脂多糖对原代培养神经元核转录因子-κB表达的影响

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对新生大鼠原代培养皮层神经元的神经毒性以及核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的影响,探讨NF-κB的信号通路在LPS损伤神经元过程中所起的作用。方法:体外培养的新生SD大鼠皮层神经元,随机分为对照组、LPS组、N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理后再加入LPS组,后两组均用LPS处理48h。检测各组培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的含量及观察各组神经元的存活率,使用RT-PCR法观察NF-κB的表达。结果:LPS作用后神经元存活率减少,LDH释放量及NF-κB的表达增加。经TPCK预处理的神经元LDH释放量及NF-κB的表达明显低于LPS组,而神经元存活率显著高于LPS组。结论:LPS能引起原代培养皮层神经元的损伤,而TPCK可明显减弱LPS对原代培养皮层神经元的损伤作用,提示NF-κB参与了LPS对原代培养皮层神经元的损伤作用。     

肺损伤机制研究：脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株核转录因子κB活性的影响

目的：探讨肺损伤机制和脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein，LBP)抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株U937细胞核转录因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)活性的影响，研究LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤的作用。方法：佛波脂诱导U937成熟后分为5组。即正常对照组；脂多糖组(10μg／L脂多糖+100μg／L重组人LBP)；低剂量抑制肽组；中剂量抑制肽组；高剂量抑制肽组(后3组分别给予10，100和1000μg／L抑制肽)。用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Western blot)测定U937细胞NFKB的活性；ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF—α)水平。结果：脂多糖刺激后NFκB P65进入核内，抑制肽组核易位明显减少。低、中、高剂量抑制肽组P65核浆灰度比分别为0．59&;#177;0．06，1．02&;#177;0．12和1．08&;#177;0．10，明显低于脂多糖组(1．34&;#177;0．12)(t=4．756，P&;lt;0．01；t=2．235，2．308，P&;lt;0．05)。低、中、高剂量抑制肽组TNF—α水平分别为(93．66&;#177;2．30)，(75．78&;#177;6．55)和(71．50&;#177;7．75)pg／L，明显低于脂多糖组[(128．67&;#177;39．67)pg／L](t=2．216，P&;lt;0．05；t=2．423，2．389，P&;lt;0．01)。结论：LBP抑制肽抑制了U937细胞NFκB的活性和TNF—α的释放；LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤可能具有潜在的预防作用。     

肺损伤机制研究:脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株核转录因子κB活性的影响

目的:探讨肺损伤机制和脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-bindingprotein,LBP)抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株U937细胞核转录因子κB(nuclearfactorkappaB,NF-κB)活性的影响,研究LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤的作用。方法:佛波脂诱导U937成熟后分为5组。即正常对照组;脂多糖组(10μg/L脂多糖+100μg/L重组人LBP);低剂量抑制肽组;中剂量抑制肽组;高剂量抑制肽组(后3组分别给予10,100和1000μg/L抑制肽)。用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Westernblot)测定U937细胞NFκB的活性;ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:脂多糖刺激后NFκBP65进入核内,抑制肽组核易位明显减少。低、中、高剂量抑制肽组P65核浆灰度比分别为0.59±0.06,1.02±0.12和1.08±0.10,明显低于脂多糖组1.34±0.12)(t=4.756,P(<0.01;t=2.235,2.308,P<0.05)。低、中、高剂量抑制肽组TNF-α水平分别为(93.66±2.30),(75.78±6.55)和(71.50±7.75)pg/L,明显低于脂多糖组犤(128.67±39.67)pg/L犦(t=2.216,P<0.05;t=2.423,2.389,P<0.01)。结论:LBP抑制肽抑制了U937细胞NFκB的活性和TNF-α的释放;LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤可能具有潜在的预防作用。     

