表皮葡萄球菌临床菌株icaA、icaR基因与生物被膜形成关系的研究

目的研究表皮葡萄球菌icaA和icaR基因与生物被膜形成的相关性。方法收集湘雅三医院机械通气患者分离表皮葡萄球菌26株,按生物被膜成膜能力分成生物被膜阳性菌组和生物被膜阴性菌组各13株。采用RT-PCR分别对2组细菌icaA和icaR基因灰度比进行检测;采用real-time PCR分别检测2组细菌icaA和icaR基因的表达,并通过2-△△Ct方法进行相对定量。结果 RT-PCR结果显示icaA基因在生物被膜阳性组中的灰度比为0.96~1.38,在生物被膜阴性组中为0.89~1.56,表达差异无统计学意义(T=10.65,P=0.057);同理,icaR基因在生物被膜阳性组中的灰度比为0.79~1.24,在生物被膜阴性组中则为0.80~1.36,表达差异亦无统计学意义(T=14.62,P=0.479)。但icaA基因在生物被膜阳性组中的平均秩(16.35)明显高于生物被膜阴性菌组(10.65),而icaR基因生物被膜阳性组的平均秩(12.38)明显小于生物被膜阴性菌组(14.62)。real-time PCR检测发现表皮葡萄球菌生物被膜阳性组icaA基因的表达量(△CT=4.86)是生物被膜阴性组(△CT=13.57)的418.8倍(t=61.890,P0.01),而icaR基因的表达量(△CT=19.03)仅为生物被膜阴性组(△CT=11.85)的1/145(t=21.330,P0.01)。结论 icaA基因与表皮葡萄球菌生物被膜的形成呈正相关,而icaR基因与表皮葡萄球菌生物被膜的形成呈负相关。     

表皮葡萄球菌全面调节子的表达在生物被膜耐药性中的作用

目的:探讨表皮葡萄球菌全面调节子的表达在生物被膜耐药性中的作用.方法:采用实时荧光定量RT-PCR对表皮葡葡球菌1457生物被膜内细菌红霉素作用前后全面调节子(agr,sarA,sigB)的表达进行检测.结果:在表皮葡萄球菌1457中,agrD和RNAⅢ在膜内菌中的表达均高于浮游菌,且红霉素作用24 h后的表达高于作用前(P＜0.05);sarA膜内菌的表达高于浮游菌(P＜0.05),但红霉素作用前后的表达无统计学差异(P＞0.05);膜内菌sigB和反应sigB 调控的活性基因asp23的表达红霉素作用前后无统计学差异(P＞0.05).结论:由于agrD和RNAⅢ参与群体效应系统的调节,提示群体效应调节在红霉素耐药性增加中起着重要作用.     

附属基因调节子在葡萄球菌生物被膜形成与感染中的作用

葡萄球菌生物被膜是生物材料相关感染病理学中最重要的毒力因子,生物被膜形成是由群集感应系统调节的。葡萄球菌附属基因调节子agr作为群集感应系统具有种属特异性,在金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌中控制着一系列毒素和毒力因子的表达,而且与天然免疫系统互作。新的研究进展表明附属基因调节子agr在体内感染中的作用非常微妙。这方面的进展有助于发掘新型抗菌剂和消除与装置相关的葡萄球菌生物被膜感染问题。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布及agr基因分型调查

目的了解我院金黄色葡萄球菌的临床分布、耐药性变迁及agr基因分型。方法我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤法进行药敏试验和结果判断;采用多重PCR法进行agr基因分型测定。结果 2015年10月至2017年3月分离的183株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要来源于24个科室,感染标本来源主要是分泌物、深部痰及非开放性脓液标本,药敏试验提示万古霉素、利奈唑胺、替加环素、复方新诺明、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌敏感率分别为100%、100%、100%、83.06%、62.29%、57.38%、55.19%、53.0%和12.57%;agr基因分型以Ⅰ型为主,其次为Ⅱ型、Ⅲ型。结论我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌于全院均匀分布,对红霉素耐药率较高,未发现对万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药株。     

外排泵msrA在表皮葡萄球菌生物被膜对红霉素耐药性中的作用

目的:探讨外排泵msrA在表皮葡萄球菌生物被膜对红霉素耐药性中的作用.方法:从野生菌株中克隆msrA基因全长,并通过穿梭载体pBT2电转化至限制缺陷菌株金黄色葡萄球菌RN4220,提取质粒后再转化S.epidermidis 1457(ica ,产膜阳性菌),得到S.epidermidis 1457-msrA.实时荧光RT-PCR检测S.epidermidis 1457-msrA和野生株S68浮游菌、生物被膜内细菌红霉素作用24 h前后msrA mRNA的表达.结果:表葡膜内菌msrA的表达在红霉素(10倍MIC)作用前后未见统计学差异.结论:提示膜内菌对红霉素耐药性的增加可能与外排泵基因的上调无关.     

