自身免疫性溶血性贫血患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平及临床意义。方法采用流式细胞仪对25例AIHA患者治疗前后和15例正常对照者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的比例进行了检测。结果25例AIHA患者治疗前CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋细胞的比例与正常对照组比较明显降低,（4．47±2．11）％VS（9．82土2．98）％（P〈0．001）,治疗后CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例与治疗前比较显著升高,（7．60±2．50）％VS（4．47±2．11）％（P〈0．001）,但仍低于正常人,（7．60±2．50）％VS（9．82±2．98）％（P〈0．05）。治疗后完全缓解患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^-T细胞的比例与治疗无效组比较明显升高,（9．55±2．36）％VS（5．68±2．67）％（P〈0．05）,无效组患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^-T细胞的比例与正常时照组比较仍然降低,（5．68±2．67）％vs（9．82±2．98）％（P〈0．01）。结论AIHA患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例较正常对照明显降低,有效治疗后得到恢复,提示CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能参与了疾病的发生。     

溃疡性结肠炎大鼠C04^＋CD25^＋T细胞的改变

目的 探讨CD4＋CD25^＋T细胞的异常在大鼠溃疡性结肠炎动物模型发病机制中的作用。方法 40只Wistar大鼠分为正常对照组和溃疡性结肠炎模型组，应用三硝基苯磺酸／乙醇法建立溃疡性结肠炎的大鼠模型，进行粪便细菌培养，流式细胞仪分析其外周血单个核细胞（PBMC）和肠系膜淋巴结（MLN）中的CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4^＋T细胞的比例，实时荧光PCR测定Foxp3 mRNA的含量。结果 （1）溃疡性结肠炎模型组大鼠PBMC中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显高于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显下降（P〈0．05），MLN中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显低于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显增高（P〈0．05）；（2）模型组大鼠PBMC中Foxp3 mRNA的含量明显增高（P〈0．05）；而MLN中Foxp3 mRNA的含量明显下降（P〈0.05）；（3）模型纽大鼠肠道菌群较正常对照有显著改变（P〈0．05）。结论 CD4^＋CD25^＋T细胞的异常在溃疡性结肠炎的发病机制中起重要作用，其异常可能与肠道菌群的改变有关。     

CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞在乙型肝炎病毒感染慢性化中的作用

目的探讨CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）在慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染中的免疫调节作用,分析HBV感染的慢性化是否与外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞的表达率有关。方法本院2008年6月-2009年5月收治的HBV感染者60例,其中乙型肝炎活动期患者30例,HBV携带者30例,选择同期门诊体检者30例为对照者。应用流式细胞仪检测外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞表达,结合HBV感染者临床情况分析各组外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞的比率与血清HBeAg和HBVDNA含量的关系。结果HBV感染及HBV携带者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞表达率较健康对照组显著增高[（8．68％±1．23）％与（1．38±0．6）4％,P〈0．01];慢性乙肝携带组与慢性乙肝恢复组比较,外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞的表达率差异有统计学意义[（8．68±1．23）％与（2．63±1．38）％,P〈0．01];HBVDNA病毒含量及Ⅻb堍含量与外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞的表达率之间存在正相关（P〈0．01）。结论HBV感染者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞水平与疾病进展明显相关,Treg在慢性乙型肝炎携带者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成乙肝病毒感染慢性化的重要因素。     

系统性红斑狼疮患者外周血天然调节性T细胞检测及临床意义

目的探讨流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋叉头状转录因子（Foxp3）^＋天然调节性T细胞的方法及其在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中改变的意义。方法建立三色流式细胞术检测天然调节性T细胞的方法,并检测了15例SLE患者和15名健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞比例以及CD4^＋细胞中CD25的表达水平。结果SLE患者外周血中天然调节性T细胞为（1．03±0．42）％,显著低于健康对照组的（5．88±1．40）％（P〈0．01）;CD4^＋淋巴细胞中CD25^＋细胞的表达水平[（5．92±3．80）％]也显著低于健康对照组[（32．01±5、70）％,P〈0．01]。结论三色流式细胞术适合检测外周血中天然调节性T细胞,SLE患者存在天然调节性T细胞免疫缺陷。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在ITP患者发病机制中的作用

目的研究慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量及Foxp3基因的表达水平,探讨它们在CITP发病机制中的作用。方法分别收集40例CITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。利用PE标记的抗-CD4单抗,FITC标记的抗-CD25单抗,作双色流式细胞术,分析CITP患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞百分率,采用RT-PCR法检测T细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果CITP患者外周血CD4^＋T、CD4^＋CD25^＋T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组（P〈0.01）,且CD4^＋CD25^＋T细胞百分率与Foxp3 mRNA水平呈正相关。结论CITP患者细胞免疫功能失调,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的数量与功能发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与CITP的发病机制有关。     

哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的测定及临床意义

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在哮喘患者外周血的变化及意义。方法采用流式细胞术检测60例哮喘患者和40例健康对照者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达量,同时测定20例急性发作期哮喘患者的肺功能。结果哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的百分比明显低于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;急性发作期哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞明显低于非急性发作期患者,差异也有统计学意义（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与了哮喘的发生。     

肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分布及临床意义

目的检测肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分布，探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测45例肺癌患者和30例健康对照者外周血中的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化，并通过体外淋巴细胞增殖实验对肺癌患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞进行鉴定。结果（1）肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞比例明显增高（P〈0．05），但治疗后其比例明显下降（P〈0．05）；（2）肺癌患者CD4^＋CD25^＋T细胞能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖和干扰素γ的分泌。结论肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例明显增高，其动态监测有助于肺癌患者免疫状态及疗效评价。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与自身免疫性甲状腺炎

调节性T细胞主要在机体免疫系统中发挥负向调节作用,既能抑制不恰当的免疫反应,又能限定免疫应答的范围、程度及作用时间,对效应细胞的增殖、免疫活性的发挥起抑制作用。近年来,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在自身免疫性甲状腺疾病中的作用日益引起人们的关注,动物实验和人体研究发现CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数目和功能的异常与自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroiditis,AIT）的关系密切,可能在AIT的发病机制中发挥关键作用。综述如下。     

急性白血病儿童外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和NK细胞的变化及其在白血病免疫中的意义

本研究观察急性白血病患儿外周血CD4^＋CCD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）及自然杀伤细胞（nature killer cell,NK）在不同病程阶段的变化,了解白血病患儿的免疫状态,以探讨CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞在急性白血病肿瘤免疫中的意义。建立流式细胞术检测外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞和NK细胞的方法：检测急性白血病初诊患儿25例、完全缓解患儿28例及20例正常健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞的数量及比例。结果表明：初诊组、完全缓解组及对照组外周血CD4^＋CD25^＋CD127^＋占CD4^＋T细胞的比例分别为（9．55±2．41）％,（8．54±2．51）％和（6．25±0．85）％,在初诊患儿组和缓解患儿组高于正常对照组,且在初诊患儿组高于完全缓解组（P〈0．05）;同时,与正常对照组比较,急性白血病患儿的NK细胞数量减少,完全缓解后患儿组NK细胞数量仍低于正常对照（4．11±3．87％和10．41±7．20％w14．06±5．95％,P〈0．05）。结论：联合应用CD4、CD25及cDl27检测Treg细胞简便可行、重复性好、检测结果可靠、准确,CD4^＋CD25^＋CD127^＋T细胞可较好地反映CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例。急性白血病患儿外周血中Treg细胞数量升高,NK细胞数量降低,表明急性白血病患儿NK细胞免疫功能处于抑制状态。Treg细胞可能在白血病的发生、发展中起一定作用,参与NK细胞的调节可能是Treg细胞在白血病免疫中的一个环节。     

Castleman′s病患者的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的研究

目的：探讨Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与疾病的关系。方法：用流式细胞术对14例Castleman′s病患者及30例正常对照的外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞的比例进行检测。结果：局灶型Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞和CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞比例在治疗前分别为（4.55±0.53）%、（0.73±0.09）%、（0.64±0.09）%;治疗后分别为（4.88±0.24）%、（1.0±0.10）%、（0.93±0.10）%,均低于正常对照组。治疗后这3种T细胞的比例较治疗前有显著升高（P〈0.05）。多中心型患者外周血中这3种T细胞比例在治疗前分别为（9.43±0.81）%、（2.79±0.17）%、（2.46±0.09）%;治疗后（8.82±1.01）%、（2.71±0.10）%、（2.23±0.10）%,均高于正常对照组。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在局灶型和多中心型Castleman′s病中的变化是不同的,这种不同的变化可能和这两型的临床表现和预后不同有关。     

类风湿关节炎患者外周血CD4+CD25+CD127lo调节性T细胞的变化及意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4+CD25+CD127loTreg调节性T细胞(Treg)的变化及意义。方法采用流式细胞术检测30例活动期RA患者和15例健康志愿者外周血中CD4+CD25+CD127lo调节性T细胞的数量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例,并研究其与RA患者疾病活动度指标(DAS28评分)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)以及其他相关性指标如免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、补体(C3、C4)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)、血清铁(SI)之间的关系。结果RA活动期患者外周血CD4+CD25+CD127loTreg数量低于健康志愿者,活动期患者CD4+CD25+CD127loTreg占CD4+T淋巴细胞的百分比为(2.75±1.01)%,明显低于健康志愿者(4.18±0.89)%(P<0.01)。RA活动期患者CD4+CD25+CD127loTreg表达水平与DAS28评分、ESR、CRP、免疫球蛋白(IgG、IgA)、PLT呈负相关(P<0.05),与血红蛋白(HGB)、血清铁(SI)、及补体(C3、C4)呈正相关(P<0.05),而与RF、RBC、IgM无明显相关性(P>0.05)。结论CD4+CD25+CD127loTreg细胞参与了RA的发病和疾病的活动,同时也可能为RA引起贫血的原因之一。     

