环介导等温扩增法快速检测手足口病病原体

目的：建立逆转录（RT）-环介导等温扩增方法（LAMP）,以快速检测手足口病最重要的两种病原体：肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）。方法：收集手足口病患儿咽拭子标本93份,针对EV71和CA16病毒的VP1基因特异性序列8个区域各设计6条LAMP引物,分别于63℃（EV71）、65℃（CA16A）扩增1 h,日光下观察结果,与实时荧光定量PCR比较检测特异性和敏感性。结果：EV71、CA16的LAMP最低检测限均为500拷贝/管,与对照病毒无交叉反应。93份标本中,RT-PCR方法检测显示EV71阳性44例,CA16阳性36例;RT-LAMP方法检测显示EV71阳性46例,CA16阳性36例,两种方法间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：应用RT-LAMP检测手足口病病原体EV71、CA16快速、灵敏、经济、特异性高,适合在基层医疗机构推广应用。     

2008--2009年广东省手足口病病毒分离和鉴定

目的了解广东省手足口病病原特征,为科学防治手足口病提供依据。方法采集2008-2009年广东省疑似手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液、脑脊液等标本,对其中肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离;分离株用肠道病毒通用引物、EV71引物、CoxAl6引物进行RT—PCR鉴定。结果对892份肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离,共分离出毒株484株,分离率为54．26％;其中EV71型302株,占62．40％;CoxAl6型143株,占29．55％。2008年和2009年不同类型标本的病毒分离率差异均有统计学意义（均P〈0．01）,2年均以粪便标本的分离率最高,分别为70．79％（126／178）和73．89％（232／314）;不同类型病例的病毒分离率之间差异无统计学意义（P〉0．05）,2年死亡和重症病例均以EV71型为主。结论2008—2009年广东省手足口病疫情主要由EV71和CoxAl6引起,今后应加强对多种病原及其变异情况的监测。     

南京市20 1 0年柯萨奇病毒A组1 6型VPl区基因特征分析

柯萨奇病毒A组16型(CAl6)是引起手足El病的常见病原之一，与另一种手足口病的致病原--人肠道病毒7l型(EV71)相比，CAl6所致手足口病症状相对较轻?。近几年研究发现，CAl6感染可能引起严重并发症、21，偶尔引起新生儿死亡。本研究对20lo年从南京地区分离的CAl6进行VPl区序列测定和分析，以了解CAl6的流行情况及分子生物学特征。     

咽拭子标本对手足口病疫情监测的应用研究

[目的]明确致手足口病肠道病毒的主要型别,并对咽拭子标本的核酸检测结果进行评价.[方法]2007年收集青岛市5家医院手足口病患者的咽拭子152份,提取病毒RNA. 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对病毒RNA进行肠道通用引物及肠道病毒71(EV71)型和柯萨奇病毒16型(CoxA16)特异性引物的检测.[结果]152份咽拭子标本中,83份标本肠道通用引物扩增阳性,阳性率为54.61%.其中,EV71阳性10份,占肠道病毒的12.05%(10/83);CoxA16阳性者42份,占肠道病毒的50.60%(42/83).[结论]手足口病疫情的病原主要以EV71和CoxA16为主,咽拭子标本在手足口病疫情的监测中具有方便、快捷的优点,而且检出率较高.     

2011年郴州市手足口病病原学及EV71型分离株基因特性研究

目的了解2011年郴州市手足口病病原学特征及EV71型分离株基因特性,为郴州地区手足口病防治工作提供依据。方法收集郴州市手足口病临床诊断病例的咽拭子或肛拭子、粪便标本,采用实时荧光PCR法检测EV71、CA16和其他肠道病毒核酸。随机挑选55份EV71阳性的标本进行RD细胞分离,10株分离株用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增EV71的VP1片段,并作基因测序和序列分子系统发生树分析。结果 2011年郴州市共报告手足口病例5 128例,发病有两个高峰,分别是5-7月和11-12月。病原学检测提示,2011年检测手足口病标本574例,发病年龄以1～3岁儿童为主,男性是女性的2.04倍,检出阳性标本461份,其中EV71占30.15%,CA16占31.89%,EV71和CA16同时阳性占0.65%,其他肠道病毒占37.31%;三种型别病毒分布在病例发病时间、发病年龄和地域上有所不同(P<0.001);重症病例25例,18例检出EV71病毒核酸,死亡病例6例均为EV71病毒感染;采用实时荧光PCR法随机检测68份其他肠道病毒,其中23份CA6、8份CA10,CA6和CA10占其他EV的45.59%。10株EV71分离株基因测序均为C4a亚型,重症和普通病例EV71的VP1基因序列差异较小。结论手足口病的发病存在明显季节、地区、性别、年龄差异,EV71是2011年郴州市引起手足口病重症和死亡病例的主要毒株类型,要开展对EV71型病毒的深入研究,同时也要关注非EV71和非CA16病毒的流行趋势,以防范其快速传播。     