肺损伤机制研究:脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株核转录因子κB活性的影

目的探讨肺损伤机制和脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP)抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株U937细胞核转录因子κB(nuclcarfactor kappa B,NF-κB)活性的影响,研究LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤的作用.方法佛波脂诱导U937成熟后分为5组.即正常对照组;脂多糖组(10μg/L脂多糖+100μg/L重组人LBP);低剂量抑制肽组;中剂量抑制肽组;高剂量抑制肽组(后3组分别给予10,100和1 000μg/L抑制肽).用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Westernblot)测定U937细胞NFκB的活性;ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子a(TNF-α)水平.结果脂多糖刺激后NFκB P65进入核内,抑制肽组核易位明显减少.低、中、高剂量抑制肽组P65核浆灰度比分别为0.59±0.06,1.02±0.12和1.08±0.10,明显低于脂多糖组(1.34±0.12)(t=4.756,P＜0.01;t=2.235,2.308,P＜0.05).低、中、高剂量抑制肽组TNF-α水平分别为(93.66±2.30),(75.78±6.55)和(71.50±7.75)pg/L,明显低于脂多糖组[(128.67±39.67)pg/L](t=2.216,P＜0.05;t=2.423,2.389,P＜0.01).结论LBP抑制肽抑制了U937细胞NFκB的活性和TNF-α的释放;LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤可能具有潜在的预防作用.     

胃癌组织中核因子-кB的活化及其临床意义

目的: 分析胃癌组织中核因子-кB(NF-кB)-p65成分的表达与临床病理特征的关系,从而探讨NF-кB在胃癌的发生、发展中的意义.方法: 收集1999年3月至2003年6月我院普外科手术切除并经病理组织学证实的胃癌标本92例,胃镜下活检的慢性胃炎标本50例.采用免疫组化SABC法检测组织标本中的NF-кB-p65,比较两组表达的差异及研究NF-кB与临床病理特征的关系.结果: 在92例胃癌标本中70例NF-кB-p65表达阳性(76.1%),可见明显的核移位现象,高于癌旁组织、炎症组织.癌旁组织、炎症组织阳性率分别为40.2%(37/92),54.0%(27/50).胃癌的病理分级低分化组的NF-кB-p65阳性表达率为63.3%(19/30),高中分化组阳性率为82.3%(51/62),两者差异有统计学意义(P<0.01).在胃癌中,年龄、性别、浸润深度、淋巴结有无转移等分组之间NF-кB-p65阳性率及DNA结合活性差异无统计学意义(P0.05).结论: NF-кB在胃癌组织中明显活化,与肿瘤的分化程度具有相关性.     

健心方对核因子-κB活性的影响

目的:观察脂多糖对CHO-K1细胞核因子-κB活性的影响及健心方含药血清对脂多糖刺激的调节作用。方法:①实验于2005-03/05在解放军广州军区武汉总医院实验中心和南方医科大学附属南方医院肿瘤中心实验室完成。选用清洁级SD大鼠12只。随机将鼠分为2组:动物治疗组和动物对照组,每组6只。②动物治疗组给予3.2kg/L健心方口服液(水煎醇提法制备,主要成分:黄芪、太子参、川芎、当归、葶苈子、云苓、桂枝、香附等),动物对照组用等量生理盐水以获得空白对照血清。灌胃体积均为10mL/kg。1d剂量分2次服,连续给药3d,第4天1次服用全天剂量后采血制备含药血清和空白对照血清。③体外培养CHO-K1细胞,分为6组:对照组:转染质粒(pNF-κB-TA-Luc和pCMV-β-半乳糖苷酶共0.5μg)后加用脂多糖刺激;感染1组:转染质粒并加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染;刺激1组:转染质粒并加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染后用脂多糖刺激;治疗组:转染质粒、加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染并用脂多糖刺激后加用含药血清干预;感染2组:转染质粒并加含Toll样受体4细胞外段的重组腺病毒感染;刺激2组:转染质粒并加含Toll样受体4细胞外段的重组腺病毒感染后用脂多糖刺激。④检测各组细胞核因子-κB相对活性,即相对发光值(荧光素酶强度值/β-半乳糖苷酶值)。⑤数据作完全随机设计方差分析,组间比较用LSD检验和Dunnett(双侧)检验。结果:大鼠12只均进入结果分析。荧光素酶报告基因检测结果表明,相对发光值:对照组细胞明显高于感染1组(3560±57,1634±38,P<0.05);刺激1组细胞明显高于对照组、感染1组(8767±82,P<0.05,0.01);感染2组、刺激2组细胞明显低于对照组(530±74,536±71,P<0.05);治疗组明显低于刺激1组(1820±24,P<0.05),但明显高于刺激2组(P<0.05),略低于转染后对照组,但差异不明显(P>0.05)。结论:健心方含药血清可部分拮抗脂多糖导致的核因子-κB激活作用;Toll样受体4是脂多糖激活细胞的关键受体,健心方含药血清的拮抗作用可能是通过阻断了Toll样受体4对脂多糖的识别造成的。     