Foxp3^＋、CD4^＋、CD25^＋调节性T淋巴细胞与慢性阻塞性肺疾病相关性的研究

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）调节性T淋巴细胞（Treg）Foxp3^＋、CD4^＋和CD25^＋的变化及3种细胞因子白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）与CD4^＋Treg的相关性。方法：采用流式细胞术检测外周血CD4^＋Treg数量,采用酶联免疫法（ELISA）测定血清IL-10、TNF-α、TGF-β水平。结果：COPD急性加重期、缓解期外周血Foxp3^＋、CD4^＋、CD25^＋T淋巴细胞（CD4^＋Treg）占单核细胞百分比明显增高,与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,缓解期略高于急性加重期,两者相比无显著性差异;COPD急性加重期组患者血清IL-10水平低于正常对照组,缓解期组低于急性加重期组,3组比较有显著性差异（P〈0.01）。COPD急性加重期及缓解期组TNF-α水平明显升高,均高于正常对照组（P〈0.01）。COPD急性加重期血清TGF-β浓度高于缓解期及正常对照组,有显著性差异,但缓解期与正常对照组相比较无显著性差异。正常对照组IL-10与CD4^＋Treg成正相关（r值为0.655,P〈0.05）,COPD急性加重期TNF-α与CD4^＋Treg成正相关（r值为0.4,P〈0.05）。结论：CD4^＋Treg可能参与COPD的发病及急性加重过程。     

CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞水平在胃癌患者外周血中的变化

目的探讨T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值水平在胃癌患者外周血中的表达及意义。方法采用血液分析仪技术,检测40例胃癌手术前患者(按临床分期为Ⅰ～Ⅱ级组18例,Ⅲ～Ⅳ级组22例)及25名正常对照组外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平。结果胃癌患者外周血CD3+、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值分别为0.78%±0.35%、0.37%±0.21%、0.61%±0.42%,明显低于正常对照组(P<0.05);胃癌Ⅲ～Ⅳ级组CD3+、CD4+细胞CD4+/CD8+比值分别为0.42%±0.27%、0.21%±0.17%、0.29%±0.25%,明显低于Ⅰ～Ⅱ级组(0.95%±0.35%、0.45%±0.19%、0.76%±0.30%,P<0.05)。结论检测胃癌患者手术前外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平,可以初步评估胃癌患者机体免疫状态,也为肿瘤的免疫增强治疗提供了理论依据。     

子痫前期发病中CD4＋CD25＋Treg细胞与Foxp3的检测及意义

[目的]研究CD4＋ CD25＋调节性T细胞（CD4＋ CD25＋Treg细胞）和Foxp3基因表达与子痫前期发病的相关性.[方法]选择住院确诊的妊娠期高血压孕妇12例（A组）、轻度子痫前期（MPE）孕妇14例（B组）、重度子痫前期（SPE）孕妇15例（C组）,30例正常妊娠晚期孕妇为对照组（D组）,应用流式细胞术检测并比较四组外周血中CD4＋ CD25＋ Treg和 Foxp3的表达水平.[结果]A组、B组和C组孕妇外周血CD4＋ CD25＋ Treg 和Foxp3表达水平均显著低于对照组（P〈0.05） C组外周血CD4＋ CD25＋ Treg和Foxp3表达水平显著低于A组和B组（P〈0.05）.[结论]子痫前期患者体内存在CD4＋ CD25＋ Treg细胞的异常,CD4＋ CD25＋Treg细胞的数量的减少和Foxp3表达的降低使CD4＋ CD25＋Treg细胞免疫抑制功能减弱,从而使母胎免疫耐受失衡,导致子痫前期的发生.     

