上皮性卵巢癌细胞凋亡、P53和Bcl-2表达及其与化疗的关系

目的：研究卵巢癌细胞凋亡、相关基因表达及其与化疗的关系。方法：选择卵巢上皮性癌３２例,行初次手术后给予以铂类为基础的联合化疗４ 疗程以上,１９ 例行二次手术。对２ 次手术标本分别作细胞凋亡原位检测和凋亡指数（ＡＩ）计数,细胞核增殖抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３和Ｂｃｌ ２ 基因表达免疫组化染色。结果：化疗有效组ＡＩ显著高于无效组（ｔ＝ ３．１６,Ｐ＜ ０．０５）,化疗前ＡＩ显著高于化疗后（ｔ＝ ２．２８,Ｐ＜ ０．０５）,高ＡＩ组（ＡＩ≥２．０）存活例数显著高于低ＡＩ组（ＡＩ＜ ２．０）（χ２ ＝ ６．４２,Ｐ＜ ０．０５）,平均生存期长于低ＡＩ组,但差异无显著性（ｔ＝ １．１３,Ｐ＞ ０．０５）,ＡＩ和ＰＣＮＡ变化无显著关系（ｔ＝ ０．６４,Ｐ＞ ０．０５）,高ＡＩ组伴有高Ｐ５３和高Ｂｃｌ ２ 表达趋势,但未达显著性水平（ｔ＝ ０．４８,Ｐ＞ ０．０５ 和ｔ＝ ０．７７,Ｐ＞ ０．０５）。结论：卵巢癌对化疗的效应与凋亡有关,高ＡＩ者敏感性较高,且预后良好,凋亡过程可能受Ｐ５３和Ｂｃｌ ２ 基因调控。ＡＩ检测可作为预测卵巢癌对化疗的效应和预后的指标。     

Bcl-2与P53在复发性卵巢癌组织中表达的临床意义

探讨卵巢上皮癌组织中Bcl- 2与突变型P53蛋白表达的临床意义及与耐药的关系。方法 :采用免疫组化方法测定 31例初治、19例复发卵巢癌组织中Bcl- 2与P53的表达率。结果 :卵巢癌组织中Bcl - 2阳性表达率为 54% ,P53阳性表达率为 60 %。Bcl - 2表达与临床分期、组织学分级无关。P53在Ⅲ -Ⅳ晚期卵巢癌表达增加。Bcl- 2在初治及复发性卵巢癌者表达无差异 ,复发性卵巢癌组织中P53表达增加。Bcl- 2阳性表达者 2年存活率无明显降低 ,P53高表达者预后不良。结论 :Bcl - 2与P53可能通过调控肿瘤细胞凋亡参与卵巢癌的发生发展 ,Bcl - 2可能在肿瘤发生的早期阶段起作用 ,P53则为后发现象。Bcl - 2与P53之间可能有功能性关联。     

顺铂、维拉帕米和环孢菌素诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨顺铂（ＤＤＰ）,维拉帕米（ＶＰ）及３′－酮基－去甲基苏氨酸１－缬氨酸２－环孢菌素（ＰＳＣ８３３）诱导卵巢癌细胞凋亡的作用机理。方法 以人卵巢癌亲代细胞株ＣＯＣ１及其耐ＤＤＰ亚细胞株ＣＯＣ１／ＤＤＰ为材料,根据所加药物的不同分为ＤＤＰ组,ＶＰ组,ＰＳＣ８３３组,ＤＤＰ联合ＶＰ组,ＤＤＰ联合ＰＳＣ８３３组和对照组,计算各组细胞生长抑制率,细胞凋亡率同时进行细胞周期分析。结果 ＤＤＰ联合ＶＰ组     

细胞凋亡和P53在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达

目的：探讨细胞凋亡和P53在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的作用。方法：用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组化技术原位观察15例正常宫颈、22例CIN*"I/Ⅱ、16例CINⅢ和52例浸润性宫颈鳞癌(ISCC)组织中细胞凋亡标记指数(A-LI)、PCNA(增殖细胞核抗原)标记指数(PCNA-LI)和P53表达阳性率及P53标记指数(P53-LI)。结果：在正常宫颈上皮未检测到凋亡细胞,随着CIN病变的进展,A-LI增高(P＜005),在ISCC,A-LI明显低于CIN(P＜001);PCNA-LI随宫颈癌各级病变的进展逐渐增高(Ｐ＜005);在正常宫颈和CINI/Ⅱ均未检测到P53表达,在CINⅢ,P53-LI明显低于ISCC(P＜001)。结论：细胞凋亡在宫颈癌发生发展过程中发挥重要作用,P53蛋白的积聚可能对细胞凋亡起抑制作用。     

