RNA干扰 Rac1基因表达对结直肠癌LoVo细胞骨架和细胞周期的影响

目的:观察Rac1蛋白在结直肠癌细胞中的表达,并分析其与结直肠癌LoVo细胞骨架、细胞周期和细胞凋亡的相关性.方法:Western blotting测定5种结直肠癌细胞株(LoVo,SW480,SW620,SW1116,HT29)中Rac1蛋白的表达;Rac1-shRNA质粒转染LoVo细胞后,激光共聚焦显微镜观察LoVo细胞骨架的变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化.结果:5种结直肠癌细胞株中均有Rac1蛋白的高表达.Rac1基因沉默后,LoVo细胞中交联状态的F-actin网明显减少且紊乱,G0/G1期细胞比例较对照组显著增加[(74.63 ±4.40)％ vs(56.46 ±3.09)％,P＜0.05],而S期细胞比例较对照组显著减少[(12.87±1.77)％vs(29.66±1.92)％,P＜0.05];Rac1-shRNA转染组LoVo细胞凋亡率较对照组显著增加[(25.31±2.05)％vs(9.38±1.16)％,P＜0.05].结论:RNA沉默Rac1基因的表达影响了LoVo细胞骨架的形成和细胞周期,为以Rac1为靶点治疗结直肠癌提供了实验依据.     

贝母甲素抑制AML-KG-1a细胞增殖与诱导细胞凋亡研究

[目的]通过体外培养和流式细胞术,检测贝母甲素对人急性髓系白血病细胞KG-1a增殖抑制、诱导凋亡和细胞周期分布的影响。[方法]利用MTT法检测贝母甲素对KG-1a的增殖抑制作用,计算抑制率;以流式细胞术检测贝母甲素对细胞凋亡及周期分布的影响。[结果]1与对照组比较,贝母甲素作用于KG-1a细胞24h、48h、72h的吸光度(OD)值均明显降低(P<0.05),且细胞生长抑制率与药物浓度呈正相关。2与对照组比较,贝母甲素能够提高KG-1a细胞晚期凋亡及总凋亡率,差异均有统计学意义(P=0.003,P=0.001)。3贝母甲素干预KG-1a后,细胞周期发生明显变化,G0/G1期细胞比例降低、G2/M期细胞比例升高、凋亡率升高(P=0.001,P=0.002,P=0.046)。[结论 ]贝母甲素具有抑制具有LSC特性的KG-1a细胞增殖、降低G0/G1期细胞比例、升高G2/M期细胞比例、诱导细胞凋亡效应。     

siRNA沉默Rac1表达促进增生期血管瘤内皮细胞内质网应激和抑制细胞增殖的作用与机制研究

目的:研究慢病毒介导Rac1沉默对增生期血管瘤内皮细胞内质网应激及Caspase-12活化水平的影响。方法:用Rac1 siRNA慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体感染人增生期血管瘤内皮细胞,用Realtime PCR和Western blot检测细胞中Rac1表达变化。MTT法测定细胞增殖能力,PI单染法检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中周期蛋白p21、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和凋亡蛋白活化的Caspase-3（C-Caspase-3）表达水平,同时检测细胞中内质网应激相关蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化的Caspase-12（C-Caspase-12）表达水平。结果:Rac1 siRNA慢病毒载体感染后的血管瘤内皮细胞中Rac1表达水平明显降低,阴性对照慢病毒对细胞中Rac1表达水平没有影响。沉默Rac1后的增生期血管瘤内皮细胞增殖能力下降,细胞G0/G1比例升高,p21蛋白水平升高,Cyclin D1蛋白水平下降,凋亡率升高,C-Caspase-3蛋白水平升高,CHOP、C-Caspase-12蛋白水平也升高,与没有感染慢病毒的细胞比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。阴性对照慢病毒感染对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、细胞周期及细胞中p21、Cyclin D1、C-Caspase-3、CHOP、C-Caspase-12蛋白水平没有影响。结论:慢病毒介导Rac1沉默诱导增生期血管瘤内皮细胞凋亡,阻滞细胞周期,诱导内质网应激发生,诱导Caspase-12活化。     

