黄嘌呤氧化酶法测定血清中超氧化物歧化酶活力的影响因素

近年来对自由基清除系统的研究较重视。 196 9年ＭｃＣｏｒｄ和Ｆｒｉｄｏｒｉｃｈ首先从牛红细胞中发现超氧化物歧化酶 (ＳＯＤ)活力。人ＳＯＤ是第 2 1对染色体编码的一类酶蛋白。ＳＯＤ酶活力测定方法很多 ,如细胞色素Ｃ -黄嘌呤氧化酶法、简易凝胶扩散法、邻苯三酚自氧化法、化学发光法、单克隆抗体酶标法、酶联免疫法、放射免疫法等。目前应用黄嘌呤氧化酶法日渐增多 ,本文对该法测定血清中超氧化物歧化酶活力的影响因素进行了一些探讨 ,结果如下。材料和方法　 (一 )原理 :通过黄嘌呤氧化酶法氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基 ,它…     

AQC—Tag法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量

采用６－氨基喹啉－Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（ＡＱＣ）为衍生剂，与各种氨基酸柱前衍生后，ａｔｅｒｓ ＨＰＬＣ仪，ＡＱＣ－ＴａｇＣ１８柱，以０．１４ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠缓冲液（ｐＨ＝４．９５）为溶剂Ａ，乙腈－水（３：２）为溶剂Ｂ进行梯度洗脱，检测波长为２４８ｎｍ，以ａ－氨基丁酸为内标，所有１７种氨基酸在３７ｍｉｎ内测定完毕，平均回收率为９５．８１％￣９９．１３％（ｎ＝１５）。     

D-氨基酸氧化酶在巴斯德毕赤酵母中的表达研究

用分子生物学方法获得了D-氨基酸氧化酶(DAAO)的表达质粒(pPIC3.5k-DAAO),用其电转化巴斯德毕赤酵母GS115获得重组菌,经筛选获得高表达菌株PD27,并对其高密度培养和诱导条件进行了优化.PD27工程菌经250ml摇瓶发酵得到的DAAO活力达到2500～2600IU/L,在14L发酵罐中的表达水平优于其它表达系统.     

脊髓D-型氨基酸氧化酶通过过氧化氢介导吗啡镇痛耐受

目的研究脊髓星形胶质细胞D-型氨基酸氧化酶(DAAO)/H2O2介导吗啡镇痛耐受的神经生物学作用。方法在全身或脊髓鞘内连续7 d注射吗啡建立吗啡耐受动物模型的同时长期给予或单次给予DAAO抑制剂或沉默脊髓DAAO基因siRNA后,进行5%福尔马林刺激,考察在小鼠或大鼠福尔马林(第Ⅰ相急性疼痛和第II相中枢敏感化疼痛)、热板和甩尾疼痛模型中吗啡镇痛作用耐受性的变化。结果皮下或脊髓联合给予吗啡和一系列结构不同的DAAO抑制剂如CBIO,AS057278和苯甲酸钠,在小鼠/大鼠急性疼痛(热板、甩尾)和福尔马林疼痛模型(第I相急性疼痛和第II相中枢敏感化疼痛)能完全预防吗啡对镇痛的耐受作用,单次剂量可完全逆转已形成的吗啡耐受状态,且DAAO抑制剂预防和逆转吗啡镇痛耐受作用与脊髓DAAO活性抑制成正性相关;脊髓注射siRNA/DAAO完全预防吗啡耐受;吗啡疼痛耐受形成后,脊髓过氧化氢升高15.1%;同时脊髓给予ROS非特异性清除剂PBN亦可完全阻断福尔马林II相疼痛和吗啡镇痛耐受状态。结论脊髓星形胶质细胞DAAO通过生成过氧化氢介导吗啡镇痛耐受性的形成,是阻断吗啡耐受的一个潜在性新靶点分子,为吗啡镇痛耐受揭示一条新的传导通路。本研究结果还表明DAAO至少是脊髓星形胶质细胞介导吗啡镇痛耐受的分子之一,为开发DAAO抑制剂作为新型镇痛药物以及单独使用或与吗啡合用拮抗吗啡耐受提供了药理学基础。     

三角酵母D-氨基酸氧化酶的固定化研究

通过共价结合的方法把三角酵母D—氨基酸氧化酶(DAO)分别固定在三种大孔高聚物和二种多糖的载体上，结果表明多糖类载体壳聚糖和Sepharose 4B比高聚物更能有效地固定化DA0。经过固定化后，壳聚糖和环氧载体Epecust固定化酶对温度和pH的稳定性提高，表现米氏常数增大。在分批式头孢菌素C氧化脱氨的反应中，固定化酶表现出良好的操作稳定性，戊二酸单酰基—7—氨基头孢霉烷酸的得率为93％。     

维生素C严重干扰氧化酶法测定胆固醇结果

氧化酶偶联法在临床化学中常用于胆固醇（CHO）测定，具有准确、快速、简便的特点。但维生素C（Vit．C）等药物可严重干扰氧化酶偶联反应的进行，造成测定结果严重负偏差，现报道如下。1材料1．1仪器意大利ARCOBT生化自动分析仪。1．2血清收集新鲜正常人混合血清，配成含有胆固醇约4．OOmmol／L的混合血清。1．3Vit．C血清将Vit．C含量为O．5g／2ml的注射液加入998ml的生理盐水中配成2838pmol／L的Vit．C水溶液，吸取此液0．lml加入Icml上述混合血清即成为约28pmol／I，Vit．C血清，以混合血清为稀释剂配成附表中各种浓度的Vit…     

