疏肝健脾活血方含药血清对肝纤维化模型大鼠肝窦内皮细胞失窗孔化的影响

目的探讨疏肝健脾活血方治疗肝纤维化的可能作用机制。方法 10只SD大鼠以10 ml/kg疏肝健脾方浓缩液(浓度2. 7 g/ml)灌胃,每日1次,连续3天后制备含药血清。中药血清设5%、10%、15%、20%、25%共5个浓度,采用MTT法筛选实验药物浓度。采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射建立肝纤维化大鼠模型后分离肝纤维化肝窦内皮细胞(SEC),同时集正常大鼠肝星状细胞(HSC)和SEC。实验分为正常组、模型组、DAPT组、NF组、中药组、中药加DAPT组、中药加NF组,共7组。各组均加入HSC,正常组加入正常大鼠SEC,其余组加入肝纤维化大鼠SEC,常规培养24 h。吸出上清液,DAPT组、中药加DAPT组加入0. 2μmol/L DAPT (Notch通路阻断剂),NF组、中药加NF组加入1 gsu/ml rh NF-κB (Notch通路激动剂)。前4组加入含10%FBS DMEM/12培养基,后3组加入含预筛选浓度中药血清、10%FBS DMEM/12培养基,培养72 h后MTT法检测各组HSC活力,Western Blot法检测SEC中CD31、vWF蛋白表达情况。结果筛选出10%浓度的中药血清对细胞增殖有抑制作用。与正常组比较,造模2、4、8周模型组HSC活力上升,造模4、8周CD31蛋白表达升高(P <0. 05或P <0. 01);与模型组比较,NF组HSC活力上升,DAPT组和中药组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P <0. 05或P <0. 01);与NF组比较,中药加NF组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P <0. 05或P <0. 01);与DAPT组比较,中药加DAPT组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达均下降(P <0. 05或P <0. 01)。结论疏肝健脾活血方可通过干预Notch通路,抑制HSC活力及SEC失窗孔化,可能是其治疗肝纤维化的作用机制之一。     

扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg·kg^-1)、扶脾柔肝方组(8.54 g·kg^-1)、扶脾方组(4.58 g·kg^-1)、柔肝方组(3.96 g·kg^-1)。采用四氯化碳腹腔注射和乙醇灌胃复制HF大鼠模型,灌胃给药4周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST);HE、Masson染色观察病理变化情况;电镜观察大鼠肝组织超微结构;Western Blot和qRT-PCR方法检测大鼠肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组的HF程度明显,胶原容积分数明显增加(P<0.01),电镜发现自噬小体增多,线粒体结构损害,大鼠血清ALT、AST明显升高(P<0.01),肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-ⅡmRNA及蛋白表达上调(P<...     

基于肝星状细胞自噬和凋亡探讨莪术醇抗肝纤维化的作用机制

基于莪术醇对肝星状细胞自噬和凋亡的影响作用,希冀阐明其抗肝纤维化作用的分子机制.将肝星状细胞分为5组,对照组、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)10 ng·mL-1组、莪术醇不同浓度(12.5、25、50 mg·L-1)组.使用MTT试剂盒检测莪术醇对TGF-...     