小潮气量通气对机械通气导致肺损伤及多器官功能衰竭中核因子-кB活性的影响

目的探讨小潮气量通气对机械通气肺损伤导致多器官功能衰竭(MODS)的保护机制.方法选用24只新西兰兔,制作机械通气相关性肺损伤(VILI)模型,将动物随机分3组,即正常组、传统潮气量组及小潮气量组,在造模结束后6 h收集VILI的炎症反应标志物肺泡灌洗液(BALF)中的中性粒细胞计数及测定肺组织核蛋白核因子-кB(NF-кB)含量,VILI炎症损伤标志物BALF的蛋白含量、肺毛细血管通透指数、肺组织湿/干比和氧合指数,以及循环内皮细胞计数、肝肾功能等指标,同时检测外周血中NF-кB活性.结果根据参考文献建立VILI兔模型,与正常组相比,小潮气量组的BALF中中性粒细胞计数、肺组织核蛋白NF-кB含量、蛋白含量、肺毛细血管通透指数、肺组织湿/干比和氧合指数、循环内皮细胞计数、肝肾功能及外周血中NF-кB含量差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论小潮气量可以降低VILI导致MODS的发生率,可能与小潮气量能够降低NF-кB通路活化有关.     

脐血与成人外周血血浆对脂多糖诱导的血管内皮细胞TLR4/NF-кB表达的影响

目的:探讨脐血血浆与成人外周血血浆对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞TLR4/NF-кB表达的影响.方法:采集剖宫产分娩的足月健康孕妇脐血和健康成人外周血各20份,制备血浆.将体外培养的人脐静脉内皮细胞ECV304分为两组,(1)脐血组,加入1 μg/mL的LPS和10%的脐血血浆;(2)成人外周血组,加入1 μg/mL的LPS和10%的成人外周血血浆.逆转录-聚合酶链反应检测TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法检测TLR4、IкBα蛋白的表达.结果:脐血组TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达量显著低于成人外周血组(P<0.01),脐血组IкBα的蛋白表达量显著高于成人外周血组(P<0.01).结论:脐血血浆抑制LPS诱导的内皮细胞TLR4/NF-кB活化,从而抑制其炎症反应.     

核因子-κB及Toll样受体4介导脂多糖诱导内皮细胞单层通透性增高

目的:探讨核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)及Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的内皮细胞单层通透性增高中的作用。方法:采用免疫荧光法及改良Boydon小室测定LPS对人脐静脉内皮细胞株ECV-304的单层细胞通透性及其F-肌动蛋白分布的影响;以免疫组织化学染色及RT-PCR法检测LPS刺激细胞NF-κB活化后的核转位及TLR4mRNA的表达。结果:LPS作用ECV-3041h后,免疫组织化学染色证实NF-κB活化后发生核转位;LPS以一定的剂量-时间依赖方式上调TLR4mRNA的表达,ECV-304单层通透性也随之增加。结论:NF-κB及TLR4可能在LPS诱导内皮细胞单层损伤导致通透性增高过程中发挥重要作用。     

临床相关浓度硫喷妥钠对大鼠脑胶质瘤细胞核因子-кB活性的影响

目的 探讨临床相关浓度的硫喷妥钠及其不同作用时间对大鼠脑胶质瘤细胞核因子(NF)-кB活性的影响.方法 取大鼠脑胶质瘤C6细胞株,分别与10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L硫喷妥钠作用1 h,在收集细胞前30 min用10 ng/ml脂多糖进行处理;取大鼠脑胶质瘤C6细胞株,分别与10-5mol/L硫喷妥钠作用0.5 h、1 h、2 h、4 h,在收集细胞前30 min用脂多糖进行处理.提取细胞总RNA.逆转录得到c-DNA,之后行PCR反应;NF-кB表达结果进行凝胶电泳分析(EMSA)并用Bio-Rad密度仪进行半定量分析.结果 经 10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L硫喷妥钠处理的电泳带窄于对照,密度测量值低于对照(P《0.05),但各处理浓度之间密度测量值的无显著性差异.经10-5mol/L硫喷妥钠作用0.5 h、1 h、2 h、4 h的各电泳带宽度依次递减,亮度依次递减;密度测量数值也依次递减(P《0.05),且低于对照(P《0.05).结论 硫喷妥钠对脑胶质瘤细胞NF-кB活性具有明显影响.这种影响与硫喷妥钠浓度无关,随硫喷妥钠作用时间的延长而增强.     

