25个湖北钉螺种群扩增片段长度多态性分子标记的遗传变异研究

目的探讨湖北钉螺种群间的遗传变异及其程度。方法采用扩增片段长度多态性分子标记技术对来自中国大陆10省的25个种群钉螺基因组DNA样品池进行扩增，分析钉螺各种群间的遗传变异并对钉螺种群进行聚类分析。结果25个钉螺种群间的相似系数GSDICE在0．694～0．831之间，Nei无偏遗传一致性在0．635～0．799之间，遗传距离D在0．169～0．306之间，Nei无偏遗传距离在0．225～0．452之间，光壳钉螺种群间的遗传变异程度明显高于肋壳钉螺种群间的遗传变异程度（P〈0．01）。25个钉螺种群被聚成3类，A类包括来自福建福清和广西宜州的光壳钉螺种群；B类包括来自四川西昌、普格、丹棱、蒲江、广汉和云南大理的光壳钉螺种群；C类则由其他来自长江中下游地区的17个钉螺种群组成。结论在中国分布的湖北钉螺已发生较大的遗传变异，基因组水平上的钉螺种群聚类结果和其地理分布基本一致。     

利用地理信息系统数据库分析钉螺空间区域的分布

目的　利用地理信息系统（ＧＩＳ）数据库分析中国大陆钉螺的空间区域分布。方法　收集中国九省３４ 个种群钉螺等位基因实验所得的种群遗传变异资料以及钉螺易感性实验资料,建立数据库。以世界数字地图为背景,在ＡｒｃＶｉｅｗ ３．０ ａ 软件上与钉螺的遗传变异和易感性数据库相联。采用ＡｒｃＶｉｅｗ 空间分析和ＧＩＳ重叠分析功能进行区域划分。收集１９９５ 年ＡＶＨＲＲＮＤＶＩ卫星图像组合成流行季节的卫星图像,并重叠各种群钉螺的杂合指数、多态位点百分率和血吸虫感染率分布图,进行图像分类。结果　空间分析结果,将钉螺遗传杂合性指数、多态位点百分率和钉螺感染率的分布图,划分成西部和东部二大区域,各区域内有各种类型。三层分布图与ＡＶＨＲＲＮＤＶＩ卫星图像重叠分析后,显示出西部四川、西部云南、中部江湖洲滩和东南部沿海４ 个明显不同的区域。结论　首次运用ＧＩＳ分析种群遗传学资料,佐证了中国大陆钉螺种群结构为分裂亚群结构,并可区分出多个亚种的理论。     

四川光壳钉螺微卫星遗传变异的小尺度空间自相关分析

目的 采用小尺度空间自相关分析方法对四川省普格县的湖北钉螺自然居群微卫星(SSR)遗传变异的空间结构进行分析,探讨湖北钉螺自然居群遗传变异的空间分布特征.方法 选用5对SSR引物对湖北钉螺基因组DNA进行扩增,选择频率在15%～85%的72个SSR等位基因,运用等样本对频率方法划分14个距离等级分别计算空间自相关系数Moran's I,.结果 5对SSR引物经PCR扩增共得到274个等位基因,SSR等位基因的平均多态信息量高达0.965,表现出很高的遗传多态性.钉螺种群中39个SSR等位基因的遗传变异存在一定程度的空间结构,表现为不同模式的正空间自相关.根据这39个等位基因在14个距离等级上的平均Moran's I值,可以发现随着距离增大正空间自相关性逐渐减小,但未发现表现为负空间自相关的距离等级和等位基因.结论 普格县湖北钉螺种群中SSR遗传变异的空间分布,表现为随着距离增加而减少的正空间自相关性.     