黄芪多糖通过阻断PTEN-PI3K-Akt信号通路诱导人类KG-1a细胞凋亡的研究

目的 研究黄芪多糖（AP）对人类急性髓系白血病KG-1a细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 常规培养急性髓系白血病细胞系KG-1a,进行细胞传代及细胞冻存;CCK-8法检测不同浓度AP对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术检测AP处理后KG-1a细胞的凋亡率;Westem blot检测运用AP处理48 h后p-Akt及bcl-2蛋白表达变化情况;实时定量PCR检测AP处理后PTEN mRNA表达情况.结果 细胞增殖抑制试验显示AP呈浓度依赖性抑制KG-1a细胞生长;0、100、150μg/ml药物处理细胞48 h后其早期凋亡率分别为（1.98±0.16）％、（12.60±0.48）％、（16.31 ±0.73）％,晚期凋亡率分别为（3.11±0.19）％、（17.17± 1.40）％、（21.17±0.81）％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与空白对照组相比,AP作用的KG-1a细胞p-Akt及bcl-2蛋白表达水平均降低（均P＜ 0.05）,PTEN mRNA表达水平上升（P＜0.05）.结论 AP能够浓度依赖地抑制KG-1a细胞增殖,其机制可能是通过抑制PTEN-PI3K-Akt信号转导通路来实现的.     

Twist 1通过MPL促进髓系白血病细胞增殖和耐药

目的:检测Twist-1与骨髓增生性白血病病毒癌基因(myeloproliferative leukemia virus oncogene,MPL)在髓系白血病患者和髓系造血系统恶性肿瘤细胞系中表达的相关性,并探讨Twist-1是否通过MPL对髓系白血病细胞增殖、耐药发挥促进作用.方法:选取中国医学科学院血液病医院2005年1月至2008年12月初次诊断为急性髓系白血病(acute myeloid leu-kemia,AML)、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者的骨髓标本41例(其中AML 23例、CML 18例),用Re-al-time PCR检测AML、CML患者以及髓系造血系统恶性肿瘤细胞系中Twist-1和MPL mRNA的表达情况,并分析其相关性.构建MPL过表达载体,制备慢病毒并感染髓系白血病细胞系K562、U937,通过细胞计数实验、集落形成实验以及药物敏感实验评价其对白血病细胞增殖、集落形成能力以及耐药的影响,并进一步确定Twist-1是否通过MPL发挥白血病促进作用.结果:在U937和K562细胞中过表达Twist-1明显增加MPL蛋白水平(P＜0.05),敲降Twist-1后MPL mRNA的表达水平明显下降(P＜0.01);AML、CML患者骨髓单核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMCs)中Twist-1 mRNA表达与MPL mRNA表达水平呈显著正相关(P＜0.05).过表达MPL使K562和U937细胞对化疗药物柔红霉素及伊马替尼的敏感性显著降低(P＜0.01),且提高K562-MPL、U937-MPL的细胞增殖、集落形成数目(均P＜0.01);干扰Twist-1并过表达MPL显著降低髓系白血病细胞增殖和集落形成(均P＜0.01).结论:Twist-1通过MPL促进AML、CML白血病细胞的增殖、存活和耐药.     