蛋白激酶C对原代培养神经元诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨PKC参与缺血性神经元损伤的可能机制。方法：采用SD大鼠大脑皮层神经元原代培养为模型，观察PKC刺激剂PMA对培养神经元的毒性率、凋亡及神经元内iNOS表达的影响。结果：PMA可以明显地促进神经元内iNOS的表达，增加神经元的毒性率，诱导神经元凋亡。结论：PKC激活参与神经元的损伤可能是通过引起神经元内iNOS的表达而实现的。     

补骨脂素干预大鼠成骨细胞骨保护素/核因子kB受体激活因子配体mRNA的表达

背景:补骨脂素有促进大鼠成骨细胞增殖与分化的作用,但其作用机制尚不明确.目的:探讨补骨脂素对大鼠成骨细胞中骨保护索(osteopomgeterin,OPG)和核因子kB受体激活因子配体(receptor activator nuclear factor kappa b ligand,RANKL)mRNA表达的影响.方法:取第3代生长状况良好的出生24 h内的SD大鼠成骨细胞,补骨脂素组加入1×10-7 mol/L的补骨脂素,雌二醇组加入1×107 mol/L的雌二醇,对照组正常培养.给药72 h后提取细胞总RNA,RT-PCR方法分析细胞OPG/RANKL mRNA的表达.结果与结论:与对照组比较,补骨脂素组和雌二醇组OPG mRNA的表达均明显增加(P＜0.05),而RANKL mRNA的表达明显下降(P＜0.05),但补骨脂索组成骨细胞OPG mRNA的表达较雌二醇组弱(P＜0.05),VOPG/VRANKL 比值也较雌二醇组小(P＜0.05).说明补骨脂素可能通过增加成骨细胞OPG的表达,抑制RANKL的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到防治骨质疏松症的日的,但作用不如雌二醇明显.     

人睫状肌细胞核因子κB在曲伏前列腺素作用下的变化

背景：核因子κB可能与葡萄膜巩膜房水流出通道的多种细胞信号调控有关。目的：观察前列腺素类曲伏前列腺素药物作用下，体外培养的人睫状肌细胞核因子KB及其抑制因子（inhibitor，IκB）的变化。设计、时间及地点：对比观察实验，于2005-03，2006-11在中山眼科中心实验室完成。材料：供体取自中山眼科医院，摘自死亡1h内无眼疾青年尸体眼球。患者家属对实验知情同意，并自愿捐献。方法：在人睫状肌细胞培养基中加1umol／L曲伏前列腺素，根据孵育时间的不同分为4组，即0h对照组和6，12，24h组。主要观察指标：采用real-time RT-PCR、免疫荧光半定量分析和ELISA法分别检测上述时间组核因子κBp65、IκBa在基因和蛋白水平的表达。结果：①与对照组比较，6，12，24h组核因子κBp65 mRNA表达均下降（F=17．068，P=0．001）：IκBαmRNA6h组、12h组较对照组改变不明显（P〉0．05），24h组较对照组表达增加（F=32．742，P=0．000）。②免疫荧光半定量分析表明：核因子KBp65荧光强度6，12，24h组均较对照组减少（F=17．216，P=0．000）；IκBQ6h组较对照组没有明显改变（P=0．134）、12h组较对照组轻微下降（P=0．032），24h组较对照组明显增加（F=17．346，P=0．001）。③ELISA法检测磷酸化核因子κBp65随药物作用时间延长而逐渐下降（F=15．4，P=0．001）。结论：曲伏前列腺素作用于人睫状肌细胞后，核因子κBp65的基因表达下调，核易位抑制，IκBα的基因表达上调。     