疏肝健脾方对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏代谢组学的影响

目的 从代谢组学的角度探讨疏肝健脾方防治肝纤维化的可能作用机制. 方法 15只SD大鼠随机分为正常组、模型组、疏肝健脾方组,每组5只.模型组和疏肝健脾方组皮下注射50％四氯化碳溶液0.1 ml/100g,每周2次,连续12周,复制大鼠肝纤维化模型.造模第1天起,疏肝健脾方组给予疏肝健脾方16.2g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水.每天1次,连续16周.末次给药后处死大.鼠取肝组织观察病理学变化,采用气相色谱-飞行时间质谱联用技术分析其代谢谱变化,鉴定差异化合物并进行相关代谢通路分析.结果 模型组大鼠肝组织见有少量的脂肪空泡变性,结缔组织增生,炎性细胞浸润,可见非典型的假小叶形成;疏肝健脾方组未见大范围的脂肪空泡,仅有少量炎性细胞浸润,肝纤维化明显好转.与正常组比较,模型组中共发现棕榈酸、二十碳烯酸、苹果酸、延胡索酸、谷氨酰胺、盐德草碱、N-乙酰-4-氨基丁酸、葡萄糖酸8个生物标志物;与模型组比较,疏肝健脾方能够使8个生物标志物向正常水平靠近.结论 疏肝健脾方对肝纤维化大鼠有一定的保护作用,其机制可能与调节能量代谢、酪氨酸代谢、脂肪酸代谢、氨基酸代谢、糖代谢紊乱有关.     

疏肝健脾方对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠尿液代谢组学的影响

目的观察疏肝健脾方(茵陈、柴胡、黄芪、白芍、枳壳、白术、猪苓、茯苓、泽兰)对肝纤维化大鼠尿液代谢谱的影响并推测其作用机制。方法皮下注射50%CCl4橄榄油溶液诱导肝纤维化的SD大鼠随机分为模型组和疏肝健脾方组,并设正常组,连续给药12周后,收集大鼠尿液,用GC-TOF/MS技术结合主成分分析、偏最小二乘方-判别模式、正交偏最小二乘方-判别模式法鉴定其代谢谱化合物变化。结果模型组中的2-羟基丁酸、异亮氨酸、beta-丙氨酸、氨基丙二酸、胞嘧啶、赖氨酸与正常组相比含有量显著升高,疏肝健脾方能够使6个生物标志物向正常水平靠近。结论疏肝健脾方对化学性肝纤维化大鼠有一定的保护作用,其机制可能与调节能量代谢、嘧啶合成代谢、氨基酸代谢有关。     

疏肝健脾方对非酒精性脂肪性肝炎患者肝纤维化指标的影响

目的:观察疏肝健脾方对肝郁脾虚型非酒精性脂肪性肝炎患者血清TGF-β1及肝纤四项的影响。方法:选择非酒精性脂肪性肝炎肝郁脾虚型患者80例,随机分为两组,其中疏肝健脾方治疗组40例,易善复对照组40例,疗程为24周。观察两组治疗后肝功能、血脂、超声学及血清TGF-β1、HA、LN、CIV、PIIINP。结果:两组治疗后肝功能、血脂较治疗前差异有统计学意义(P<0.01),组间治疗后比较差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后疏肝健脾方组B超总改善率为90.00%,易善复组B超总改善率为77.50%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后血清TGF-β1、HA、LN、CⅣ、PIIINP含量较治疗前差异有统计学意义(P<0.01),组间治疗后比较除LN外,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:疏肝健脾方可抑制非酒精性脂肪性肝炎患者肝纤维化趋势,对疾病有一定保护作用。     

肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠肾组织自噬相关蛋白表达的影响

目的肾衰Ⅱ号方对5/6(A/I)肾切除慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾组织自噬相关蛋白表达的影响。方法随机选取65只SD雄性大鼠采用5/6(A/I)肾切除术制备CRF大鼠模型,将45只成功造模大鼠随机分为模型组、中药组(肾衰Ⅱ号方10 mL/kg)、西药组(氯沙坦钾6 mL/kg),每组15只,另取15只大鼠作为假手术组。给予相应干预,60日后检测大鼠的肾功能[血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、内生肌酐清除率(CCr)]及血红蛋白(HGB),采用Western Blot检测自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1、LC3的表达,HE和Masson染色观察肾组织病理形态。结果与本组干预前比较,中药组、西药组干预后SCr、BUN、HGB水平均降低(P0.01),CCr水平升高(P0.01)。与假手术组比较,模型组BUN及SCr升高(P0.01),CCR及HGB降低(P0.01),肾皮质和肾髓质Atg5、Beclin-1蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高(P0.01,P0.05)。与模型组同期比较,两个给药组干预后BUN水平降低(P0.01), CCr水平升高(P0.01),肾皮质和肾髓质Atg5、Beclin-1蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高(P0.01,P0.05)。HE和Masson染色显示,中药组和西药组肾脏病理变化明显减轻,优于模型组。结论肾衰Ⅱ号方能够改善5/6(A/I)肾切除CRF大鼠的肾功能,提高HGB水平,减轻肾间质纤维化,其作用机制可能与自噬相关信号通路的激活有关。     

