二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响

目的 观察二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响.方法 将24只ICR妊娠小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、二补助育汤组,每组小鼠6只.胚胎着床障碍小鼠模型采用米非司酮制备,每组予以相应药物灌胃,妊娠第5天脱颈处死.计算各组小鼠平均胚胎着床位点数,检测自噬标志物微管相关轻链蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1表达,透射电镜观察子宫内膜细胞中自噬小体的表达.结果 模型组平均着床位点数低于空白组(P<0.05),补佳乐、二补助育汤组高于模型组(P>0.05).各组小鼠子宫内膜细胞中均见自噬小体,空白组见少量自噬小体表达;模型组部分细胞有破坏、坏死,内膜发育不良,细胞内自噬小体多于其他组;补佳乐组和二补助育汤组子宫内膜腺体和血管较模型组丰富,细胞内自噬小体表达虽多于空白组,但较模型组少.模型组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平均低于空白组,其中LC3-Ⅱ有显著差异(P<0.05);补佳乐组和二补助育汤组LC3-Ⅱ表达高于模型组(P>0.05);二补助育汤组Beclin-1表达高于模型组和补佳乐组(P<0.05).结论 二补助育汤能够通过调节子宫内膜自噬作用,维持细胞稳态,从而利于胚胎着床.     

基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制＊

目的 基于Ang/Tie-2信号通路，探讨补肾活血方孕前导法给药调控肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制。方法 阴道涂片HE染色法观察，选取动情周期规律的健康未交配雌性SD大鼠60只，随机分为5组：空白组、模型组、阿司匹林组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组，动情前期时入组，分组给药并合笼，于妊娠第5天处死，腹主动脉采血后，迅速剖取子宫并制片，采用光镜观察各组大鼠子宫内膜组织形态，采用免疫组化法（IHC）检测各组大鼠子宫组织中VEGF、FLK-1表达水平及螺旋动脉数量，采用Western-Blot检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2蛋白表达水平，采用Real-Time PCR检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2 mRNA表达水平。结果 给药组能明显改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，并接近空白组水平；模型组大鼠子宫湿重、子宫脏器指数、螺旋动脉数量、VEGF、FLK-1及子宫组织Tie-2蛋白表达、Ang-1mRNA、Ang-2mRNA和Tie-2mRNA表达等均较空白组降低（P < 0.05）；补肾活血方高剂量组大鼠妊娠第5天子宫组织VEGF、FLK-1、螺旋动脉数量、Ang-1蛋白、Tie-2蛋白及Ang-1mRNA、Tie-2mRNA表达量较模型组明显增加（P< 0.01）。结论 补肾活血方孕前导法给药，改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，促进子宫组织血管生成，改善组织血瘀状态，促进胚胎着床，可能与其提高大鼠子宫组织VEGF、FLK-1、Ang-1、Tie-2表达水平，并维持Ang-2正常表达有关。     

二补助育汤对着床障碍小鼠子宫环氧化酶-2、过氧化物酶体增殖物激活受体δ的影响

目的:探讨二补助育汤对着床障碍小鼠内膜中环氧化酶-2(COX-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)表达的影响。方法:将C57妊娠小鼠随机分为空白、模型、阿司匹林、戊酸雌二醇片、二补助育汤高、中、低剂量组,每组8只,吲哚美辛油制备胚胎着床障碍小鼠模型,各组给予相应药物灌胃。妊娠第5天取小鼠子宫,观察外观形态、COX-2、PPARδ基因和蛋白表达。结果:模型组小鼠子宫苍白细长,串珠样改变少,且分布稀疏不均。各观察组小鼠子宫较模型组红润,有串珠状改变,串珠分布增多且不均。模型组COX-2和PPARδ蛋白表达低于空白组(P<0.05);各观察组COX-2蛋白表达均高于模型组(均P<0.05)。二补助育汤低、高剂量组PPARδ mRNA表达较模型组、戊酸雌二醇片组明显增加(P<0.05),阿司匹林组PPARδ mRNA表达高于二补助育汤中剂量组(P<0.05);二补助育汤各剂量组PPARδ蛋白表达高于模型组(P<0.01),其中中剂量组高于戊酸雌二醇片组和阿司匹林组(P<0.05)。结论:二补助育汤能够调节子宫内膜COX-2和PPARδ表达,提高子宫内膜容受性,有利于胚胎着床。     

