应用PCR技术及ELISA法检测HBV的结果分析

本文报道用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）及聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测６４６例似肝火患者血清乙肝病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）－乙肝二对半及乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ－ＤＮＡ）的分析结果。用ＥＬＩＳＡ法检出ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋）及ＨＢｅＡｇ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）这两种模式ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）检出率分别高达９５．６％（４４／４６）及９１．１％（１２３／１３５），在虽然有ＨＢｓＡｇ（＋）出现，无（或     

应用聚合酶链反应检测HBV—DNA的临床价值

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ法对５３０例乙肝患者（含１１８例病毒携带者）血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝病毒标志物进行检测，ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率分别为１）ＨＢｓＡｇ“＋”、ＨＢｅＡｇ“＋”和抗－ＨＢｃ“＋”组为９６．８５％；２）ＨＢｓＡｇ“＋”、抗－ＨＢｅ“＋”和抗－ＨＢｃ“＋”组为４４．１２％；３）ＨＢｓＡｇ“＋”和抗－ＨＢｃ“＋”组为３５．８９％；４）ＨＢＶ标志物均阴性为１３．１１％；５）     

乙型肝炎病毒血清学标记物与PCR HBV-DNA检测结果的比较

对３０９例乙型肝炎病毒血清学标记物１５种阳性形式进行ＰＣＲＨＢＶ－ＤＮＡ检测比较,ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）形式的ＰＣＲ阳性率９５．２％;ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）形式的ＰＣＲ阳性率８３．３％。抗－ＨＢｓ（＋）、抗－ＨＢ     

350例病毒性肝炎患者检测HBV-DNA与HBV血清学标志物相关性研究

采用ＰＣＲ技术对３５０例各型病毒性肝炎进行检测，旨在研究血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－Ｍ之间的相关性，以确定ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义。并以ＨＢＶ－ＤＮＡ为依据进一步考察ＨＢＶ－Ｍ的临床价值。结果显示：在ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）病例中ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）者１０２例（９０．２７％），说明ＨＢｅＡｇ基本可反应病毒处于复制状态；在１３７例ＨＢｅＡｇ（－）／抗－ＨＢｅ（＋）中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）为６８例（４９．６３％），表明病毒活动并未终止；在抗－ＨＢｓ（＋）１４例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２例（１４．２９％），说明抗－ＨＢｓ出现后仍然可有ＨＢＶ复制；在ＨＢＶ－Ｍ均阴性的８５例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２３例（２７．０６％），说明不能单纯依靠ＨＢＶ－Ｍ检测来诊断乙肝，需定期查ＨＢＶ－ＤＮＡ或肝活体组织检查ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ。     

ELISA法与PCR法联合检测乙肝病毒标记物临床价值探讨

用酶联免疫吸附法与聚合酶链反应法,联合检测１１３例病毒性肝炎患者血清乙肝病毒免疫学标记物（ＨＢＶ－Ｍ）与分子生物学标记物（ＨＢＶ－ＤＮＡ０。结果显示,ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（＋）,抗ＨＢｅ（＋）组,ＨＢｓＡｇ（＋）,抗ＨＢｅ（＋）,抗ＨＢｃ（＋）组,ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（－）,抗ＨＢｃ（＋／－）组,抗ＨＢ（＋）,抗ＨＢｓ（＋）组及ＨＢＶ－Ｍ全阴组,ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为１００％,     

承德市高校无偿献血学生五项血液指标分析

对１９９９年１－６月份承德市高校１６０５名无偿献血大学生的乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）丙肝抗体（ＨＣＶ）,血清转氨酶（ＡＬＴ）,爱滋病（ＡＩＤＳ）,梅毒,血比重,血型等七项血液指标中主要指标的检测结果进行了统计学分析。结果：ＨＢｓＡｇ阳性率为４．１％（１．５％－５．１％）,ＡＬＴ阳性率为８．２％（３．７％－１１．１％）,发现４例ＨＣＶ阳性者,ＡＬＴ（＋）合并ＨＢｓＡｇ（＋）者１０例。未发现ＡＩＤＳ,     