福建省并殖吸虫第1中间宿主种类、分布及感染率的调查

[目的]调查福建省并殖吸虫第1中间宿主淡水螺的种类、地理分布和感染率。[方法]捕捉各地淡水螺类,检查其所携带不同虫种的并殖吸虫尾蚴感染率。[结果]在25个县中,发现全省有6种淡水螺类可充当并殖吸虫第1中间宿主,即放逸短沟蜷、湖北钉螺闽亚种、福建拟钉螺、建瓯洱海螺、小桥拟钉螺和新店拟钉螺,其感染率(％)分别为0．26、0．53、0．15、0．49、0．15和6．57;放逸短沟蜷分布较广。[结论]放逸短沟蜷为传播并殖吸虫的优势种。     

湖北钉螺扩增片段长度多态性分子标记遗传多样性研究的合理样本量与分子位点数

目的探讨用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记研究湖北钉螺遗传多样性的合理样本量与分子位点数。方法选取湖南省岳阳市遗传变异较大的肋壳钉螺为研究材料，用AFLP方法对钉螺基因组DNA进行扩增，然后分析湖北钉螺样本量和分子位点数与遗传变异信息可靠性的关系。结果湖北钉螺样本量和分子位点数与遗传多样性信息的可靠性之间存在明显的关系。当样本量低于7只时，AFLP总位点数、多态位点数、多态位点频率、Nei’s基因多样性指数和Shannon’s信息指数变化很大，而当样本量超过30只时，这些指标值的变化趋于平稳。当AFLP分子位点数低于128时，多态位点频率、Nei’s基因多样性指数、Shannon’s信息指数以及这两个指数的标准差变化相当剧烈，当分子位点数超过338时，这些指标值的变化趋于稳定。结论在用AFLP分子标记技术研究湖北钉螺的遗传多样性时，每个钉螺种群内的样本量最好不应低于30只，用于研究分析的分子位点数最好不低于338个。     

基于微卫星标记的中国南方沿海地区白纹伊蚊种群遗传多样性研究

目的 应用微卫星标记分析中国南方沿海地区白纹伊蚊种群的遗传多样性，为媒介生物控制提供依据。方法 利用微卫星位点对浙江省杭州市、义乌市和宁波市、福建省龙岩市、广东省广州市、广西壮族自治区南宁市、海南省海口市7个采样点的白纹伊蚊种群进行了遗传多样性检测和聚类分析。结果 共检测微卫星位点7个，各个群体的等位基因数（N_A）为5.429~7.571，有效等位基因数（N_E）为2.897~3.632，等位基因丰度（R_S）为5.236~7.170，期望杂合度（H_E）为0.538~0.637。各个群体近交系数（F_IS）为0.008~0.332，表现为群体内杂合子不足，群体间分化系数（F_ST）为0.058，表明7个白纹伊蚊种群间的遗传变异为5.8%。邻接法聚类分析表明，浙江省杭州市和义乌市的白纹伊蚊种群构建成为1个分支，福建省和广东省的白纹伊蚊种群构成1个分支，广西壮族自治区和海南省的白纹伊蚊种群构成1个分支，且海南种群显示出较大的遗传变异。白纹伊蚊种群贝叶斯分支分析表明，可能的分支数为3个。结论 中国南方沿海7个不同地理区域的白纹伊蚊种群在7个微卫星位点呈现较丰富的遗传多样性和中低水平的遗传分化，种群间遗传差异随着地理距离的增加而增大。     