沉默SIRT2基因对急性粒细胞白血病细胞增殖的影响

目的 SIRT2是组蛋白去乙酰化酶家族成员之一,其参与多种肿瘤的发生和发展.本研究旨在探讨SIRT2基因在人急性粒细胞白血病细胞NB4和耐药细胞HL60/A增殖中的作用,分析SIRT2对于细胞周期的影响,寻找治疗急性粒细胞白血病的新靶点.方法 蛋白质印迹法检测SIRT2在急性粒细胞白血病细胞HL60/A和NB4中的表达,针对SIRT2 mRNA不同的靶序列设计并合成shRNA,构建真核表达干扰载体,制备慢病毒并感染HL60/A和NB4细胞,用嘌呤霉素筛选出稳定表达shRNA的细胞,应用蛋白质印迹法验证干扰效率;采用改良MTT法检测沉默SIRT2基因前后HL60/A和NB4细胞增殖的改变;用流式细胞术检测沉默SIRT2基因前后细胞周期的变化.结果 在HL60/A和NB4细胞中SIRT2蛋白表达水平均增高,F=43.22,P=0.002.用慢病毒感染HL60/A(F=184.9,P＜0.001)和NB4(F=354.7,P＜0.001)后,SIRT2基因的蛋白表达水平显著降低.MTT结果显示,与对照组细胞比较,48 h沉默SIRT2基因的HL60/A(F=208.4,P＜0.001)和NB4(F=27.58,P＜0.001)细胞的生长速度变慢;于72 h这种抑制作用更加明显,其中HL60/A的增殖速度明显变慢,F=555.9,P＜0.001.流式细胞术检测细胞周期结果显示,G0～G1期百分比,与对照组HL60/A/con(27.62±1.01)％相比,干扰组HL60/A/sh1 (37.14±0.03)％(F=7.61,P＜0.001)和HL60/sh2(37.51±3.63)％(F=3.89,P=0.009)比例显著增加;与对照组NB4/con(27.49±0.50)％相比,干扰组NB4/sh1(38.26±1.93)％(F=8.02,P=0.007)和NB4/sh2(35.23±1.11)％(F=3.50,P＜0.001)比例显著增加;S期细胞百分比,与对照组HL60/A/con(51.94±1.15)％相比,干扰组HL60/A/sh1 (40.24±0.66)％(F=3.34,P＜0.001)和HL60/sh2(42.73±2.76)％(F=10.33,P=0.004)比例显著降低;与对照组NB4/con(50.65±0.23)％相比,干扰组NB4/sh1(39.58±1.11)％(F=3.02,P＜0.001)和NB4/sh2(43.82±1.33)％(F=10.42,P=0.011)比例显著降低;G2～M期细胞比例无明显变化.结论 干扰SIRT2基因的表达可使细胞周期阻滞在G0～G1期,从而抑制急性粒细胞白血病细胞HL60/A和NB4的增殖.     

拓扑异构酶I抑制剂诱导白血病HL60/VCR耐药细胞凋亡的研究

目的　研究拓扑异构酶I抑制剂 (topotecan ;TPT)对白血病耐药细胞HL6 0 /VCR诱导凋亡的作用。方法　瑞氏 吉姆萨染色和吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)染色进行形态观察 ,采用TUNNEL、流式细胞仪检测细胞周期和AnnexinV观察TPT对HL6 0 /VCR细胞的抑制效应和促凋亡作用。WesternBlot检测bcl 2、活化的caspase 3和P糖蛋白 (Pgp)的表达变化。 结果　经TPT处理后的HL6 0 /VCR细胞 ,在光镜和AO/EB染色中均可见到典型的凋亡细胞形态学改变 ,并具有时间和剂量依赖性 ;AnnexinV染色后能检测到早期凋亡细胞 (2 6 .8% ) ,细胞周期显示 :G1期细胞比例增高 ,S期减低 ,并有 2 1.8%凋亡峰 ;TUNNEL能检测到 (6 2 .2± 3.5 ) %的阳性细胞 ;伴有活化的caspase 3的表达和bcl 2的下调 ,而Pgp的表达在细胞凋亡前后无变化。结论　TPT能诱导白血病耐药细胞凋亡 ,该过程伴有caspase 3的活化和bcl 2的表达下调。     

小白菊内酯抑制CD34+ CD38- KG-1a白血病细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性

目的：探讨小白菊内酯（parthenolide,PTL）对CD34+CD38- KG-1a白血病细胞的增殖、Bcl-2表达及其被同种异体NK（allo-NK）细胞杀伤敏感性的影响。方法：免疫磁珠法从KG-1a细胞中分离CD34+CD38- KG-1a细胞。XTT法检测PTL对CD34+CD38-白血病细胞增殖的影响,Real-time PCR和Western blotting分别检测PTL对CD34+CD38- KG-1a细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响,LDH释放法观察PTL对CD34+CD38- KG-1a细胞被allo-NK细胞杀伤敏感性的影响。结果：PTL对CD34+CD38- KG-1a细胞增殖的抑制呈剂量（2.5~80 μmol/L)依赖性。PTL浓度为2.5 μmol/L时,PTL组CD34+CD38- KG-1a细胞的增殖抑制率显著高于对照组\[（4.89±1.07）% vs 0,P<0.01\];PTL杀伤CD34+CD38- KG-1a细胞的IC50为20 μmol/L;PTL组CD34+CD38-KG-1a细胞Bcl-2 mRNA \[（0.105±0.007）vs（0.307±0.013）,P＜0.01\]与蛋白表达均显著低于对照组。在效靶比为10∶1,20∶1和40∶1时,allo-NK细胞对PTL组CD34+CD38- KG-1a细胞杀伤率逐步升高,且均高于阴性（无PTL处理）对照组\[(19.76±1.01)%,(30.14±0.96)%和(51.48±3.15)% vs (12.50±1.42)%,(16.90±0.93)%和(31.70±1.53)%（均P<0.01）\];效靶比为40∶1时,allo-NK细胞对PTL组细胞的杀伤效率显著高于阳性（Bcl-2抑制剂ABT-737处理）对照组\[（51.48±3.15）% vs （43.08±2.81）%,P<0.05\]。结论：PTL能抑制CD34+CD38-KG-1a细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性,这可能与PTL下调Bcl-2的表达有关。     