HPLC法测定复合氨基酸胶囊中氨基酸的含量

目的:建立用高效液相色谱法测定复合氨基酸胶囊中氨基酸的含量。方法:采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)为衍生剂,与各种氨基酸柱前衍生后,用Waters 2690高效液相色谱仪,AccQ.Tag C18柱(150 mm×3.9 mm,4 μm),以水为溶剂A,Eluent(醋酸盐-磷酸盐缓冲液)稀释液为溶剂B,乙腈为溶剂C进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温37℃,进样量10μL。结果:所有氨基酸在37 min内测定完毕,回收率为101.4％-110.2％,RSD 1.1％-4.5％。结论:本法分离度好,快速,简便。可作为产品的质量控制方法。     

应用固定化D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为7-ACA

D-氨基酸氧化酶（DAAO）是两步酶法催化头孢菌素C（CPC）生成7-氨基头孢霉烷酸（7-ACA）的重要酶之一。利用固定化DAAO催化CPC的转化液中，酮酸中间体随批次的增加逐渐减少，反应至第13批时，转化基本完全。当转化液pH由7．2升至7．6时，终止反应，转化率和收率分别达99．6％和93％。分次补加固定化DAAO，可连续转化132批。     

环氧化酶和环氧化酶—2抑制剂

非甾体抗炎药通过抑制环氧化酶，减少前列腺素的生成合理而呈现抗炎作用。现在发现，环氧化酶至少有两种异构体，即环氧化酶－１和环氧化酶－２。环氧化酶－１－可催人人体正常生理功能所需的前列腺素的合成；环氧化酶－２则由炎性刺激所产生。     

OPA-FMOC联用柱前衍生法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量

采用邻苯二甲醛（OPA）和氯甲酸芴甲酯（FMOC－CL）与氨基酸进行柱前衍生,HPLC测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量,方法简便快速,准确。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的纯化、性质鉴定及细胞毒性测定

目的从眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶（LAAO）,测定其理化性质及细胞毒性。方法采用Superdex75凝胶层析、Phenyl-SepharoseFF疏水层析、ResourceS离子交换层析分离纯化LAAO;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及C18反相色谱鉴定纯度并测定相对分子量;CCK8法测定细胞毒性。结果舟山眼镜蛇蛇毒经凝胶层析、疏水层析、离子交换层析及C18反相色谱后获得LAAO（暂定名NA-LAAO）,在非还原和还原条件下相对分子质量均为58kD左右;具有明显的抑制人胃癌MGC-803细胞增殖作用。结论从眼镜蛇毒中纯化得到LAAO,其具有明显的细胞毒性。     

RP-HPLC法测定18种氨基酸中有关物质

目的:建立 RP-HPLC 测定18种氨基酸中有关物质的方法。方法:采用 Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相 A,乙腈-水(1:1);B,醋酸盐缓冲液(pH 6.1),流速为1.0 mL·min~(-1),检测波长为360 nm,采用校正面积归一化法测定氨基酸中其他氨基酸的含量。结果:本色谱条件下各种氨基酸和杂质均能良好地分离,衍生化试剂对氨基酸分析无干扰,最低检测限为1ng·mL~(-1)。结论:该方法专属性强,操作方便,结果准确,重现性好。     

导数光谱法测定复合氨基酸注射液中色氨酸的含量

目的 :测定复方氨基酸中色氨酸的含量。方法 :用二阶导数分光光度法。结果 :浓度范围在 9～ 45 μg·ml-1时 ,呈良好线性。平均回收率 10 0 43% ,RSD为 0 44 %。结论 :该法操作方便 ,计算简单 ,实用性强。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果:NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24h的IC50分别为(2.48±0.41)、(1.74±0.27)和(0.83±0.19)mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论:NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

D—氨基酸的生物转化与拆分技术研究的新进展

介绍了Ｄ－氨基酸的存在及其作用,着重综述了Ｄ－氨基酸的生物转化和拆分技术以及在生产制备中的应用。     

氨基酸分析仪法测定角膜接触镜护理液中甘氨酸的含量

目的 建立用氨基酸分析仪测定角膜接触镜护理液(简称“护理液”)中甘氨酸(Gly)含量的方法.方法 采用日立氨基酸分析仪,甘氨酸经离子交换色谱茚三酮柱后衍生,以外标法进行测定.流动相:pH＝4.0的柠檬酸钠缓冲液-0.2 mol·L-1氢氧化钠溶液梯度洗脱,流速:0.4 mL·min-1,检测波长:570 nm.结果 甘氨酸出峰时间为3.2 min,整个分析时间仅为10 min.甘氨酸在0.0107～0.214 g·L-1范围内线性关系良好,相关系数为0.9999.加样回收率为100.1％～100.7％,RSD为0.16％～0.30％.结论 该方法操作简便,无需样品前处理,准确度高,且护理液中其他成分对测定影响小.     

L-氨基酸氧化酶对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨L-氨基酸氧化酶(LAAO)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为临床上寻找新的肺癌治疗方法提供参考。方法:将A549细胞制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,根据LAAO干预浓度的不同,将其分为4组:2.41、4.82、9.64、19.28mg·mL-1干预组,各组均干预24、48、72h。镜下观察各组细胞形态学改变,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,另设立阴性对照组进行比较。结果:LAAO对A549细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论:LAAO可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。