2009年龙岩市人肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的 分析2009年龙岩市流行的人肠道病毒71(EV 71)分离株的分子生物学特征.方法 从手足口病例的153份咽拭标本中分离EV 71病毒株,选取其中3株,用RT-PCR扩增VPl基因片段,并进行测序和病毒种系进化等分析.结果 3株EV 71均为C4基因亚型,与其他省份C4亚型分离株的同源性为94.8%-99.0%;...     

2008年广东省儿童手足口病病原学监测

目的监测手足口病的病原体,为预防和控制肠道病毒感染提供依据。方法采集手足口病患儿的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液进行RT-PCR定性,肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离;分离株用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定。结果共收集患儿标本443份,肠道病毒通用引物阳性259份;做病毒分离256份,阳性150份,其中粪便158份,病毒分离阳性112份,阳性率为70.89%;肛拭子21份,病毒分离阳性10份,阳性率为47.62%;咽拭子65份,病毒分离阳性26份,阳性率为40.00%;疱疹液10份,病毒分离阳性2份,阳性率为20.00%。结论粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液的分离率有显著差异,粪便分离率最高;EV71和CA16是引起小儿手足口病的主要病原体,死亡病例全部是由EV71病毒引起。     

菏泽市2013年手足口病病毒核酸检测结果分析

目的分析2013年菏泽市手足口病病原学检测结果,为手足口病疫情研判和综合防治提供参考资料。方法收集菏泽市九县区手足口病诊疗定点医疗医院采集的手足口病临床确诊病例的粪便、肛拭子或咽拭子标本,提取样本核酸,用实时荧光定量PCR法检测新肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A16型（CA16）和非EV71、CA16的其他肠道病毒（EV）。结果2013年菏泽市全年都有HFMD病例报告,病原以EV71为主,在不同区域、年龄、月份有均明显统计学差异。     

2010-2013年江苏省泰州市非EV71和非CoxA16型手足口病肠道病毒病原谱及CoxA6VP1基因特征分析

肠道病毒（EV）71型和柯萨奇病毒（Cox）A16型是导致手足口病的主要病毒,也有部分非EV71和非Cox A16型病毒导致手足口病,针对这部分病毒的研究较少。本研究对泰州市各监测哨点医院诊断为手足口病患儿的1509份临床咽拭子和肛拭子混合标本进行研究。     

19份手足口病临床标本的病原学分离与鉴定

目的：为探索手足口病的病原并为该病的防治提供科学依据,对本省徐州地区采集的19份手足口病临床标本进行病原学分离与鉴定。方法：采集的患者咽拭子（6份）和肛拭子（13份）标本,接种Hep-2细胞进行病毒分离,经培养3代,对有明显致细胞病变效应并能连续传代的毒株,用肠道病毒通用引物real-time-RT-PCR方法鉴定确认为肠道病毒后,用肠道病毒分子分型引物（E187/E222）对肠道病毒VP1区进行扩增,将扩增产物测序获得的序列与GeneBank中肠道病毒核苷酸序列进行比对,确定毒株血清型别。结果：19份标本中分离到9株病毒,均为肠道病毒。对其VP1区部分核苷酸序列测定和比较分析后,鉴定出其中有6株为CoxB5,1株为CoxB3,2株为Echo6。结论：虽然肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CoxA16）是引起手足口病暴发流行的主要病原,但引起手足口病的肠道病毒存在多种血清型,CoxB5、CoxB3和Echo6等均能引起手足口病。因此,对手足口病的病原学检测,除EV71和CoxA16外,不能忽视对其他肠道病毒的病原学检测和鉴定。     