生物信息模拟及生物学效应结合研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶的抑制作用

目的 体外研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的抑制作用.方法 利用生物信息模拟技术,体外模拟以盐酸小檗碱为代表的5种生物碱(配体)与AchE(受体)相互分子对接效应与差异性;将小鼠眼眶取血后脱臼处死,立刻开腹取出十二指肠制备组织匀浆,采用双缩脲法测定肠组织匀浆中总蛋白含量,将盐酸小檗碱与肠组织液共孵育后用酶法检测小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,以生物信息模拟和生物学效应相结合对比研究盐酸小檗碱对AchE的抑制作用.结果 体外分子模拟5种生物碱中只有盐酸小檗碱和药根碱能与AchE受体活性中心进行分子对接;盐酸小檗碱能明显抑制小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,抑制程度与其浓度具有明显的量效关系.结论 体外生物信息模拟和生物学效应研究均表明盐酸小檗碱对AchE有明显的抑制作用.     

人参皂苷对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

目的探讨人参皂苷对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用。方法采用羊肉汤二倍稀释法测定人参皂苷对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用。结果本次研究共得44株标准株,其中阳性被膜菌株31例,被膜形成率为70.45%,编号为SA17的为强成膜菌株,MIC标准菌株20株,强成膜株SA17 41株;MBC标准菌株30株,强成膜株SA17 60株。药物浓度3.2/1.6时,金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制率比较,差异有统计学意义(P0.05)。药物浓度100、50、25、12.5、6.3时金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制率比较,差异无统计学意义(P0.05)。人参皂苷能下调agr、sar A、fnb A基因表达,其中0.1、1.0、10.0浓度下调agr、sar A、fnb A基因表达,与对照相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论人参皂苷对金黄色葡萄球菌生物被膜具有显著的抑制作用,随着药物浓度的增加,其抑制率显著增加。人参皂苷可下调agr、sar A、fnb A基因表达,减少细菌黏附性。     

表皮葡萄球菌ica操纵子与细胞间多糖粘附素及生物膜表型的相关性

目的 探讨表皮葡萄球菌 ica 操纵子与细菌间多糖粘附索(polysaccharide intercellular adhesin,PIA)及生物膜表型之间的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测 icaA 基因,刚果红琼脂平皿检测 PIA,微量板半定量法检测细菌生物膜表型;统计学分析 icaA 基因与 PIA 及生物膜表型之间的相关性.结果 49 株临床分离菌株中,32.7%(16/49)能形成生物膜,67.3%(33/49)无生物膜形成.icaA 基因阳性菌株中 80%(8/10)有生物膜形成,ica 操纵子与生物膜表型密切相关(P<0.01);PIA 阳性菌株中63.6%(14/22)有生物膜形成,PIA 与生物膜表型密切相关(P<0.01).结论 表皮葡萄球菌 ica 操纵子的存在与生物膜表型密切相关,PIA 的合成是生物膜形成的关键环节.     

扁担杆化学成分体外抑菌活性研究

目的:寻找药用植物扁担杆的抗菌活性成分.方法:将从扁担杆中分得的6个化合物:木栓酮(1)、表木栓醇(2)、二十一酸(3)、β-谷甾醇(4)、棕桐酸丙酯(5)、儿荼素(6).采用液体两倍稀释法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、β-溶血性链球菌、表皮葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌进行体外押茼实验.结果:与阳性对照药盐酸小檗碱比较,上述6个化合物对除金黄色萄萄球菌以外的5种细菌生长均有明显的抑制作用,特别是儿茶素对绿脓杆菌、β-溶血性链球菌和表皮葡萄球菌均有较强的抑制作用,最低抑菌浓度分别为0.004、0.002、0.004mg/ml,押茼效果优于盐酸小檗碱.结论:扁担杆中舍有多种抗菌活性成分.其中儿荼素为押菌活性较强的成分之一.     

临床分离表皮葡萄球菌的大环内酯耐药性与生物膜形成能力、icaA基因型的关系

目的 研究68株临床分离表皮葡萄球菌大环内酯耐药性与生物膜形成能力、icaA基因型之间的关系,初步预测采用大环内酯抗菌药物预防表皮葡萄球菌生物膜感染的有效性.方法 以琼脂平板稀释法测定菌株的最小抑菌浓度,采用微孔测定法考察临床分离表皮衙萄球菌生物膜形成能力,通过PCR法测定icaA基因型,探讨三者之间的关系.结果 临床分离表皮葡萄球菌对大环内酯耐药程度较高(88.2%),且耐药菌生物膜形成能力较敏感菌显著增强(P<0.05),耐药菌与敏感菌的icaA阳性比率没有统计学差异(P>0.05).结论 红霉素、阿奇霉素、克拉霉素等常用的大环内酯类药物可能难以有效地预防表皮葡萄球菌生物膜感染.     