聚甲基丙烯酸甲酯颗粒对人滑膜细胞核因子κB受体激动剂配体/骨保护蛋白表达的影响

背景:多种因子可以影响骨保护蛋白/核因子κB受体激动剂配体/核因子κB受体激动剂(Osteoprotegerin/receptor activator of nuclear factor-kappaB/ligand of receptor-activator of nuclear factor-kappaB,OPG/RANKL/RANK)系统的表达影响骨代谢,那么松动假体周围的骨水泥颗粒是否也通过影响其代谢参与假体松动过程?目的:观察聚甲基丙烯酸甲酯颗粒对人滑膜细胞RANKL/OPG表达的影响。方法:体外培养人滑膜细胞,在滑膜细胞培养体系中分别加入质量浓度为0(空白对照),0.2,1,10g/L的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥颗粒,采用荧光定量PCR检测上述各浓度PMMA颗粒作用不同时间后滑膜细胞内RANKL、OPG的表达量及其比值。结果与结论:与空白对照组相比,各实验组滑膜细胞内RANKL、OPG的表达量均有下降;随着与聚甲基丙烯酸甲酯颗粒共培养时间延长,各实验组滑膜细胞内RANKL、OPG表达均有下降趋势,而RANKL/OPG表达比值无明显变化。说明聚甲基丙烯酸甲酯颗粒在对滑膜细胞产生生物学反应时并不干扰假体周围骨代谢的动态平衡,并未直接参与人工关节假体的无菌性松动。     

聚甲基丙烯酸甲酯颗粒对人滑膜细胞核因子κB受体激动剂配体/骨保护蛋白表达的影响

背景：多种因子可以影响骨保护蛋白/核因子κB受体激动剂配体/核因子κB受体激动剂（Osteoprotegerin/receptor activator of nuclear factor-kappaB/ligand of receptor-activator of nuclear factor-kappaB,OPG/RANKL/RANK）系统的表达影响骨代谢,那么松动假体周围的骨水泥颗粒是否也通过影响其代谢参与假体松动过程？目的：观察聚甲基丙烯酸甲酯颗粒对人滑膜细胞RANKL/OPG表达的影响。方法：体外培养人滑膜细胞,在滑膜细胞培养体系中分别加入质量浓度为0（空白对照）,0.2,1,10g/L的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥颗粒,采用荧光定量PCR检测上述各浓度PMMA颗粒作用不同时间后滑膜细胞内RANKL、OPG的表达量及其比值。结果与结论：与空白对照组相比,各实验组滑膜细胞内RANKL、OPG的表达量均有下降;随着与聚甲基丙烯酸甲酯颗粒共培养时间延长,各实验组滑膜细胞内RANKL、OPG表达均有下降趋势,而RANKL/OPG表达比值无明显变化。说明聚甲基丙烯酸甲酯颗粒在对滑膜细胞产生生物学反应时并不干扰假体周围骨代谢的动态平衡,并未直接参与人工关节假体的无菌性松动。     

羧甲基壳聚糖对体外培养许旺细胞增殖及核因子κB表达的影响

背景：研究表明羧甲基壳聚糖对多种细胞具有促增殖作用,但其对许旺细胞增殖的影响及具体作用机制有待进一步探索。 目的：观察羧甲基壳聚糖对许旺细胞的促增殖作用,以及其对许旺细胞内核因子κB表达及活性的影响。 方法：取对数生长期的SD乳鼠许旺细胞细胞悬液接种于96孔板,分别以PBS、0,10,50,100,200,500,1 000 mg/L羧甲基壳聚糖培养24 h,采用CCK-8法检测细胞增殖。取对数生长期的SD乳鼠许旺细胞,胰酶消化后制备成细胞悬液,接种于6孔细胞培养板内,分别加入50 mg/L羧甲基壳聚糖、100 mg/L羧甲基壳聚糖、200 mg/L羧甲基壳聚糖、PBS培养24 h,进行BrdU、Real-time PCR及Western blot法检测。 结果与结论：CCK-8及BrdU检测结果表明羧甲基壳聚糖在50-1 000 mg/L范围内可促进许旺细胞增殖,200-500 mg/L时促增殖效应最明显。Real-time PCR及Western blot结果表明50-200 mg/L羧甲基壳聚糖可促进许旺细胞内核因子κB mRNA及蛋白的表达,且具有浓度依赖性。表明羧甲基壳聚糖可促进体外培养许旺细胞的增殖及其核因子κB的表达。     

