朝医补肺元汤对哮喘模型小鼠肺组织中p38蛋白激酶表达的影响

目的:探讨朝医补肺元汤对小鼠哮喘模型肺组织中p38蛋白激酶表达的作用及其可能机制。方法:雄性BALB/c小鼠40只随机分成5组。支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-5、IL-13的含量采用酶联免疫吸附法(ELISA)测出,并对支气管肺泡灌洗液中炎症细胞的病理学改变进行观察。应用免疫蛋白质印迹(Western blot)测小鼠肺组织中磷酸化的p38MAPK表达作用强弱。结果:相较于正常对照组,哮喘模型组小鼠BALF中IL-5、IL-13以及肺组织中的磷酸化p38MAPK表达增强(P0.05)。相比较于小鼠哮喘模型组,朝医补肺元汤低、高剂量组小鼠肺泡灌洗液中的IL-5、IL-13、肺组织磷酸化p38MAPK表达水平显著降低(P0.05)。综上可证明朝医补肺元汤能显著改善哮喘小鼠肺组织的病理学上的改变。结论:朝医补肺元汤显著治疗哮喘的功效密切相关于阻碍哮喘小鼠p38MAPK信号通路的表达。     

黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶和白细胞介素-4表达的影响

目的探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶(p38 MAPK)和白细胞介素-4(IL-4)表达的变化以及黄芪注射液对其影响。方法应用鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入刺激复制大鼠哮喘模型。随机分成3组:正常对照组,哮喘模型组和黄芪干预组。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4含量、肺组织IL-4 mRNA和磷酸化p38 MAPK表达的变化,并观察BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化。结果哮喘模型组大鼠肺组织中IL-4 mRNA、磷酸化p38 MAPK表达水平及BALF中IL-4含量和EOS计数均较正常对照组显著增加(P<0.01);黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低(P<0.01),肺组织病理学损伤程度明显减轻。肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与IL-4 mRNA表达、IL-4含量和EOS计数之间分别呈显著正相关(r=0.71,0.73,0.65,P<0.01)。结论 p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程。黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达和炎症介质IL-4产生有关。     

中药复方对链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号转导通路的影响

目的:观察中药复方对链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号转导通路的影响。方法:将48只BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、模型组、中药组、SB203580组,每组12只。模型组、中药组、SB203580组采用麻醉并破损鼻黏膜滴注一定量肺炎链球菌法建立链球菌性肺炎模型;中药组在造模后以中药复方7.5 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃治疗,2次·d~(-1),SB203580组造模后以SB203580 1mg·kg~(-1)·d~(-1)腹腔注射,1次·d~(-1),共7 d。造模第7天解剖取肺组织,检测各组小鼠肺组织p38MAPK基因及p-p38MAPK蛋白表达水平和TNF-α、IL-6含量变化。结果:中药组小鼠肺组织中p38MAPK基因及p-p38MAPK蛋白表达水平和TNF-α、IL-6含量较正常组高(P0.05),无统计学意义;较模型组低(P0.05),有统计学意义。结论:中药复方能有效抑制链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号通路的活化,控制炎症进程。     

黄芪对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的变化以及黄芪对其影响。方法静脉注射 LPS 复制大鼠 ALI 模型。随机分成3组,即正常对照组、LPS 刺激组和黄芪干预组。采用蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化 p38MAPK 的表达,并观察大鼠动脉血氧分压(PaO_2)、肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)白蛋白、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化以及肺组织病理学改变。结果 LPS 刺激组大鼠肺组织磷酸化 p38MAPK 的表达较正常对照组显著增加(P<0.01)。与LPS 刺激组比较,黄芪干预组大鼠肺组织磷酸化 p38 MAPK 的表达、W/D、BALF 白蛋白以及血清 TNF-α含量显著下降,PaP_2显著上升(P<0.05),肺组织病理学损伤明显减轻。结论 ALI 时肺组织 p38 MAPK 磷酸化表达增加;黄芪注射液对内毒素性肺损伤有保护作用,其机制可能与抑制磷酸化 p38MAPK 的表达有关。     

