二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响

目的 观察二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响.方法 将24只ICR妊娠小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、二补助育汤组,每组小鼠6只.胚胎着床障碍小鼠模型采用米非司酮制备,每组予以相应药物灌胃,妊娠第5天脱颈处死.计算各组小鼠平均胚胎着床位点数,检测自噬标志物微管相关轻链蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1表达,透射电镜观察子宫内膜细胞中自噬小体的表达.结果 模型组平均着床位点数低于空白组(P<0.05),补佳乐、二补助育汤组高于模型组(P>0.05).各组小鼠子宫内膜细胞中均见自噬小体,空白组见少量自噬小体表达;模型组部分细胞有破坏、坏死,内膜发育不良,细胞内自噬小体多于其他组;补佳乐组和二补助育汤组子宫内膜腺体和血管较模型组丰富,细胞内自噬小体表达虽多于空白组,但较模型组少.模型组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平均低于空白组,其中LC3-Ⅱ有显著差异(P<0.05);补佳乐组和二补助育汤组LC3-Ⅱ表达高于模型组(P>0.05);二补助育汤组Beclin-1表达高于模型组和补佳乐组(P<0.05).结论 二补助育汤能够通过调节子宫内膜自噬作用,维持细胞稳态,从而利于胚胎着床.     

二补助育汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响

目的:探讨补肾活血中药方二补助育汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响。方法:制备小鼠胚泡着床障碍模型,研究其子宫内膜SCFmRNA、HOXA-10 mRNA、LIF、ER、PR、整合素(αvβ3)表达的改变。结果:GnRHa+HMG+HCG超促排方案能降低子宫内膜容受性,而二补助育汤能够调控小鼠子宫内膜调控链间的相关调控因子的表达,从而改善子宫内膜容受性。结论:二补助育汤改善子宫内膜容受性的作用是肯定的,并且其作用途径是多靶点、多环节的。     

二补助育汤对子宫内膜容受性影响的临床研究

目的:观察二补助育汤对子宫内膜容受性的影响。方法:收集从2010年5月-2011年5月因子宫内膜容受性低造成体外受精-胚胎移植(IVF-ET)失败而就诊于肖承悰教授门诊的肾虚型患者42例,服用二补助育汤3个月,随访治疗半年后受孕率和统计治疗前后临床症状积分、子宫内膜厚度及雌、孕激素水平的变化。结果:半年随访受孕率为57.1%;治疗后临床症状积分较治疗前有显著改善(P<0.05);治疗后HCG注射日子宫内膜厚度明显大于治疗前(P<0.05),且雌激素水平较治疗前显著升高(P<0.05);孕激素水平治疗前后比较无统计学意义(P>0.05)。结论:二补助育汤对改善子宫内膜容受性有较显著的疗效。     

二补助育汤对着床障碍小鼠子宫环氧化酶-2、过氧化物酶体增殖物激活受体δ的影响

目的:探讨二补助育汤对着床障碍小鼠内膜中环氧化酶-2(COX-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)表达的影响.方法:将C57妊娠小鼠随机分为空白、模型、阿司匹林、戊酸雌二醇片、二补助育汤高、中、低剂量组,每组8只,吲哚美辛油制备胚胎着床障碍小鼠模型,各组给予相应药物灌胃.妊娠第5天取小鼠子宫,观察外观形态、...     

胚胎停育肝郁证患者血管生成因子表达特征研究

目的：检测子宫蜕膜组织中缺氧诱导因子1α多肽(hypoxia-inducible factor-1 alpha, HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)信号通路及下游靶蛋白表达,从血管生成途径探讨胚胎停育肝郁证的分子生物学机制。方法：选取45例胚胎停育患者和15例自愿终止妊娠的正常早孕女性为研究对象,采用Western Blot法及实时荧光定量PCR法检测子宫蜕膜组织中VEGF、C型凝集素家族14A(C-type lectin clomain containing 14A,CLEC14A)、CD81、HIF-1αmRNA及蛋白表达量。结果：与对照组比较,胚胎停育组子宫蜕膜组织中VEGF mRNA表达下降,差异具有统计学意义(P<0.05),CLEC14A、CD81、HIF-1αmRNA表达水平有改善,但差异无统计学意义(P>0.05)。与肝郁证比较,非肝郁证子宫蜕膜组织中VEGF mRNA表达升高,具有统计学意义(P<0.05),CD81、CLEC14A、HIF-1αmRNA表达水平降低,但...     

