用PCR-反向点杂交法检测九江地区乙型肝炎病毒基因型

目的调查九江地区乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus,HBV）基因型的分布情况。方法采用PCR-反向点杂交法,对203例HBV DNA阳性患者HBV进行基因型分析。结果共检测了203例患者,成功分型199例,占98.03%。其中B型160例,占78.82%;C型24例,占11.82%;B、C混合型14例,占6.90%;D型1例,占0.49%。结论利用PCR-反向点杂交法技术可以较简便地对HBV进行基因型分析,分型成功率高,适用于临床检测;在九江地区人群中感染的HBV以B型为主,C型次之,其它型别极少见。     

外阴阴道念珠菌病患者菌群调查及其ERG5基因突变研究

目的?了解外阴阴道念珠菌病（VVC）患者白念珠菌分离及ERG5基因突变情况。方法?收集无锡市妇幼保健院2018年6—12月妇产科门诊VVC患者阴道分泌物500例，通过镜下观察菌丝及孢子选取可疑标本，经沙保弱琼脂平板增菌后接种科玛嘉显色平板，进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）鉴定；用真菌快速培养鉴定药敏试剂盒对白念珠菌进行药敏试验；PCR扩增部分白念珠菌ERG5基因并进行测序分析。结果?显色平板鉴定结果显示，VVC病原以白念珠菌最多（54.7%），其次为光滑念珠菌（22.5%）、热带念珠菌（16.5%）、克柔念珠菌（4.2%）和其他真菌（2.1%）；156株显色平板鉴定结果为白念珠菌的菌株中，经MALDI-TOF MS鉴定为白念珠菌共155株。155株白念珠菌对5-氟尿嘧啶均敏感，对各类唑类药物呈现不同水平耐药性；对7株（3株唑类药物耐药菌株，3株唑类药物敏感菌株和1株质控菌株）进行ERG5扩增测序，检出2个突变位点（1个同义突变位点G528A，1个错义突变位点G528C）。结论?外阴阴道念珠菌以白念珠菌为主，并对各类唑类药物表现出不同的耐药率，耐药菌株中ERG5基因在G528C位点突变可能与耐药有关。     

外阴阴道念珠菌病患者白念珠菌分离情况及ERG5基因位点突变分析

目的 了解外阴阴道念珠菌病(VVC)患者白念珠菌分离及ERG5基因突变情况.方法 收集无锡市妇幼保健院2018年6—12月妇产科门诊VVC患者阴道分泌物500例,通过镜下观察菌丝及孢子选取可疑标本,经沙保弱琼脂平板增菌后接种科玛嘉显色平板,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定;用真菌快速...     

复发性外阴阴道念珠菌病病原学研究

目的 了解复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)致病菌的菌种分布情况及对抗真菌药物的敏感性与外阴阴道念珠菌病(VVC)的不同之处.方法 分别采集VVC患者和RVVC患者阴道分泌物进行念珠菌培养、鉴定和药敏试验.结果 76例RVVC病例经鉴定白色念珠菌60株(78.94%),光滑念珠菌6株(7.89%),热带念珠菌5株(6.57%),克柔念珠菌5株(6.57%),与VVC组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RVVC的念珠菌菌株对药物的敏感率为制霉菌素最高,其次为两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑.RVVC组与VVC组比较,差异无统计学意义(P＞0.01).结论 RVVC的主要致病菌仍是白色念珠菌,但非白色念珠菌所占比例呈上升趋势;制霉菌素对阴道内真菌的敏感率最高,是治疗真菌感染的首选药物,RVVC致病菌株对唑类抗真菌药物仍有较高的敏感率.     

胶体金法在检测外阴阴道念珠菌中的临床意义

目的探讨胶体金念珠菌试纸条(以下简称胶体金法),在检测外阴阴道分泌物中外阴阴道念珠菌(VVC)中的临床应用。方法用生理盐水涂片法、革兰染色涂片法、培养法、胶体金法同时检测300例妇女阴道分泌物中的念珠菌。结果300例阴道分泌物中生理盐水涂片法检出念珠菌90例,革兰涂片染色法检出念珠菌101例,培养法检出念珠菌110例,胶体金检出念珠菌108例。胶体金法检出阳性率与培养法相比,差异无统计学意义(χ2=0.125,P0.05)。胶体金法的敏感性为95.5%,特异性为98.4%,约登指数为0.939,阳性预测值为97.4%,阴性预测值为97.2%。结论用胶体金法检测外阴阴道分泌物中的阴道念珠菌操作简便、快速和结果可靠。具有较高的特异性,敏感性,有效性。作为外阴阴道念珠菌筛查的一种常规检测方法,值得临床应用推广。     