PEG—ELISA检测两对半阳性模式血清中IgG类HBsAg免疫…

用ＰＥＧ沉淀免疫复合物，再用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ／ＩｇＧ免疫复合物，用此法对２０６例１１种两对半阳性模式血清中的ＨＢｓＡｇ／ＩｇＧ复合物进行了检测，总阳性率为１８．９％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｃ（＋）及抗ＨＢｅ（＋）、抗ＨＢｃ（＋）二种模式阳性率最高（均为５０％），ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋），抗ＨＢｓ（＋）、抗ＨＢＣ（＋）以及抗ＨＢｃ（＋）这三处模式均未检出，但例数少，分别为５、１     

精神科住院患者乙肝病毒感染状况调查

目的：探讨精神科住院患者乙肝病毒（ＨＢＶ）感染状况,为防治ＨＢＶ 的院内感染提供参考依据。方法：采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对１２９５ 例住院精神病患者进行血清ＨＢＶ标志物检测。结果：血清ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ 五项ＨＢＶ 标志物阳性率分别为８．７３％ 、３１．０４％ 、２．７％ 、２１．７８％ 、１５．２９％ ,ＨＢＶ 总感染率为４３．６３％ ;５６５ 例阳性标本检出ＨＢＶ感染模式１５ 种,ＨＢｓＡｇ（＋ ）、抗－ＨＢｓ（－ ）、ＨＢｅＡｇ（－ ）、抗－ＨＢｅ（＋ ）、抗－ＨＢｃ（＋ ）（小三阳）占１２．２％ ,ＨＢｓＡｇ（＋ ）、抗－ＨＢｓ（－ ）、ＨＢｅＡｇ（＋ ）、抗－ＨＢｅ（－ ）、抗－ＨＢｃ（＋ ）（大三阳）占５．８４％ 。结论：精神科住院患者中存在ＨＢＶ 传染源,病区应加强监测、隔离、消毒等综合性措施,预防住院患者ＨＢＶ 的院内感染     

胎儿LAK／IL—2治疗长期HBV无症状携带者的临床研究

应用儿脾ＬＡＫ细胞，配合ｒＩＬ－２和ｒＩＦＮ－γ治疗８例长期ＨＢＶ无症状携带者，结果表明：有７５％（６／８）的患者ＨＢｅＡｇ转阴，其中有２５％（２／８）的患者ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ均转阴，治疗后ＣＤ＾＋８Ｔ细胞稍有增高，Ｔａｃ抗原比治疗前和对照组均显著增高，血ｓＩＬ－２Ｒ，ＩＬ－８和ＮＴＦ－α治疗后均显著增高。     

献血员血清抗─HCV水平及其感染因素调查

对１６７名职业献血员进行了献血前筛选，结果抗ＨＣＶ阳性检出率达１７．６７％（１１９／６７０）．ＡＬＴ异常和ＨＢｓＡｇ阳性者抗－ＨＣＶ阳性检出率分别为６６．６７％和２９．２％，高于ＡＬＴ正常和ＨＢｓＡｇ阴性者（１４．Ｏ％和１６．９％）。不同年龄、性别的献血员ＨＣＶ感染无差异。运用１：１配对的病例对照研究方法对９７对抗－ＨＣＶ阳性和阴性的献血员进一步的调查发现：有献血浆、肝炎、饮酒、针灸史及ＡＬＴ异常、ＨＢｓＡｇ阳性的献血员感染ＨＣＶ的危险性分别是无上述因素的５４．１９，２．５３，１．８８，６．０８和４．５９，２．５３倍，献血浆成为献血员感染ＨＶＣ的第一高危因素（ＯＲ＝５４．１９）；且献血浆（或全血）次数越多、献血时间越长，其感染ＨＣＶ的危险性越大，从而呈现明显的“剂量－效应”关系。     