2010年合肥儿童手足口病病例肠道病毒血清基因型分析

目的:对合肥地区2010年5~7月儿童手足口病流行期间的手足口病患儿进行病原学调查。方法:采集手足口病患儿的疱疹液、粪便、咽拭子进行病毒分离;分离的病毒接种非洲绿猴肾细胞(Vero)后待细胞病变(CPE)达到++++以上后提取RNA。分别用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定,并根据血清型不同比较其临床特征。结果:77例患儿采集的标本中65例分离到病毒;经RT-PCR检测发现其中47例CA16阳性,18例为EV71,比例为2.6∶1。CA16感染和EV71感染在患者的年龄大小、症状轻重等方面无显著统计学差异。结论:手足口病患儿检测到的主要病原是CA16和EV71,两者感染对临床的影响无显著差异。     

河北省2009年手足口病病原学研究

目的了解2009年引起河北省手足口病的病原谱及分布特征,为制定预防控制措施提供实验依据。方法通过流行病学调查,采集手足口病临床诊断病例的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液和脑脊液标本,针对肠道病毒(EV)5′端非编码区保守基因序列以及EVVP1至2A区基因序列设计EV通用引物和型特异性引物,通过RT-PCR扩增检测HFMD临床诊断病例的标本,并对病原进行分型。结果采用RT-PCR法共检测HFMD临床诊断病例1990份标本,1296份标本EV阳性,阳性率为65.13%,其中752份标本EV71阳性,452份CA16阳性,1份EV71+CA16阳性,91份其他EV阳性。随机抽取55份其他EV阳性标本经RT-PCR和测序进一步分型,除24份未定型外,共鉴定出31份,其中CA10占18.18%(10/55),CA6占14.55%(8/55),ECO30占9.09%(5/55),ECO6、ECO9各占3.64%(2/55),CA5、CA14、CB5、ECO14各占1.82%(1/55),未定型占43.64%(24/55)。结论 2009年引起河北省手足口病流行的病原体主要为EV71和CA16,同时还有部分CA5、CA6、CA10、CA14、CB5、ECO6、ECO9、ECO14、ECO30等其他型别,引起河北省重症病例的EV主要型别为EV71。     

桂林市手足口病不同标本类型病原阳性检出率比较

目的通过比较手足口病患儿咽拭子和粪便标本病原阳性检出率,探究不同类型标本对手足口病实验室诊断的指导意义。方法 2012年2-11月份,收集全市7个县手足口病患儿咽拭子和粪便标本开展病原学检测,通过SPSS和Excel软件,对检测结果进行统计学分析。结果随机抽取手足口病患儿共281例,配对采集病例两种类型标本共562份,咽拭子、粪便的总肠道病毒阳性检出率分别56.58%、80.78%,EV71阳性检出率分别为17.79%、26.69%,CoxA16阳性检出率分别为3.56%、5.69%,两种类型标本的总肠道病毒阳性检出率(P0.001)、EV71阳性检出率(P0.001)、CoxA16阳性检出率(P=0.031)差异均有统计学意义。结论在手足口病实验室诊断中,粪便标本病原阳性检出率比咽拭子高,在日后工作中为提高标本阳性检出率,应首先选择采集粪便标本加以检测。     

2008年龙岩市手足口病实验室检测结果分析

目的了解龙岩市2008年手足口病病原特点。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及组织细胞分离法,对614例手足口病患者的咽拭样本454份、粪便样本377份、疱疹液样本62份共893份进行CA16和EV71的检测。结果 614例中158例检出CA16或EV71,其中CA16 37例、EV71 121例,4例检出其他肠道病毒。病原监测发现2008年4月以前流行的是CA16,5月份CA16和EV71同时存在,6月份以后7个县(市、区)监测的病例均为EV71,全市7个县(市、区)均监测到EV71。结论本检测表明RT-PCR用于手足口病CA16和EV71的检测,可以快速、准确地扩增咽拭、粪便、疱疹液及病毒培养物中的病毒,鉴定病毒亚型,结果可靠,是一种快速、敏感、特异的检测方法。2008年引起龙岩市幼儿手足口病的病原,5月份以前流行病原为CA16,5月份后为EV71。     