DC-CIK对急性髓细胞白血病干细胞的杀伤作用

目的:研究树突状细胞(dendritic cell,DC)联合同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对急性髓细胞白血病细胞株KG-1a中白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)的体外杀伤和诱导凋亡作用。方法:分离健康人外周血单个核细胞,贴壁细胞用GM-CSF和IL-4诱导培养DC,悬浮细胞用IL-2、IL-1、IFN-γ和CD3 mAb诱导培养CIK。将KG-1a细胞冻融物作为抗原负载DC(即Ag-DC),与CIK共培养作为实验组(Ag-DC-CIK),无抗原负载的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK),单独CIK作为空白对照组,与KG-1a共育后流式细胞术检测各组细胞中CD34+CD38-CD123+白血病干细胞的比例。DC-CIK与KG-1a细胞共培养,流式细胞术检测各组细胞中KG-1a细胞与CD34+CD38-CD123+细胞的凋亡率。结果:外周血单个核细胞成功诱导DC。CIK组、DC-CIK组及Ag-DC-CIK组中CD3+CD56+细胞比例为(17.36±4.44)%、(28.22±3.66)%和(36.16±5.88)%,依次升高(P<0.05)。与对照组相比,Ag-DC-CIK组与DC-CIK组细胞中CD34+CD38-CD123+细胞比例显著降低[(8.78±0.62)%vs(3.95±0.53)%、(3.03±0.62)%,P<0.01〗。DC-CIK可诱导KG-1a细胞凋亡,凋亡率由(2.34±0.74)%上升至(12.27±1.01)%,但对其中CD34+CD38-CD123+细胞无明显的诱导凋亡作用。结论:DC联合CIK能杀伤急性髓细胞白血病干细胞,但无明显的诱导凋亡作用。     

急性髓系白血病细胞中 DICER1 基因的表达及其功能研究简

目的：检测急性髓系白血病细胞株HL-60、KG-1细胞中DICER1基因的表达水平,研究DICER1基因沉默对HL-60、KG-1细胞增殖、凋亡的影响,探寻DICER1在白血病发病机制中的作用。方法：应用Real-time PCR和Western blot检测DICER1在白血病细胞株HL-60、KG-1中mRNA和蛋白的相对表达水平。用Lipofectamine TM LTX 将DICER-shRNA载体转染HL-60、KG-1细胞,Real-time PCR和Western blot的方法从mRNA和蛋白水平检测DICER1的干扰效率。CCK-8法检测DICER1干扰后对白血病细胞增殖的影响,流式细胞仪检测DICER1干扰后白血病细胞凋亡率。结果：以正常HEK293细胞为对照,白血病细胞株HL-60、KG-1中DICER1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于正常HEK293细胞（P＜0.05）。DICER1-shRNA转染HL-60、KG-1细胞5天后,DICER1 mRNA和蛋白表达水平显著下降,干扰效果显著（P＜0.05）;CCK-8实验结果表明：与对照组细胞相比,DICER1干扰后白血病细胞增殖力显著降低（P＜0.05）;流式细胞分析表明：与正常细胞和对照组细胞比较,DICER1干扰后白血病细胞凋亡显著增加（P＜0.01）。结论：DICER1在白血病细胞株HL-60、KG-1中高表达,具有促进白血病细胞增殖,抑制凋亡的作用。     

