血清LCAT与脂质改变和肝脏疾病

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)由肝脏合成,主要功能是催化卵磷脂分子中β位上脂酰基转移到游离胆固醇3位的羟基上,生成胆固醇酯及溶血卵磷脂。其反应式为:卵磷脂+游离胆固醇LCAT+APOA-I胆固醇酯+溶血卵磷脂。初生HDL分子内的卵磷脂与胆固醇为LCAT的作用底物,载脂蛋白(APOA-Ⅰ)为其必需的激活剂,APOA-Ⅵ、APOE、APOD也有激活LCAT的作用。     

茶叶多糖对卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的影响

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(EC 2.3.1.43)简称LCAT是由肝脏微粒体合成后分泌进入血液的,其主要作用是将卵磷脂C_2位上脂酰基转移至游离胆固醇(FC)分子的3位羟基上,生成胆固醇酯(CE)和溶血卵磷脂。     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶抗大鼠血栓形成的初步观察

已知胆固醇酯/胆固醇比值下降的血小板,其聚集功能增强,是形成血栓的主要原因之一。Owen等报道卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的缺陷或活力降低,可导致血小板功能低下。由于LCAT能催化卵磷脂的脂酰基转移到胆固醇生成胆固醇酯,对胆固酯/胆固醇比值有影响。因此我们采用Umetsu双方法,用自行分离纯化的LCAT,观察其对大鼠血栓形成的作用。     

人血清高密度脂蛋白载脂蛋白A—Ⅱ的分离、提纯、鉴定和抗血清的制备

载脂蛋白apo H-I是HDL的主要载脂蛋白,约占所有载脂蛋白的70%。apoA-I的分子量为27000,由245个氨基酸残基组成的多肽,其羧基端是谷氨酸,氨基端为天门冬氨酸。HDL与卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)共同作用可使胆固醇从细胞表面清除,推测这是HDL抗动脉粥样硬化的主要机制之一。已知apo A-I是LCAT的激活剂,将apo A-I或apo A-I与磷脂加入培养细胞液即有自细胞中清除胆固醇的     

银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默病家兔模型ACAT1和LCAT mRNA表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默(AD)病家兔模型胆固醇酰基转移酶(ACAT1)和卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT)mRNA表达的影响。[方法]以2%高胆固醇饲料喂养雄性新西兰大白兔,建立AD家兔模型。模型建立后,用50 mg/(kg·d)EGB761灌胃3周作为EGB761组,以5 mg/(kg·d)辛伐他汀作为阳性药对照组。干预结束后,通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测海马卵磷脂-胆固醇酰基转移酶mRNA和胆固醇酰基转移酶1 mRNA的表达。[结果]银杏叶提取物EGB761可以下调ACAT1 mRNA的表达,不影响LCAT mRNA的表达。[结论]银杏叶提取物EGB761可下调AD家兔模型ACAT1 mRNA表达,对LCAT mRNA表达无调节作用。     

LCAT酶学测定法方法学探讨

我们参照Nagasaki的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性测定法,以自身血清加入二软脂酰卵磷脂(DL)为底物,应用国产,酶试剂进行LCAT活性测定,并对方法学,特别是游离胆固醇显色反应进行了摸索。此方法具有两酶用量小,重复性好,操作简便的特点,适用于临床及实验室工作。     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶的酶学测定法

卵磷脂—胆固醇酰基转移酶(以下简称LCAT)催化下列反应:把卵磷脂C_2位上的脂肪酸转移到非酯化胆固醇上,生成溶血卵磷脂和胆固醇脂。反应在血浆内进行。人体胆固醇代谢运转中,该酶是关键环节之一,故测定LCAT活性对研究冠心病的脂质代谢实属十分必要。LCAT的活性测定方法大体上有三类:①免疫学方法①,“②共同基质法”(the common—substrate method),③自身基质法     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺陷症LCATG179R突变的初步研究

 目的 研究1个新近发现的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)突变型LCATG179R对其编码蛋白正常功能的影响。方法 构建LCAT cDNA野生型和突变型表达载体,通过在HEK293细胞中瞬时表达,测定细胞合成的LCAT的活性,并通过实时定量PCR测定内质网应激相关基因的表达情况。结果 成功构建载体,野生型LCAT酶活力明显高于突变型LCATG179R,且表达突变型LCATG179R的细胞的内质网应激相关基因表达量明显升高。结论 LCAT突变型G179R会导致该酶的活力降低,可能与该突变型蛋白的异常结构有关。携带此种基因突变的患者有患LCAT缺陷症的可能。     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶对实验性高脂血症大鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇和游离胆固醇分布的影响

用纯化的人血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)给实验性高脂血症大鼠腹腔注射,发现注射后大鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显升高,游离胆固醇(FC)水平明显下降,HDL-C/FC和HDL-C/总胆固醇(TC)比值明显升高,FC/TC比值明显下降。对LCAT可能具有防治动脉粥样硬化的作用进行了讨论。     