海藻酸钠纯度对微囊纤维化及囊内甲状旁腺组织功能的影响

目的研究海藻酸纯度对移植微囊及囊内人胚胎甲状旁腺组织功能的影响。方法将纯化及未纯化海藻酸微囊及微囊化人胚胎甲状旁腺组织分 4组异种移植于小鼠腹腔内 ,设立空囊对照组。测定人甲状旁腺素数值 ,通过测定具有特异性的人甲状旁腺素 ,以明确微囊内甲状旁腺组织的分泌功能 ,组织学检测微囊形态。结果移植后 2个月纯化组及未纯化组人甲状旁腺组织分泌功能有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,分别为 (38.8± 13.7) pg/ml和(1.2± 0 .7) pg/ml,纯化及未纯化海藻酸钠制备空囊移植组 ,植入 1个月时微囊冲洗回收率分别为 (72± 18) %和(2 4± 13) % ,植入 2个月时为 (6 5± 2 1) %和 0。结论纯化的海藻酸制备微囊具有良好的生物相容性 ,微囊内甲状旁腺组织发挥功能时间比未纯化海藻酸明显延长     

两种免疫分析方法检测乙肝病毒血清标志物的差异分析

目的:比较酶联免疫吸附试验分析方法(ELISA)和化学发光免疫法(CLIA)检测乙型肝炎病毒血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb)的差异。方法:采用ELISA法和CLIA法对2011年1～12月在我院传染病门诊首次就诊300例患者的血清样本进行平行检测乙型肝炎病毒血清标志物,分析两种免疫分析方法灵敏度和阳性结果符合性。结果:CLIA法检测血清HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb检测的灵敏度分别为0.2ng/ml、10mIU/ml、0.1Ncu/ml、1Ncu/ml和0.5Ncu/ml,均高于ELISA法。CLIA法和ELISA法测定300份血样HB-sAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb结果差异无统计学意义(P>0.05),CLIA法测定HBeAb差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA法相对于CLIA法测定HBsAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb的阳性符合率分别为94.17%、96.23%、97.20%和92.42%,而HBeAb阳性符合率仅为65.52%。结论:采用CLIA检测乙型肝炎血清标志物的灵敏度和符合率优于ELISA法,并且可以直接对血清标志物表达进行定量,值得临床推广应用。     

HBsAg进入体外培养的人绒毛膜滋养层细胞的初步研究

目的：检测HBsAg进入体外培养的人绒毛膜滋养层细胞的情况，为HBV宫内传播机制研究提供理论依据。方法：用胰蛋白酶（0．25％）－DNase I(0.15U/ml)联合消化法，获取纯度较高的人绒毛膜滋养层细胞。将状态良好的对数生长期人绒毛膜滋养层细胞分为6组，HBsAg-anti-HBs复合物组（I），热灭活的HBsAg、HBsAg、anti-HBc均阳性血清和高滴度anti-HBs阳性血清共同孵育物组（Ⅱ），热灭活的HBsAg、HBeAg、anti-HBc均阳性血清组（Ⅲ），HBsAg组（Ⅳ），热灭活的正常人血清组（Ⅴ），及正常细胞培养液组（Ⅵ，空白对照组）。分别收集各组细胞铺片，免疫组化检测细胞的感染状况。结果：所获人绒毛膜滋养层细胞纯度较高，符合后续实验要求。用鼠抗人anti-HBs免疫组化检测收集的细胞铺片，发现I、Ⅱ组均有大量HBsAg阳性信号，Ⅲ组细胞亦有少量HBsAg阳性信号出现，其他各组细胞均未发现HBsAg阳性信号。结论：体外培养的人胎盘滋养层细胞能将HBsAg-抗HBs复合物中的HBsAg，但不能将单独的HBsAg“摄入”胞内。     

