病心肌病,能够降低细胞凋亡及Fas基因的表达及Caspase-3蛋白表达水平,且几种ACEI具有类效应。     

卡托普利预处理对大鼠急性心肌损伤的保护作用及其对心肌细胞凋亡的影响

目的:研究卡托普利预处理对大鼠急性心肌损伤的保护作用及其对心肌细胞凋亡的影响。方法:Wistar雄性大鼠随机分为3组:对照组、异丙基肾上腺素损伤组(Iso损伤组)、卡托普利预处理组(Cap预处理组);用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,用免疫组化方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:Cap预处理组与Iso损伤组比较,心肌坏死面积减小,心肌细胞凋亡指数明显减少(P<0.01)。结论:卡托普利可能通过上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,从而抑制心肌细胞凋亡,发挥心肌保护作用。     

纳洛酮对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Fas?FasL表达的影响

目的:观察纳洛酮(naloxone,Nal)对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Fas、FasL蛋白表达的影响并探讨其机制。方法:SD大鼠24只,随机分成假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和纳洛酮处理组(Nal组)。原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测Fas、FasL蛋白表达;光镜下观察心肌组织病理学的改变。结果:与Sham组相比,IR组可见大量心肌细胞凋亡,Fas、FasL蛋白表达显著增加(P<0.01)。与IR组相比,Nal组心肌细胞凋亡显著减少,Fas、FasL蛋白表达明显降低(P<0.01)。IR组见心肌组织呈大小不等的灶性坏死,Nal组心肌坏死不明显。结论:心肌缺血再灌注时Fas、FasL表达介导心肌细胞凋亡,纳洛酮通过抑制Fas、FasL蛋白的表达而减少细胞凋亡从而起到保护心肌的作用。     

金水清对IgA肾病大鼠细胞凋亡Fas/FasL系统的影响

目的观察金水清对IgA肾病大鼠细胞凋亡Fas/FasL系统的影响。方法采用口服BSA+皮下注射四氯化碳、蓖麻油+尾静脉注射脂多糖+加高温高湿环境+高糖高脂饮食的复合法,复制大鼠IgA肾病模型,并给予金水清治疗,Western-blot检测肾组织Caspase-9、P53、Fas、FasL蛋白表达,RT-PCR检测肾组织Fas、FasL mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组Caspase-9、P53、Fas、FasL蛋白表达明显升高(0.05);与模型组比较,治疗组Caspase-9、P53、Fas、FasL蛋白表达明显降低(0.05)。与正常组比较,模型组Fas、FasL mRNA表达明显升高(0.05);与模型组比较,治疗组Fas、FasL mRNA表达明显降低(0.05)。结论金水清能够明显抑制IgA肾病大鼠肾组织细胞的凋亡和增殖,其可能通过下调P5、Caspase-9及Fas、FasL蛋白和mRNA水平而发挥作用。     

心肌细胞凋亡与急性心脏移植排斥的关系

目的：探讨心肌细胞凋亡,Fas蛋白,FasL蛋白表达与心脏移植急性排斥的关系。方法：利用大鼠腹腔异位心脏移植模型。实验组为异基因心脏移植,供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠。对照组为同基因心脏移植,供体与受体均为SD大鼠,设立4个观察点,分别为术后第1,3,5,9天,每个观察点7只动物,应用免疫组化法检测心肌组织Fas蛋白,FasL蛋白的表达,应用3－原位末端标记法（TUNEL法）检测凋亡心肌细胞。结果：（1）实验组移植心肌术后第3天即有一定量TUNEL阳性心肌细胞,术后第5天TUNEL阳性心肌细胞数达高峰,持续至术后第9天,对照组心肌检测到极少量的TUNEL阳性细胞。（2）术后第5,9天标本,实验组检测到大量FasL阳性心肌浸润细胞。（3）实验组与对照组心肌都检测到大量Fas阳性信号。结论：（1）心肌细胞凋亡是心脏移植排斥心肌细胞死亡的一种方式。（2）心脏移植排斥时同时检测到了Fas蛋白,FasL蛋白,TUNEL（＋）心肌细胞,可能是表达FasL的心肌浸润细胞诱导Fas阳性心肌细胞凋亡,介导移植排斥。     

卡维地洛对心衰大鼠心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨卡维地洛(CAR)对心肌梗塞(MI)后充血性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：将雄性Waistar大鼠前降支结扎，于术后1周开始予CAR和美托洛尔(MET)干预7周，观察CAR和，MET对大鼠心肌细胞凋亡、Fas、FasL和Bdl-2的mRNA和蛋白表达的影响。结果：CAR和MET都可不同程度地降低心肌细胞凋亡指数，但CAR降低心肌细胞凋亡指数、Fas及FasL的mRNA水平、上调Bcl-2表达效果优于MET。结论：CAR可有效地减少MI后心肌细胞凋亡、防治CHF，这与其抑制Fas和FasL表达、促进Bcl-2表达有关。     

芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨芪苈强心胶囊抗心力衰竭的作用机制。方法H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组、模型组、芪苈强心组,后2组采用100μmol/L H2O2处理6 h造成心肌细胞损伤模型,芪苈强心组加入含药血清,3组继续培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖率。各组给药孵育48 h后,收集细胞,FCM方法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas/FasL mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芪苈强心组能增加H9C2细胞增殖活性,RT-RCR和Western blot方法结果显示芪苈强心组细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL表达明显下降,Bcl-2、Bcl-2/Bax明显上升。结论芪苈强心胶囊能下调Caspase-3、Fas/FasL表达,调节Bcl-2/Bax平衡,抑制心肌细胞凋亡,对心肌细胞起到一定的保护作用。     

氟美松对急性肝损伤大鼠肝细胞Fas/Fas配体表达和细胞凋亡的影响

目的 :观察内毒素急性肝损伤后肝细胞凋亡和Fas/Fas配体 (FasL)表达的变化 ,以及氟美松对其影响 ,探讨急性肝损伤早期作用机制 .方法 :采用免疫组化和原位杂交技术检测各时相点肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达 ;应用原位末端标记技术对各时相点肝细胞凋亡进行检测 .结果 :内毒素急性肝损伤各时相点大鼠肝细胞Fas/FasL蛋白和mR NA的表达较对照组明显上调 (P <0 .0 5 ) ,且与肝细胞凋亡的增加相一致 ;氟美松可明显减轻炎症反应 ,抑制脂多糖 (LPS)诱导的肝细胞凋亡 ,并使肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达明显下调 (P <0 .0 5 ) .结论 :肝细胞凋亡和Fas/FasL系统活化可能参与内毒素急性肝损伤早期的发病机制 ,而且加重早期肝损伤 ;氟美松可抑制Fas/FasL系统活化 ,阻断和调控凋亡 ,从而减轻肝组织损伤     

芹黄素对肾缺血再灌注损伤后Fas/FasL介导凋亡反应的影响

目的 探讨芹黄素抑制大鼠肾缺血再灌注损伤凋亡Fas、FasL基因表达的影响。方法 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,将60只大鼠分为5组：假手术组、缺血再灌注组、芹黄素低浓度组（2mg/kg）、芹黄素中浓度组（10mg/kg）、芹黄素高浓度组（50mg/kg）,每组大鼠各12只。检测血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）,测定肾组织氧化损伤和抗氧化指标（SOD、MDA和GSH-Px）含量,观察肾组织病理学变化,免疫组化检测FasL、caspase-3和Bcl-2表达,Western blot法检测Fas、FasL和Bcl-2表达水平。结果 与假手术组比较,缺血再灌注组Cr和BUN水平均明显增高;SOD和GSH-Px含量明显降低,MDA含量显著升高;病理组织显示肾小管损伤严重;免疫组化示FasL、caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2表达降低;Western blot法检测结果显示Fas和FasL表达水平明显升高,Bcl-2表达水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与缺血再灌注组比较,芹黄素组Cr和BUN水平均明显降低;SOD和GSH-Px含量明显升高,MDA含量显著下降;病理组织显示肾小管损伤显著改善;免疫组化显示FasL、caspase-3蛋白表达较表达下调,Bcl-2表达上调;Western blot法检测结果显示,Fas和FasL和表达水平明显下降,Bcl-2表达水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 芹黄素能减轻肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能与其上调Bcl-2基因和阻断Fas/FasL系统有关,从而抑制肾缺血再灌注损伤后所造成的细胞凋亡。     

大鼠实验性肾缺血/再灌注引起肾小管上皮细胞凋亡及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系

目的：探讨大鼠实验性肾缺血再灌注引起肾脏损伤、肾小管上皮细胞凋亡情况及其与Bcl—2，Fas／FasL表达变化的关系．方法：建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型，在不同时间点处死动物取肾组织石蜡包埋切片，HE染色分析肾组织病理损伤程度，用TUNEL法标记检测肾小管上皮细胞凋亡的变化，SABC免疫组化方法检测Bcl—2，Fas与FasL蛋白表达的变化．结果：缺血再灌注后肾组织的病理损伤主要发生在肾小管，肾小管上皮细胞凋亡指数增加，且随缺血再灌注时间延长而进一步上升，48h达高峰(P＜0．05).Bcl—2蛋白在对照组呈弱阳性表达，缺血30min，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，48h达高峰(P＜0.05)，并以远曲小管为主．Fas，FasL蛋白在对照组呈阴性表达，缺血30，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，以72h时达高峰(P＜0.05)，多表达在远曲小管．HE染色可见肾缺血再灌注后各组均有不同程度的肾小管上皮组织片状坏死灶，以近曲小管为主，坏死灶周围有炎性细胞浸润．结论：肾缺血再灌注可诱导肾小管上皮细胞凋亡，Bcl—2，Fas／FasL系统可能在肾小管上皮细胞凋亡过程中发生着重要的调控作用．     

牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的　探讨牛磺酸对缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的保护及初步机制。方法　采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型。以TUNEL法检测心肌凋亡细胞 ,免疫组化法分析心肌细胞Fas/FasL、Caspase 8及Caspase 3蛋白表达变化。荧光分析法测定Caspase 3活性。结果　凋亡组 (心肌缺血 1h ,再灌注 2 4h)心肌细胞凋亡指数为 (16 .3± 4 .5 2 ) ,较对照组 (0 .4 3± 0 .0 4 )有显著性升高 ,Fas/FasL及Caspase 3蛋白水平也均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。牛磺酸保护组的心肌细胞凋亡指数、Fas/FasL、Caspase 3蛋白水平及Caspase 3活性均显著性低于凋亡组。结论　牛磺酸对缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡有较好的拮抗作用 ,其机制可能与降低Fas死亡受体通路中相关蛋白酶水平及其活性有关。     

兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas/FasL表达的变化

目的:观察兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas及FasL蛋白表达的变化,探讨肺损伤的可能机制.方法:健康新西兰白兔30只,雌雄不拘,运用5F Berman球囊堵塞左下肺动脉,然后球囊放气,复制肺动脉栓塞缺血再灌注模型,随机分为5组(n=6):假手术组,肺动脉栓塞1 h组、肺动脉栓塞2 h组,肺动脉栓塞2 h再灌注1 h组、肺动脉栓塞2 h再灌注2 h组;另设6只正常未手术白兔为对照组.实验结束取肺组织,测定肺组织湿/干重比,采用流式细胞分析法检测肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肺上皮细胞Fas及FasL蛋白表达的变化.结果:与对照组、假手术组相比,肺动脉栓塞1、2 h组兔肺组织细胞凋亡率明显增加,再灌注后凋亡细胞进一步增多,并随着再灌注时间延长而逐渐增多(P＜0.05或0.01);Fas及FasL蛋白表达在肺动脉栓塞及再灌注后明显上调(P均＜0.01).肺泡上皮细胞凋亡指数与肺组织湿干比、Fas及FasL蛋白表达呈显著正相关(r分别为0.769,0.820,0.820;P＜0.01).结论:肺动脉栓塞缺血/再灌注可能通过激活Fas/FasL系统,诱导肺组织细胞凋亡,从而导致肺损伤的发生.     

细胞凋亡及Fas和FasL在高脂肾损害中的作用

目的 :探讨细胞凋亡及凋亡相关蛋白 Fas和 Fas L在高脂饮食肾损害中的表达。方法 :将 2 4只 Wistar大鼠随机分为对照组、肾病组及高脂饮食组 ,饲养 1 2周 ,观察血脂、尿蛋白、肾脏病理积分、肾脏细胞凋亡及 Fas和 Fas L的表达。结果 :高脂饮食组血胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、尿蛋白、肾脏病理积分高于肾病组及对照组 ,肾脏免疫组化也显示高脂饮食组细胞凋亡及 Fas和 Fas L表达增强。结论 :高脂血症可加剧肾小球损伤 ,肾脏细胞凋亡及 Fas和 Fas L参与其发病过程     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因的动态表达及抗菌药物干预效应

目的 探讨创伤弧菌（W）脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因Fas mRNA、细胞色素C（CytC）mRNA、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspases）-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的动态表达及头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星的干预效应.方法 制作大鼠W脓毒症模型（W组）和W脓毒症抗菌药物干预模型（AA组）,并设正常对照组（NC组）,同时采用RT-PCR法检测各组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达量的动态变化.结果 W组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA和Bax mRNA的表达量均较NC组增高.而各时点Bcl-2 mRNA表达量均较NC组下降（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12h时肝组织Bcl-2 mRNA表达量及9h时的Caspase-3 mRNA表达量仍高于NC组（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12、16h时的肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,染菌后12、16h时的Bax mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,而染菌后9、12、16h时的Bcl-2 mRNA表达量则较同时点W组增高（均P〈0.05）.结论 外源性、内源性凋亡途径均参与了W脓毒症肝细胞损伤过程;促/抗凋亡调节基因（Bax/Bcl-2）表达失衡可促进肝细胞凋亡;而抗菌药物则可有效抑制肝细胞凋亡,从而维持促/抗凋亡调节基因表达的平衡.