桦褐孔菌乙醇提取物在小鼠哮喘模型中对p38MAPK信号通路的影响

目的:探讨桦褐孔菌乙醇提取物对哮喘小鼠气道炎症和Thl/Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制.方法:雄性BALB/c小鼠32只随机分成4组,即正常对照组、哮喘模型组和桦褐孔菌乙醇提取物低、高剂量干预组.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4,IL-5,IL-13,IFN-γ含量以及肺组织中磷酸化p38MAPK的变化,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变.结果:哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数,IL-4,IL5,IL-13水平和IFN-γ水平降低;肺组织中磷酸化p38 MAPK表达水平升高,与正常组比较差异显著(P＜0.05).桦褐孔菌乙醇提取物低、高剂量干预组小鼠BALf中炎症细胞计数,Il-4,Il-5,IL-13水平和肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均明显降低,IFN-γ水平明显上升,与哮喘模型组比较均具有显著差异(P＜0.05).桦褐孔菌乙醇提取物处理能明显减轻哮喘小鼠肺组织病理学改变,桦褐孔菌低、高剂量干预组之间比较无显著差异.结论:p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程.桦褐孔菌对哮喘小鼠具有保护作用,其机制可能与抑制p38 MAPK磷酸化、调节IL-4/IFN-γ平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关.     

基于p38 MAPK信号通路探讨苍膝通痹胶囊对KOA大鼠关节软骨的保护作用

目的:观察苍膝通痹胶囊治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:将60只4周龄SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为空白组,模型组,二甲基亚砜(DMSO)组,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组,每组10只。除正常组外,其余各组采用改良Hulth法建立KOA模型,造模成功后,苍膝通痹胶囊组每日给予0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊溶液灌胃,SB203580组每日给予0.015 g·kg~(-1)的SB203580溶液灌胃,苍膝通痹胶囊联合SB203580组组每日给予含0.015 g·kg~(-1)SB203580及0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊的混合溶液灌胃,DMSO组给予1%DMSO溶液灌胃,模型组和空白组给予生理盐水灌胃,用药干预4周后处死、取材。苏木素-伊红(HE)染色观察软骨组织形态学改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血上清液中白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-tine PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨组织中p38 MAPK信号通路中相关因子p38,p-p38,基质金属蛋白酶-13(MMP-13),Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)mRNA及蛋白的表达水平,免疫组化法检测p-p38的定位表达。结果:与正常组比较,模型组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著上调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著下调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著上调(P0.01);与模型组比较,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著下调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著上调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著下调(P0.01)。结论:苍膝通痹胶囊可有效保护KOA大鼠软骨组织,其机制可能与靶向阻断p38 MAPK信号通路有关。     

益气活血方对内毒素诱导内皮细胞炎症反应的干预作用

目的研究益气活血方对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮细胞炎症反应的干预作用。方法体外培养内皮细胞EA. hy926,设为空白对照组、LPS组、益气活血方低剂量组、益气活血方高剂量组、辛伐他汀组、SB203580(p38 MAPK抑制剂)组、SB203580+益气活血方组,药物预处理3 h后加LPS刺激12h,收集上清及细胞,ELISA检测上清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8水平,Western blot检测黏附因子VCAM-1、ICAM-1蛋白表达水平及p38 MAPK蛋白磷酸化水平。结果与空白对照组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-8分泌水平以及VCAM-1、ICAM-1蛋白表达水平升高(P 0. 01),p38 MAPK蛋白磷酸化水平亦明显升高(P 0. 01);与LPS组比较,益气活血方低、高剂量组、辛伐他汀组TNF-α、IL-6、IL-8、VCAM-1、ICAM-1表达水平以及p38 MAPK磷酸化水平明显降低(P 0. 05,P 0. 01);益气活血方组、SB203580组以及益气活血方+SB203580组TNF-α、IL-6、IL-8、VCAM-1、ICAM-1表达水平及p38 MAPK磷酸化水平较LPS组均有明显下降(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方+SB203580组与益气活血方组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论益气活血方通过抑制p38 MAPK活性发挥抗LPS诱导内皮细胞炎症反应之作用。     