北京市褐家鼠种群遗传多态性及与汉坦病毒分布关系的研究

目的了解北京地区褐家鼠不同地理种群遗传多态性与该地区汉坦病毒（HV）基因变异及其分布可能存在的关联。方法选取北京市不同地区捕获褐家鼠，采用巢式RT—PCR法检测HVM基因片段，获得的阳性标本产物进行直接测序，构建系统发育树。另一方面对不同HV来源的宿主个体和其对应种群内随机选取的其他个体，以及其他一些地区鼠类作为参照，用随机扩增多态DNA（RAPD）技术获得褐家鼠基因组DNA多态性图谱，利用RAPDDIST和PHYLIP软件分析褐家鼠种群多态性，并与对应的北京地区的HV差异和分布进行比较。结果选用50个随机引物进行扩增，有5个引物获得清晰、多态性高的RAPD谱带。不同区域种群RAPD标记不尽相同，北京市褐家鼠地理种群之间存在一定程度的遗传分化，大部分种群遗传距离较为接近，其中采集于某农产品集散地的XFD种群遗传距离相对较大，有特异性标记条带。11个HV代表序列均为汉城型汉坦病毒，基因差异为0．1％～8．0％，可分为2个主要的支系，多数毒株变异类型在不同地域中交叉分布，但BjFT01株变异较大，成一个独立的支系。通过Bootstrap分析和系统树图比较，种群分化较大的XFD种群与该区获得1株亲缘关系相对较远的HV相对应。结论北京市不同区域HV及其褐家鼠DNA多态性均存在一定差异，不同种群尤其是输入性种群对北京HV流行影响程度不同，初步显示一些特定种群与特定的基因性别有一定的关联。XFD种群外源基因交流渗入的可能性较大，进一步证明北京市HV随着鼠类种群迁移输入的可能性极大，但仍有待于选用一些特异性标记基因多态性进行继续研究。     

湖北钉螺微卫星锚定PCR产物序列分析

目的 分析4个种群湖北钉螺中微卫星序列及其两侧序列的特点.方法 以(CA)8RY为引物对湖北钉螺基因组DNA进行微卫星锚定PCR(SSR-PCR)扩增,对全部159个扩增产物进行T克隆并测定其中82个片段的核苷酸序列.结果 SSR-PCR的扩增产物是湖北钉螺基因组DNA上的散在区域,不是微卫星序列,但扩增产物中含有微卫星序列,测序的82个片段中36个克隆片段含有微卫星序列.微卫星序列其侧翼序列有一定的保守性,同一个微卫星的侧翼序列多数情况下是相同的.(GA/CT)n、(TTAGGG/CCCTAA)n两类微卫星在4个钉螺种群中均有发现,(CAA)n仅在福建福清种群中发现,(TCTCTG)n仅在安徽贵池种群中发现,(GAA～TTC)n、(CAA/TTG)n、(CAT)n三种微卫星序列仅在四川普格种群中发现.结论 SSR-PCR扩增的不是微卫星,其结果的分析应当类似于随机扩增多态性DNA.因此SSR-PCR不能十分有效体现微卫星作为分子标记的优势,应当根据微卫星的侧翼序列设计针对微卫星的引物,对微卫星进行PCR扩增并进行分析.     

金属离子对不同螺龄湖北钉螺酚氧化酶活性的影响

目的探讨金属离子对不同螺龄湖北钉螺（成螺、幼螺、螺卵）酚氧化酶（PO）活性的影响。方法将不同螺龄湖北钉螺软体制作成部分纯化的P0酶液。以邻苯二酚作为底物,分别检测不同浓度NaCl、KCl、Na_2SO_4、K_2SO_4、MgSO_4、CaSO_4、ZnSO_4及CuSO_4等对P0活性的影响。结果Na＋和K＋对不同螺龄湖北钉螺P0活性均无影响;Mg2＋和Ca2＋对不同螺龄湖北钉螺PO活性均有激活效应;而Zn2＋对该酶均有抑制作用;低浓度Cu2＋可提高不同螺龄湖北钉螺PO活性,而高浓度Cu2＋则可降低该酶活性。结论Mg2＋、Ca2＋、Zn2＋及Cu2＋等金属离子均可影响不同螺龄湖北钉螺P0活性,为化学灭螺新途径提供理论依据。     

海南岛4种常见蜚蠊遗传多态性的初步研究

目的探讨海南岛常见蜚蠊遗传多态性，寻找蜚蠊分类的分子标记。方法采用随机扩增DNA多态性（RAPD）技术对美洲大蠊、澳洲大蠊、黑胸大蠊和褐斑大蠊进行随机扩增，分析DNA图谱、计算遗传距离并绘出亲缘关系聚类图。结果筛选出4条随机引物，扩增出122个条带，其中多态性条带占71．31％。根据RAPD图谱计算出4种蜚蠊间的遗传距离，以澳洲大蠊和黑胸大蠊间遗传距离最短，褐斑大蠊和美洲大蠊间距离最长。根据4种蜚蠊遗传距离构建出的系统聚类图中，黑胸大蠊先与澳洲大蠊聚成一簇，再与褐斑大蠊、美洲大蠊相聚类。结论蜚蠊基因组DNA遗传多态性丰富，RAPD技术能够反映出不蚓蜚蠊间的亲缘关系，并可准确进行蜚蠊分类。     