临床分离表皮葡萄球菌生物膜形成与其耐药性的相关性分析

目的分析临床分离的表皮葡萄球菌对抗菌药物的耐药性与生物膜形成能力的关系。方法收集成都地区两家医院非重复临床分离表皮葡萄球菌45株,用半定量黏附实验检测其生物膜形成能力,采用K-B法以统一方案进行抗菌药物药敏试验,按CLSI2009版判断结果,用χ2检验分析表皮葡萄球菌耐药性与生物膜形成能力之间的关系。结果 45株表皮葡萄球菌中18株为生物膜形成株,其中12株来源于分泌物标本,6株来源于其他无菌体液。来源于分泌物和其他无菌体液的表皮葡萄球菌生物膜形成能力差异无统计学意义（P〉0.05）;45株表皮葡萄球菌除对万古霉素、利奈唑胺、喹奴普丁/达福普丁有较高的抗菌活性外,对青霉素、氨苄西林/克拉维酸、苯唑西林、头孢唑啉、复方新诺明、林可霉素、环丙沙星、红霉素、庆大霉素、亚胺培南的耐药率均〉50%,特别是苯唑西林耐药表皮葡萄球菌（MRS）高达88.9%.可形成生物膜和不可形成生物膜的菌株对抗菌药物耐药率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论表皮葡萄球菌对抗菌药物的耐药性与其生物膜形成能力无相关性。     

葡萄球菌生物膜检测及与耐药性的关系

目的探讨临床标本中葡萄球菌形成生物膜的状况,研究有无生物膜的葡萄球菌的耐药性差异,帮助临床根据药敏结果选用抗菌药物,及时有效控制葡萄球菌医院感染。方法采用刚果红,微量平板法检测生物膜形成,观察葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响;对临床标本分离的葡萄球菌进行鉴定和药敏试验。结果刚果红法检测腐生葡萄球菌、金黄色葡萄球菌(金葡菌)、表皮葡萄球菌生物膜阳性率分别为10.0%、16.7%、40.0%;生物膜半定量法:表皮葡萄球菌生物膜阳性率TSB、TSB-0.25%Glu、TSB-2%Alc、TSB-4%Alc、TSB-2%NaCl、TSB-4%NaCl分别为13.5%、34.6%、33.3%、29.2%、19.4%、32.1%,其中0.25%Glu、TSB-2%Alc、TSB-4%NaCl为最佳浓度;药敏结果,产生生物膜的葡萄球菌的耐药性对青霉素、红霉素和复方新诺明的耐药有增加趋势,耐药率分别为:86.43%、82.44%、78.35%。结论临床标本葡萄球菌绝大部分能产生生物膜、葡萄糖、乙醇、氯化钠能促进生物膜形成;葡萄球菌对临床常用的抗菌药物耐药性严重,对其引起的感染可用万古霉素。     

ica操纵子对表皮葡萄球菌在不同骨科植入物表面黏附和生物膜形成的影响

目的 探讨ica操纵子对表皮葡萄球菌在骨科植入物表面黏附和生物膜形成能力的影响,为临床骨科材料的使用提供理论依据.方法 采用PCR扩增表皮葡萄球菌ica操纵子的icaADBC基因,荧光定量PCR检测ica操纵子基因的表达,苯酚-硫酸法检测细胞间多糖黏附素(PIA)的合成,黏附能力检测采用菌落平板计数法,生物膜形成能力检测采用结晶紫染色法.结果 11株表皮葡萄球菌临床菌株扩增出ica操纵子的icaADBC基因,且在菌株中均有表达.ica操纵子基因表达高的菌株其PIA分泌量较高.表皮葡萄球菌在骨组织上的黏附和生物膜形成能力最强,其次为钛合金和不锈钢.icaA基因表达与细菌在3种生物材料上的生物膜形成相关.结论 表皮葡萄球菌在不同骨科植入物上具有不同的黏附和生物膜形成能力,ica操纵子基因通过调节PIA分泌量而影响表皮葡萄球菌生物膜的形成.     

Detection of biofilm formation among the isolates of staphylococcus epidermidis by modified microtiter- plate test

The present study was done to detect biofilm formation among the strains of Staphylococcus epidermidis isolated from different clinical specimens and healthy controls in the department of Microbiology, Mymensingh Medical College between July 2007 to June 2008. A total of 62 Staphylococcus epidermidis isolates were identified by standard microbiological technique. Among them 32 S. epidermidis were isolated from cases and 30 were from healthy controls. Antimicrobial susceptibility of the isolates was carried out by disk diffusion method as per recommendation of Clinical and Laboratory Standard Institute 2007. Biofilm production was detected by Modified microtiter-plate test. Out of 32 clinical isolates of S. epidermidis, 13 strains found to produce biofilm. On the other hand out of 30 S. epidermidis from healthy controls, only 5 strains produced biofilm. So detection rate of biofilm production of S. epidermidis by Modified microtiter plate test in clinical isolates was significantly higher than that of control group.     