益肾填精助孕法对肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响

目的:观察益肾填精助孕方药对肾虚胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响,探讨益肾填精助孕法对肾虚胚胎着床障碍改善的可能作用机制。方法:制作肾虚胚胎着床障碍小鼠病证结合模型,分别予益肾填精助孕中药低剂量、中剂量、高剂量、戊酸雌二醇及生理盐水灌胃,扫描电镜下观察子宫内膜表面胞饮突情况。结果:中药组中剂量及高剂量组小鼠子宫内膜细胞表面有大量发育中的胞饮突表达,而西药组表达胞饮突大小不一,略低于正常对照组。结论:益肾填精助孕中药能够改善肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突的发育,有助于提高子宫内膜容受性。     

健胎液对胚胎着床障碍小鼠子宫炎性细胞因子表达的影响

目的探讨中药健胎液对子宫内膜着床微环境改善的可能分子机制。方法 90只受孕小鼠随机分为正常组、模型组、中药组各30只,模型组和中药组采用吲哚美辛皮下注射建立胚胎着床障碍小鼠模型。中药组从妊娠第1天开始用健胎液(144%无菌煎剂)灌胃,每天每只0.5ml;模型组和正常组每天用等量生理盐水灌胃。在妊娠第5天检测各组小鼠(每组10只)子宫内膜白介素-1β(IL-1β)、白介素1受体Ⅰ型(IL-1RⅠ)、白介素-6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、集落刺激因子-1(CSF-1)mRNA水平,妊娠第8天检查各组小鼠(每组20只)子宫内胚胎发育情况,记录胚胎着床率和着床位点数。结果中药组和模型组的胚胎着床率、着床位点数同正常组比较显著降低(P0.01),中药组胚胎着床率、着床位点数同模型组比较明显升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著升高(P0.01);与模型组比较,中药组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著降低(P0.05或P0.01)。结论中药健胎液通过降低胚胎着床障碍小鼠子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1细胞因子的基因表达,改善子宫内膜微环境,促进着床。     

少腹逐瘀汤对子宫内膜容受性不良大鼠的改善作用及机制研究

目的 探讨少腹逐瘀汤对子宫内膜容受性不良大鼠的改善作用及机制.方法 随机选取10只雌性SD大鼠作为对照组,其余雌性大鼠建立血瘀型子宫内膜容受性不良大鼠模型.造模大鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇(0.27 mg/kg)组及少腹逐瘀汤低、高剂量(144、288 mg/kg)组,每组9只.给药后按2:1安排雌性、雄性大鼠合笼,...     

二补助育改良方对反复体外受精-胚胎移植失败患者子宫内膜容受性的影响

目的：观察二补助育改良方对反复体外受精-胚胎移植（IVF-ET）失败患者子宫内膜容受性的影响。方法：选取2016年1月至2018年3月东直门医院、北京妇产医院及海淀区妇幼保健院多中心收集的因反复IVF-ET失败而就医患者资料,二补助育改良方药物干预3个月后,与未用药干预组比较,采集2组患者黄体中期子宫内膜活体检查,从分子生物学层面进行研究观察,以qPCR研究同源盒基因（HOX）A10 mRNA表达,以免疫组织化学法检测白血病抑制因子（LIF）、整合素αⅤβ3等指标,同时记录妊娠结局。结果：在HOXA mRNA表达中,2组差异有统计学意义（P<0.05）;在LIF、整合素αⅤβ3的表达,2组差异有统计学意义（P<0.05）;胚胎种植率和临床妊娠率有显著提高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：二补助育改良方可以改善反复IVF-ET失败患者黄体中期子宫内膜HOXA 10mRNA、LIF、整合素αⅤβ3的表达。二补助育改良方的药效值得肯定,可以改善反复IVF-ET失败患者的子宫内膜容受性。     

补肾调经方药对人着床期子宫内膜血管生成因子及其受体的影响

目的 :研究补肾调经中药对着床期子宫内膜反应性中血管生成因子和血管生成因子受体的影响。方法 :采用自身对照方法对服用中药前后的人着床期子宫内膜组织的VEGF、VEGFR、bFGF FGF、PDGFR α、EGFR进行免疫组织化学的对比分析。结果 :服用中药后 5种因子的表达强度和阳性细胞率均明显增加 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,提示中药具有整体促进血管生成的作用。结论 :服用补肾调经中药后血管生成因子和血管生成因子受体的增强为妊娠的建立提供了基础和保障     

补肾固黄汤改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织形态的实验研究

目的 观察中药补肾固黄汤对胚泡着床障碍小鼠子官内膜组织学形态的影响.方法 将45只雌性昆明小鼠随机分为中药组、模型组、正常组.中药组在孕前预防性行补肾固黄汤灌胃2次,孕后每天灌服补肾固黄汤;其余两组给予等体积生理盐水.妊娠第4天中药组、模型组皮下注射米非司酮溶液造成小鼠胚泡着床障碍.妊娠第5天,收集各组小鼠子宫,应用光学显微镜观察小鼠子宫内膜组织形态学变化.结果 妊娠第5天,模型组小鼠子宫内膜腺体数量少、腺腔小而直,间质细胞体积小,间质紧密;而正常组则表现为腺体数目多,腺腔扩张、弯曲,腺腔、官腔均有较多分泌物,间质疏松、水肿;中药组与正常组相似.结论 补肾固黄汤可以改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态,从而提高子官内膜容受性.     