健胎液对围着床期小鼠子宫炎性细胞因子IL-1的影响

目的:探讨健胎液对胚胎着床障碍小鼠着床期子宫炎性细胞因子IL-1β及IL-1RⅠ的影响。方法:建立胚胎着床障碍的动物模型,分为三组,观察各组着床率和着床点数,妊娠第5天分别检测各组小鼠子宫内膜IL-1β的蛋白含量,以及子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ的mRNA水平。结果:模型组胚胎着床数、着床位点数与正常组比较显著降低(P0.01);中药组胚胎着床数、着床位点数与模型组比较明显升高(P0.05),但仍低于正常组(P0.05)。模型组子宫内膜IL-1β蛋白量同正常组、中药组比较明显升高,中药组IL-1β蛋白量同正常组比较无显著性差异。模型组IL-1β、IL-1RⅠ的mRNA表达水平同正常组比较显著升高,中药组IL-1RⅠ的mRNA表达水平同模型组比较明显降低,但仍比正常组水平高。结论:围着床期子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ参与胚胎着床的病理生理过程,健胎液可能通过调节IL-1表达,改善子宫内膜微环境,提高子宫内膜胚胎种植容受性,促进着床。     

基于VEGF/VEGFR-2和Ang-1/Tie-2通路探讨养精种玉汤对薄型子宫内膜大鼠血管生成的影响

目的：基于血管内皮生长因子（VEGF）/血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)和血管生成素（Ang-1）/酪氨酸激酶-2(Tie-2)信号通路,探讨养精种玉汤调控薄型子宫内膜（TE）大鼠子宫血管生成的机制。方法：选取动情周期规律的雌性未交配SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组、中药组,每组10只,宫腔注射95%乙醇建立TE模型,分组给药14 d,处死后剖腹取子宫,采用HE染色观察子宫形态,WesternBlot检测大鼠子宫VEGF、VEGFR-2、Ang-1、Tie-2蛋白表达,Quantitative Real-Time PCR检测大鼠子宫VEGF、VEGFR-2、Ang-1、Tie-2mRNA表达水平。结果：与模型组比较,中药组能明显改善模型大鼠的子宫内膜形态,增加子宫湿重和子宫脏器指数（P<0.05）,并接近对照组水平;中药组大鼠子宫VEGF、VEGFR-2、Ang-1、Tie-2蛋白及mRNA水平均显著增加（P<0.05,P<0.01）。结论：养精种玉汤可以明显改善TE大鼠的子宫组织形态,增加其内膜血管生成,可能与提高大鼠子宫组织VEGF、VEGFR-2、...     

健胎液对胚胎着床障碍小鼠子宫炎性细胞因子表达的影响

目的探讨中药健胎液对子宫内膜着床微环境改善的可能分子机制。方法 90只受孕小鼠随机分为正常组、模型组、中药组各30只,模型组和中药组采用吲哚美辛皮下注射建立胚胎着床障碍小鼠模型。中药组从妊娠第1天开始用健胎液(144%无菌煎剂)灌胃,每天每只0.5ml;模型组和正常组每天用等量生理盐水灌胃。在妊娠第5天检测各组小鼠(每组10只)子宫内膜白介素-1β(IL-1β)、白介素1受体Ⅰ型(IL-1RⅠ)、白介素-6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、集落刺激因子-1(CSF-1)mRNA水平,妊娠第8天检查各组小鼠(每组20只)子宫内胚胎发育情况,记录胚胎着床率和着床位点数。结果中药组和模型组的胚胎着床率、着床位点数同正常组比较显著降低(P0.01),中药组胚胎着床率、着床位点数同模型组比较明显升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著升高(P0.01);与模型组比较,中药组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著降低(P0.05或P0.01)。结论中药健胎液通过降低胚胎着床障碍小鼠子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1细胞因子的基因表达,改善子宫内膜微环境,促进着床。     