外阴阴道念珠菌病发病机制及抗生物膜治疗的研究进展

外阴阴道念珠菌病是一种主要由白念珠菌引起的症状性阴道炎症,有近40%的患者会复发,部分患者甚至发展为复发性外阴阴道念珠菌病。该文讨论了白念珠菌的致病机制,并概括了外阴阴道念珠菌病抗生物膜治疗的最新进展。     

FFPE组织HPV检测中PCR-反向点杂交技术的应用:两种核酸提取方法的比较

目的 比较两种不同核酸提取方法在人乳头瘤病毒(HPV)亚型检测中的应用,为实验室选择相应的核酸提取方法来获得有效的HPV结果提供依据。方法 收集25例浸润性宫颈癌福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织标本,采用粗提法和纯化法两种核酸提取方法提取DNA标本,并通过检测DNA浓度、纯度及内参β-Globin来评估DNA质量。将提取的DNA经PCR扩增后,应用PCR-反向点杂交法检测HPV亚型,分析两种提取方法HPV检测结果的有效性及一致性。结果 两种提取方法均能获得适量的DNA用于HPV检测,粗提法较纯化法可获得较高的DNA浓度(P<0.05),但存有一定有机物及蛋白质污染。纯化法较粗提法获得的DNA纯度更高(P<0.05)。将粗提法和纯化法提取的DNA用于检测HPV感染,总HPV阳性率分别为92%和96%。采用粗提法提取的DNA标本高危型HPV(HR-HPV)阳性率低于纯化法(92%vs. 96%),但单一型HPV16阳性率高于纯化法(44%vs. 36%);与纯化法相比,粗提法提取的DNA无法检测出更多型别的混合感染,而FFPE组织标本经纯化法分离后可检测出HPV33、HPV...     

外阴阴道念珠菌病的病原检测及体外药敏检测

目的：了解性病门诊外阴阴道念珠菌病(WC)患者的病因及酵母菌体外对伊曲康唑(IT)、氟康唑(FL)的敏感性。方法：用法国梅里埃公司的试剂盒对107例疑诊为WC的阴道分泌物标本进行培养鉴定,并用E-test抗真菌药敏试条检测IT、FL对酵母菌的MIC值,判定敏感性。结果：107例阴道分泌物标本培养阳性87例,分离出自念株菌69株(79．31％,69／87),其中对IT敏感67株、中敏1株、耐药1株,对FL均敏感(69株);光滑念株菌10株(11．49％,10／87),其中对IT敏感2株、中敏2株、耐药6株,对FL敏感9株、耐药1株;近平滑念珠菌4例(4．60％,4／87),对IT敏感3株、耐药1株,对FL均敏感(4株);热带念珠菌、土生念珠菌、清酒念珠菌和埃莫毕赤念珠菌各1例(1．15％,1／87),其对IT、FL均敏感。结论：WC最常见的病因仍是自念珠菌,但比率明显下降;用Btest法检测酵母菌对IT、FL的敏感性在临床选择抗真菌药物具有一定的参考意义。     

氟康唑联合达克宁栓治疗复杂性外阴阴道念珠菌病

目的：探讨复杂性外阴阴道念珠菌病的有效治疗方法及其疗效。方法：将67例复杂性外阴阴道念珠菌病患者随机分成两组，观察组；氟康唑联合达克宁栓治疗；对照组：单纯达克宁栓治疗，两组均治疗3个疗程；结果：观察组与对照组比较短期疗效无明显差异，长期疗效明显优于对照组（P〉0．05）．结论：全身用药联合局部用药是治疗复杂性外阴阴道念珠菌病的有效方法．     

胶体金法联合涂片镜检法在诊断外阴阴道假丝酵母菌病中的应用

目的探讨胶体金法联合涂片镜检法检测假丝酵母菌的临床诊断价值。方法对280例外阴阴道假丝酵母菌病患者的白带标本同时进行真菌培养、胶体金法和涂片镜检法检测,以真菌培养作为诊断金标准对胶体金法和涂片镜检法的阳性检出率进行比较研究。结果 280例真菌培养阳性标本中,胶体金法和涂片镜检阳性检出率分别为68.93%和56.07%,胶体金法显著高于涂片法(P0.005),两种方法联合检测阳性率可达到79.96%。结论胶体金法的阳性检出率高于涂片镜检法,两法联合使用可明显提高检出率,能为临床提供便捷、可靠的诊断依据。     

