恶性疟原虫NADP依赖型异柠檬酸脱氢酶重组蛋白的酶活性及其特异性氨基酸序列

红内期恶性疟原虫对氧化作用十分敏感，参与代谢反应的多种酶均需还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)。异柠檬酸脱氢酶(ICDH)可催化异柠檬酸氧化脱羧，产生2-酮戊二酸、二氧化碳和NADPH。因此，ICDH是催化其代谢反应的关键酶。Chan等克隆了恶性疟原虫ICDH(pflCDH)基因，     

诺氏猴疟原虫的葡萄糖代谢:红内期的糖酵解和磷酸戊糖途径活力

以正常红细胞、受染红细胞和游离疟原虫为材料,研究了红内期各个不同发育时期的葡萄糖代谢,同时探讨虫体本身是否存在磷酸戊糖途径和酵解途径的酶系,以及美蓝对正常恒河猴红细胞与游离于红细胞外的诺氏猴疟原虫磷酸戊糖途径的影响。用闪烁计数法测定从1-~(14)C与2-~(14)C葡萄糖释放的~(14)CO_2量,作为戊糖途径活性的指标;以2-~3H     

环亮氨酸对疟原虫生长和代谢的影响

环亮氨酸(80mg/kg)灌喂感染伯氏疟原虫小鼠5d,完全制止原虫生长。体外培养的恶性疟原虫(P.f)与环亮氨酸(1.5×10~(-2)M)接触3d,红内期原虫失去侵入新红细胞的能力,变异虫达90％。恶性疟原虫在体外与环亮氨酸培养30h,[~3H]次黄嘌呤掺入感染红细胞的量被抑制52～58％,掺入核酸中的量较对照减少79％;[~(14)C]甲硫氨酸的掺入被抑制30％,而其生成精脒的量被抑制50％。     

恶性疟原虫NADP依赖型异柠檬酸脱氢酶重组蛋白的酶活性及其特异性氨基酸序列

红内期恶性疟原虫对氧化作用十分敏感 ,参与代谢反应的多种酶均需还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (NADPH)。异柠檬酸脱氢酶 (ICDH )可催化异柠檬酸氧化脱羧 ,产生 2 酮戊二酸、二氧化碳和NADPH。因此 ,ICDH是催化其代谢反应的关键酶。Chan等克隆了恶性疟原虫ICDH (pfICDH)基因 ,并对其在大肠杆菌中的表达及重组蛋白酶活性进行了研究。根据PlasmoDB数据库中恶性疟原虫基因组信息预测的ICDH开放阅读框设计出一对引物 ,以提取的恶性疟原虫Tan株基因组DNA为模板 ,PCR扩增出ICDH基因。经测序证明 ,其核苷酸序列与PlasmoD…     

恶性疟原虫对乙胺嘧啶的抗性机制

作者在体外观察了恶性疟原虫FCR株(乙胺嘧啶敏感株,IC_(50)=3)和W_2株(乙胺嘧啶抗性株,IC_(50)=30000)对[(14)C)乙胺嘧啶的摄入、乙胺嘧啶的代谢以及二氢叶酸还原酶(DHFR)酶促反应的动力学特征。实验采用含8％高度同步化的14小时龄环状体原虫与20μM的[~(14)C]乙胺嘧啶共同孵育24小时,液体闪烁计数器测定[~(14)C]乙胺嘧啶的放射性,并推算疟原虫摄入乙胺嘧啶的量。结果,FCR株与W_2株摄入量无差异。对照组每10~9正常红细胞摄入乙胺嘧啶0.07nmol,感染疟原虫的红细胞摄入0.24nmol,另用放     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体的制备

目的制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性单克隆抗体。方法克隆、表达恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,并以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其亚类和效价,蛋白质印迹法(Western blotting)分析其特异性。结果成功克隆并表达了恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因,以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白作为免疫源制备单克隆抗体,共筛选了15株能高效分泌效价在1∶6 400～1∶51 200特异抗体的细胞株,抗体亚类为IgG1或IgG2。所有抗体均能唯一识别恶性疟原虫虫源蛋白Mr 33 000组分,而与疫区非疟疾发热病人的红细胞组分无交叉反应。结论以重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白为免疫源成功制备了能识别天然恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的特异性单克隆抗体。     

异柠檬酸脱氢酶1在肝脏疾病中作用的研究进展

异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)作为胞质和过氧化物酶体中一种依赖NADP的酶,主要促进异柠檬酸转变为α-酮戊二酸,并生成NADPH.IDH1广泛参与肝脏中糖、脂质和氨基酸代谢以及氧化应激的发生,并与多种肝脏疾病的发生发展密切相关.突变的IDH1可将α-酮戊二酸转变为一种肿瘤代谢物-2-羟基戊二酸,参与肝脏肿瘤的代谢重编程及...     

