氟伐他汀抑制高糖诱导足细胞发生上皮—间叶细胞转分化

目的探讨他汀类药物保护高糖诱导的糖尿病肾小球损伤的可能机制。方法给予25mmol／L葡萄糖刺激的同时给予不同浓度的氟伐他汀处理分化后的足细胞36h。采用蛋白免疫印迹法检测旷平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维粘连蛋白（FN）、CD2相关蛋白（CD2AP）和Wilms肿瘤1基因（WT-1）蛋白的表达;间接免疫荧光法检测α-SMA。结果低糖（5．6mmol／L）条件下小鼠足细胞表达高水平的WT-1、CD2AP,基本不表达α-SMA和FN;予25mmol／L葡萄糖作用36h后,足细胞中α-SMA和FN表达水平升高,同时WT-1和CD2AP表达水平降低。在高糖条件下给予不同浓度的氟伐他汀处理,结果表明氟伐他汀可部分逆转高糖的上述作用,且存在一定的剂量依赖性。结论氟伐他汀可在一定程度上抑制高糖诱导的足细胞发生向间叶细胞表型的转分化。     

足细胞向间充质细胞转分化的研究

<正>肾脏纤维化是各种慢性肾脏病(CKD)的最终归宿和必然结局[1],其发生机制尚不清楚。近年研究显示,已分化上皮细胞向间充质细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),是合成细胞外基质(ECM)的成纤维细胞与肌成纤维细胞来源的重要途径。最初EMT概念源于胚胎发育和肿瘤转移[2],然而其在肾脏纤维化进展中也扮演了重要角色[3]。     

厄贝沙坦通过核转录因子κB信号通路减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡的研究

目的探讨厄贝沙坦通过抑制核转录因子κB(NF-κB)的表达减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。方法将H9C2细胞分为:对照(Con)组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、二甲基亚砜(DMSO)组(5.5 mmol/L葡萄糖+1‰二甲基亚砜)、高糖(HG)组(33 mmol/L葡萄糖)、厄贝沙坦(Ir)组(33 mmol/L葡萄糖+1μmol/L厄贝沙坦),每组3个细胞。检测细胞增殖抑制率;IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TNF-α、Bax、Bcl-2 mRNA;核转录因子κB(NF-κB)、caspase-3蛋白表达及细胞凋亡率。结果 Ir组低于高糖诱导的Bax[(50.31±2.18)vs(61.96±4.08)]、IL-6[(7.67±1.53)vs(25.33±4.16)]、MCP-1[(26.67±6.11)vs(43.33±3.06)]、TNF-α[(35.33±3.06)vs(44.67±4.16)]、NF-κB[(2.19±0.52)vs(3.58±0.53)]及caspase-3[(2.28±0.10)vs(2.86±0.12)]表达及细胞凋亡[(10.73±1.78)vs(16.46±2.24)],差异均有统计学意义(P0.05);上调高糖抑制的Bcl-2[(0.62±0.04)vs(0.45±0.06)]的表达(P0.05)。结论厄贝沙坦通过NF-κB信号通路,可减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。     

核因子κB通路参与缺氧诱导心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α

目的:探讨缺氧刺激能否诱导体外培养心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α),核因子κB(NF-κB)通路是否参与其中,并发挥调节作用。方法:1%O2物理缺氧刺激原代SD大鼠乳鼠心肌细胞,在不同时间点Real-time PCR检测TNF-αmRNA水平;ELISA检测培养上清中TNF-α蛋白水平;Western blot检测胞质NF-κB相关通路蛋白IKKα,IKKβ,IKKBα蛋白及磷酸化蛋白水平以及胞核NF-κB p65蛋白表达;电泳迁移率实验检测NF-κB DNA结合能力。缺氧同时给予NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)刺激心肌细胞,检测细胞核p65蛋白表达,TNF-αmRNA及蛋白水平。结果:缺氧诱导原代心肌细胞表达TNF-α,TNF-αmRNA水平从缺氧1h开始升高,12h及24h达峰值;其蛋白分泌从缺氧6h开始升高,12h和24h达峰值。缺氧激活NF-κB通路:缺氧5min胞质pIKKα/IKKβ表达开始上调,30min达峰值,持续6h;IKKBα表达缺氧5min开始降低,而pIKKBα缺氧30min开始增加;胞核p65蛋白水平缺氧5min上调,1h达峰值,持续6h;NF-κB DNA结合能力缺氧5min后开始增强。PDTC抑制NF-κB活性,有效抑制TNF-αmRNA及其蛋白表达。结论:缺氧通过激活NF-κB通路,诱导心肌细胞自分泌TNF-α,NF-κB在缺氧诱导心肌细胞自分泌TNF-α过程中起正向调节作用。     

高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞转分化的作用

目的:观察高糖对体外培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)功能以及与成骨细胞转分化相关蛋白表达的变化,探讨糖尿病血管病变的可能细胞/分子发病机制. 方法:用组织贴块法建立SD大鼠胸主动脉VSMCs的体外培养技术;高糖(葡萄糖浓度:50 mmol/L)作用该细胞,设相同浓度甘露醇为对照组,观察在不同的培养时间下(3、12h和第3、6、9、12d),采用免疫蛋白印迹法和间接免疫荧光法分别检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和成骨细胞特异性核转录因子(core-binging factor α-1,Cbfα-1/RUNX2)的表达.细胞钙沉积含量测定观察培养细胞钙盐的沉积. 结果:组织贴块法培养的大鼠原代胸主动脉VSMCs呈梭型,α-SMA表达强阳性;高糖作用12h,VSMCs的Cbfα-1表达明显上升;高糖作用9d后,VSMCs的α-SMA表达量较高糖作用前降低近90%;免疫荧光染色显示VSMC细胞呈低强度的α-SMA染色阳性;同时,高糖作用下的VSMCs能够检测到OPN蛋白的表达,与对照组相比差异显著;高糖作用下细胞钙沉积含量明显增加. 结论:持续的高糖作用能够使动脉VSMCs发生向类似成骨样细胞的转分化,提示高糖诱导的VSMCs转分化可能参与糖尿病血管病变的发生发展.     