红丝线草提取物对高血压并发高脂血症模型大鼠调脂作用的研究

目的:观察红丝线草提取物对肾性高血压并发高脂血症大鼠( RHHR)血清脂质、一氧化氮( NO)、总抗氧化能力( T- AOC)及卵磷脂胆固醇酰基转移酶( LCAT)活性的影响。方法:采用双肾双夹结合高脂乳剂灌胃法复制RHHR模型。大鼠造模后,连续5周灌胃给予红丝线草提取物,并于给药第5周末处死大鼠,取血测血清脂质、总抗氧化能力及卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性。结果:红丝线草提取物高、低剂量和辛伐他汀均可明显降低RHHR血清中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇,同时明显升高血清高密度脂蛋白胆固醇水平;红丝线草提取物高、低剂量明显提高血清NO含量、总抗氧能力和LCAT的活性。结论:红丝线草提取物对RHHR具有明显的调脂作用,其作用与提高血清LCAT活性、NO含量和总抗氧化能力有关     

树Qu胆固醇酯转运蛋白的cDNA和蛋白质结构分析

目的 获得不易感动脉粥样硬化动物树Qu胆固醇酯转运蛋白（CETP）的cDNA和蛋白质序列,分析其结构特点,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法 以从树Qu肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART－RACE技术,获得了树QuCETP的cDNA序列,并推导出其蛋白质氨基酸序列,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较。结果 获得的树QuCETP cDNA（在GenBank中的注册号为AF334033）长1636bp,编码485个氨基酸,其成熟蛋白由477个氨基酸组成,比人多一个氨基酸（Gly318),该蛋白与人、家兔的同源性分别为88％和82％。序列中与CETP结合和转运中性脂质功能相关的区域均非常保守,但在Asm342位的N－糖基化位点缺失,可能使其转运胆固醇酯的活性增加,利于外周组织和血浆中的胆固醇及其酯的清除。通过对不同种属蛋白序列的比较,初步分析了树QuCETP蛋白与功能相关的结构特点。结论 树QuCETP糖基化的特点有可能是该动物对动脉粥样硬化具有不易感性的分子机理之一。     

THE TREE SHREW APOLIPOPROTEIN C-I cDNA：SEQUENCE AND ITS EXPRESSION

A rabbit anti-serum to tree shrew apolipoprotein C-I (apo C-I) was used to screen an expression cDNA li-brary constructed by us from tree shrew (TS) liver tissue. Two apo C-I cDNA clones were obtained. The longerone consists of 380 nuclcotides, including 21 bp and 95 bp at the 5‘‘ and 3‘‘ and of the non-translated regions respectively, and a 264-bp fragment in an open reading frame encoding 88 amino acids prepropeptide which conrains 26 amino acids of signal peptide and a mature protein (62 amino acids). Comparing the amino-acid sequence deduced from this cDNA with those of the published mammalian apo C-Is reveals that it shared some struc-tural similarity with rat, mouse and dog ape C-I, but it had 5 more amino acids than that of human and baboon.The expression of ape C-I mRNA in 8 different tissues were also assayed with Northern blot. The results demonstrated that liver had the highest expression, intestine had much less expression and no expression in other tissues,which is much different from human and other species. This study has laid down a good foundation for further studying on the function and the stucture of tree shrew apo C-I gene.     

树鼩载脂蛋白AI cDNA的克隆及其组织表达

目的克隆不易感动脉粥样硬化动物树（ｔｒｅｅｓｈｒｅｗ,ＴＳ）载脂蛋白ＡＩ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡＩ,ａｐｏＡＩ）的基因,比较分析其结构特点。方法以提取的肝组织ｍＲＮＡ为模板,反转录构建了ＴＳ肝组织ｃＤＮＡ文库。利用制备的兔抗ＴＳ载脂蛋白ＡＩ多抗血清为探针筛选该文库,对阳性克隆进行测序、序列分析及组织表达实验。结果克隆获得了ＴＳａｐｏＡＩｃＤＮＡ序列,全长序列由９００个核苷酸构成,包括２８ｂｐ组成的５′非翻译区;７９５ｂｐ组成的一个完整开放阅读框架,编码翻译２６５个氨基酸的ＴＳａｐｏＡＩ前体（含１８个氨基酸构成的信号肽、６个氨基酸的原肽片段及２４１肽的成熟蛋白）;两个终止密码ＴＧＡ、ＴＡＡ和随后７２ｂｐ的３′非翻译区。新基因已被ＧｅｎＢａｎｋ接受。对编码蛋白质的亲疏水性分析表明ＴＳａｐｏＡＩ的疏水性强于人的相应蛋白。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ显示ＴＳａｐｏＡＩ基因主要在肝脏和小肠组织表达。结论获得了不易感动脉粥样硬化动物ＴＳａｐｏＡＩ的新基因,编码的蛋白质结合胆固醇及胆固醇酯的能力可能大于人的ａｐｏＡＩ。     

