桔梗栽培及野生种质遗传多样性的RAPD分析

为了解桔梗栽培种质、野生种质的遗传背景,为桔梗育种及道地药材研究提供依据,采用RAPD方法分析了桔梗20份栽培种质、3份野生种种质及5份遗传材料共92个样品的遗传多样性。从264个随机引物中筛选出多态性较好的6个引物进行全部样品PCR扩增,得到多态性条带58条。所有种质的多态性位点比率(P)为66.67%,Nei's基因多样性指数Ht为0.2099,栽培种质的Ht和P值AT＞AB＞NC＞SZ,野生和遗传材料中各份种质的Ht和P值很低,但总体值仍高;UPGMA聚类和SPSS聚类可以将各种不同来源的种质很好地区分开来。结论：桔梗栽培种质在遗传背景来上为混杂群体,纯系材料遗传背景均一,不同栽培产区桔梗种质已出现明显遗传分化。     

药用黄芪的遗传多样性RAPD分析

目的：对药用黄芪的遗传多样性进行研究,为黄芪的保护利用提供参考。方法：采用随机扩增多态DNA（RAPD）方法对15份黄芪基因组进行扩增,所获数据通过NTSYS-pc v2.1和POPGENE v1.3进行分析。结果：从47条引物中筛选出12条条带清晰且重复性好的引物用于实验和统计分析,共扩增出85个位点,多态性位点占78.16%。聚类分析显示,所有供试黄芪可明显聚为三类。结论：本研究中来自四个省份的黄芪具有较高的遗传多样性;材料间遗传距离的远近与其地理来源有一定相关性,其中四川理塘的野生黄芪与其他材料遗传距离较大,推测与其独特的生境有关。说明保护黄芪多样性应尽可能广泛收集不同来源地的种质资源。     

不同产地西洋参种质遗传多样性的RAPD和ISSR分析

目的采用RAPD和ISSR分子标记技术对我国10个产地的西洋参Panax quinquefolium的遗传多样性进行分析。方法以人参及加拿大西洋参为对照,采用CTAB法提取基因组DNA,选取13个RAPD随机引物及12个ISSR引物对样品进行PCR扩增,根据条带数目,应用NTSYS-pc2.10e软件采用UPGMA方法进行聚类分析。结果 13条RAPD引物共扩增出97条清晰条带,多态性条带81,多态性百分率为85.51%;12条ISSR引物共扩增出99条清晰条带,多态性条带64,多态性百分率为64.65%;通过聚类分析,RAPD及RAPD+ISSR综合将样品聚为4大类;ISSR将样品聚为2大类。结论 RAPD和ISSR标记构建的样品聚类树状图在分类上稍有差异,但总体趋势一致。人参与西洋参被明显区分开来;在ISSR上,吉林兴参镇与北岗镇西洋参与人参聚为一大类;在生长环境及种植条件影响下,东北部分产地西洋参与加拿大西洋参相比在遗传多样性上有所改变。     

药用菊花遗传多样性的RAPD分析

目的:分析不同药用菊花栽培类型的遗传差异。方法:采用2%CTAB法进行药用菊花的DNA提取,并用RAPD技术对22个类型药用菊花种质资源的DNA进行检测,采用NTSYS软件对扩增结果进行统计和聚类。结果:筛选得到的26个引物共得到了233条扩增DNA片断,其中89.7%的扩增条带表现出多态性,每个引物平均可扩增得到8.04条多态性片断。聚类分析结果表明利用RAPD技术可将全部供试材料区分开。结论:药用菊花种质资源在分子水平上确实存在较大差异;药用菊花栽培类型间的差异与环境因素有关,但更大程度上由其遗传因素决定。     

药用金荞麦遗传多样性的RAPD分析

目的:对野生金荞麦进行遗传多样性研究.方法:通过RAPD技术对7个野生金荞麦居群共87个个体进行遗传多样性分析.结果:用12个随机引物共扩增出85条清晰条带,其中75条具多态性,平均多态性位点比率为88.24%,Nei's基因多样性指数H=0.310 3,Shannon多样性指数I=0.563 2,遗传分化指数G_(st)=0.192 4.结论:金荞麦种内具有较高的遗传多样性,遗传变异主要存在于居群内部,遗传多样性与地理关系表现出明显的相关性.RAPD可以作为研究遗传多样性及遗传分化的有效标记.     