不同地区钉螺对日本血吸虫易感性的实验研究

目的 观察不同地区钉螺对云南大理日本血吸虫的易感性，为今后教学科研所需尾蚴提供依据。方法 采自国内3省的钉螺以钉螺与钉螺40：1的比例进行群体感染，观察3省钉螺对大理地区日本血吸虫的易感性。结果 在相同条件下，不同地区钉螺对云南大理日本血吸虫易感性不同，湖北、安徽、云南的感染率分别为42．0％、28．6％9．5％，各地钉螺差异有显著性。结论 3省钉螺对云南血吸虫的感染率以湖北最高，云南最低。     

氯硝柳胺杀灭钉螺效果影响因素分析

目的 研究氯硝柳胺杀灭钉螺的效果并了解影响其杀灭效果的主要因素。方法 采用实验流行病学方法，对中国血吸虫病流行区的钉螺通过随机分层抽样，抽取了10个省（市）33个县共37个点，采集钉螺，随机分组，用不同浓度的氯硝柳胺分别浸泡24h、48h，观察其杀灭效果，计算不同药物浓度、不同作用时间和不同生境的LC50。统计分析采用SPSS 13．0软件进行。结果 氯硝柳胺溶液1．0mg／L浸泡24h和0．5mg／L浸泡48h，杀螺率均达100％。同一作用时间，对钉螺的杀灭效果随着药物浓度降低显著下降。浸泡钉螺24h，LC50均值为0．0939mg／L，而浸泡钉螺48h，LC50均值为0．0625mg／L，浸泡24h和48h间的杀灭钉螺LC50差异有统计学意义（t=5．001，P〈0．01）。在一定的浓度范围内，氯硝柳胺对钉螺的杀灭效果在48h、不同生境（山丘型、湖沼型和水网型）SlgLG50之间的差异具有统计学意义（F=4．264，P〈0．05）。非条件logistic回归分析，浓度、时间、生境的标准化回归系数估计值分别为2．047（OR=5．573）、0．263（OR=2．924）、0．187～0．210（1．969～2．560）。结论 氯硝柳胺能有效杀灭钉螺，药物浓度、作用时间以及钉螺孳生地类型为其主要影响因素。     

高山地区钉螺分布的空间特征研究

目的 分析山区钉螺分布的空间特征.方法 建立四川省普格县钉螺分布的地理信息系统(GIS),用空间自相关分析和空间扫描统计量法研究山区钉螺分布的空间特征.结果 普格县钉螺分布存在空间自相关,其有螺框出现率的全局Moran's I指数为0.095(P<0.05),局部空间自相关分析显示有28个钉螺孳生地的局部空间关联指数(LISA)值有统计学意义(P<0.05),这些环境又可细分为高-高、低-低、低-高和高-低四种空间关联模式.空间扫描统计量法共探测出24个钉螺孳生地聚集区,其中有14个高值聚集区,10个低值聚集区(P<0.05),与局部空间自相关的结果 较为吻合.结论 普格县山区钉螺分布存在空间自相关,钉螺孳生地在空间上呈一定的聚集性,同时存在空间分布的异质性,利用这一规律可以更好地控制钉螺.