树Ju载脂蛋白AIcDNA的克隆及其组织表达

克隆不易感动脉粥样硬化动物树Ｊｕ（ｔｒｅｅｓｈｒｅｗ,ＴＳ）载脂蛋白Ａ－Ｉ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡＩ,ａｐｏＡＩ）的基因,比较分析其结构特点,方法以提取的肝组织ｍＲＮＡ为模板,反转录构建了ＴＳ肝组织ｃＤＮＡ文库。利用制备的兔抗ＴＳ载脂蛋白ＡＩ多抗血清为探针筛选该文库,对阳性克隆进行测序,序列分析及组织表达实验。结果克隆获得了ＴＳａｐｏＡＩｃＤＮＡ序列,全长序列由９００个核苷酸构成,包括２８     

一种新的五步蛇蛇毒类凝血酶Cdna的克隆和序列分析

目的：克隆出五步蛇的类凝血酶cDNA，为研究其结构和功能的关系。并为下一步基因表达开发抗血栓药物提供依据和基础。方法：从五步蛇蛇腺中提取了总RNA，通过反转录合成第一链cDNA，经PCR扩增出五步蛇毒腺中类凝血酶TLE1的cDNA片段，并将其连接到质粒载体扩增，然后进行DNA测序。结果：成功克隆出一种新的五步蛇类凝血酶的cDNA片段。此片段全长794bp，包括编码部分的全长为777bp。推导其编码的蛋白质序列为258个氨基酸，其中包括18个氨基酸的信号肽，6个氨基权的前肽和234个氨基酸的成熟氨基酸顺序。TLE1成熟肽与其它蛇毒类凝血酶相比，蛋白质一级结构具有较高的同源性。结论：从五步蛇中成功克隆出一 种新的类凝血酶cDNA，并确定了它的DNA顺序。     

牛催乳素基因组全序列的克隆及在真核细胞中的表达

目的：构建牛催乳家(bPRL)为目的基因转基因动物—乳腺生物反应器。方法：采用长距离PCR技术，首次从正常牛外周血细胞中克隆到全长9388bp的bPRL基因组序列，利用亚克隆的方法将bPRL基因组DNA克隆到真核表达载体pcD—NA3．1( )上，构建出pcDNA3．1( )/bPRL的重组表达载体，通过脂质体转染至非洲绿毛猴肾细胞株(COS—7)，逆转录—PCR得到长度为804bP扩增片段。结果：序列测定bPRL基因包括全部5个外显子和4个内含子，5’端854bp的上游调控区以及3’端69bP的非翻译区(UTR)。bPRL cDNA包含信号肽在内的全长序列。结论：克隆的bPRL基因组DNA序列在转录水平上具有生物学功能，在体外培养的真核细胞中能够进行正常表达，为进一步建立转基因动物—乳腺生物反应器奠定了坚实的基础。     

桂北五步蛇金属蛋白酶原基因800bp片段的克隆和序列分析

目的：扩增桂北五步蛇金属蛋白酶原基因,并对其进行序列分析,方法：从广西桂北山区五步蛇毒腺中抽提蛇毒总RNA,采用一步法（RT－PCR和PCR在同一试管内进行）扩增金属蛋白酶原基因,对其进行电泳检测,得到3条特异的DNA条带,大小分别为1．5kb,1.3kb,和800bp,利用平端连接方法将800bp克隆至pGEM-T载体,挑选白色菌落,用酶切和PCR法对其进行鉴定,提取阳性菌落进行测序并推导编码的氨基酸序列。结果：信号肽和前肽和已报道的皖南五步蛇金属蛋白酶很相似。同源性为97．9％,但仅含有部分金属蛋白酶成熟肽的氨基酸序列。结论：推测此800bp片段为广西五步蛇金属蛋白酶原基因的一部分。     

北京鸭载脂蛋白AI cDNA的克隆及其组织表达

目的:克隆不易感动脉粥样硬化动物北京鸭载脂蛋白AI的基因。方法:分离提取北京鸭肝组织mRNA,以此为模板,反转录构建了鸭肝组织cDNA文库。利用制备的兔抗鸭载脂蛋白AI(apoAI)多抗血清为探针筛选该文库,获得10个阳性克隆,测序及序列分析。结果:包括18bp、240bp组成的5’和3’非翻译区,792bp组成的一个完整开放阅读框架,编码264个氨基酸的鸭apoAI前体,含18个氨基酸构成的信号肽、6个氨基酸的原肽片段和240肽的成熟蛋白。推译出的成熟肽与鸭apoAI氨基酸的直接测序结果完全一致。该新基因已被GenBank接受。Northern blot显示鸭apoAI mRNA不仅主要在肝和小肠组织表达;而且不同于人和哺乳类动物,亦可少量在脑、肾、肌肉组织分布。结论:结果为进一步研究不易感动脉粥样硬化动物北京鸭apoAI基因组结构、功能及其抗动脉硬化机制奠定了基础。     

人Hrs cDNA的克隆与序列分析

以小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ为探针从人胎盘ｃＤＮＡ文库中克隆出人ＨｒｓｃＤＮＡ，其全长为２９１０ｂｐ，所编码的蛋白质含７７７个氨基酸。人ＨｒｓｃＤＮＡ与小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ间高度保守。推定的氨基酸序列含有锌指样结构域、脯氨酸丰富区及脯氨酸、谷氨酰胺丰富区。