三子养亲汤、桃红四物汤单用及联用治疗哮喘大鼠作用的比较

目的 比较三子养亲汤、桃红四物汤单用及联用对哮喘大鼠的作用效果。方法 SD大鼠以卵清白蛋白(OVA)致敏激发复制模型,并予药物进行干预。采用ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中γ干扰素(IFN-γ)、白介素4(IL-4)含量,并用Western Blot法检测肺组织中磷酸化p38蛋白激酶(p38 MAPK)的表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠BALF中IL-4含量明显升高(P ＜ 0.01),IFN-γ含量明显降低(P ＜ 0.01),IFN-γ/IL-4比值下降(P ＜ 0.01);与模型组比较,各药物组IL-4水平下降、IFN-γ水平提高,IFN-γ/IL-4比值升高,差异均有统计学意义(P ＜ 0.05,P ＜ 0.01);化痰活血方组与三子养亲汤及桃红四物汤组比较,差异均有统计学意义(P ＜ 0.05,P ＜ 0.01)。模型组大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达较正常对照组明显增加(P ＜ 0.01),各药物组磷酸化p38 MAPK表达下降,且化痰活血方组与三子养亲汤组、桃红四物汤组比较,差异均有统计学意义(P ＜ 0.05,P ＜ 0.01)。结论 三子养亲汤、桃红四物汤联用组成的化痰活血方对哮喘大鼠的治疗作用优于单用,可能与抑制p38 MAPK磷酸化,调节Th1/Th2平衡有关。     

P38MAPK通路在内皮细胞F-actin蛋白表达中的作用及通络药物的影响

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路在络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)表达中的作用及通络药物保护血管内皮,防治血管病变的作用机制。方法:首先建立络气虚滞型血管内皮功能障碍(VED)大鼠模型,用模型大鼠血清体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞株,实验分为空白对照组、正常血清组、模型血清组、通心络(TXL)组、SB203580组5组。采用Western blot技术检测各组中F-actin、p38、磷酸化p38(phospho-p38)蛋白表达的变化。结果:与空白对照组和正常血清组比较,模型血清组F-actin的蛋白表达明显下调(P0.05),phospho-p38蛋白表达明显升高(P0.01,P0.05);与模型血清组比较,通心络组和SB203580组F-actin的蛋白表达明显升高(P0.01),phospho-p38蛋白表达明显下调(P0.05)。结论:p38 MAPK信号通路的激活可能参与了络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的F-actin蛋白表达的变化及通心络可能通过抑制p38 MAPK信号通路而对内皮功能起保护作用的,这可能是通心络防治血管病变的机制之一。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素的干预研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化中的作用及大黄素的干预效应。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)分为对照组、IL-1β诱导组、IL-1β+SB 203580组和IL-1β+大黄素组。培养48 h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白(CK)、p38MAPK及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况。结果IL-1β可诱导部分NRK52E由卵圆形转变为梭形,同时CK表达减弱,α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达增强。SB 203580阻断p38MAPK通路后可显著抑制IL-1β诱导的细胞形态改变,同时上调CK表达,下调α-SMA及p-p38MAPK的表达。大黄素对IL-1β诱导的细胞形态改变及α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达也有明显抑制作用,其抑制作用与SB 203580的阻断作用相比无显著性差异。结论p38MAPK参与介导IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化过程,大黄素可通过干扰p38MAPK信号通路抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

芪桂益脉灵对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织P38MAPK信号通路的影响

目的:观察芪桂益脉灵(QGYML)对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织p38MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)、P-p38MAPK(磷酸化丝裂原活化蛋白激酶)表达的影响,探讨该药抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法:雄性SD大鼠50只,随机分为5组,正常对照组、假手术组、模型组、芪桂益脉灵高剂量组、低剂量组,分别给生理盐水、QGYML1.2、0.6 g/kg灌胃,每日灌胃给药1次,连续灌胃7 d,结扎/再通冠状动脉左前降支制备急性心肌缺血再灌注模型。取大鼠心肌组织HE染色观察病理形态变化,免疫组化法测定心肌细胞p38MAPK、P-p38MAPK表达。结果:芪桂益脉灵高、低剂量组大鼠心肌组织病理学变化较模型组明显减轻,高剂量组效果更明显。模型组大鼠心肌组织P-p38MAPK表达较其他各组明显增强(P0.05);芪桂益脉灵组P-p38MAPK表达明显减少,与模型组比较具有统计学意义(P0.05),高剂量组效果更显著;各组p38MAPK表达未见明显变化。结论:芪桂益脉灵对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有显著保护作用,抑制p38 MAPK信号通路是其作用机制之一。     