科罗索酸对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究科罗索酸（corosolic acid）对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法:使用不同浓度的科罗索酸处理K562细胞,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响,分光光度法检测对Caspase-3/7,-8,-9活性的影响。结果:科罗索酸能显著抑制白血病K562细胞的增殖,并且这种抑制作用随着科罗索酸浓度升高和培养时间延长而显著增强。科罗索酸处理后的K562细胞中,处于G0/G1期的细胞比率明显升高（P＜0.05）,S期和G2/M期的细胞明显减少（P＜0.05）,凋亡细胞明显增多（P＜0.05）,Caspase-3/7,-8和-9的活性明显增强。结论:科罗索酸能抑制白血病K562细胞的增殖,促进其凋亡,这一效应可能与Caspase活性的增强有关。     

异隐丹参酮对胃癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨异隐丹参酮（ICTS）对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、周期、凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901,采用0、5、10、20 μmol／L ICTS处理24、48、72 h后, CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;确定ICTS抑制BGC-823和SGC-7901细胞的最佳浓度和最佳作用时间后,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡率。Western blotting检测ICTS处理后胃癌细胞中Cyclin D1、Bcl-2、p53、p21蛋白的表达。结果 0、5、10、20 μmol／L ICTS处理BGC-823细胞24 h的增殖抑制率分别为（0.789±0.048）％、（16.74±1.55）％、（33.58±2.26）％、（54.62±2.61）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）;0、5、10、20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24 h的增殖抑制率分别为（-0.184±0.023）％、（12.76±1.73）％、（32.95±2.47）％、（53.80±2.65）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS 处理BGC-823细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（54.62±2.61）％、（55.08±2.35）％、（59.72±2.53）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（53.80±2.65）％、（55.76±2.47）％、（61.83±2.82）％,差异无统计学意义（P＞0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后G0／G1期细胞比例为（78.34±7.13）％和（79.57±7.34）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。ICTS处理组BGC-823、SGC-7901凋亡率分别为（24.78±3.42）％和（28.76±4.21）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达量均显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;p53和p21蛋白表达量显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ICTS通过增加p53、p21表达,降低Cyclin D1和Bcl-2表达,进而抑制细胞增殖,增加细胞G0／G1阻滞和凋亡,发挥抗胃癌的作用。     

miR-134-5p 对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的:观察微小核糖核酸-134-5p(miR-134-5p)转染对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,验证其可能的分子机制.方法:收集湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心2016年5月至8月收治的8名宫颈癌患者肿瘤组织和相应癌旁组织.利用lipo-fectamine 2000将miR-134-5pmimics转染至宫颈癌Hela和SiHa细胞.采用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡;qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞miR-134-5pmRNA表达以及宫颈癌细胞EGFR mRNA表达;Western blotting检测宫颈癌细胞EGFR信号通路相关蛋白的表达.结果:宫颈癌组织miR-134-5pmRNA表达显著低于癌旁组织(P＜0.01).和转染miR-NC的Hela和SiHa细胞比较,转染miR-134-5pmimics的宫颈癌Hela和SiHa细胞miR-134-5pmRNA表达显著升高;细胞增殖能力显著降低(转染第5天,Hela细胞:1.06±0.13 vs 1.32±0.07;SiHa细胞:1.12±0.10 vs 1.42±0.12,均P＜0.05);形成的集落数减少;G0/G1期细胞比例显著上升,S期和G2/M期细胞比例显著下降;细胞凋亡率显著增加[Hela细胞:(26.53±13.48)％ vs(3.25±1.74)％;SiHa细胞:(30.49±12.04)％ vs(5.10±2.86)％,均P＜0.05];EGFR mRNA和EGFR蛋白表达显著下调,其中EGFR mRNA,Hela细胞下调58％(P＜0.01),SiHa细胞下调41％ (P＜0.05);EGFR下游靶蛋白p-AKT、p-ERK1/2和CyclinD1蛋白及pEGFR蛋白表达显著下调.结论:miR-134-5p可显著抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其可能的分子机制是通过抑制EGFR基因的表达,抑制EGFR通路的活化.     