顺铂诱导人卵巢癌AO10／17细胞凋亡的实验研究

目的 探讨顺铂是否通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长，以及细胞凋亡和细胞周期、细胞内外钙离子浓度的关系。方法 应用顺铂处理ＡＯ１０／１７细胞，ＨＥ染色观察细胞形态学改变；琼脂糖凝胶电泳观察ＤＮＡ降解，以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的改变及细胞内钙离子的变化。结果 在顺铂作用下，ＡＯ１０／１７细胞呈凋亡改变，ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时细胞周期发生特定的改变，细     

卵巢癌细胞凋亡及相关基因的检测

探讨Ｂｃｌ－２、ｐ５３、Ｆａｓ基因与卵巢癌细胞凋亡的关系。方法４４例卵巢癌术后石蜡包埋组织切片后,应用原位末端标记法及免疫组化法进行相关检测。结论Ｂｃｌ－２、ｐ５３、Ｆａｓ基因可能过调控细胞凋亡而参与卵巢癌的发生与发展。     

产前不同疗程激素治疗对仔鼠脑神经元细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的通过产前应用不同疗程地塞米松治疗,了解不同给药疗程产前激素治疗是否会影响后代脑发育及可能的机制。方法SPF级SD孕大鼠34只,随机分为4组,产前1剂组8只,于孕17d肌注地塞米松0.8mg/(kg.d);产前3剂组8只,于孕17、18、19d各肌注地塞米松0.8mg/(kg.d);产前4剂组10只,于孕17、18、19、20d各肌注地塞米松0.8mg/(kg.d);对照组8只肌注等量生理盐水。对各组孕鼠所生仔鼠,分别于生后第1、7、14天每组每个时间点随机取仔鼠16只测量全脑重量、称重后再将脑组织进行凋亡细胞的原位标记检测(每个时间点各8只)脑神经元细胞凋亡及改良的酶联免疫杂交分光光度法检测(每个时间点各8只)脑bcl-2蛋白表达,并与对照组比较。结果产前糖皮质激素治疗(antenatalcorticosteroidstreatment,ACT)1日龄仔鼠1剂组、3剂组、4剂组脑重分别为(0.301±0.030)g、(0.302±0.026)g、(0.296±0.025)g,均低于对照组(0.363±0.041g),P均<0.01;7日龄仔鼠3剂组、4剂组脑重分别为(0.798±0.092)g、(0.785±0.050)g,均低于对照组(0.862±0.049)g,P<0.05或P<0.01;14日龄仔鼠,仅产前4剂组脑重(1.190±0.080)g低于对照组(1.295±0.019)g,P<0.01。1日龄仔鼠产前3剂,4剂组神经元细胞凋亡率分别为(9.82±1.51)%、(10.28±1.50)%,较对照组(6.78±1.35)%增加(P均<0.01);7日龄仔鼠产前4剂组神经元细胞凋亡率(22.85±3.18)%较对照组(18.61±3.34)%显著增加(P<0.01)。1日龄仔鼠产前3剂,4剂组bcl-2蛋白含量分别为(9.50±0.46)U/ml、(9.06±0.46)U/ml,均低于对照组(12.60±1.04)U/ml,P均<0.01;7日龄仔鼠产前4剂组bcl-2蛋白含量(6.87±0.27)U/ml低于对照组(8.40±0.52)U/ml,P<0.01。产前1剂组与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论ACT会影响仔鼠脑发育,可引起脑重量的下降,重复ACT下调脑bcl-2蛋白的表达,通过调节bcl-2基因表达引起脑神经元凋亡增加,使仔鼠脑发育障碍。     