苦参碱对Raji细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨活化的p38MAPK在苦参碱(Matrine,Mat)诱导人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡过程中对Fas/FasL的影响。方法:选用Raji细胞进行体外培养,用苦参碱(终浓度为0.4、0.8、1.6 mg/mL)和在此基础上加入SB203580(p38 MAPK抑制剂)作用48 h后,分别采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率和Western blot检测P-p38MAPK、Fas、FasL蛋白表达的变化。结果:终浓度为0.4、0.8、1.6 mg/mL苦参碱对Raji细胞总凋亡率显著高于SB203580组及对照组(P<0.05或P<0.01);Western blot显示P-p38MAPK、Fas、FasL蛋白表达水平随苦参碱浓度的提高而增加,并且在加入SB203580后降低。P-p38MAPK与Fas、FasL具有明显相关性。结论:苦参碱可能通过活化p38MAPK来上调Fas、FasL的表达,从而促进Raji细胞凋亡。     

麻杏解毒合剂通过p38MAPK/AP-1通路对冠状病毒肺炎模型小鼠炎性因子的调控作用研究

目的 研究麻杏解毒合剂对冠状病毒肺炎模型小鼠炎性因子表达的影响,基于p38MAPK/AP-1通路研究其疗效机制。方法 60只昆明种（KM）小鼠随机分成空白对照组、模型组、p38MAPK抑制剂组及麻杏解毒合剂高、中、低剂量组,每组10只。采用模拟寒湿环境、表达h ACE2的重组腺相关病毒转导、SARS-CoV-2spike假病毒气管内给药建立小鼠冠状病毒肺炎模型。检测各组小鼠血清炎性因子、肺组织病理改变、肺组织p38MAPK、c-jun、c-fos的mRNA水平和蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠血清炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达均显著升高（P <0.01）,肺组织炎性改变明显,c-fos m RNA水平和p-p38、c-fos、c-jun蛋白表达均显著增加（P <0.05）。与模型组比较,麻杏解毒合剂高、中剂量组小鼠血清炎性因子显著降低（P <0.01或P <0.05）,小鼠肺组织炎性损伤明显减轻,同时肺组织中c-fos的mRNA水平和p-p38、...     

黄芩苷通过p38 MAPK/NLRP3通路对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的:观察黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:采用将80只健康雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,黄芩苷低、中、高剂量组,地塞米松组(DEX),SB203580组和黄芩苷+SB203580组(BA+SB203580),每组10只。黄芩苷低、中、高剂量组分别腹腔注射不同剂量(10,50,100 mg·kg^-1)的BA溶液;DEX组腹腔注射5 mg·kg^-1的DEX溶液;SB203580组腹腔注射0.5 mg·kg^-1的SB203580溶液;黄芩苷+SB203580组腹腔注射100 mg·kg^-1的BA溶液和0.5 mg·kg^-1的SB203580溶液;正常组和模型组均注射等体积的生理盐水,每天给药1次,连续7 d,末次给药1 h后,除正常组,其余大鼠均给予气管滴注5 mg·kg^-1LPS构建急性肺损伤模型,正常组大鼠气管滴注等体积的生理盐水溶液,12 h后结束实验,取材。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和中性粒细胞计数;测定肺组织湿/干重比、血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;免疫荧光法检测肺组织中活性氧(ROS)的含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定BALF中细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;免疫组化(IHC)检测p-p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达的定位表达及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中p-p38 MAPK,硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP),NOD样受体蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织出现炎性病理变化,肺湿/干质量,BALF中细胞总数及中性粒细胞数目增高(P<0.01),SOD活性下降(P<0.01),ROS和MDA含量升高(P<0.01),细胞因子IL-1β,IL-18,IL-6,TNF-α和p-p38 MAPK,NLRP3,Caspase-1的表达量均上调(P<0.01)。与模型组比较,黄芩苷组,SB203580组和黄芩苷+SB203580组可有效减轻LPS所致肺组织病理变化,降低肺湿/干质量,BALF中细胞总数及中性粒细胞数目(P<0.05,P<0.01),升高SOD活性(P<0.05,P<0.01),并降低ROS和MDA水平(P<0.05,P<0.01),细胞因子IL-1β,IL-18,IL-6,TNF-α和p-p38 MAPK,NLRP3,Caspase-1的表达量均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩苷可有效保护LPS所致急性肺损伤,其作用机制可能与抑制p38 MAPK/NLRP3信号通路减轻炎症反应有关。     