α-硫辛酸(奥力宝)与糖尿病未梢神经病变

α-硫辛酸是一个在少数细胞内合成的二硫化合物,它的天然功能是作为丙酮酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶线粒体酶复合体中的辅酶.药理剂量下,α-硫辛酸是一个多功能的抗氧化剂,在德国已经用于糖尿病神经病变超过30年.最近的研究报道,2型糖尿病病人静脉输注α-硫辛酸可以增加胰岛素介导的葡萄糖利用,所以,α-硫辛酸可以作为一个安全有效的胰岛素增敏辅助治疗药物.     

α-硫辛酸（奥力宝）与糖尿病未梢神经病变

α-硫辛酸是一个在少数细胞内合成的二硫化合物，它的天然功能是作为丙酮酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶线粒体酶复合体中的辅酶。药理剂量下，α-硫辛酸是一个多功能的抗氧化剂，在德国已经用于糖尿病神经病变超过30年。最近的研究报道，2型糖尿病病人静脉输注α-硫辛酸可以增加胰岛素介导的葡萄糖利用，所以，α-硫辛酸可以作为一个安全有效的胰岛素增敏辅助治疗药物。     

肯尼亚高原地区恶性疟原虫肝细胞期抗原-1的细胞因子应答的季节性变化情况

在肯尼亚高原地区恶性疟常随季节的变化而呈季节性流行。恶性疟原虫肝细胞期抗原-1(LSA-1)是肝细胞期疟原虫表达在裂殖体表面的一个约200 kDa的多肽分子,其N端和C端非重复区编码的氨基酸残基数为14-24的多肽能诱生IL-10、TNF-α、IFN-γ和CTL的应答。研究表明,在流行区人群中,如其外周血单核细胞(PBMC)产生对LSA-1应答的细胞因子,则再感染率下降。该文报道该地区儿童和成人的细胞因子的季节性变化情况。     

对氧化剂敏感的宿主红细胞能抑制疟疾感染

据报道,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏的宿主红细胞受氧化剂诱发的溶血能保护宿主防止疟疾的严重感染。作者曾发现疟原虫使它寄生的红细胞受氧化剂的压迫加重,并发现在G-6-PD缺乏者疟原虫寄生的红细胞未到成熟期就会溶血,释放出的未     

冈比亚恶性疟患儿红细胞流动粘附机制

恶性疟原虫寄生的红细胞粘附于血管内皮细胞是恶性疟原虫致病的主要因素。因此,研究粘附的分子机制和流变学特征具有重要意义。 作者对冈比亚恶性疟患儿血中分离的有恶性疟原虫寄生的红细胞粘附特性进行了研究。使红细胞从覆盖有甲醛固定的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)或血小板的载玻片上流     

用单克隆抗体分析约氏疟原虫抗原的研究 Ⅰ.约氏疟原虫红内期与人疟原虫的共同抗原

用粗提的约氏疟裂殖子免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp 2/0瘤细胞融合,获得13株分泌抗约氏疟红内期单克隆抗体的杂交瘤。这些McAb分别属于小鼠:IgG_1,IgG_(2a),IgG_(2b)及IgG_3亚类。据免疫荧光观察,13株McAb可分为4类:1.与红内期各发育阶段的原虫能出现荧光反应;2.针对晚期滋养体及裂殖体;3.抗裂殖体及裂殖子;4.单纯抗裂殖子。有5株McAb与人疟原虫发生荧光反应,其中4株只与恶性疟原虫交叉,M_(26-32)则不仅与恶性疟原虫且与间日疟原虫均有强的交叉反应,,表明约氏疟与人的两种疟原虫间有共同抗原,并提示恶性疟原虫与间日疟原虫间也有共同抗原。共同抗原在不同种间的分布和含量不尽相同。用未经固定的感染红细胞加McAb作间接荧光试验,在感染红细胞表面未观察到荧光反应。     

人红细胞膜血型糖蛋白A在恶性疟原虫入侵中的受体作用

本文在体外观察了血型糖蛋白A(GPA)及其抗体、鸡卵类粘蛋白(OM)、α_1-酸性糖蛋白(α_1-AGP)、麦胚凝集素(WGA)等对恶性疟原虫入侵红细胞的影响。在低浓度下,GPA、抗GPA-IgG和WGA对恶性疟原虫的入侵有明显的抑制作用,其浓度和抑制率间呈双曲线型量效关系,有饱和趋势。而OM、α_1-AGP及非特异性的抗血清无明显的作用。从配体-受体作用的生物学特性的角度,证实了GPA与恶性疟原虫的结合具有高度的特异性、高度的亲和力及有饱和趋势,其结合后能产生特定的生物学效应。     