导管分离表皮葡萄球菌生物被膜形成能力相关研究

目的：探讨导管分离表皮葡萄球菌的生物被膜形成能力和耐受应激环境能力。方法采用结晶紫半定量法和细菌计数法检测表皮葡萄球菌的生物被膜形成能力和应激环境耐受能力。结果表皮葡萄球菌1457菌株和5株导管分离菌株均具有生物被膜形成能力,菌株之间生物被膜形成能力差异无统计学意义（ P＞0．05）;导管分离菌株与1457菌株的游离细菌和被膜细菌的生长能力、对高分子材料的黏附能力、对过氧化氢的氧化应激耐受能力和对乙醇耐受能力差异无统计学意义（P＞0．05）。结论表皮葡萄球菌导管分离菌株与产生生物被膜的表皮葡萄球菌1457菌株具有相近的生物被膜形成能力和耐受应激环境能力。     

Penetration of erythromycin through Staphylococcus epidermidis biofilm

Background The catheter related infection caused by Staphylococcus epidermidis biofilm is increasing and difficult to treat by antimicrobial chemotherapy. The properties of biofilms that give rise to antibiotic resistance are only partially understood. This study aimed to elucidate the penetration of erythromycin through Staphylococcus epidermidis biofilm.

Methods The penetration ratio of erythromycin through Staphylococcus epidermidis biofilms of 1457, 1457-msrA, and wild isolate S68 was detected by biofilm penetration model at different time points according to the standard regression curve. The RNA/DNA ratio and the cell density within the biofilms were observed by confocal laser microscope and transmission electromicroscope, respectively.

Results The penetration ratios of erythromycin through the biofilms of 1457, 1457-msrA, and S68 after cultivation for 36 hours were 0.93, 0.55 and 0.4, respectively. The erythromycin penetration ratio through 1457 biofilm (0.58 after 8 hours) was higher than that through the other two (0.499 and 0.31 after 24 hours). Lower growth rate of the cells in biofilm was shown, with reduction of RNA/DNA proportion observed by confocal laser microscope through acridine orange stain. Compared with the control group observed by transmission electrmicroscope, the cell density of biofilm air face was lower than that of agar face, with more cell debris.

Conclusions Erythromycin could penetrate to the Staphylococcus epidermidis biofilm, but could not kill the cells thoroughly. The lower growth rate of the cells within biofilm could help decreasing the erythromycin susceptibility.

     

熊果酸对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响

目的 研究熊果酸对金黄色葡萄球菌(S.aureus)生物膜形成的影响.方法 二倍稀释法测定熊果酸与左氧氟沙星对S.aureus的最低抑菌浓度(MIC),采用紫外法测定金黄色葡萄球菌的生长曲线,结晶紫染色法测定生物膜生成量,倒置显微镜下观察生物膜结构.结果 熊果酸对S.aureus的MIC为0.27 mmol/L,左氧氟沙星的为0.000 6 mmol/L,不同浓度熊果酸不仅对S.aureus浮游菌的生长有抑制作用,且能显著抑制其生物膜的形成,并呈浓度依赖性;与左氧氟沙星和熊果酸单独应用相比,熊果酸和左氧氟沙星联合用药更能显著抑制S.aureus生物膜形成,且差异具有统计学意义(P<0.01).结论 熊果酸与左氧氟沙星联用对抑制S.aureus生物膜形成有增效作用.     

氨溴索联合左氧氟沙星对粘液型铜绿假单胞菌生物被膜的体外干预作用研究

目的探讨盐酸氨溴索（Ambroxol Hydrochloride,Amb）联合左氧氟沙星（Levofloxacin,LFX）对粘液型铜绿假单胞菌生物被膜（biofilm,BF）的影响。方法以铜绿假单胞菌粘液型菌株PDO300为实验菌株,构建体外BF模型。分为生理盐水对照组、Amb组、LFX组、Amb与LFX联合作用组,二倍稀释法测定LFX最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration,MBC）,结晶紫染色法定量测定BF形成量。结果 PDO300培养7d后可形成稳定的BF。与单独应用LFX相对比,Amb与LFX联合作用后测定载体表面BF值显著降低（P〈0.01）,且载体表面BF随着LFX浓度增高而减少。结论 Amb可显著增强LFX对BF的破坏作用。