PCR反向点杂交技术快速鉴定BALF中分枝杆菌菌种的应用研究

目的探讨PCR-反向点杂交技术(PCR-RDBHA)快速鉴定支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid BALF)标本中分枝杆菌菌种的临床应用价值。方法对临床306例活动性肺结核患者、疑似非结核分枝杆菌感染肺病患者BALF标本采用PCR-反向点杂交技术和传统的改良罗氏培养法进行分枝杆菌菌种鉴定。结果 306例BALF标本PCR反向点杂交技术检测出分枝杆菌127例,阳性率为41.5%(127/306),其中结核分枝杆菌复合群(MTC)108例,占分枝杆菌的85.0%(108/127),非结核分枝杆菌(NTM)19例,占分枝杆菌的15.0%(19/127)。NTM中,6例脓肿分枝杆菌,10例胞内分枝杆菌,2例戈登分枝杆菌,1例瘰疬分枝杆菌;传统的改良罗氏培养法检测出分枝杆菌101例,阳性率33.0%(101/306),经菌种的初步鉴定,其中MTC89例,占分枝杆菌的88.1%(89/101),NTM12例,占分枝杆的11.9%(12/101)。结论 PCR反向点杂交技术能够快速鉴定BALF中分枝杆菌菌种,该方法简便、结果准确,具有良好的临床应用价值。     

改进的反向斑点杂交方法

目的 改进反向斑点杂交的操作方法,探索更为简便快捷的实验流程.方法 优化杂交液Ⅱ的组分,使用HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型三个试剂盒验证改进的实验方法.结果 HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型试剂盒的实验结果证实,使用优化后的杂交液Ⅱ,链霉亲和素过氧化物酶在杂交温度能够有效地...     

ABC typing and extracellular enzyme production of Candida albicans isolated from Candida vulvovaginitis

Background Candida albicans is the most common and virulent genus Candida. Detection of virulence factors in this species plays an important role in the better understanding of pathogenesis and antifungal treatment. Molecular typing investigations are important in the epidemiological interpretation of infection. This study aimed to evaluate extracellular enzyme activity and genotyping of C. albicans species isolated from vulvovaginal samples.MethodsOne hundred and three vaginal C. albicans isolates were tested for esterase, phospholipase, proteinase, and hemolysin activities by specific media. Besides, the DNA of C. albicans isolates was extracted and amplified for ABC genotyping.ResultsThe highest enzyme production of C. albicans isolates was for proteinase (97.1%) and esterase (95.2%), whereas 59.2% of C. albicans isolates were negative for hemolysin secretion. Genotype C (83.5%) was the most frequent genotype followed by genotype B (12.6%) and genotype A (3.9%).ConclusionIt is concluded that genotype C was the predominant genotype in all examined vulvovaginal C. albicans isolates. Also, there was a significant difference between enzyme production in each genotype (except for proteinase).     

ERG11基因突变与白念珠菌对氟康唑耐药性的初步研究

目的探讨白念珠菌氟康唑作用的靶酶编码基因（ERG11）突变与氟康唑耐药性的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增临床分离的23株白念珠菌ERG11基因,包括2株耐氟康唑株、9株氟康唑剂量依赖敏感株和12株氟康唑敏感株,并进行双向测序。应用B last软件,将测序结果与网上已发表序列（GenBankAY856352）进行比对,以确定是否发生基因突变。结果23株白念珠菌的ERG11基因序列共检出16个同义突变位点和18个错义突变位点。错义突变中Y205E、I437V、A255V、E260V、K487N、G472R、N435V、D502E、K143Q为新发现的突变位点。结论Y205E、I437V、A255V位点突变发现于敏感株,可能与白念珠菌耐药无关;K487N、G472R、N435V、D502E、E260V发现于剂量依赖敏感株,K143Q发现于耐药株,可能与耐药的形成有关。     