巴戟天遗传多样性的RAPD研究

目的应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)标记技术对广东产5个类群的栽培巴戟天进行遗传多样性研究。方法应用15种引物对64个个体进行检测,应用Popgen32软件分析群体的遗传多样性。结果共得到224条带,其中多态位点112个,多态百分率为50.00%。种群内多态位点百分率在37.05%～53.13%,平均为45.86%。Shannon指数和Nei指数均反映出巴戟天各类群遗传多样性有一定的变化。Shannon指数为0.287 6,各类群的Shannon指数在0.103 3～0.236 2,Nei指数为0.175 6,各类群的Nei指数在0.074 5～0.154 0。结论目前栽培巴戟天居群间有一定的分化,并产生了多种农家类型,其中小叶巴戟天(POP2)遗传多样性明显高于其他类型,这些可能是导致目前栽培巴戟天质量产生变异的主要原因。     

蒲公英属植物遗传多样性的RAPD分析

目的 分析4种蒲公英属植物的遗传关系和遗传多样性.方法 利用RAPD分子标记技术和方法对不同居群蒲公英进行检测,通过计算遗传相似系数建立其聚类分析图.结果 从150条随机引物筛选出10条有效引物,在河南4个品种24个野生蒲公英居群RAPD共扩增出1 110个位点,平均每个引物扩增出111个位点,每个居群扩增出46.25个位点;在所获得的95条可重现谱带中,7条单态,88条多态,多态性程度达92.63％,遗传距离在0.008 7 ～0.792 2.结论 蒲公英不同种、同一种不同居群间存在明显的遗传分化,其中种间差异大于种内,遗传多样性主要存在于居群间;RAPD技术可以作为蒲公英居群遗传多态性、亲缘关系及品种鉴别研究的有效手段.     

西部地区濒危药用植物秦艽遗传多样性的RAPD分析

目的:对甘肃、陕西、宁夏、四川及青海5个主产地秦艽的遗传多样性进行分析。方法:用随机扩增多态性DNA标记(RAPD)技术对11个秦艽种群90个个体基因组DNA的遗传多样性进行检测。结果:RAPD 8条引物检测到65条扩增条带,其中有59条是多态的,多态位点百分比达到97.78%。通过聚类分析可将秦艽的11个种群聚为两类,四川和陕西两省4个种群聚为一类;甘肃、宁夏和青海省7个种群聚为一类。结论:甘肃省环县种群、子午岭种群和华亭种群应作为秦艽的重要种群加以优先重点保护。     

药用肉苁蓉的遗传多样性RAPD分析

目的 :荒漠肉苁蓉Cistanche deserticola和管花肉苁蓉Cistanche tubulosa群体遗传多样性的研究。方法 :对荒漠肉苁蓉 2个野生居群和管花肉苁蓉 4个野生居群进行RAPD分析 ,利用POPGENE1.31版软件分析群体的遗传多样性。结果 :荒漠肉苁蓉平均多态位点百分率 47.37% ,2个居群多态位点分别为 39.4 7%和 35.53% ,平均Nei’s基因多样性为 0 .135 8,Shannon’s多态性信息指数为 0.2072 ,基因分化系数Gst=0.2546。管花肉苁蓉平均多态位点百分率 27.5 9% ,各居群多态位点百分率从 19.54 %到 25.29% ,其中安迪尔居群的最高 25.29% ,平均Nei’s基因多样性为 0.0823,Shannon’s多态性信息指数为 0.1258,基因分化系数Gst=0.1755。结论 :荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉在居群间均有一定的分化 ,荒漠肉苁蓉的遗传多样性明显高于管花肉苁蓉 ,并已明显分化成 2个生态型。     