安坤种子丸对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10表达的影响

目的:观察安坤种子丸对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10表达的影响,探讨其对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响及其机制。方法:将有规律动情周期的雌性小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,每组25只。先期用安坤种子丸对中药组小鼠进行灌胃,雌、雄合笼后观察雌鼠阴栓率,妊娠第4天对中药组和模型组小鼠颈背部皮下注射米非司酮进行干预,制成胚泡着床障碍模型;于妊娠第5、6天处死小鼠,留取子宫标本。采用Q-PCR技术和免疫组化方法检测小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达;同时制备HE切片以观察各组小鼠子宫内膜形态结构的变化,统计分析各组间妊娠率、平均着床胚泡数及着床率等指标的变化。结果:安坤种子丸可以提高胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达,妊娠率、平均着床胚泡数及着床率等指标虽低于正常组,但高于模型组。结论:安坤种子丸可能通过提高雌鼠子宫内膜上HOXa-10基因及蛋白的表达,一定程度上改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。     

蒲灵化瘀止痛方对子宫腺肌病模型小鼠异位和在位内膜血管生成相关因子的影响

目的：探讨蒲灵化瘀止痛方对子宫腺肌病（Adenomyosis,ADM）小鼠异位及在位内膜血管内皮生长因子（VEGF）、内皮抑素（ENS）、微血管密度（MVD）表达的影响,从血管生成相关因子的角度揭示蒲灵化瘀止痛方治疗ADM的作用机理。方法：造模饲养3个月建立小鼠ADM模型。将ADM小鼠随机分为蒲灵化瘀止痛方高、中、低剂量组,丹莪妇康煎膏组,孕三烯酮组,模型组,空白组,连续给药12周后,采用HE染色法观察不同组子宫内膜腺体与间质侵入子宫肌层的程度;采用免疫组化SP法染色检测异位和在位子宫内膜的VEGF、ENS的表达,并通过CD31标记异位子宫内膜血管内皮细胞,测定其MVD。结果：蒲灵化瘀止痛方高、中剂量组能降低模型小鼠异位和在位内膜VEGF的表达（P〈0.01）,降低模型组小鼠异位内膜VEGF/ENS的比值（P〈0.01）,有下调模型小鼠在位内膜VEGF/ENS比值的趋势。结论：蒲灵化瘀止痛方减少经量的机制可能是抑制在位内膜血管生成,减少在位内膜血管数量;蒲灵化瘀止痛方缩小病灶、减轻痛经程度的机制可能是抑制异位内膜血管生成,减少异位内膜血管数量。     

电针结合克罗米芬对多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜胰岛素受体和胰岛素受体底物1蛋白表达及胚泡着床的影响

目的:探讨电针提高克罗米芬促排多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胚泡着床的作用机制。方法:24日龄雌性SD大鼠皮下注射含脱氢表雄酮的麻油溶液结合高脂饮食造模;PCOS大鼠随机分为模型组、克罗米芬组、电针组、电针+克罗米芬组,每组25只。各组均于80日龄起进行干预,其中电针组及电针+克罗米芬组先电针治疗,选取"中脘""关元""天枢"穴,1周3次,连续5周;治疗结束后第1、2天,克罗米芬组、电针+克罗米芬组灌服克罗米芬(100mg·kg-1·d-1)。全部治疗结束后,各组分别取出大鼠(15只)与雄鼠交配,妊娠第8天处死,观察大鼠妊娠率及胚泡着床情况;各组其余大鼠断头处死,留取子宫内膜标本,Western blot法检测受体胰岛素受体(INSR)及胰岛素受体底物1(IRS 1)蛋白的表达。结果:模型组大鼠妊娠率和胚泡着床数显著低于正常组(P0.05);与模型组相比,克罗米芬组、电针组、电针+克罗米芬组大鼠妊娠率和胚泡着床数均显著增加(P0.05),其中电针+克罗米芬组妊娠率和胚泡着床数显著高于电针组和克罗米芬组(P0.05)。与正常组比较,模型组子宫内膜组织INSR及IRS 1蛋白表达降低(P0.05);与模型组比较,电针、电针+克罗米芬组INSR及IRS 1蛋白表达显著增加(P0.05);与克罗米芬组比较,电针、电针+克罗米芬组INSR及IRS 1蛋白表达显著增加(P0.05)。结论:电针能够提高克罗米芬促排PCOS大鼠的妊娠率和胚泡着床数,其机制可能与提高PCOS大鼠子宫内膜组织中INSR和IRS 1蛋白表达水平有关。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后血管生成的影响