肝细胞癌患者组织中MAGE-1基因的原核表达及鉴定

目的:克隆MAGE-1基因并对其进行原核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-1基因片段,将该片段克隆在原核表达载体PET-32a中,重组克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白以His亲和柱层析纯化,并用Dot-blot和Western-blot对其进行鉴定。结果:经RT-PCR扩增出930bp基因片段,经测序分析后的DNA序列与Genbank中的报道序列同源程度达98%,构建含重组表达载体PET32-M1的工程菌,经IPTG诱导表达、纯化,MAGE-1蛋白浓度为0.48mg/ml,经Dot-blot和Western-blot检测,纯化蛋白可以与商业化的驴抗MAGE-1的多抗结合。结论:成功扩增了肝细胞肝癌中的MAGE-1基因全长cDNA并对其进行了原核表达与鉴定,为进一步研究MAGE-1基因的功能和研制有临床价值的全人抗MAGE-1抗体奠定了基础。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与乙肝两对半检测结果的相关性探讨

目的:探讨HBV-DNA的检出情况与乙肝两对半结果之间的关系。方法:运用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测307例疑似乙肝患者血清中的HBV-DNA,同时运用ELISA方法进行两对半指标的检测,并对结果进行相关性探讨。结果:HBsAg( )HBeAg( )HBcAb( )组(大三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为98.15%(53/54),平均拷贝数为7.56E 06/m l;HBsAg( )HBeAb( )HBcAb( )组(小三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为27.78%(15/54),平均拷贝数为3.79E 05/m l;HBsAg( )HBcAb( )组血清HBV-DNA检出率为91.18%(31/34),平均拷贝数为2.85E 05/m l,小三阳组HBV-DNA阳性检出率及拷贝数均低于大三阳组,且与大三阳组比较均具有显著性差异(P<0.01,P<0.05);HBsAb( )组血清HBV-DNA检出率为1.6%(1/63),平均拷贝数为1.13E 08/m l;HBcAb( )组血清HBV-DNA检出率为16.67%(1/6),平均拷贝数为3.00E 04/m l;HBsAb( )HBeAb( )HBcAb( )组血清HBV-DNA检出率为12.50%(4/32),平均拷贝数为3.00E 05/m l;HBsAg( )组血清HBV-DNA检出率为0(0/2);HBV-M全阴性组HBV-DNA检出率为1.61%(1/62),平均拷贝数为2.75E 05/m l。结论:HBV-M阴性患者仍有HBV-DNA阳性者,因此在检测中应联合应用两种方法进行检测,提高检出率,避免漏诊,为临床HBV感染、复制及传染性的判断以及指导治疗提供更为可靠的判定依据。     

人源性抗HBsAg单克隆抗体Fab片段的制备及其纯化

目的：制备人源性重组ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段。方法：采用固相ＨＢｓＡｇ，从已建立的性抗体组成文库中筛选针对ＨＢｓＡｇ的抗体子文库，并转入大肠杆菌中表达。反复冻融细菌获得可溶性Ｆａｂ片段。制备羊抗人ＩｇＧＦａｂ抗体亲和层析柱，纯化Ｆａｂ片段，。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及点印迹法分析纯化后Ｆａｂ片段的纯度及ＨＢｓＡｇ的能力。结果：蛋白印迹显示转化的细菌内有可溶性Ｆａｂ片段的表达。纯化后的Ｆａｂ片段达免疫纯，并     

苦参碱脂质体抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的评价苦参碱脂质体的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法通过苦参碱脂质体、苦参碱作用于体外培养的2.2.15细胞,观察和比较二者对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响及药物的细胞毒性,初步评价苦参碱脂质体的抗HBV作用。结果苦参碱脂质体、苦参碱作用于2.2.15细胞11 d后,对细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为7.29mg/ml和1.33rage/ml,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(IC50)分别为0.078 mg/ml、3.35mg/ml、<0.078mg/ml和>10mg/ml,苦参碱脂质体对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为93.46和2.17,高于苦参碱的治疗指数。结论苦参碱脂质体在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,可以提高苦参碱的抗HBV作用。     