中药健胎液对围着床期小鼠IL-6表达的影响

目的:探讨细胞因子IL-6在胚胎着床障碍发生发展中的作用,以及中药健胎液促进胚胎着床对子宫内膜IL-6的影响。方法:用吲哚美辛建立胚胎着床障碍的动物模型,动物分为正常对照组(正常组),胚胎着床障碍组(模型组),中药治疗组(中药组)。观察各组着床率和着床点数,用ELISA方法检测了妊娠第5天各组小鼠子宫内膜IL-6的蛋白含量,用RT-PCR方法检测妊娠第5天小鼠子宫内膜IL-6的mRNA水平。结果:模型组的胚胎着床数、着床位点数同正常组比较显著降低(P<0.01);中药组胚胎着床数、着床位点数同模型组比较明显升高(P<0.05),但仍低于正常组(P<0.05)。模型组子宫内膜IL-6蛋白量同正常组、中药组比较明显升高,中药组IL-6蛋白量同正常组比较没有显著差异(P=0.211)。模型组IL-6 mRNA表达水平同正常组、中药组比较显著升高(P<0.01),中药组IL-6 mRNA表达水平同正常组比较没有显著差异(P>0.05)。结论:中药健胎液通过调节IL-6的表达促进着床。     

二补助育汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响

目的:探讨补肾活血中药方二补助育汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响。方法:制备小鼠胚泡着床障碍模型,研究其子宫内膜SCFmRNA、HOXA-10 mRNA、LIF、ER、PR、整合素(αvβ3)表达的改变。结果:GnRHa+HMG+HCG超促排方案能降低子宫内膜容受性,而二补助育汤能够调控小鼠子宫内膜调控链间的相关调控因子的表达,从而改善子宫内膜容受性。结论:二补助育汤改善子宫内膜容受性的作用是肯定的,并且其作用途径是多靶点、多环节的。     

补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠围着床期妊娠结局和子宫内膜容受性的影响

目的研究补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠妊娠结局和子宫内膜容受性的影响及可能作用机制。方法将240只动情周期正常的昆明系雌性小鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、疏肝组,每组各60只。除正常组,其余各组小鼠建立控制性超促排卵模型。造模第1天始补肾组、疏肝组分别给予补肾助孕方混悬液(浓度1.5 g/mL)和逍遥丸混悬液(浓度0. 09 g/mL),均0.4 mL/(30 g·d)灌胃,模型组及正常组给予同等剂量蒸馏水灌胃,连续11天。比较各组小鼠围着床期血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)、NO含量及子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白及其mRNA表达,测量子宫内膜厚度,观察小鼠内膜胞饮突表达,统计各组小鼠妊娠数、胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠妊娠数、胚胎着床数减少(P0.05),同时模型组血清E_2、P降低,子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均降低(P0.05),子宫内膜厚度变薄,胞饮突发育不良;与模型组比较,补肾组、疏肝组小鼠妊娠数及胚胎着床数增加,血清E_2、P含量及子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均升高(P0.05),子宫内膜厚度增加,胞饮突发育接近正常组。结论补肾法、疏肝法均能够增加超促排卵小鼠妊娠率及胚胎着床数,其作用机制可能与调节雌、孕激素水平及其受体,影响VEGF、eNOS表达,调控NO释放,改善小鼠子宫内膜组织形态及血管通透性有关。     

补肾安胎中药对着床障碍小鼠子宫VEGF和MMP_(-9)mRNA表达的影响

目的:研究补肾安胎中药对着床障碍小鼠子宫组织血管内皮生长因子(VEGF)和金属蛋白酶(MMP-9)mRNA表达的影响。方法:将受孕大鼠随机分为正常对照组、模型组、保胎灵片和坤元汤4组,从妊娠第1d开始,正常对照组和模型组每天灌胃生理盐水0.3mL,给药组用保胎灵和坤元汤灌胃0.3mL,连续灌胃6d,在第3和4天小鼠注射吲哚美辛油剂诱导着床障碍小鼠模型,在第6天末次给药后收集小鼠子宫组织,使用荧光定量RT-PCR技术检测小鼠子宫组织VEGF和MMP-9mRNA的表达。结果坤元汤明显提高了着床障碍小鼠子宫VEGF和MMP-9mRNA的表达。结论补肾安胎中药坤元汤可能通过调节VEGF和MMP-9mRNA的表达来促进胚胎着床。     