雪莲强筋壮骨方对膝骨关节炎软骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的影响

目的:探讨雪莲强筋壮骨方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传导通路的影响。方法:将24只3月龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、p38阻断剂组及含药血清组,每组6只。除空白组外,其余各组均采用改良Hulth法行KOA造模。造模成功后含药血清组以雪莲强筋壮骨方水煎剂灌胃(10 g·kg~(-1)),其余各组均以等量生理盐水灌胃,每天2次,连续干预7 d后静脉采血,分别制成10%含药血清和10%空白血清的DMEM培养液保存备用。血清制备完成后处死动物,分离膝关节软骨进行软骨细胞培养。空白组和模型组以空白血清进行干预,p38阻断剂组以空白血清和SB203580进行干预,含药血清组以含药血清进行干预。血清干预结束后,分别采用免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法检测各组软骨细胞磷酸化p38MAPK水平。结果:免疫荧光检测结果显示,模型组磷酸化p38MAPK表达呈强阳性,p38阻断剂组和含药血清组次之,空白组最弱。蛋白免疫印迹检测结果显示,空白组磷酸化p38MAPK表达最弱,模型组磷酸化p38MAPK表达最强,p38阻断剂组和含药血清组磷酸化p38MAPK表达水平相当,介于空白组和模型组之间。经扫描定量检测,空白组、模型组、p38阻断剂组和含药血清组条带的光密度值分别为0.31±0.06、0.83±0.11、0.58±0.45、0.55±0.56,差异有统计学意义(F=3.872,P=0.034)。空白组的光密度值小于模型组、p38阻断剂组及含药血清组(P=0.007,P=0.031,P=0.038);模型组的光密度值大于p38阻断剂组和含药血清组(P=0.038,P=0.028);p38阻断剂组和含药血清组的光密度值比较,差异无统计学意义(P=0.066)。结论:雪莲强筋壮骨方能阻滞KOA软骨细胞p38MAPK信号传导通路,其效果与p38MAPK阻断剂SB203580相当。     

大蒜素对PM2.5诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的探讨PM2.5对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及大蒜素(Allicin)的抑制作用及可能机制。方法采集大气PM2.5并分别以0(空白对照组)、20、100、200、400 mg/L(PM2.5 20、100、200、400 mg/L组)作用小鼠VSMCs 24 h,检测VSMCs增殖情况,一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量和VSMCs中磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;VSMCs分别加入Allicin 5、20、40 mg/L(Allicin 5、20、40 mg/L组)、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580 20μmol/L(SB203580 20μmol/L组)和Allicin40 mg/L与SB203580 20μmol/L(Allicin+SB203580组),检测Allicin的干预作用及机制。结果与空白对照组比较,PM2.5 100、200、400 mg/L组均诱导VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量升高,NO分泌减少(P0.05,P0.01),细胞内p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达增加(P0.05),尤其200 mg/L组效果显著(P0.05,P0.01);与PM2.5 200 mg/L组比较,Allicin 20、40 mg/L组、SB203580 20μmol/L组、Allicin+SB203580组可抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01),VSMCs中p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.05,P0.01);与Allicin 20 mg/L组比较,Allicin+SB203580组可进一步抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01,P0.05),VSMCs中p-p38MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.01)。结论 Allicin可能通过抑制p38 MAPK信号通路,抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖。     

电针“内关”对心肌肥厚模型大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路的影响

目的:探讨电针“内关”穴治疗心肌肥厚的作用机制.方法:SD大鼠40只用随机数字表法分为正常组、模型组、模型+p38抑制剂组、模型十电针组,每组10只.采用皮下注射盐酸异丙肾上腺素3 mg/(kg·d)建立心肌肥厚大鼠模型,模型+p38抑制剂组在造模基础上每日皮下注射0.3 mg/kg p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)特异性抑制剂SB 203580;模型十电针组电针“内关”穴,采用连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电20 min,1次/d,共14 d.其他两组不予治疗干预.放射免疫法技术检测心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量,免疫印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)含量.观察电针“内关”穴对TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK的影响.结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均显著升高(均P＜0.01);经抑制剂和电针处理后,模型+p38抑制剂组和模型十电针组大鼠TNF-α、IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均明显降低,与模型组比较差异有统计学意义(均P＜0.05),与正常组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);模型+p38抑制剂组和模型十电针组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针“内关”可以明显抑制心肌肥厚p38 MAPK的磷酸化,这种保护作用可能通过抑制TNF-α、IL-1β等炎性因子的表达实现对p38 MAPK信号通路调节.     