疏肝健脾方对慢性乙型肝炎肝郁脾虚型患者外周血的影响

T淋巴细胞亚群在慢性乙型肝炎(简称慢性乙肝)病情发展、复发和预后中起决定作用[1].中医辨证以肝郁脾虚型多见,疏肝健脾方是治疗慢性乙型肝炎肝郁脾虚型的名方.动物研究发现[2],疏肝健脾法干预鸭乙肝病毒感染肝郁脾虚证的疗效肯定,能够有效抑制HBV DNA病毒的复制,但有关疏肝健脾方对慢性乙型肝炎肝郁脾虚型外周血T细胞亚群的影响国内外鲜有报道.本研究观察了疏肝健脾方     

疏肝活血健脾补肾汤对肝纤维化指标的影响

Ⅲ型胶原氨基肽（PⅢP）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（N—C）在病毒性肝炎中常作为肝细胞损伤程度的诊断依据，我院采用疏肝活血健脾补肾汤治疗慢性肝炎肝纤维化患者，经观察对PⅢP、LN、N—C指标的改善有较好的疗效，现小结如下。     

健脾益气方对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞自噬及上皮间质转化的影响

目的:探讨健脾益气方调控腹膜透析(PD)大鼠腹膜间皮细胞(PMC)自噬及上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:将70只无特定病原体动物(SPF)级雄性SD大鼠随机分为中药高剂量组、中药低剂量组、西药组、模型组、假手术组,每组14只。除手术组不切除肾脏只剥离肾脏包膜外,其余各组大鼠均行5/6肾切除,并采取腹腔注射4.25%腹膜透析液复制腹膜纤维化模型。造模成功后,中药高、低剂量组采用健脾益气方灌胃,西药组采用阿托伐他汀钙片灌胃,模型组、假手术组采用0.9%氯化钠注射液灌胃。给药4周后,光镜下观察大鼠PMC结构,测量腹膜厚度;电镜下观察大鼠PMC超微结构;免疫组织化学法及蛋白质印迹法检测微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达。结果:与假手术组比较,模型组PMC自噬体数量明显减少,自噬水平下调,大鼠腹膜致密层厚度及LC3-Ⅱ、Beclin-1、α-SMA表达水平均升高(P<0.05),E-cadherin表达水平均降低(P<0.05)。与模型组比较,西药组、中药高剂量组、中药低剂量组PMC...     

健脾化痰疏肝活血法治疗脂肪肝肝纤维化60例

目的:观察健脾化痰疏肝活血法治疗脂肪肝肝纤维化的临床疗效.方法:治疗组60例运用健脾化痰疏肝活血法治疗,对照组40例用西药治疗.结果:总有效率治疗组为88.3％,对照组为67.5％,两组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论:健脾化痰疏肝活血法治疗脾虚痰阻、肝郁血瘀型脂肪肝肝纤维化疗效满意.     

芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝脏细胞自噬的影响

目的 观察芪术颗粒对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导大鼠肝纤维化模型自噬的影响。方法 将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组、芪术颗粒组,除正常对照组外其余各组均腹腔注射CCl4建立肝纤维化模型,按照组别对应处理。4周后取肝组织,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及自噬相关基因3（autophagy-related gene 3,Atg3）、自噬相关基因Beclin1介导的蛋白表达,Real-time PCR检测Atg3、Beclin1基因表达,电镜下观察自噬情况。结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝α-SMA蛋白显著增多（P<0.01）;与模型对照组比较,复方鳖甲软肝片组、芪术颗粒组肝α-SMA蛋白显著减少（P<0.05）;与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝Atg3蛋白表达显著增加（P<0.01）,Atg3基因表达增加,Beclin1蛋白及基因表达增加,自噬溶酶体和自噬体数量增多;与模型对照组比较,芪术颗粒组、复方鳖甲软肝片...     

清肝健脾活血方对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠氧化应激的影响

目的:观察清肝健脾活血方对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠模型氧化应激作用的影响.方法:将72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、鳖甲煎丸组和清肝健脾活血方高、中、低剂量组,每组12只.除正常组外,其余各组大鼠采用每周腹腔注射2次40％四氯化碳(CCl4)橄榄油混悬液腹腔注射的方法建立肝纤维化模型,共8周.于造模第2日开始,各给...     

疏肝健脾方对化学性肝损伤的保护作用

目的:观察疏肝健脾方不同提取物对CCl4诱发的化学肝损伤小鼠的保护作用。方法:将小鼠随机分为正常组、模型组、疏肝健脾方水提组、醇提组、醇水双提组、联苯双酯(BP)组,灌胃给予不同工艺制备的提取物,每天一次,连续10d,末次给药8h后,按0.1ml/10g一次性注射0.1%CCl4溶液复制小鼠化学性肝损伤模型。分光光度法测定血清中谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;HE染色观察肝病理组织学改变;免疫组化染色检测NF-κB、TNF-α蛋白的表达。结果:疏肝健脾方水提取物(15.6g/kg)、醇提取物(15.6g/kg)、醇水双提取物(15.6g/kg)不仅能降低ALT、AST、MDA含量,升高SOD、GSH-Px活性,还能减轻肝脏病理损伤程度,抑制肝脏NF-κB、TNF-α蛋白的表达。结论:疏肝健脾方对CCl4诱发的肝损伤小鼠有一定的保护作用,其机制可能与抗机体脂质过氧化有关。     

通窍活血汤对血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬相关蛋白LC3及Beclin-1的影响

目的:探讨通窍活血汤对血管性痴呆大鼠海马CA 1区自噬相关蛋白LC3及Beclin-1表达的影响。方法:50只健康雄性SD实验大鼠随机分为假手术组(Sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)、通窍活血汤组高、中、低剂量组,采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备血管性痴呆大鼠模型,用Morris水迷宫实验检测模型,4周后采用免疫印迹法检测各组大鼠海马CA1区LC3II/LC3I比值、Beclin1蛋白的表达及变化情况。结果:Beclin1蛋白Western blot检测结果,与Sham组比较,VD组的Beclin1蛋白表达明显增高(P<0.05);与VD组比较,通窍活血汤高中剂量组Beclin1表达明显降低(P<0.05)。LC3蛋白Western blot检测结果:与Sham组比较,VD组的LC3II/LC3I比值均增高(P<0.05);与VD组比较,通窍活血汤高、中剂量组LC3II/LC3I比值增降低(P<0.05)。结论:通窍活血汤可减少血管性痴呆大鼠自噬相关蛋白的表达。     