少腹逐瘀汤对子宫内膜容受性不良大鼠的改善作用及机制研究

目的探讨少腹逐瘀汤对子宫内膜容受性不良大鼠的改善作用及机制。方法随机选取10只雌性SD大鼠作为对照组,其余雌性大鼠建立血瘀型子宫内膜容受性不良大鼠模型。造模大鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇(0.27 mg/kg)组及少腹逐瘀汤低、高剂量(144、288mg/kg)组,每组9只。给药后按2∶1安排雌性、雄性大鼠合笼,妊娠第5天剖腹观察胚胎着床率、平均胚胎着床数;采用ELISA法检测子宫内膜组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平;DCF荧光法检测子宫内膜组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;硫代巴比妥酸法检测子宫内膜组织丙二醛水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察子宫内膜组织病理变化,记录子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜厚度;Western blotting法检测子宫内膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,KDR)蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜TNF-α、IL-6、IL-8、ROS、丙二醛水平均显著升高(P<0.05),胚胎着床率和平均胚泡着床数显著降低(P<0.05),子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜厚度显著降低(P<0.05),子宫内膜VEGF、KDR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠子宫内膜TNF-α、IL-6、IL-8、ROS、丙二醛水平均显著降低(P<0.05),胚胎着床率和平均胚泡着床数显著升高(P<0.05),子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜厚度显著升高(P<0.05),子宫内膜VEGF、KDR蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。HE染色结果显示,相较于模型组,各给药组大鼠子宫内膜组织较为完整,少量子宫内膜上皮细胞空泡变性,腺上皮细胞排列较为规则,固有层间质内炎性细胞浸润减少,肌层肌纤维排列较整齐,其中少腹逐瘀汤高剂量组改善更显著。结论少腹逐瘀汤可减轻子宫内膜容受性不良大鼠氧化应激、炎症反应,改善子宫内膜容受性,提升胚胎着床率,其作用机制可能与调控VEGF/KDR通路有关。     

健胎液对胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的探讨健胎液促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜发育的机制。方法采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,留取血清及子宫标本,采用放免法检测血清和子宫局部雌二醇(E₂),孕酮(P)含量,采用免疫组化技术检测子宫雌,孕激素受体(ER,PR)表达。结果各组血清和子宫组织E₂,P含量无显著差异(P>0.05);中药组子宫内膜腺体、间质ER,PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P<0.05),与正常组无差异(P>0.05)。结论健胎液通过促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体、间质的ER,PR表达,改善子宫内膜的发育,利于胚泡着床。     

针刺改善大鼠胚泡着床障碍机制初探

目的 观察针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床的影响,并初步探讨其作用机制.方法 早孕大鼠随机分为正常组、模型组及针刺组,观察各组大鼠着床率及平均着床胚泡数;放免法检测血清雌二醇（E2）、孕酮（P4）及泌乳素（PRL）的水平;免疫组化及RT—PCR法检测着床点孕激素受体（PR）及泌乳素受体（PRLR）表达的差异。结果 针刺组着床率及平均着床胚泡数较模型组显著提高（P〈0．01）,模型组血清P4、PRL水平、PR、PRLR蛋白及mRNA表达水平均低于正常组和针刺组（P〈0．05）。结论 针刺可在一定程度上促进大鼠胚泡着床,其作用机制可能与针刺调节大鼠体内性激素及其受体表达有关,     

二补助育汤对子宫内膜容受性影响的临床研究

目的:观察二补助育汤对子宫内膜容受性的影响。方法:收集从2010年5月-2011年5月因子宫内膜容受性低造成体外受精-胚胎移植(IVF-ET)失败而就诊于肖承悰教授门诊的肾虚型患者42例,服用二补助育汤3个月,随访治疗半年后受孕率和统计治疗前后临床症状积分、子宫内膜厚度及雌、孕激素水平的变化。结果:半年随访受孕率为57.1%;治疗后临床症状积分较治疗前有显著改善(P<0.05);治疗后HCG注射日子宫内膜厚度明显大于治疗前(P<0.05),且雌激素水平较治疗前显著升高(P<0.05);孕激素水平治疗前后比较无统计学意义(P>0.05)。结论:二补助育汤对改善子宫内膜容受性有较显著的疗效。     