纳秒级脉冲电场对SKOV3细胞的凋亡诱导作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨纳秒级脉冲电场对SKOV3细胞的凋亡诱导作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达的影响。方法:以场强为50kV/cm,脉宽100ns,10、30、60或80个脉冲电场处理SKOV3细胞,以未经处理的SKOV3细胞为对照组,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测早期凋亡;处理后6h,琼脂糖凝胶电脉法检测晚期凋亡;以50kV/cm,100ns,30个脉冲电场处理细胞,分别孵育0h,2h,6h,12h后提取总蛋白,Western blot法检测caspase-3活性片段、Bax、Bcl-2表达量的改变。结果:与对照组相比,纳秒级陡脉冲处理组细胞出现明显的磷脂酰丝氨酸(PS)外翻(P0.05)且细胞膜保持完整,即Annexin V(+)/PI(-);凝胶电泳检测显示,处理组DNA呈明显的阶梯状分布;Western blot检测示,与对照组相比,处理组细胞内caspase-3活性片段、促凋亡蛋白Bax表达量显著增加(P0.05),凋亡抑制蛋白Bcl-2表达量略降低,Bcl-2/Bax显著降低(P0.05)。结论:纳秒级脉冲电场可通过caspase-3依赖凋亡途径,降低Bcl-2/Bax比值诱导SKOV3细胞凋亡。     

Bcl-2/Bax蛋白表达对皮瓣重建兔阴囊生精细胞凋亡的影响

目的:探讨皮瓣重建兔阴囊生精细胞的凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达的关系。方法:将12只育龄期健康雄性新西兰大白兔随机分成实验组和对照组,每组6只。采用温度计埋藏法测量实验组皮瓣重建前阴囊内睾丸表面温度,手术切除实验组动物阴囊,建立皮瓣重建阴囊动物模型,对照组不作处理。动物模型建立后第8周末,实验组动物测量睾丸表面温度后行睾丸活检;对照组直接进行睾丸活检。采用原位末端标记(TUNEL)法检测睾丸生精细胞凋亡指数,免疫组织化学法结合图象分析仪检测睾丸生精细胞Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果:实验组模型建立前睾丸表面温度为36.0±0.3℃,模型建立后第8周末睾丸表面温度为38.1±0.6℃(P<0.05)。模型建立后第8周末实验组睾丸生精小管中生精细胞的凋亡指数(AI)为71.85±2.69%,对照组AI为7.73±4.95%(P<0.05)。手术使Bax表达显著升高(P<0.05),Bcl-2表达显著降低(P<0.05);凋亡细胞主要为初级精母细胞和圆形精子细胞。结论:皮瓣重建兔阴囊后睾丸局部温度升高,诱导睾丸生精细胞凋亡增加;生精细胞凋亡增加与Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达升高密切相关。细胞内Bcl-2/Bax比值是影响生精细胞凋亡的重要因素之一。     

顺铂对沉默β-catenin的卵巢癌SKOV3增殖、凋亡的影响

目的:通过沉默Wnt/β-catenin信号转导通路的核心蛋白β-catenin,探讨顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响,为卵巢癌的耐药逆转提供新思路。方法:用包含β-catenin基因特异RNA序列的慢病毒转染人卵巢癌SKOV3细胞,沉默β-catenin蛋白表达。分组:SKOV3组、SKOV3-neg组(转染空载体)、SKOV3-RNAi组(转染β-catenin-RNAi慢病毒)。Western blot法检测转染前后SKOV3细胞中β-catenin蛋白的表达。12.5μg/ml顺铂作用48h后,用MTT法检测顺铂对各组SKOV3细胞增殖抑制率的影响;流式细胞术检测各组中SKOV3细胞的凋亡率。结果:(1)Western blot结果显示,SKOV3-RNAi组中β-catenin蛋白表达水平显著低于SKOV3-neg和SKOV3组(P<0.05)。(2)相同浓度顺铂作用下,SKOV3-RNAi组的增殖抑制率显著高于SKOV3组及SKOV3-neg组(P<0.05),而后两组的增殖抑制率无显著差异(P>0.05)。(3)流式细胞术检测结果显示,SKOV3-RNAi、SKOV3-neg和SKOV3组的细胞凋亡率分别为(18.8±4.3)%、(1.8±0.3)%、(1.9±0.3)%,SKOV3-RNAi组凋亡率显著高于其余两组(P=0.008<0.05)。顺铂作用后,SKOV3-RNAi、SKOV3-neg和SKOV3组的细胞凋亡率分别为(67.7±2.5)%、(33.3±2.6)%、(32.3±2.1)%;顺铂作用后,各组凋亡率均显著升高(P均<0.05),且SK-OV3-RNAi组凋亡率显著高于其余两组(P=0.000<0.05)。结论:沉默β-catenin蛋白能有效增强SKOV3对cDDP的敏感性,β-catenin有可能成为逆转卵巢癌化疗耐药的治疗靶点。     

