TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

TP53在不明原因复发性流产患者绒毛组织中的表达及其对人滋养层细胞生长的影响

目的：探讨肿瘤蛋白P53（TP53）在不明原因复发性流产（URSA）患者绒毛组织中的表达及其对人滋养层细胞凋亡和迁移的影响,初步阐明其机制。方法：选取40例URSA患者（患者组）和30例实施人工流产健康孕妇（对照组）的绒毛组织,采用RT-PCR和Western blotting法检测绒毛组织中TP53 mRNA及蛋白表达水平。培养人滋养层HTR-8细胞,分为空白对照组、空载体组和TP53-siRNA组,Western blotting法检测转染siRNA后3组细胞中TP53蛋白表达水平。流式细胞术、Transwell小室和Western blotting法分别检测空白对照组和TP53-siRNA组细胞凋亡率、细胞迁移数和细胞中TP53、Cleaved-Caspase3、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：患者组绒毛组织中TP53 mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组（P<0.01）。TP53-siRNA组细胞中TP53蛋白表达水平明显低于空白对照组（P<0.01）。细胞转染48h后,与空白对照组比较,TP53-siRNA组细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,细胞迁移数明显升高（P<0.01）,Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：TP53在URSA患者绒毛组织中呈高表达,沉默人滋养层HTR-8细胞TP53表达能明显促进细胞迁移和抑制细胞凋亡。     

章勤治疗不明原因复发性流产经验

复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)是指与同一性伴侣连续发生3次及以上的自然流产[1],其常见发生原因包括解剖异常、病原微生物感染、内分泌代谢异常、自身免疫性疾病等多种因素,但目前仍有高达50％以上的RSA无法明确其致病原因[2],称为不明原因复发性流产(unexplain...     

非对称性二甲基精氨酸在不明原因复发性流产患者绒毛及外周血的表达及其意义

目的 探讨不明原因复发性流产（URSA）患者绒毛及外周血非对称性二甲基精氨酸（ADMA）表达及其临床价值。方法 选取URSA患者168例,采用计算机产生随机数法将就诊患者以3〖DK〗∶1的比例分为训练集126例(URSA组)和测试集42例,另选取同期于我院进行终止妊娠的126例孕妇作为对照,对比训练集及对照组临床资料及外周血和绒毛组织ADMA表达,通过拟合曲线和阈值效应分析患者血清URSA表达与URSA发生的关系,采用多因素Logistics回归模型分析发生URSA的独立危险因素,构建列线图模型。结果 与对照组比较,URSA组患者IL-6、IL-117、Th17、Th17/Treg及血浆、绒毛组织ADMA表达显著增加,孕酮、IL-10、TGF-β及Treg显著降低（P＜0.05）。IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg及血浆ADMA、绒毛组织ADMA是发生URSA的独立危险因素,而IL-10、TGF-β及Treg是发生URSA的保护因素（P＜0.05）。当血浆ADMA≥1.43 μmol/L时,血浆ADMA每增加0.6 μmol/L,孕妇发生VRSA的风险增加17%,差异具有统计学意义（OR=0.115,95%CI：0.102~0.133,P＜0.05）;当绒毛ADMA≥1.92 μmol/L时,绒毛ADMA每增加0.6 μmol/L,孕妇发生URSA的风险增加14%,差异具有统计学意义（OR=1.192,95%CI：1.085~1.302,P＜0.05）。依据独立影响因素构建的列线图预测模型具有较高的区分度、准确性和临床适用性。结论 ADMA在URSA患者血浆及绒毛组织中的表达增加,是URSA发生的独立危险因素,对URSA的发生具有一定的预测价值     

ET-1及受体在不明原因复发性流产绒毛中的表达及其对滋养细胞迁移的调节

目的 通过检测内皮素-1(endothelin-1, ET-1)及受体(endothelin receptors, ETR)在不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)绒毛组织中的表达,探讨其与URSA的关系。方法不明原因复发性流产患者30例(RSA组)及正常早孕人流妇女30例(正常组,即CTL组),采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)及Western印迹法检测两组绒毛组织中ET-1、ETR-A、ETR-B mRNA及蛋白的表达。取体外培养的妊娠早期绒毛外滋养细胞Transwell迁移实验法检测ET-1、ETR-A阻断剂BQ-123及ETR-B阻断剂BQ-788受体对绒毛外滋养细胞迁移能力的影响。结果RSA组较正常组绒毛组织中ETR-B mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而ET-1、ETR-A mRNA及蛋白在二组绒毛组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。ET-1促进HTR-8细胞迁移,ETR-B阻断剂阻断ET-1的促迁移作用。结论 ET-1可能通过ETR-B受体促进妊娠早期绒毛外滋养细胞迁移,URSA患者较正常组绒毛中ETR-B mRNA及蛋白表达降低可能与URSA相关。     