柚皮苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡及迁移的影响

目的 探讨柚皮苷对卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡及迁移的影响。方法 采用1、5、10、20 μmol／L柚皮苷处理对数生长期的SKOV3细胞,并设不加柚皮苷处理的SKOV3细胞为对照组。采用MTT法检测不同浓度柚皮苷处理48 h及20 μmol／L柚皮苷处理12、24、36、48 h的增殖情况。收集不同浓度柚皮苷处理48 h的SKOV3细胞,Annexin V FITC／PI双染或PI单染流式细胞术分别检测细胞凋亡和细胞周期,Transwell法检测细胞穿膜数以评价迁移能力,Western blotting检测p Akt和PTEN的表达水平。结果 MTT检测发现,经1、5、10、20 μmol／L柚皮苷处理48 h,SKOV3细胞的增殖率降低,除1 μmol／L外,5～20 μmol／L柚皮苷处理SKOV3细胞的增殖率低于对照组（P＜0.05）;10、20 μmol／L处理48 h的增殖率分别为（6195±687）％和（50.58±6.09）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;20 μmol／L柚皮苷处理12、24、36、48 h的增殖率依次为（83.93±5.54）％、（73.10±3.58）％、（61.95±5.01）％和（53.00±7.67）％,均低于对照组（P＜005）。与对照组相比,1～20 μmol／L柚皮苷处理48 h的G0／G1期细胞比例和凋亡率升高,S期细胞比例降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。1、5、10、20 μmol／L柚皮苷处理48 h的细胞穿膜数依次为（61.83±6.77）个、（47.17±5.35）个、（32.17±5.95）个和（20.83±3.06）个,p Akt相对水平为0.545±0.050、0373±0035、0280±0054和0173±0034,PTEN相对水平为0.357±0.054、0.468±0.085、0.602±0.063和0.728±0.103,均优于对照组（P＜0.05）。结论 柚皮苷能显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖并促进其凋亡,降低侵袭能力,该过程可能与其抑制PTEN／Akt信号通路激活有关,为临床治疗卵巢癌提供可能线索。     

miR-155在细胞因子诱导的杀伤细胞诱导白血病细胞凋亡中的作用及其机制

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)对白血病细胞凋亡的影响,探讨miR-155在此过程中的作用.方法 MTT法检测CIK细胞对白血病NALM-6和Jurkat细胞的细胞毒作用,实时定量反转录PCR检测白血病细胞miR-155表达,流式细胞术检测miR-155对CIK细胞诱导白血病细胞凋亡的影响,构建包含miR-155作用位点的CEBP/β基因3'-UTR区的质粒,转染白血病细胞,双荧光素酶报告基因试剂盒检测白血病细胞CEBP/β荧光素酶活性.结果 CIK细胞对NALM-6和Jurkat细胞具有强大的细胞毒作用,且呈时间与剂量依赖性(P＜0.05),同时CIK细胞能上调NALM-6和Jurkat细胞中miR-155的表达,其中NALM-6细胞上调(2.87±0.19)倍(t=2.787,P＜0.05),Jurkat细胞上调(1.98±0.25)倍(t＝ 3.513,P＜ 0.05).另外,miR-155 mimics能促进CIK细胞对NALM-6和Jurkat细胞诱导的凋亡作用(t=4.239,P＜0.05;t=3.565,P＜0.05),而miR-155抑制剂能够拮抗此过程(t=3.772,P＜ 0.05;t=4.017,P＜ 0.05).miR-155直接作用于CEBP/β基因3'-UTR区,且CIK细胞降低白血病细胞荧光素酶活性,其中NALM-6细胞下降(42.89±2.07)％(t=3.578,P＜0.05),Jurkat细胞下降(37.02±1.95)％(t=4.393,P＜ 0.05).结论 CIK细胞通过上调miR-155促进白血病细胞凋亡,这为CIK细胞治疗白血病提供新的数据.     