野生型p53基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的：探讨野生型ｐ５３(ｗｔ ｐ５３)基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用。方法：利用脂质体介导,将含有人全长ｗｔ－ｐ５３基因ｃＤＮＡ的真核表达载体质粒ｐＣＥＰ４／ｐ５３和空载体质粒ｐＣＥＰ４分别转染卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞株,分别命名为ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４／ｐ５３细胞(C组)、ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４细胞(B组),另设ＳＫＯＶ３细胞为正常对照组（Ａ组）。观察细胞体外生长情况和凋亡变化。结果：外源性ｐ５３基因在Ｃ组细胞中获表达,细胞生长曲线显示ｐ５３的导入使ＳＫＯＶ３细胞生长受到明显抑制,Ｃ组平均细胞集落数（１８．６±１．８个）少于Ａ组（２４．３±２．２个）和Ｂ组（２２．７±２．６）,差异有显著性（Ｐ（005）。ＭＴＴ法检测C组细胞活力明显低于Ａ、Ｂ组。Ｃ组细胞Ｇ０～Ｇ１期百分比（５７．７９％）及凋亡细胞百分比（13．９1％）均高于Ｂ组（４６．０２％、２．０８％）和Ａ组（４３．６２％、０）。结论：ｗｔ－ｐ５３基因可介导ＳＫＯＶ３细胞Ｇ１期停滞和细胞凋亡,抑制细胞体外生长。     

阿司匹林对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响以及对凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的作用。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析阿司匹林对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用,用流式细胞术分析方法定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的表达。结果:阿司匹林对SK-OV3细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈量效和时效的关系;1、5、10mmol/L3个浓度的阿司匹林处理细胞48h后,细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,而且G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高,细胞被阻滞在G2/M期,细胞周期也发生明显改变;阿司匹林可抑制卵巢癌细胞的bcl-2mRNA表达,而上调bax mRNA的表达。结论:阿司匹林能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡。此作用可能与阿司匹林抑制细胞bcl-2mRNA的表达和上调bax mRNA表达有关。     

细胞周期调控相关蛋白P53、P16、P21、Rb在子宫内膜癌的表达与意义

目的 :研究与细胞周期G1→S调控点相关的P5 3、P16、P2 1、Rb蛋白在子宫内膜癌的表达及其相关情况 ,探讨其临床应用价值。方法 :采用免疫组化 (LSAB法 )检测上述指标在 2 1例正常子宫内膜、15例子宫内膜上皮内瘤样病变 (EIN)及 4 5例子宫内膜癌中的表达。结果 :P5 3蛋白表达由正常内膜、EIN至内膜癌逐渐升高 ,而P16、P2 1、Rb蛋白结果相反 ;在子宫内膜癌中 ,P5 2和P2 1呈负相关 (r =- 0 .32 2 ) ,P16、P2 1与Rb呈正相关 (r=0 .36 1;r =0 .4 41)。P2 1蛋白表达与良好病理学分级有关 (P <0 .0 5 ) ,P5 3蛋白表达与临床各参数有关 ,与ER、PR的表达呈负相关 ,单因素及多因素分析均提示P5 3蛋白表达阳性的子宫内膜癌患者预后差 (P <0 .0 5 )。结论 :与细胞周期G1→S调控相关的P5 3、P16、P2 1、Rb蛋白均参与子宫内膜癌发生、发展 ,且部分基因相互关联 ,P5 3可作为独立预后因素应用于临床 ,其阳性表达提示预后不良     

上皮性卵巢癌中p53蛋白表达与患者预后关系的探讨

上皮性卵巢癌中ｐ５３蛋白表达与患者预后关系的探讨荣风年１孙德刚１吴彩志１汤春生２（１山东省千佛山医院２山东省立医院）ｐ５３是临床上研究较早的一种抑癌基因，其对患者预后的意义尚有争论。虽有用ｐ５３作患者预后指标，结合治疗后患者的生存率曲线，研究ｐ５３蛋...     