核因子-κB抑制剂对小鼠肺炎衣原体肺炎致炎及抗炎细胞因子表达变化的影响

目的观察核因子(NF)-κB抑制剂对小鼠感染肺炎衣原体后致炎及抗炎细胞因子表达的调节效应,并对其作用机制进行初步探讨。方法采用TLR4基因缺失(C3H/HeJ)雄性小鼠90只,随机分为正常组、肺炎衣原体感染组和肺炎衣原体感染加NF-κB抑制剂干预组,正常组鼻内接种二磷酸蔗糖(2sp)缓冲液,感染组鼻内接种肺炎衣原体约4.0×10~6IFU/mL,干预组即在感染肺炎衣原体后腹腔注射NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸酞吡咯烷(PDTC)50mg/kg,并分别在接种后第1、4、7、14和21天处死小鼠,取肺脏组织分别采用Western blot法检测NF-κB蛋白的表达,用ELISA法检测肺组织中TNF-α、IL-10的表达,同时观察各组中小鼠肺组织病理变化。结果小鼠感染肺炎衣原体后NF-κB蛋白的表达与正常组比较迅速升高,第4天达高峰(12.44±1.42)pg/mg,第14天时表达下降(5.61±0.81)pg/mg。同时肺组织中TNF-α、IL-10的表达水平在各时间点均高于正常组。在NF-κB抑制剂干预组,肺组织N F-κB蛋白表达与感染组比较明显减弱,同时TNF-α、IL-10的表达水平在各时间点均低于感染组。结论 NF-κB能活化小鼠感染肺炎衣原体的炎症反应,其特异性NF-κB抑制剂能有效拮抗NF-κB活性,抑制炎性介质的释放,减轻炎症反应。     

鼠脑缺血再灌注时葛根素对核因子κB表达的影响

背景：近年研究证明，炎症反应是脑缺血再灌注损伤的主要机制之一，核因子κB作为一种转录因子在脑缺血再灌注炎症反应中起着调控多种炎性细胞因子表达的关键作用。先期实验表明，葛根素具有抗氧自由基和神经细胞凋亡的作用，如果还具有抗炎作用，则可进一步阐述葛根素的脑保护作用机制。目的：探讨葛根素在全脑缺血再灌注损伤中对核因子κB的影响。设计：随机平行对照设计。单位：卫生部北京医院急诊科、华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科、华中科技大学同济医学院的病理学教研室、实验动物中心和公共卫生学院卫生统计学教研室。材料：实验于2003—04／12在同济医学院病理学教研室进行。将健康清洁级的Wistar大鼠75只随机分为假手术组，脑缺血再灌注组和葛根素组3组各25只，每组按再灌注的时间又分为2，6，12，24和48h共5个观察时间点，每个时间点5只大鼠。方法：①假手术组：不电凝双侧椎动脉，分离双侧颈总动脉不夹闭，不给药。②脑缺血再灌注组：电凝双侧椎动脉后用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉10min后松开，行再灌注，在再灌注开始时腹腔注射1mL的生理盐水，以后每隔6h注射1次。③葛根素组：处理程序同脑缺血再灌注组，只是将生理盐水改为葛根素100mg／kg。主要观察指标：在大鼠全脑缺血10min后再灌注2，6，12，24和48h时，用免疫组织化学法检测海马CA1区核因子κB和抑制蛋白κB的活性；用原位杂交法检测肿瘤坏死因子αmRNA的表达，用苏木精-伊红染色检测存活神经元数目。结果：经补充后75只大鼠进入结果分析。①核因子κB的活性：脑缺血再灌注组再灌注2h即明显升高，6h达到高峰，48h仍高于假手术组（P均〈0．01）；葛根素组在各个时间点均低于脑缺血再灌注组（P〈0．01）。②肿瘤坏死因子αmRNA的表达：脑缺血再灌注组再灌注2h即明显升高，12h达到高峰，48h仍高于假手术组（P均〈0．01）；葛根素组在再灌注6～48h均低于脑缺血再灌注组（P〈0．01）。③抑制蛋白κB的活性：脑缺血再灌注组再灌注2h有明显下降，6h降至最低点，以后逐渐升至2h水平，葛根素组在各个时间点均高于脑缺血再灌注组（P〈0．01或0．05）。④存活神经元数目：脑缺血再灌注组随再灌注时间的延长而逐渐减少（P均〈0．01）。在各对应时间点，葛根素组均多于脑缺血再灌注组（P〈0．05或0．01）。结论：全脑缺血再灌注时，葛根素可通过抑制抑制蛋白κB的降解及核因子κB的活性，下调肿瘤坏死因子αmRNA的表达。抑制炎症反应而起到脑保护作用。     