两种鉴别诊断恶性疟和间日疟免疫层析试条检测效果评价

目的 对两种快速、简便能区分诊断恶性疟和间日疟的胶体金免疫层析试条的检测效果进行评价. 方法 筛选基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体C6E9和G4C9,并将其同时吸附于样品垫;将单克隆抗体B2G10(针对恶性疟原虫与间日疟原虫)和C6H.(只针对恶性疟原虫)分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析检测试条.用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样(120份)和内脏利什曼病患者血样(20份)以评价其特异性,检测确诊的疟疾患者血样(间日疟105份,恶性疟95份)以评价其敏感性.均用单盲法检测,同时用基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对制备的试条进行平行检测. 结果 检测120份疫区非疟疾发热病人血样和20份内脏利什曼病患者血样,有138份显示为阴性,特异性为98.6％,其中20份内脏利什曼病患者血样全部为阴性.检测200份疟疾患者血样,阳性190份,敏感性为95.0％,其中间日疟检出率为93.3％ (98/105),恶性疟检出率为96.8％ (92/95).基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对制备的试条检测的敏感性和特异性分别为93.5％ (187/200)和95.7％ (134/140),与本研究制备的基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对的试条比较两者敏感性(x2=0.42,P＞0.05)和特异性(x2=1.09,P＞0.05)的差异均无统计学意义. 结论 研制出的基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高.     

恶性疟原虫合成类生长激素释放抑制因子肽

恶性疟原虫能合成一种类似哺乳动物生长激素释放抑制因子(SRIF)的肽。将恶性疟原虫LE-5株培养在5％O_2、5％CO_2、90％N_2、红细胞压积为5％的RPMI培养液中,4天后原虫血症最高为5～15％。代谢标记是在更换培养液时,连续两天在培养液中加入[2,3,4,5,6-~3H]苯丙氨酸(8μCi/     

四种恶性疟原虫裂殖子蛋白的主要等位双态性与入侵红细胞的两种选择性途径无关

恶性疟原虫入侵红细胞是由裂殖子上的配体与红细胞上的受体相互作用所介导的,不同的恶性疟原虫虫株或克隆共有两种入侵红细胞的选择性途径。在红细胞表面至少有三种恶性疟原虫入侵的受体,血型糖蛋白A和B(gpA、gpB),以及一种尚未鉴定的胰肽酶敏感的分子“X”。与gpA作用的恶性疟原虫配体是红细胞结合抗原175(EBA-175)。     

形成玫瑰花结的恶性疟原虫的细胞粘附特性

前人报道,感染恶性疟原虫的红细胞阻塞血管的机制似与疟原虫粘附后毛细小静脉内皮的性质有关,是由感染红细胞形成的玫瑰花结所引起的。本文描述了两株形成玫瑰花结(TM178R和TM267R)及1株非形成花结(ND9)的恶性疟原虫与不同靶细胞粘附的特性,旨在阐明疟原虫阻塞毛细血管的机     

苦木素类与茴香霉素及其它真核细胞蛋白合成抑制剂体外抗恶性疟原虫活性的比较

鉴于鸦胆丁(bruceantin)和其它苦木素化合物具有破坏核糖体的作用,引起不可逆的抑制蛋白质合成,因而以抑制[~3H]次黄嘌呤(~3H]hyp)的掺入作为评价疟原虫活力指数的方法,观察了苦木素类衍生物与真核细胞的蛋白质合成抑制剂的体外抗恶性疟原虫的作用。所用的疟原虫为T9-96株(恶性疟原虫氯喹敏感株)和K1株(恶性疟原虫抗氯喹和抗乙胺嘧啶株)。2种原虫均培养在悬浮于RPMI 1640的人A~+红细胞中,培养液中加有D-葡萄糖和10％人A~+血清。选择富含环状体的疟原虫作药敏试验,即将T9-96或     

恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶falcipain-1非红内期疟原虫所必需

恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶falcipains是抗疟化学药物的新靶标之一。Falcipains由红内期疟原虫表达,包括falcipain-1,falcipain-2和falcipain-3。对falcipain-2和falcipain-3的功能研究表明,二者均是食物泡血红蛋白酶,参与降解恶性疟原虫滋养体的血红蛋白。由于缺乏合适的表达系统,falcipain-1的功能尚未研究清楚。Puran等应用基因敲除技术获得falcipain-1基因敲除恶性疟原虫,通过比较观察falcipain-1的抑制剂YA29(据报道能特异地阻止裂殖子的红细胞入侵)和其他蛋白酶抑制剂对野生型疟原虫(WT)和falcipain-1基因敲除疟原虫的抑制作用,来评…