Abstract：

Objective To analyze the spatial characteristic on the distribution of Oncomelania hupensis in mountainous regions.Methods Based on the geographic database of snail distribution in Puge county,Sichuan province,spatial autocorrelation analysis and spatial scan statistics were applied to analyze the spatial characteristic of snail distribution.Results With regard to the rate of frame with snails,the global Moran's I indicator was 0.095(P<0.05),which indicated the spatial autocorrelation of snail distribution in Puge county.Data from the local spalial autocorrelation analysis showed that there were 28 snail habitats with statistically significant differences on local indicators of spatial autocorrelation(LISA)value(P<0.05),among which existed high-high,low-low,low-high and high-low four types of correlation model.The Spatial Scan Statistics had in total identified 24 snail habitat clusters(P<0.05),including 14 high rate clusters and 10 low rate clusters,and the result was similar to that of LISA analysis.Conclusion There were spatial autocorrelation and spatial aggregation of snail distribution in mountainous regions,meanwhile spatial heterogeneity of snail distribution also existed.This law could be explored for beaer control of snails.     

空心莲子草与氯硝柳胺复配灭螺作用的研究

目的探讨空心莲子草与氯硝柳胺复配用药的灭螺效果。方法采用室内浸杀法，将不同浓度的空心莲子草水浸液以及0．0625mg／L氯硝柳胺与不同浓度空心莲子草水浸液的复配溶液，在（22±2）℃室温条件下浸泡钉螺24h和48h，观察钉螺上爬、闭厣及死亡情况。结果不同浓度的空心莲子草水浸液单用浸杀灭螺24h半数致死量（LC50）为388mg／L，将0．0625mg／L的氯硝柳胺分别与不同浓度的空心莲子草水浸液复配后，灭螺24h比。降为116mg／L，增效比（SR）〉3。当空心莲子草水浸液浓度为800mg/L及以上时，能使钉螺闭厣率在30min内达76．7％以上，有效抑制了钉螺上爬。结论空心莲子草具有显著灭螺及抑制钉螺离水上爬的作用，且与0．0625mg／L氯硝柳胺复配后能明显增强杀螺效果。     

剂量投螺条件下泥土中活性螺卵检测方法研究

目的探讨现场适用于泥土中钉螺螺卵的简易检测方法,旨在检验直接恒温孵化法和自然状态孵化法的可行性。方法采用安徽省池州市贵池区自然生钉螺,按照雌雄各25、50、100、200、400、800只的剂量,投入面积为4 m2/池的模拟自然状况的钉螺池中饲养2年,采集实验池中土壤分别用4种方法进行螺卵检测和幼螺孵化实验,对4种方法进行统计学分析。结果 4种实验方法均能检出螺卵或孵化出钉螺,经Kruskal-Wallis H检验,4种方法螺卵或幼螺检出率差异无统计学意义;经对数线性回归检测钉螺检出数与投螺剂量无相关性（Y=1.7312Lnx-5.7060）;Kappa值检验4种方法无一致性。结论有螺泥土中含有活性螺卵,直接恒温孵化和自然状态孵化法可以孵化出幼螺。     

蛋白质分子对日本血吸虫毛蚴趋向作用的观察

目的采用自制的钉螺(Oncomelania hupensis)模拟装置法对比法,初步观察蛋白质对日本血吸虫毛蚴(Schistosoma japanicummiracidia)的趋向作用及其在"模拟钉螺"中的应用。方法采用自制的钉螺模拟装置——玻璃盲管,取钉螺模拟装置四支,标号为A、B、C、D。A管装满去氯水,B管装满螺SCW液,C管装满去离子的SCW液,D管装满去离子去蛋白质的SCW液。在玻璃平底圆盘中注入刚孵出的毛蚴悬液200 ml(毛蚴密度约20个/ml),静置3 min,让毛蚴在容器内自由活动并均匀分布。然后将钉螺模拟装置同时放入玻璃圆盘中,5 min后将装置同时取出,进行观察和计数比较。结果 B管与C管毛蚴数明显高于A管,且差异有统计学意义(P0.05);C管与D管差异无统计学意义(P0.05)。结论蛋白质分子对毛蚴的吸引作用很小,没有明显的排斥作用,也没有明显的吸引作用,在钉螺吸引毛蚴的理论方面可以不考虑蛋白质分子的趋向影响。