Klotho基因对子宫颈鳞癌细胞恶性生物学行为的影响及相关机制

目的:探讨Klotho基因对人子宫颈鳞癌细胞株SiHa生物学特性的影响及其作用机制.方法:实时荧光定量PCR及Western blotting检测Klotho基因在子宫颈鳞癌细胞系SiHa、HeLa和C33A及人永生化表皮细胞HaCaT细胞中的表达水平.构建Klotho过表达载体并转染SiHa细胞,采用CCK-8法、Transwell侵袭实验和流式细胞术检测SiHa细胞增殖、凋亡和迁移能力的变化;Western blotting检测Rho A和ROCK1蛋白表达水平.结果:Klotho在子宫颈癌SiHa、Hela、C33A细胞中表达水平低于HaCaT细胞(P＜0.05).在SiHa细胞中过表达Klotho后,(1)细胞的增殖能力显著低于对照组[(67.37±5.04)％ vs(100.34 ±7.62)％,P＜0.05)];(2)G0/G1期细胞百分率显著增加[(82.56±3.89)％ vs(61.37±3.28)％,P＜0.05]、S期细胞百分率显著减少[(9.12±2.48)％vs(28.97±2.08)％,P＜0.01];(3)细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著增加(均P＜0.05);(4)细胞迁移率显著降低(P＜0.01);(5) Rho A和ROCK1蛋白表达水平均显著下降(均P＜0.01).结论:Klotho能够抑制人子宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移,并促进其凋亡;作用机制可能与抑制Rho A/ROCK 1信号通路的活化有关,提示Klotho可以作为诊断和靶向治疗子宫颈癌的潜在作用位点.     

Notch1基因表达对急性T淋巴细胞白血病SupT1细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨Notch信号通路与急性T淋巴细胞白血病发生、发展的关系。方法利用携带Notch1特异性和非特异性shRNA的慢病毒载体包装成的病毒颗粒感染急性T淋巴细胞白血病SupT1细胞,采用CCK．8法检测细胞抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率（AnnexinV＋／7-AAD一和AnnexinV＋／7-AAD＋）;采用实时荧光定量PCR法检测Notch1受体基因及下游靶基因的表达水平。结果Notch1干扰组、空白对照组和空载体组96h的细胞增殖抑制率分别为0．902±0．013、0、0．486±0．084,干扰组较空白对照组、空载体组升高（均P〈0．05）;三组细胞早期凋亡率分别为（15．27±0．31）％、（5．57±0．25）％、（5．80±0．20）％,干扰组较空白对照组、空载体组升高（均P〈0．05）;而各组细胞晚期凋亡率无明显变化（均P〉0．05）。干扰组细胞中Notch1受体基因及其下游靶基因Hes1、c-myc、NF-κB在48、72、96h的mRNA相对表达量均较空白对照组及空载体组降低（均P〈0．05）。结论特异性Notch1-shRNA可有效下调Notch1mRNA的表达,并降低其下游靶基因的表达水平。Notch1表达下调可以抑制急性T淋巴细胞白血病SupT1细胞增殖,促进supT1细胞的早期凋亡。     

CELF1通过抑制CDKN1B促进胶质瘤细胞增殖的研究

目的 探讨CELF1在胶质瘤细胞增殖中的作用及可能机制。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting检测胶质瘤细胞系U87、U251、SHG44以及人正常星形胶质细胞系HA1800中CELF1 mRNA和蛋白表达;无义核酸NC（NC组）、siCELF1（siCELF1组）和siCELF1＆siCDKN1B（siCELF1＆siCDKN1B组）转染U87细胞, CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期变化;Western blotting检测CELF1、CDKN1B和Cyclin D1蛋白表达。结果 胶质瘤细胞系U87、U251和SHG44 中CELF1 mRNA相对表达量分别为3.1±0.074、4.2±0.137和3.6±0.023,均高于人正常星形胶质细胞HA 1800的1.1±0.054,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting检测CELF1的蛋白表达与mRNA表达一致。沉默CELF1能显著降低U87细胞活力,siCELF1组G0／G1期细胞比例为（63.5±1.33）％,显著高于NC组的（39.4±1.24）％,而siCELF1组S期细胞比例为（14.3±0.095）％,显著低于NC组的（22.8±1.97）％（P＜0.05）。siCELF1组CDKN1B蛋白相对表达量为2.37±0.088,显著低于NC组的1.17±0.101（P＜0.05）。siCELF1组 Cyclin D1蛋白相对表达量为0.274±0.039,显著低于siCELF1＆siCDKN1B组的0.83±0.071（P＜0.05）。siCELF1＆siCDKN1B组细胞活力高于siCELF1组（P＜0.05）。siCELF1＆siCDKN1B组G0／G1期细胞比例为（42.1±1.76）％,显著低于siCELF1组的（62.4±1.92）％（P＜0.05）;而siCELF1＆siCDKN1B组S期细胞比例为（20.3±0.077）％,与NC组的（22.8±1.97）％差异无统计学意义。结论 CELF1通过抑制CDKN1B,进而介导Cyclin D1表达促进胶质瘤细胞增殖。