天津市手足口病分子流行病学分析

目的分析天津市手足口病病原学分布及肠道病毒71型(EV71)分子流行病学特点。方法采集天津市各医院2008—2010年手足口病住院患者粪便标本2 377份,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道病毒核酸;选取部分EV71阳性标本分离病毒,采用RT-PCR扩增其VP1基因,进行序列测定和同源性分析,建立系统发生树。结果 2 377份手足口病粪便标本中,肠道病毒总阳性率为70.72%(1 681/2 377),其中EV71占48.30%,CV-A16占37.36%,其他EV占14.34%;31株EV71分离株与C4亚型的C4a分支参比株具有最高核苷酸序列同源性,同源性为95.7%～99.2%,在系统发生树上均归属于C4a分支。结论天津市2008—2010年手足口病主要病原体为EV71,其流行株为C4亚型中的C4a病毒株。     

2009—2011年上海市宝山区手足口病病原学研究

[目的]探讨2009—2011年上海市宝山区手足口病病原学特征及诊断意义。[方法]2009年3月—2011年12月连续采集手足口病临床诊断病例的咽拭子、大便样本或肛拭子和疱疹液进行肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CoxA16)和其他肠道病毒核酸检测。[结果]2009—2011年肠道病毒的总检出率分别为59.00%、72.44%和79.00%,重症(死亡)病例中EV71型肠道病毒的阳性检出率为90.91%,明显高于普通病例(χ2=45.97,P<0.001)和聚集性病例的检出率(χ2=56.85,P<0.001);咽拭子、肛拭子或大便样本、疱疹液、咽漱液标本肠道病毒阳性检出率分别为68.02%、86.67%、71.43%、25.00%;咽拭子标本与肛拭子或大便标本和疱疹液标本检测结果符合率为83.53%和100.00%;发病0~4d肠道病毒核酸检出率为79.73%,5~10d肠道病毒核酸检出率为45.61%,差异有统计学意义(χ2=30.91,P<0.001)。[结论]2009—2011年宝山区手足口病感染的主要病原是EV71型和CoxA16型肠道病毒,肠道病毒的检出率逐年提升,且每年的优势型别有所不同;手足口病重症(死亡)病例的主要病原为EV71型肠道病毒;咽拭子、肛拭子或大便样本、疱疹液都有较高的诊断价值;病后4d内采集标本对手足口病诊断效果较好。     

2013 - 2018年太原市手足口病病原监测结果分析

目的 对2013 - 2018年太原市手足口病患者咽拭子标本进行病原学分析,为太原市手足口病预防提供科学依据。方法 收集手足口病患者咽拭子标本3 621份,采用荧光定量逆转录 - 聚合酶链式反应检测病毒核酸进行肠道病毒分型,采用Excel 2003进行数据整理,用SPSS Statistics 22.0对样本阳性率进行χ2检验。结果 肠道病毒（HEV）阳性标本2 387份,阳性率66.89％,分为EV71、CVA16和其他肠道病毒,阳性率分别为13.53％、23.12％和30.24％;2013 - 2018年的HEV阳性率总体呈逐年下降的趋势（χ2 = 97.996,P＜0.001）;5 - 7月份阳性标本数最多,占全年的76.42％;男女性阳性率无差异（χ2 = 3.647,P = 0.056）,1～5岁年龄组阳性标本数最多,占比84.89％;阳性率排在前3位的县区是清徐县、杏花岭区和阳曲县较高,分别为80.10％（310/387）、76.49％（244/319）和75.36％（156/207）。结论 太原市手足口病病原体型别分布呈现时间差异,人群差异及地区差异,应针对性提出预防措施,并扩大肠道病毒监测范围。     

2009年山东省手足口病病例的病原学检测分析

目的了解2009年引起山东省手足口病（HFMD）的病原体型别及分布特征。方法采集HFMD临床诊断病例的粪便、咽拭子、疱疹液等标本,应用肠道通用引物和EV71、CoxA16特异性引物对其进行RT-PCR鉴定;使用RD、Hep-2细胞对部分肠道通用引物阳性的粪便标本进行病毒分离。结果共收集1604份HFMD临床诊断病例标本,实验室检测阳性标本990份,其中EV71阳性标本589份,CoxA16阳性标本29份,EV71和CoxA16同为阳性标本2份,EV71和CoxA16的检出率分别为36.72%和1.81%。从80份肠道通用引物阳性的粪便标本中分离出肠道病毒32株,其中EV71型病毒23株,CoxA16型病毒4株。结论引起山东省HFMD的病原体主要为EV71型肠道病毒,EV71感染占EV阳性标本数的59.50%。全省17个地市均有EV71感染的HFMD病例检出。