IL-15与NK细胞在不明原因复发性流产中的临床意义

目的:探讨外周血白细胞介素(IL)-15与自然杀伤(NK)细胞亚群水平的表达和不明原因复发性流产(URSA)的关系,及其诊断URSA的价值。方法:以57例URSA患者为观察组,同期入院体检无不良孕产史的57例健康早孕者为对照组;酶联免疫法检测两组血清孕酮、绒毛膜促性腺激素β(HCG-β)、IL-15、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)及趋化因子配体5(CCL5)水平,流式细胞仪检测两组NK细胞水平;分析IL-15与NK细胞亚群的相关性及诊断URSA效能。结果:观察组血清孕酮及HCG-β水平低于对照组(P<0.05),观察组IL-15水平高于对照组(P<0.05)。观察组NK细胞CD56⁺CD16⁺型高于对照组(P<0.05),NK细胞CD56⁺ CD16^-与CD56^- CD16⁺型观察组低于对照组(P<0.05)。外周血IL-15水平和NK细胞CD56⁺CD16⁺...     

miR-30a-3p在复发性流产绒毛组织中的表达及对滋养细胞功能的影响

目的 观察miR-30a-3p在复发性流产患者绒毛组织中的表达,及其对滋养细胞(HTR-8)凋亡、迁移功能的影响.方法 采用qRT-PCR检测复发性流产患者(RSA组)及正常早孕妊娠(正常组)要求终止的患者各20例绒毛组织中miR-30a-3p的表达水平.在HTR-8细胞中转染miR-30a-3p前体分子,共分3组:m...     

补肾化瘀法治疗原因不明复发性流产临床研究

目的：临床研究补肾化瘀法治疗原因不明复发性流产。方法：选取48例保胎患者,随机分为观察组和对照组各24例,观察两组保胎成功率;观察组予补肾化瘀法治疗,对照组予补肾法治疗。结果：观察组保胎成功率为87.5%,对照组为66.7%,观察组疗效明显高于对照组。结论：补肾化瘀法治疗原因不明复发性流产疗效显著。     

淋巴细胞主动免疫治疗原因不明复发性流产的护理

目的:探讨淋巴细胞主动免疫治疗原因不明复发性流产的护理方法。方法:对原因不明复发性流产患者,应用丈夫或健康第三者的淋巴细胞主动免疫疗法治疗,并进行临床观察与护理干预。结果:治疗后妊娠74例,其中妊娠已分娩49例,目前妊娠>16周17例,妊娠在16周以内再次流产8例,妊娠>16周流产0例,妊娠成功率89.2%。结论:淋巴细胞主动免疫疗法配合护理干预治疗原因不明复发性流产安全可靠,效果显著。     

原因不明性复发性流产淋巴细胞免疫治疗的剂量及疗效研究

目的：探讨原因不明性复发性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA）患者再次妊娠结局及治疗前后患者外周血调节性T细胞水平的变化。方法对165例URSA患者进行主动免疫治疗,观察患者治疗后再次妊娠结局。同时检测和分析治疗前后患者外周血的CD4＋CD25＋Tr水平。将试验过程中供体血浆析出较少致使分离得到的淋巴细胞较少的患者37例作为低剂量组,较多者84例作为高剂量组。结果165例患者中,再次妊娠121例,仍在治疗中44例。再次妊娠的患者中成功分娩87例,再次发生早期流产14例,继续妊娠20例,主动免疫治疗成功率88.5%。其中低剂量组成功分娩29例,再次早期流产8例,主动免疫治疗成功率（72.4%）显著低于高剂量组（92.3%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。所有患者治疗后CD4＋CD25brightT表达水平均显著高于治疗前（P＜0.05）;妊娠成功患者外周血CD4＋CD25＋Tr及CD4＋CD25brightT均较妊娠失败者显著升高（P＜0.05）。结论主动免疫治疗对 URSA 患者有效,治疗时应注射高剂量淋巴细胞,主动免疫治疗可显著提高患者 CD4＋CD25brightT 的表达水平, CD4＋CD25brightT可能是调控母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素。     