某地区女性生殖道念珠菌感染的病原学调查

目的探讨该地区女性生殖道念珠菌(VVC)感染的病原学分析。方法对2013年5月至2014年4月该院体检女性的阴道分泌物标本进行KOH悬滴法检测,复诊时进行真菌培养检查的标本,使用沙保罗培养基分离菌株并鉴定菌种,将分离的白色念珠菌做药物敏感试验。结果 15 199例标本共检出真菌阳性标本926例。不同年龄组间和不同季节间比较,差异均有统计学意义(χ2=45.714,P0.001;χ2=13.784,P=0.003),老年组患者和冬季阳性率较低。286例真菌标本培养出念珠菌197例,其中白色念珠菌78.17%(154/197),光滑念珠菌10.15%(20/197),热带念珠菌6.09%(12/197),近平滑念珠菌3.05%(6/197),克柔念珠菌2.03%(4/197),酿酒酵母菌0.51%(1/197)。白色念珠菌对制霉菌素敏感率为100.0%,5-氟胞嘧啶敏感率94.2%,氟康唑敏感率94.8%,咪康唑敏感率75.3%,酮康唑敏感率85.1%,伊曲康唑敏感率77.9%。结论生殖道念珠菌感染主要是育龄女性,且菌种分布差异无统计学意义。     

白念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

摘要：目的：建立检测白念珠菌烯醇化酶（enolase, Eno）的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。 方法：将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建立检测Eno的ELISA法,对方法的精密度、特异性、最低检测限等指标进行评价。用该法检测白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母等不同真菌培养上清中Eno水平。 结果：Eno浓度为20 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间变异系数(CV)分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%;最低检测限为1.25 ng/mL。本法可从白念珠菌37 ℃培养24 h后的上清中检出Eno,Eno含量与白念珠菌菌丝含量呈正相关。本法对近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。 结论：建立的检测白念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA方法有较好的特异性,可用于评价Eno检测在侵袭性白念珠菌感染中的诊断价值。     

白色假丝酵母菌ERG11基因突变与唑类抗真菌药物耐药的关系

目的探讨白色假丝酵母菌ERG11基因突变与唑类抗真菌药物耐药的关系。方法纸片扩散法初步筛选临床分离的耐唑类抗真菌药物的白色假丝酵母菌,测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑的最低抑菌浓度,随机选择10株白色假丝酵母耐药株,提取基因组DNA。利用DNASTAR软件辅助设计3对PCR引物,以提取的目的 DNA为模板,分别从前(P1)、中(P2)、后(P3)3段扩增ERG11基因全序列。扩增后的PCR产物经纯化后测序,将测序结果与GenBank中已知标准序列(X13296)进行比较分析。结果电泳结果显示,获得的3段PCR产物大小与预期结果一致。测序结果显示成功获得10株白色假丝酵母菌ERG11全基因序列。与GenBank中标准株序列(X13296)比较,耐药株均存在同义突变和错义突变,共27个碱基突变位点。15个位点是错义突变,其中F126LI、166N、H183Q、V437I、S453F和N490K为新发现的突变位点。结论耐唑类抗真菌药物的白色假丝酵母菌ERG11基因有多个发生错义突变的位点,且为多点突变,可能与其耐药有关。     

反向斑点杂交技术应用于青少年女性HPV感染检测的研究

目的利用反向斑点杂交技术检测青少年女性的人乳头状瘤病毒(HPV)的感染情况并进行型别分析,为该类人群的HPV感染情况提供流行病学数据。方法应用PCR-反向斑点杂交(RDB)法对85例青少年女性进行23种HPV亚型检测(低危型为HPV6、11、42、43、45和高危型为HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4)。结果 85例样本中,HPV感染者40例,阳性率为47.06%,高危型占感染例数的50.62%,低危型占49.38%,二型或二型以上混合感染占52.5%(21/40)。结论应大力加强青少年女性HPV感染的宣传和筛查力度;反向斑点技术是很好的青少年女性HPV感染的筛查手段。     

细菌性阴道病及假丝酵母菌病的感染情况及相关因素分析

目的了解本地区女性细菌性阴道病（BV）及外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）的发病情况及影响疾病的相关因素。方法回顾性分析2011-2013年本院1967例女性体检情况,并进行统计分析,采用问卷调查方式分析影响BV、VVC发病的相关因素。结果1967例体检检出282例女性VVC,检出率14．34％（282／1967）;检出231例BV,检出率11．74％（231／1967）;VVC以25～35岁性活跃期年龄段检出率较高,BV发病率各年龄层差异无统计学意义（P〉0．05）;VVC及BV治疗效果及疗效影响因素经Logistic分析,流产为影响治疗效果的危险因素;男方配合治疗及使用避孕套为康复效果的保护性因素。结论VVC与BV均与阴道微生态失衡相关,治疗中应注意指导患者养成健康的卫生习惯,注重男方协同治疗,阻断交叉感染,以保证良好的治疗效果。