柔肝通络汤对MCAO大鼠自噬蛋白Beclin1及LC3表达的影响

目的 从细胞自噬的角度探讨柔肝通络汤治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法 将120只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组及柔肝通络汤组。空白组不予处理,假手术组及模型组予蒸馏水灌胃,柔肝通络汤组柔肝通络汤灌胃,均预处理1周。末次灌胃30min后,建立脑缺血再灌注模型。按再灌注3、6、12、24h时间点进行大鼠神经功能缺损评分并取脑,进行神经功能评分、TTC染色、HE染色、免疫组化法检测Beclin1、LC3蛋白的表达。结果 与空白组及假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分升高(P<0.01),模型组与柔肝通络汤组均可见面积不等的梗死灶(P<0.01);模型组大鼠梗死侧脑组织细胞形态变性、坏死,出现噬神经细胞现象,且随时间增长而加重,Beclin1及LC3表达升高(P<0.01)。与模型组比较,柔肝通络汤组神经功能缺损评分下降(P<0.05),梗死面积有所减小,差异有统计学意义(P<0.05)。且柔肝通络汤组各亚组较模型组细胞形态损伤明显减轻,Beclin1及LC3表达均降低(P<0.01)。结论 柔肝通络汤能改善大鼠神经功能缺损,缩小脑梗死灶,...     

健脾疏肝方对CCl_4诱导小鼠肝纤维化抑制作用的实验研究

目的:观察中药复方健脾疏肝方对CCl4诱导小鼠肝纤维化的抑制作用,并探寻其作用机制。方法:将80只雄性清洁级C57BL/6J小鼠随机均分为4组,即正常组、模型组、健脾疏肝组及活血化瘀组。除正常组外,其余3组腹腔注射20%CCl4橄榄油剂1 mL/kg(2次/周,共8周)。正常组腹腔注射等量100%橄榄油剂(2次/周,共8周)。第5周起健脾疏肝组及活血化瘀组分别给予健脾疏肝方和扶正化瘀胶囊灌胃(1次/d,共4周)。实验结束后检测小鼠肝组织基质金属蛋白酶(MMP-1)及其抑制物(TIMP-1)、血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)及四型胶原(Ⅳ-C)水平,采用光镜观察小鼠肝脏病理组织学改变。结果:健脾疏肝组、活血化瘀组TIMP-1、HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平均显著低于模型组(P<0.01);健脾疏肝组TIMP-1、HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平均显著低于活血化瘀组(P<0.01);与空白组相比,其余3组MMP-1均明显升高(P<0.01),但彼此无明显差异(P>0.05)。结论:健脾疏肝方对CCl4诱导的小鼠肝纤维化具有良好的治疗作用。     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠自噬相关蛋白Beclin-1及LC3-Ⅱ表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27 g·kg~(-1)),秋水仙碱组(0.2 mg·kg~(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg~(-1))。采用大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1.5 mL·kg~(-1))联合灌胃30%乙醇(10 mL·kg~(-1))制备肝纤维化模型,连续造模8周;其后灌胃相应药物(10 mL·kg~(-1)),每日1次,连续4周,正常组、模型组给予等体积生理盐水。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)及总胆红素(TBIL)水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度;透射电镜观察大鼠肝组织超微结构;免疫组化法检测肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;qRT-PCR以及Western Blot法检测大鼠肝组织Beclin-1、LC3-ⅡmRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GGT、TBIL含量显著增高(P 0.05,P 0.01),ALB含量显著降低(P 0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1和LC3-ⅡmRNA、蛋白表达上调(P 0.01)。与模型组比较,FRF中、高剂量组的γ-GGT显著下降(P 0.05,P 0.01),FRF各剂量组的大鼠血清ALT、AST、TBIL明显降低(P 0.05,P 0.01),ALB升高(P 0.05,P 0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1、LC3-ⅡmRNA、蛋白表达显著下调(P 0.01)。结论FRF能干预纤维组织增生,改善肝功能,其抗肝纤维化机制可能与下调Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制细胞自噬功能相关。     

基于ICC自噬探讨疏肝健脾法调节功能性消化不良胃肠动力障碍的研究思路

功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是临床常见的一种功能性胃肠病,其发病率高、病因复杂且病程迁延.Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)是胃肠道电活动的起搏细胞,产生和传播慢波,并参与胃肠道神经递质信号的传递.自噬调节是多种疾病潜在的治疗策略,F...