原因不明习惯性流产与HLA-DRB1位点的相关研究

目的探讨原因不明习惯性流产（URSA）与HLA-DRB1位点的相关性。方法采用PCR-SSOP方法对72对URSA患者夫妻进行HLA-DRB1位点基因分型,并与80对正常夫妇比较,将结果进行统计学分析。结果 HLA-DRB1＊15在URSA患者组中频率为15.28%（22/144）,在正常对照组为25.00%（40/160）,（χ2=4.412,P=0.035）;HLA-DRB1＊09在URSA患者丈夫中频率为34.72%（25/72）,在正常对照组的丈夫中为13.75%（11/80）,（χ2=9.221,P=0.002）;HLA-DRB1＊13基因频率在URSA患者丈夫为5.56%（4/72）,正常对照组为16.25%（13/80）,（χ2=4.363,P=0.036）。URSA患者夫妻间享有1个HLA-DRB1共有抗原比例为34.72%（25/72）,4.17%（3/72）的URSA患者夫妻间享有两个HLA-DRB1共有抗原;对照组32.50%（26/80）夫妻间享有1个HLA-DRB1共有抗原,2.50%（2/80）享有两个HLA-DRB1共有抗原。两组比较,差异无统计学意义。结论 HLA-DRB1＊15可能为女方URSA的拮抗基因,HLA-DRB1＊13可能为男方URSA的拮抗基因,HLA-DRB1＊09可能为男方URSA的易感基因。     

反复自然流产与绒毛中TRAIL及其受体的表达相关性分析

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在不明原因早期反复自然流产患者(URSA)绒毛中的表达.方法:实验组15例,为妊娠45～60d的URSA患者;对照组15例,为健康的人工流产患者.2组分别取绒毛组织采用免疫组化法检测TRAIL及其受体的表达.结果:实验组绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5蛋白表达较强,诱骗受体DcR1及DcR2蛋白与正常对照组相比表达较少.结论:TRAIL及其受体参与维持母胎界面的免疫耐受,其表达失衡可能导致绒毛细胞凋亡紊乱,是造成自然流产的机制之一.     

药物治疗对不明原因复发性流产患者Th_1、Th_2细胞因子的影响

目的:通过观察安胎种子丸治疗对不明原因复发性流产(URSA)患者Th1、Th2细胞因子的影响,探讨其治疗URSA的机理。方法:33例URSA患者用安胎种子丸治疗,每次6克,3次/日,3个月为一疗程。采用酶联免疫吸附法分别检测33例URSA患者治疗前后和正常妇女(30例)血清Th1(IL-2)细胞因子、Th2(IL-10)细胞因子水平,观察治疗前后患者血清中Th1(IL-2)、Th2(IL-10)水平的变化。结果:治疗前URSA患者IL-2水平明显高于正常妇女,IL-10水平明显偏低,差异均有显著性(P<0.05);治疗后与治疗前相比,IL-2水平明显降低,IL-10水平明显升高,差异均有显著性(P<0.05)。结论:安胎种子丸可能通过调节细胞因子平衡而达到保胎作用,初步揭示其安胎的机理。     

人类白细胞抗原-DR基因与不明原因的重复性流产的关联性研究

目的：探讨不明原因重复性自然流产(URSA)及其临床表现与人类白细胞抗原(HLA)DR1、DR3、DR4、DR10等位基因频率的关系。方法：运用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR—SSP）方法测定HLA—DR1、DR3、DR4、DR10的基因频率。结果：HLA—DR1、DR3的阳性率在URSA组与对照组差异无显著性，DR4阳性率在URSA组明显高于对照组，差异有显著性，DR10阳性率在URSA组高于对照组，但差异无显著性。DR4基因分布与URSA患者的不同临床特征无明显关联。与抗心磷脂抗体(ACA)有较强关联。结论：HLA—DR4与URSA有明显关联，尤其在ACA( )患者中关联更强。     

原因不明性复发性流产综合治疗后妊娠结局的研究

目的探讨原因不明性复发性流产患者给予孕激素治疗、主动免疫治疗及被动免疫治疗等综合治疗后的妊娠结局。方法回顾性分析102例原因不明性复发性流产病例,其中综合治疗组(观察组)52例,孕激素治疗组(对照组)50例。综合治疗组孕前及孕早期给予丈夫淋巴细胞免疫治疗,孕早期给予孕激素及免疫球蛋白治疗;孕激素治疗组孕早期仅给予孕激素。追踪两组患者的妊娠结局。结果给予综合治疗患者妊娠成功率达96.2%(50/52),单纯补充孕激素的患者妊娠成功率为40.0%(20/50),两者差异有统计学意义(χ2=6.37,P=0.012)。观察组妊娠期糖尿病的发生率为16.0%(8/50),对照组为25.0%(5/20),差异无统计学意义(P=0.518)。观察组分娩后新生儿Apgar评分7分的发生率为98.0%(49/50),对照组为95.0%(19/20),差异无统计学意义(P=0.915)。新生儿男女比例观察组为1.27∶1,对照组为1.22∶1,差异无统计学意义(P=0.857)。结论给予孕激素、主动免疫治疗及被动免疫治疗等综合治疗方法对于URSA患者是安全、有效的。     