Cycling and Tai Chi Chuan exercises exert greater immunomo- dulatory effect on surface antigen expression of human hepatitis B virus

Background Both athletes with intensive exercise and aged people may have weakened immunity against virus infection. This study aimed to evaluate whether people undergoing aerobic exercises including competitive cyclists with moderate training （CMT） and middle-aged people practicing Tai Chi Chuan （TCC） exercise have higher immunity against hepatitis B virus than age-matched sedentary controls including college students （CSC） and middle-aged people （MSC）.
Methods Human peripheral blood mononuclear cells from competitive cyclists and sedentary controls were stimulated by phytohemagglutinin （PHA） to prepare conditioned medium （MNC-CM） for the assessment of inhibitory effects on hepatitis B surface antigen （HBsAg） expression in human hepatoma Hep3B cells.
Results The inhibitory effects on the relative HBsAg expression of CMT＇s and TCC＇s MNC-CM were greater than those of the controls. The CMT＇s MNC-CM prepared from 5 μg/ml PHA decreased HBsAg expression to 61.5%, whereas that of CSC remained at 83.8%. Similarly, this expression by treatment of TCC group＇ MNC-CM was 68.4% whereas that of MSC group was 84.3%. The levels of cytokines such as interferon-γ（IFN-γ）, tumor necrosis factor-α （TNF-α）, IFN-α and interleukin-1β （IL-1β） in the MNC-CM from the CMT and TCC groups were greater than those in the controls. Antibody neutralization of CMT＇s MNC-CM and addition of recombinant cytokines into CSC＇s MNC-CM indicated that IFN-γ, TNF-α and IFN-α had synergistic effects against HBsAg expression. Similar blocking effect was noted in TCC versus MSC groups.
Conclusion These results suggest that the immunomodulatory response to suppress HBsAg expression in CMT and TCC with moderate aerobic exercise is greater than that in age-matched sedentary controls.     

人oxLDL自身免疫复合物的体外致动脉粥样硬化作用

目的：观察oxLDL自身免疫复合物对U937巨噬样细胞泡沫化和活化的影响,以探讨oxLDL免疫学反应致动脉粥样硬化的机制。方法：采用密度离心法从健康人血浆中提取低密度脂蛋白（LDL）,用铜离子氧化成oxLDL;用亲和层析法从136例住院患者血清中提取oxLDL自身抗体。在体外制成2种形式不同的免疫复合物：聚乙二醇沉淀的不溶性免疫复合物（PEG-IC）和RBC吸附的可溶性免疫复合物（RBC-IC）,把这2种免疫复合物加至U937巨噬样细胞的培养基中,以oxLDL作阳性对照,并用热聚合人γ球蛋白（HAGG）封闭Fcγ受体作阻断对照,检测干预后的各组U937巨噬样细胞内胆固醇和胆固醇酯及培养基中基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的水平。结果：RBC-IC干预组与RBC吸附oxLDL（RBC-oxLDL）干预组比较,U937巨噬样细胞培养基中MMP-1蛋白表达［（0.769±0.030) ng/ml vs (0.513±0.034) ng/ml,P＜0.01］和细胞内胆固醇酯蓄积［（20.271±1.668) μg/mg vs (17.226±1.298) μg/mg,P＜0.05］明显升高;而在PEG-IC组这种作用则更为明显,且呈剂量依赖性。用10mg/ml的HAGG封闭Fcγ受体后,MMP-1的水平下降约71%,其对巨噬样细胞泡沫化和活化的作用都受到明显的抑制。结论：oxLDL自身免疫复合物能够促进巨噬细胞泡沫化和活化, 其参与动脉粥样硬化的过程可能是通过Fcγ受体途径来实现的。