脂联素对成骨细胞核因子κB受体活化素配体表达的影响

背景:成骨细胞分泌的核核因子kκ B受体活化素配体的主要作用为保持破骨细胞的分化和活性,抑制破骨细胞的凋亡.目的:观察脂联素对成骨细胞核因子kκ B受体活化素配体表达的影响,拟进一步探讨其对破骨细胞生成的作用.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-08/2006-03在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所完成.材料:外科手术中弃之5份取正常成人(35～55岁)髂前上棘松质骨由供者自愿提供;人重组脂联素蛋白购自Calbiochem公司.方法;正常成人髂前上棘松质骨体外培养成骨细胞.分别用0,3,10和30 mg/L脂联素干预人成骨细胞48 h.成骨细胞和CD14 外周血单核细胞共培养14 d,用30 mg/L脂联素干预14 d,以25μg/L 巨噬细胞集落刺激因子 50 μg/L核因子k B受体活化素配体干预14 d作为诱导破骨细胞阳性对照.主要观察指标:分别采用荧光定量聚合酶链反应和酶联接免疫吸附剂测定的方法检测核因子k B受体活化素配体的表达;并用脂联素蛋白干预成骨细胞与外周血单核细胞共同培养系统,观察对破骨细胞生成的作用.结果:①脂联素呈剂量和时间依赖性促进人成骨细胞核因子κ B受体活化素配体的表达.②脂联素呈时间和剂量依赖性促进人成骨细胞可溶性破骨细胞异化因子蛋白的分泌.③脂联素干预成骨细胞与CD14 外周血单核细胞共同培养系统可诱导破骨细胞生成.结论:脂联索可通过诱导成骨细胞核因子κ B受体活化素配体表达,诱导破骨细胞生成.     

鼠脑缺血再灌注时葛根素对核因子κB表达的影响

背景:近年研究证明,炎症反应是脑缺血再灌注损伤的主要机制之一,核因子κB作为一种转录因子在脑缺血再灌注炎症反应中起着调控多种炎性细胞因子表达的关键作用.先期实验表明,葛根素具有抗氧自由基和神经细胞凋亡的作用,如果还具有抗炎作用,则可进一步阐述葛根素的脑保护作用机制.目的:探讨葛根素在全脑缺血再灌注损伤中对核因子κB的影响.设计:随机平行对照设计.单位:卫生部北京医院急诊科、华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科、华中科技大学同济医学院的病理学教研室、实验动物中心和公共卫生学院卫生统计学教研室.材料:实验于2003-04/12在同济医学院病理学教研室进行.将健康清洁级的Wistar大鼠75只随机分为假手术组,脑缺血再灌注组和葛根素组3组各25只,每组按再灌注的时间又分为2,6,12,24和48 h共5个观察时间点,每个时间点5只大鼠.方法:[1]假手术组:不电凝双侧椎动脉,分离双侧颈总动脉不夹闭,不给药.[2]脑缺血再灌注组:电凝双侧椎动脉后用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉10 min后松开,行再灌注,在再灌注开始时腹腔注射1 mL的生理盐水,以后每隔6 h注射1次.[3]葛根素组:处理程序同脑缺血再灌注组,只是将生理盐水改为葛根素100 mg/kg.主要观察指标:在大鼠全脑缺血10 min后再灌注2,6,12,24和48 h时,用免疫组织化学法检测海马CA1区核因子κB和抑制蛋白κB的活性;用原位杂交法检测肿瘤坏死因子αmRNA的表达,用苏木精-伊红染色检测存活神经元数目.结果:经补充后75只大鼠进入结果分析.[1]核因子κB的活性:脑缺血再灌注组再灌注2 h即明显升高,6 h达到高峰,48 h仍高于假手术组(P均＜0.01);葛根素组在各个时间点均低于脑缺血再灌注组(P＜0.01).[2]肿瘤坏死因子αmRNA的表达:脑缺血再灌注组再灌注2 h即明显升高,12 h达到高峰,48 h仍高于假手术组(P均＜0.01);葛根素组在再灌注6～48 h均低于脑缺血再灌注组(P＜0.01).[3]抑制蛋白κB的活性:脑缺血再灌注组再灌注2 h有明显下降,6 h降至最低点,以后逐渐升至2 h水平,葛根素组在各个时间点均高于脑缺血再灌注组(P＜0.01或0.05).[4]存活神经元数目:脑缺血再灌注组随再灌注时间的延长而逐渐减少(P均＜0.01).在各对应时间点,葛根素组均多于脑缺血再灌注组(P＜0.05或0.01).结论:全脑缺血再灌注时,葛根素可通过抑制抑制蛋白κB的降解及核因子κB的活性,下调肿瘤坏死因子αmRNA的表达,抑制炎症反应而起到脑保护作用.