川产贝母种质资源遗传多样性的ISSR分析

目的:为阐明川产贝母资源间亲缘关系提供更多证据.方法:利用ISSR分子标记技术对川产10个种1变种共19份材料进行分析,采用NTSYS软件计算材料间相似系数,并用UPGMA法构建了系统树.结果:从35个ISSR引物中共筛选出11个多态性明显、反应稳定的引物,在19份供试材料DNA中共扩增出179条谱带,其中多态性条带163条,占86.8%.材料间ISSR标记遗传相似性系数(GS)在0.569～0.855.聚类分析结果显示,所有供试材料均可区分开,并聚为4组.第1组包括川贝母、甘肃贝母、长腺贝母和短丝贝母,第Ⅱ组由暗紫贝母和浓蜜贝母组成,槽鳞贝母、浙贝母、瓦布贝母和梭砂贝母聚为第Ⅲ组,湖北贝母单独为第Ⅳ组.试验结果还表明,来源于同一地区的多数川产贝母材料可分别聚在一起.结论:ISSR标记适用于川产贝母资源的遗传多样性研究,但药典收载的川贝母药材的4种基原植物种间及其与其他川产贝母属各物种间尚不能仅通过采用ISSR标记技术进行分子鉴定.此外,ISSR聚类结果同川产贝母资源的地理分布有一定关系.     

羌活水溶部分的抗心律失常作用

实验表明羌活水溶部分对乌头碱引起的小白鼠、大白鼠实验性心律失常及氯仿-肾上腺素所致家兔实验性心律失常均有明显的对抗作用。其抗心律失常作用为羌活溶液的非无机盐部分。     

羌活化学成分研究

目的对羌活Notopterygium incisum的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、HPLC以及Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离纯化,并结合现代波谱学技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从羌活的70%乙醇提取物中分离得到14个化合物,分别鉴定为7-羟基香豆素(1)、5,7-二甲氧基香豆素(2)、紫花前胡内酯(3)、佛手酚(4)、佛手柑内酯(5)、异虎耳草素(6)、比克白芷内酯(7)、(+)-顺式凯林内酯(8)、(-)-反式凯林内酯(9)、茴香酸对羟基苯乙酯(10)、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯(11)、阿魏酸(12)、异欧前胡素(13)和异补骨脂素(14)。结论化合物2、7~9和11为首次从羌活属植物中分离得到。     

羌活中香豆素类化学成分及其抗氧化活性研究

目的研究羌活Notopterygium incisum中的香豆素类化学成分及其抗氧化活性。方法采用重结晶、硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱以及制备HPLC等多种分离手段进行分离纯化,通过现代波谱学方法鉴定结构,并采用DPPH法和ABTS法对分离得到的化合物进行抗氧化活性测试。结果从羌活70%乙醇提取物中的二氯甲烷萃取层分离得到10个化合物,分别鉴定为佛手酚(1)、中甸前胡素(2)、镰叶芹二醇(3)、苯乙基阿魏酸酯(4)、丝立尼亭(5)、拱当归素(6)、羌活酚(7)、紫花前胡苷元(8)、(+)-cis-khellactone(9)、水合氧化前胡素(10),并经2种不同的方法测试了这类化合物的抗氧化活性。结论化合物2、6为首次从该植物中分离得到;经DPPH法和ABTS法测试发现化合物1和7具有较强的抗氧化能力;构效关系分析发现5位上具有-OH,多烯烃结构的呋喃环香豆素具有比其他香豆素类化合物更强的抗氧化活性。     

羌活中的香豆素类成分及其抑制脂多糖诱导的RAW 264.7细胞NO生成活性的研究

目的研究羌活Notopterygium incisum的香豆素类成分及其抗炎活性。方法采用硅胶、HPLC等柱色谱方法进行分离纯化,通过质谱、核磁共振波谱数据鉴定化合物的结构;采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7炎症反应模型,考察羌活中香豆素类成分对炎症反应模型一氧化氮(NO)生成的影响。结果从羌活甲醇提取物分离得到24个香豆素类化合物,分别鉴定为异欧前胡素(1)、川白芷素(2)、补骨脂素(3)、香柑内酯(4)、茵陈素(5)、欧芹酚(6)、5-去氢羌活醇(7)、环氧脱水羌活醇(8)、7″-O-甲基异羌活醇(9)、佛手柑素(10)、7-异戊烯氧基-6-甲氧基-香豆素(11)、栓翅芹烯醇(12)、羌活醇(13)、去甲呋喃羽叶芸香素(14)、异羌活醇(15)、蛇床夫内酯(16)、6-异戊烯氧基伞形花内酯(17)、紫花前胡苷元(18)、异虎耳草素(19)、紫花前胡苷(20)、前胡苷V(21)、前胡苷I(22)、印枳苷元-11-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(23)、羌活苷(24)。化合物7～10、13和15抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞NO生成活性最强,最大半数抑制浓度(IC_(50))值为8.50～35.12μmol/L。结论化合物7为新的天然产物,化合物17为首次从羌活中分离得到;C-5位上具有多烯烃结构的香豆素抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞NO生成活性较强。     