目的从血管生成的角度探讨益气养阴活血法及其代表方芪棱汤抗大鼠脑缺血再灌注损伤的机理。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、芪棱汤去养阴药组(对照组)、芪棱汤组(治疗组)。采用颈内动脉线栓法复制大鼠脑缺血再灌注(MCAO/Reperfusion)模型。在再灌注不同时点采用免疫组织化学法测血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素(Ang)-2,CD34标记微血管计数。结果假手术组VEGF表达、Ang-2表达极弱;除缺血再灌注6h外,各相应再灌注时间点12h、1d、3d、7d,治疗组及对照组VEGF表达、Ang-2表达较模型组明显增多,且治疗组与对照组比较有显著差异。CD34标记微血管计数再灌注各时间点,治疗组、对照组与模型组比较均有显著差异;治疗组与对照组比较有显著差异。结论芪棱汤通过促进VEGF、Ang-2表达的上调,促进微血管新生,可能是其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一;益气养阴活血法优于益气活血法。     

养精种玉汤对原因不明不孕症患者子宫内膜胰岛素样生长因子-Ⅱ及其受体表达的影响

目的：探讨养精种玉汤对原因不明不孕症患者黄体中期子宫内膜胰岛素样生长因子－Ⅱ（IGF－Ⅱ）及其受体表达的影响及与子宫内膜接受性的关系。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术,对22例原因不明不孕症患者服用养精种玉汤前后黄体中期子宫内膜行IGF－Ⅱ及IGF－Ⅱ及IGF－Ⅱ型受体mRNA检测。结果：治疗前黄体中期子宫内膜IGF－ⅡmRNA表达水平（低度比值）为0．794±0．453，显著低于治疗后同期水平（1．202±0．551，P＜0．01）；治疗前IGF－Ⅱ型受体mRNA表达水平（灰度比值）为0．725±0．354，显著低于治疗后的表达水平（1．045±0．581，P＜0．05）。相关分析显示治疗前后IGF－ⅡmRNA与IGF－Ⅱ型受体mRNA表达呈相关。结论：养精种玉汤能促进黄体中期子宫内膜IGF－Ⅱ及其受体的基因表达，促进子宫内膜分化，提高子宫内膜对胚泡种植的接受性。     

四君子汤抑制移植性原发性肝癌小鼠肿瘤生长的实验研究

目的 观察四君子汤对移植性原发性肝癌小鼠肿瘤生长的影响.方法 30只移植性原发性肝癌小鼠随机分为模型组、5 - FU组及四君子汤组(简称四君组),每组10只.模型组和四君组小鼠分别给予蒸馏水和四君子汤灌胃,每天1次,连续给药10 d;5 -FU组隔天给予5- FU腹腔注射.观察各组小鼠的体质量、瘤重、脾重、肿瘤细胞凋亡、细胞周期、表观扩散系数( ADC)及血清血管内皮生长因子(VEGF).结果 小鼠体质量和去瘤体质量比较,四君组显著高于其余两组(P＜0.01).比较瘤重和肿瘤指数,四君组显著低于模型组(P＜0.01).抑瘤率比较,5 - FU组(54.67％)＞四君组(17.81％).脾脏重量及脾脏指数比较,四君组显著高于模型组和5 - FU组(P＜0.01).细胞凋亡比较,四君组显著高于模型组(P＜0.01).比较S期细胞,5 - FU组显著低于其余两组(P＜0.01).G0 - G1期比较,四君组显著高于模型组(P＜0.05),低于5 - FU组(P＜0.05).G2 -M期各组比较差异无统计学意义(P＞0.05).肿瘤ADC及血清VEGF比较,四君组低于模型组(P＜0.01),高于5 - FU组(P＜0.01).小鼠肿瘤ADC值与血清VEGF水平呈正相关(r=0.873,P＜0.01),与细胞凋亡呈负相关(r=-0.284,P＜0.05).结论 四君子汤对小鼠移植性原发性肝癌的作用机制在于促进肿瘤细胞的凋亡,影响细胞周期,抑制血清VEGF的表达;肿瘤实质的ADC值与实验室检查存在一定相关性,对于小鼠肝癌模型肿瘤生长情况的评定具有一定指导意义.