早产孕妇蜕膜细胞凋亡、周期变化及Bcl-2、Caspase-3和p21蛋白的表达研究

目的 探讨早产孕妇蜕膜细胞的凋亡、细胞周期及Bcl-2、Caspase-3、p21蛋白的表达情况.方法 选取90例孕产妇入组,分为早产组(n=30)、足月顺产组(n=30)和足月剖宫产组(n=30).比较三组孕产妇蜕膜细胞的细胞周期、凋亡情况及相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、p21的表达.结果 早产组患者蜕膜细...     

凋亡抑制蛋白XIAP与卵巢癌细胞耐药性

肿瘤细胞对化疗药物的耐受性在临床治疗中备受关注,肿瘤细胞逃避凋亡机制在耐药机制不断研究中成为关注要点,凋亡抑制蛋白家族成员之一X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）,分别在肾癌、肝癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、人类卵巢癌等肿瘤细胞耐药的发生发展中起着关键性作用,研究表明XIAP高表达于耐药性卵巢癌细胞的胞质中,通过多种途径影响肿瘤细胞的生长,但对其发生机制及应对策略尚未明确,现针对XIAP基因对卵巢癌治疗影响的新进展进行综述,为临床治疗卵巢癌细胞耐药性的研究提供新的思路。     

顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的研究

目的:研究顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的发生情况,并探讨可能的发生机制。方法:顺铂干预卵巢癌SKOV3细胞后,用MDC染色荧光显微镜观察自噬囊泡及流式细胞仪检测自噬率;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测凋亡率及TUNEL法检测凋亡指数;Western blot检测自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3的表达。结果:顺铂干预SKOV3细胞后,MDC阳性细胞数明显增多;自噬率提高(P<0.05);凋亡率提高(P<0.05);凋亡指数提高(P<0.05);自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3表达均增强(P<0.05)。结论:顺铂不仅可诱导卵巢癌SK-OV3细胞凋亡,而且可诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

C-erbB2、nm23和p53蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义

目的探讨ＣｅｒｂＢ２、ｎｍ２３和ｐ５３３种基因蛋白在卵巢上皮性癌中表达的关系。方法应用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接法检测７０例卵巢上皮性癌石蜡切片中ＣｅｒｂＢ２、ｎｍ２３和ｐ５３蛋白的表达情况。应用ＫａｐｌａｎＭｅｉｅｒ法及多变量Ｃｏｘ比例风险回归模型,分析这３种蛋白表达与患者预后的关系。结果（１）ＣｅｒｂＢ２蛋白表达率为３１．４％,与其临床分期有关;ｎｍ２３蛋白表达率为３８．６％,其表达在有无盆腔淋巴结转移标本中有一定意义;ｐ５３蛋白表达率为３４．３％,在浆液性卵巢癌中的表达率较粘液癌为高。（２）３种基因蛋白表达比较,差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。（３）患者生存随访表明,ＣｅｒｂＢ２表达患者的平均生存时间短于无表达患者;ｎｍ２３和ｐ５３对生存期影响不显著。结论ＣｅｒｂＢ２蛋白表达与卵巢上皮性癌的恶性程度有显著相关性,对其预后有显著影响。ｎｍ２３蛋白表达可能与盆腔淋巴结转移有关,ｐ５３蛋白表达与卵巢癌病理分型有关,但二者均与预后关系不显著。     

bcl-2、P~(53)、Fas蛋白表达与卵巢上皮癌细胞凋亡的相关性研究

目的：探讨ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｆａｓ基因与卵巢上皮癌细胞凋亡的关系。方法：４４份卵巢癌术后石蜡包埋组织切片，应用原位末端标记法及免疫组化法进行相关检测。结果：卵巢上皮癌组织中有细胞凋亡和ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｆａｓ蛋白的表达，阳性率分别为７５．００％、４３．１８％和４５．４５％。ｂｃｌ－２、Ｐ５３蛋白表达与卵巢上皮癌细胞凋亡呈负相关，Ｆａｓ蛋白表达与细胞凋亡呈正相关。上述４项指标在卵巢浆液性囊腺癌和卵巢粘液性囊腺癌之间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｆａｓ基因可能通过调控细胞凋亡参与卵巢上皮癌的发生与发展。