羌活化学成分研究

从羌活的乙醚提取部分分离鉴定了佛手柑内酯,异欧芹属素乙,去甲呋喃羽叶云香素,佛手酚,羌活醇,羌活酚,脱水羌活酚,花椒毒酚,佛手柑亭,苯乙基阿魏酸酯,对羟基间甲氧基苯甲酸,阿魏酸和娠烯醇酮等13个化合物。     

羌活化学成分的研究

从中药羌活的50%乙醇可溶部分中,分离鉴定了哥伦比亚甙、胡萝卜甙、λ-氨基丁酸、天门冬氨酸、亮氨酸。其中3种氨基酸是首次从该植物中分得。     

羌活种子发芽及实生苗生长发育的研究

目的：研究打破休眠后的羌活种子的萌发过程、适宜培养基以及羌活实生苗生长规律和优化措施。方法：使用光照培养箱,设置25,20,15,10 ℃ 4个发芽温度条件,光周期为12 h/12 h光暗反应,计算发芽始期和发芽持续时间,以及发芽势和发芽率；9种基质、4种播种深度下定期对种子苗进行生长发育的观测。结果：羌活种子的发芽适温为15 ℃,基质A6(锯末、蛭石、草炭灰、珍珠岩混合基质)是9种基质中对羌活实生苗生长最有利的基质,覆土深度1～1.5 cm较好；实生苗子叶出土需要约10 d,出苗约15 d,第1片真叶展开约25 d,第2片真叶展开2个月,倒苗时间12月份,返苗时间3月份。结论：解除休眠的羌活种子能长出高质量的实生苗,且适合生长在土质疏松、有机质丰富、土层深厚的土壤上。     

高效液相色谱法测定不同产地羌活中紫花前胡苷的含量

目的 :测定不同产地羌活中紫花前胡苷含量。方法 :高效液相色谱法。结果 :紫花前胡苷回归方程为Y=-9509.1+1912709.8X ,r =0.9998,线性范围 0.16～0.64μg ,平均回收率 99.3% ,RSD 2.64%。 结论 :方法简单、快速、重现性好。     

羌活和宽叶羌活的环境土壤学研究

目的对羌活和宽叶羌活进行环境生态学比较,探讨环境植物学因素对野生羌活的影响,为羌活的野生抚育和引种驯化提供理论依据.方法对四川甘孜、阿坝、青海互助和甘肃临潭等主产区进行了长期的野生环境考察研究,并对各主产地的土壤养分状况进行了初步分析.结果野生羌活的生长、繁殖和分布主要受到3个方面的制约,即(1)土壤发育程度和养分状况,(2)土壤水分状况,(3)生境的植被覆盖状况.前二者受到植被覆盖状况的制约和影响,这些基础研究工作的欠缺是药用羌活植物引种长期难以取得成功的重要制约因素.结论羌活原生生境土壤有机质、氮素和有效磷与宽叶羌活有较大差异,对羌活和宽叶羌活的分布影响很大;土壤中有机质、水解性氮、有效磷对羌活和宽叶羌活的药材质量的影响极大,但其定量关系有待进一步研究.     

中药复方清脑胶囊应用超临界流体萃取技术的探讨

本文通过分析清脑胶囊的研发历程,探讨超临界技术对新药研发过程中各环节的影响和可能产生的问题,并结合清脑胶囊的实例,给出解决的对策,为超临界流体萃取技术应用于中药新药开发提供可资借鉴的参考.