特发性血小板减少性紫癜患者CD4^＋CD25^＋Treg细胞的表达

目的：近年研究发现，CD4^＋CD25^＋Treg细胞不论数量缺失或功能紊乱均可导致免疫异常的发生，对调节性T细胞的深入认识，将会对免疫异常疾病如自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、过敏性疾病等发病机制的揭示有着深远的意义。实验将进一步验证CD4^＋CD25^＋Treg细胞与特发性血小板减少性紫癜发病的关系及可能机制。 方法：实验于2007—06／09在中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所实验室完成。①实验材料：中国协和医科大学血液病医院住院的特发性血小板减少性紫癜患者27例治疗前后外周血，患者确诊符合血液病诊断及疗效标准。正常人外周血15份，实验均征得患者或家属知情同意。②实验方法：应用流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者、正常对照、以及治疗前后患者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例。对其中治疗有效的23例患者，采用密度梯度离心法从治疗前后的外周血中提取单个核细胞，以RT—PCR方法检测其中Foxp3 mRNA的表达水平。 结果：①特发性血小板减少性紫癜患者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例以及CD4^＋CD25^＋Treg细胞在总CD4^＋T细胞中所占比例明显均低于正常对照组（P〈0．05）。②有效治疗后的特发性血小板减少性紫癜患者CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例与治疗前相比无明显改变（P〉0．05），但Treg细胞中Foxp3mRNA的表达水平比治疗前明显增加（P〈0．05）。 结论：特发性血小板紫瘢患者体内存在CD4^＋CD25^＋Treg细胞的异常，数量的减少、Foxp3表达的降低所造成的CD4^＋CD25^＋Treg细胞免疫抑制功能受损可能是特发性血小板减少性紫瘢发病的一个重要因素。     

大肠癌患者外周血CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-调节性T细胞的含量及临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-调节性T细胞（Treg）的变化及意义。方法流式细胞术检测36例大肠癌患者及30例健康人外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg的变化；ELISA检测同一标本血清中转化生长因子β（TGF—β）的表达水平。结果36例大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg占CD4^＋、淋巴细胞的比例为（6．92±1．31）％，与正常对照组（4．91±1，24）％相比差异有显著性（P〈0．05）。20例腺癌、7例黏液癌、9例未分化癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例分别为（6．81±1．52）％、（6.99±1．21）％、（7．08±1．17）％，各组间比较差异无显著性（P〉0．05），均高于对照组的（4．91±1．24）％，差异有显著性（P〈0，05）。IV期大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg高于Ⅱ期大肠癌患者（P〈0．05）。大肠癌组外周血清中TGF—β水平显著高于正常对照组，随着TGF—β水平增加，CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例逐渐增高，两者呈正相关。结论大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg表达增高，与临床分期相关，但与组织学分类无关，导致机体免疫抑制，可能参与大肠癌发生。     

扁桃体摘除术对IgA肾病患者外周血CD4^＋CD25^＋细胞数及病情的影响

【目的】观察扁桃体摘除对IgA肾病（IgAN）患者外周血CD4^＋CD25^＋细胞数的影响。【方法】研究对象包括37例IgAN病人（A组）及37例非肾炎慢性扁桃体炎病人（B组）,10例正常人（C组）。对A、B两组实施扁桃体摘除术,观察手术前及摘除后1、3个月外周血CD4^＋CD23^＋细胞比例。收集IgAN病人的尿液,检测24h尿蛋白,尿红细胞。【结果】A组CD4^＋CD25^＋细胞数显著低于B、C两组（P均〈0．05）,后两组之间无显著差异（P〉0．05）;A组术后1个月为1．32％±0．313％,3月为3．01％±0．310％,术后1个月与B组及C组有明显差剐（P均〈0．05）,术后3个月与B组及C组无显著差别（P均〉0．05）。A组术后1个月及3个月,血尿及蛋白尿均较术前明显减少;随着血尿、蛋白尿逐渐减少而外周血CD4^＋CD25^＋细胞数逐渐恢复正常水平。【结论】扁桃体切除术可改善IgAN患者免疫功能。     

哮喘患儿外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与过敏体质和IgE水平的关系

目的探讨哮喘患儿外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr）的变化及其与过敏体质和IgE水平的关系。方法应用流式细胞术检测70例哮喘患儿的Tr细胞数变化,采用酶联免疫法（ELISA）检测血清中IgE含量。结果急性发作期组患儿外周血Tr水平[（6．17±1．72）％]明显低于缓解期组患儿[（7．56±1．48）％]和对照组儿童[（7．13±1．48）％]（均P〈0．05）;而缓解期患儿外周血Tr水平与对照组儿童比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。有过敏体质患儿外周血Tr水平[（5．53±1．18）％]明显低于无过敏体质患儿[（6．40±2．00）％]（P〈0．05）。哮喘组患儿外周血Tr水平[（6．17±1．72）％]与其外周血IgE水平[（144．86±14．74）IU／ml]呈负相关（rP=-0．435,P〈0．05）。结论外周血Tr水平在哮喘患儿发作期显著降低,而在有过敏体质的患儿更低,并与外周血IgE水平呈显著的负相关性。