祛痰活血颗粒对NAFLD模型大鼠脂肪组织AQP7，p38MAPK表达的影响

目的:探讨祛痰活血颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的作用,并探讨其相关的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分成正常组(6只),模型组(34只);除正常组外,采用高脂饮食诱导的方法诱导NAFLD大鼠模型,确认造模成功后,将剩余模型组(30只)随机分为5组,每组6只,分别为模型组,祛痰活血颗粒高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg~(-1)),SB203580组(3 mg·kg~(-1)),分别予以灌胃祛痰活血颗粒及腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580,连续干预4周。苏木素-伊红(HE)及油红O染色观察肝脏病理变化;试剂盒测定血清甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),肝脏TG;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测脂肪组织水通道蛋白7(AQP7)及p38分裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)mRNA表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝脏游离脂肪酸(FFA),脂肪组织AQP7和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,血清TG,TC,AST,ALT和肝脏TG,FFA明显升高,脂肪组织中AQP7 mRNA及AQP7含量表达降低,p38MAPK mRNA及p-p38MAPK含量升高(P0.05);与模型组比较,祛痰活血颗粒和SB203580可减轻NAFLD大鼠肝脏脂肪变性程度;明显降低NAFLD大鼠的血清TG,TC,AST,ALT,肝脏TG,FFA(P0.05);各中药组和SB203580组大鼠脂肪组织AQP7 mRNA和AQP7含量表达明显升高,p38MAPK mRNA和pp38MAPK含量明显降低(P0.05)。结论:祛痰活血颗粒能减轻或者逆转肝脏的脂肪变性,其机制可能与抑制脂肪组织p38MAPK活化、上调AQP7表达,增加甘油入血代谢,减少进入肝脏的FFA,从而降低肝脏TG蓄积有关。     

血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的研究

目的:探讨血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的实验研究。方法:通过酶消化法获得原代子宫内膜细胞,脂多糖(LPS)诱导炎症模型,后实验随机分为5组,正常对照组,模型组(100μg·m L~(-1)LPS),血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组(10、30、100μg·m L~(-1)血府逐瘀胶囊)。MTT法检测各组细胞活力,酶联免疫吸附法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL~(-1)β)、IL-6、IL-8蛋白含量,免疫印迹法检测各组细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9),环氧化二酶(COX-2)蛋白表达量及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平,反转录聚合酶连锁反应检测p38 MAPK mRNA含量。结果:与正常组比较,模型组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8、MMP-9及COX-2蛋白表达量都显著提高(P0.01),p38 MAPK磷酸化水平提高(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著提高(P0.01);与模型组比较,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8水平都显著降低(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著降低(P0.01);血府逐瘀胶囊中、高剂量组中MMP-9及COX-2蛋白表达量及p38 MAPK磷酸化水平下调(P0.01)。结论:血府逐瘀胶囊能显著抑制LPS诱导的子宫内膜细胞炎症,与降低炎症因子表达及p38 MAPK信号通路有关。     

补骨脂素对A375细胞黑素合成的影响及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究补骨脂素对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路的调控作用机制。方法:通过NaOH裂解法、多巴醌氧化法测得黑素含量及酪氨酸酶活性,使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光PCR法测MAPK通路中关键蛋白激酶和MITF、TYPE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38及加入p38信号通路阻断剂后上述蛋白及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达。结果:补骨脂素具有类雌激素样作用,其与空白对照组比较能抑制细胞黑色素含量和酪氨酸酶活性,显著降低MITF、TYRE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38蛋白表达及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达(P0.01)。而p38信号通路阻断剂(SB203580)的加入反转了补骨脂的抑制作用。结论:补骨脂素可通过p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素生成。