主动免疫治疗不明原因复发性自然流产的临床分析

目的探讨主动免疫治疗不明原因复发性自然流产的临床疗效及对分娩结局的效果。方法选择2010年1月～2012年1月期间在我院就诊的不明原因复发性自然流产患者30例为观察组,并给予淋巴细胞注射及常规保胎药物治疗;选择同期在我院就诊的不明原因复发性自然流产患者33例为对照组,并在妊娠后给予常规保胎药物治疗。结果观察组妊娠成功率为90%,而对照组则为54.55%,两组相比较差异有显著性意义(P<0.01),观察组随访27例中并未出现并发症、低体重儿、畸形儿,观察组在新生儿Apgar评分与同期分娩组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论主动免疫治疗不明原因复发性自然流产是一种无风险、无毒副作用、费用低、治愈率高的理想治疗方法。     

原因不明性复发性流产91例主动免疫治疗效果分析

目的探讨原因不明性复发性流产(URSA)行主动免疫治疗的疗效及免疫细胞含量的变化特征。方法应用荧光染色和流式细胞技术,分别对2011年1月至2012年8月在安徽医科大学第一附属医院产前诊断中心行淋巴细胞主动免疫治疗的91例URSA患者治疗前后淋巴细胞坏死率及CD3、CD4、CD8及NK细胞比率进行测定;并随访其妊娠结局。结果 79例成功妊娠至12周胎盘形成以后,12例在孕12周以前再次流产,成功率86.81%;治疗后CD3、CD4和NK细胞比例明显下降,CD8及淋巴细胞坏死率显著上升,差异具有统计学意义(P0.05)。结论淋巴细胞主动免疫治疗对于URSA具有显著的疗效,NK细胞的降低有利于妊娠成功。     

Association of HLA-DQB1 coding region with unexplained recurrent spontaneous abortion

Background DNA analysis has shown a lack of significant compatibility between couples affected by unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA) compared with normal fertile couples,^8 although one study that made use of a PCR-sequence-specific oligonucleotide (SSO) method did observe evidence of significant compatibility in the HLA-DQA1 and DQB1 alleles between patients and aborted fetuses.^9 This study was designed to investigate whether URSA were associated with particular DQ alleles or promoter alleles.Methods Thirty-two patients with URSA and 54 women who had had at least one successful pregnancy were included in this study. HLA-DQ genotyping was performed by the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method. The HLA-DQB1 promoter was detected by the SSO and sequence-specific primer (SSP) methods. The DQA1, DQB1, and DQB1 promoter (QBP) gene frequencies in the patients were compared with the gene frequencies in normal controls. The data were analyzed statistically with the x^2 and Fisher‘s exact tests.Results The results showed that the frequency of DQB1 ^*0604/0605 was significantly higher and the frequency of DQB1^* 0501/0502 was significantly lower in the patient group as compared with the normal controls. In addition, the frequencies of the DQA1 ^* 01-DQB1 ^* 0604/0605 and QBP6.2-DQB1 ^* 0604/0605 haplotypes were overrepresented in the patients relative to the controls. Our results did not show any differences between URSA patients and the controls with regard to DQA1 and QBP allele frequencies.Conclusions Our data suggest that URSA is associated with the HLA-DQB1 coding region, and is not associated with its upstream regulatory region. The DQB1 ^* 0604/0605, DQA1 ^* 01-DQB1 ^* 0604/0605, and QBP6.2-DQBI^* 0604/0605 haplotypes may confer susceptibility to URSA, while the DQB1 ^* 0501/0502 allele may protect women from URSA.     

EP1在不明原因复发性自然流产中的作用研究

目的研究前列腺素E2受体亚型EP1在不明原因复发性自然流产(URSA)中表达水平变化,分离鉴定子宫平滑肌细胞,并用特异性siRNA抑制EP1的表达,观察其对子宫平滑肌收缩率的影响,为抗RSA药物研究提供新的理论依据。方法用荧光定量PCR检测两组子宫平滑肌细胞膜上EP1的表达分布情况;应用图像分析系统测量正常组和URSA组病人子宫平滑肌细胞收缩率;用特异性siRNA抑制URSA组子宫平滑肌细胞EP1的表达,分析其对在子宫平滑肌细胞收缩率的影响。结果 URSA组子宫平滑肌细胞中EP1的表达水平显著高于正常组(P<0.01),同时URSA组中子宫平滑肌细胞的收缩率显著高于正常组(P<0.01);EP1特异性siRNA和阴性对照siRNA处理URSA组子宫平滑肌细胞后,EP1特异性siRNA处理子宫平滑肌细胞收缩率较阴性对照siRNA处理组显著下降(P<0.05)。结论在RSA病人中,外在刺激或内在因素导致EP1表达上调可能是促使子宫的异常收缩而发生流产的一个重要原因。因而PGE2/EP1系统可作为治疗RSA的一个潜在靶点。