健胎液改善胚泡着床障碍模型小鼠实验研究

目的:观察中药健胎液对胚泡着床障碍模型小鼠胚泡着床以及子宫内膜形态学影响。方法:采用吲哚美辛引起的胚泡着床障碍动物模型,将实验动物分为正常组、中药组、模型组,观察妊娠第5天、第8天子宫内膜形态结构变化和妊娠第8天胚泡着床率、着床位点数。结果:中药组胚泡着床率、着床位点数同模型组比较明显升高。中药组妊娠第5天子宫内膜与模型组比较,内膜血管明显比模型组增加,炎性细胞明显减少,基质出现明显蜕膜样变,子宫内膜空泡、脂滴明显少于模型组。模型组妊娠第5天子宫内膜腔上皮受损,妊娠第8天腺上皮受损,中药组子宫内膜腔上皮、腺上皮均未见结构改变。结论:中药健胎液能改善子宫内膜微环境,促进胚泡着床。     

升气壮阳汤超声雾化法对变应性鼻炎小鼠的作用研究

目的探讨升气壮阳汤超声雾化法对变应性鼻炎小鼠的干预作用及可能作用机制。方法选取SPF级BALB/c小鼠40只,随机取10只作为空白组,其余小鼠采用卵清蛋白+氢氧化铝免疫辅助剂构建变应性鼻炎小鼠模型,将成模小鼠随机分为模型组、氯雷他定组、升气壮阳汤组,每组10只。氯雷他定组给予氯雷他定药液灌胃,升气壮阳汤组给予升气壮阳汤超声雾化,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,均连续干预28 d。记录各组小鼠造模前及干预第7,14,28天鼻部症状评分,干预结束后检测各组小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、组胺、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)水平,实时荧光定量PCR法检测各组小鼠鼻黏膜组织中GATA3、T-bet、Tim1、Tim3 mRNA表达量。结果干预第7,14,28天,模型组鼻部症状评分均明显高于空白组(P均<0.05),氯雷他定组和升气壮阳汤组均明显低于模型组(P均<0.05)。模型组血清IgE、组胺、IL-4、IL-5、IL-10水平及鼻黏膜组织中GAT3、Tim1、Tim3 mRNA表达量均明显高于空白组(P均<0.05),血清IL-2、IFN-γ水平及鼻黏膜组织中T-bet mRNA表达量均明显低于空白组(P均<0.05);氯雷他定组和升气壮阳汤组血清IgE、组胺、IL-4、IL-5、IL-10水平及鼻黏膜组织中GAT3、Tim1、Tim3 mRNA表达量均明显低于模型组(P均<0.05),血清IL-2、IFN-γ水平及鼻黏膜组织中T-bet mRNA表达量均明显高于模型组(P均<0.05)。结论升气壮阳汤超声雾化可减轻变应性鼻炎小鼠的症状,其作用机制可能与降低炎症因子表达,调控Th1/Th2动态平衡有关。     

通窍化栓汤对急性脑梗死患者血清中VEGF、Ang-1的影响

目的:观察通窍化栓汤对急性脑梗死的临床疗效及其血清中VEGF、Ang-1含量的影响。方法:选择60例急性脑梗死患者随机分为观察组30例,对照组30例,对照组采用血栓通注射液及阿斯匹林肠溶片;观察组采用在对照组基础上加通窍化栓汤治疗,疗程15天。分别比较两组治疗前后神经功能缺损(NFD)评分及血清中Ang-1、VEGF水平的变化。结果:治疗后两组NFD评分较治疗前均有明显改善,但观察组NFD评分改善较对照组更为显著(P<0.01);治疗后两组患者血清中VEGF含量均有不同程度增加(P<0.01);观察组治疗后血清VEGF含量增高尤为明显,与对照组比较有统计学意义(P<0.01)。治疗后两组患者血清中Ang-1含量均有不同程度下降(分别P<0.01,P<0.05),治疗后两组比较亦有统计学意义(P<0.05)。结论:通窍化栓汤可调节脑梗死患者血清中Ang-1、VEGF的含量,改善神经功能缺损,值得进一步研究及应用。