核因子-κB信号通路与动脉粥样硬化

目前研究认为动脉粥样硬化是慢性炎症性疾病，NF-κB／IκB信号通路在调控炎症反应起着重要作用，研究发现NF—κB／IκB信号通路的异常激活与动脉粥样硬化疾病的发生、发展有密切关系。抑制NF—κB／IκB信号通路的活化，可望为动脉粥样硬化的防治开辟一条新的途径。本文就近年来NF—κB／IκB信号通路与动脉粥样硬化研究进展做一复习。     

迷迭香酸通过核转录因子-κB信号通路对抗谷氨酸诱导PC12细胞损伤

目的观察迷迭香酸(RA)对抗谷氨酸诱导的PC12细胞损伤发挥神经保护作用,探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法将培养细胞分为对照组、损伤组(16 mmol/L谷氨酸)、RA1组(30μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)、RA2组(60μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)。采用MTT法检测细胞活力;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态的改变,碘化丙啶染色流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达水平的变化。结果不同浓度谷氨酸(0、4、8、12、16、20 mmol/L)作用PC12细胞24 h后,细胞存活率呈剂量依赖性下降。与损伤组比较,RA1组和RA2组细胞存活率明显升高(P<0.05)。16 mmol/L谷氨酸作用PC12细胞1 h后,细胞质中IκBα蛋白和NF-κB p65蛋白表达明显减少,p-IκBα蛋白表达明显增加,NF-κB p65蛋白在细胞核中表达明显增加,2 h达到高峰;给予30、60μmol/L RA预处理1 h后,能抑制NF-κB p65蛋白活化进入细胞核。结论 RA通过抑制NF-κB信号通路的活化,对谷氨酸诱导损伤的PC12细胞有保护作用。     

核因子-κB活化抑制增强高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡

目的　研究地塞米松 (DXM)和长春新碱 (VCR)对高三尖杉酯碱 (HH)诱导白血病细胞凋亡与核因子 κB (NF κB)活化的影响。方法　采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、DNA电泳方法观察HH诱导K5 6 2 n细胞凋亡 ,采用电泳迁移率变动分析 (EMSA)观察HH诱导K5 6 2 n细胞NF κB活化。结果　用 (0 5、5、5 0 ) μmol/L的HH均能诱导K5 6 2 n细胞凋亡率分别为 (30 0 0± 3 34,4 7 13± 3 18,6 8 6 3± 8 14 ) % ,与对照组相比 ,有良好的浓度依赖关系 (P <0 0 5 ) ;DXM 1μmol/L和VCR 0 1μmol/L本身无诱导K5 6 2 n细胞凋亡的作用 ,但均能增强HH 0 5μmol/L诱导的K5 6 2 n细胞凋亡 ,凋亡增加率分别为 85 8%和 114 6 % (P值均 <0 0 5 )。K5 6 2 n细胞未经药物诱导NF κB也有轻度活化 ;HH 0 5 μmol/L可明显诱导K5 6 2 n细胞NF κB活化 ,DXM 1μmol/L和VCR 0 1μmol/L能显著抑制HH 0 5 μmol/L诱导的NF κB活化 ,抑制率分别为 32 0 %和39 4 % (P值均 <0 0 5 )。结论　HH诱导K5 6 2 n细胞凋亡的同时激活NF κB ;DXM和VCR可通过抑制NF κB活化 ,增强其诱导K5 6 2 n细胞凋亡的作用。     

糖尿病肾病与核因子-κB信号通路

糖尿病肾病的病理生理机制与核因子-κB（NF-κB）信号通路密切相关,NF-κB及其相关基因作为一种转录因子调节众多基因的表达,参与糖尿病肾病的发生发展,因此,作用NF-κB信号通路可以作为治疗糖尿病肾病的一个研究方向。现将两者关系作以下综述。     

核因子κB信号通路在肺癌中的作用

核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是调控多种基因表达的核转录因子,其活化失调不仅与各种炎症性疾病有关,而且在肺癌的发生、发展、转移及治疗中也发挥着重要的作用.近年来研究发现,NF-κB可能是抗癌药物治疗的靶点,为肺癌等恶性肿瘤的治疗提供了新思路.     

罗格列酮对脂多糖诱导的核因子-κB信号转导通路的影响

本研究通过对小鼠内毒素脂多糖(LPS)急性肝损伤动物模型应用过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR γ)的特异忡激动剂罗格列酮,探讨其对LPS诱发的急性肝损伤中肝脏核因子(NF)-κB信号转导通路方面的影响.     

罗格列酮对高糖诱导的系膜细胞核因子-κB活性及细胞间黏附分子1表达的影响

目的探讨罗格列酮对高糖诱导的大鼠系膜细胞表达细胞间黏附分子1(ICAM-1)的影响及其可能机制。方法采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG 不同浓度罗格列酮培养大鼠系膜细胞。以RT-PCR检测ICAM-1 mRNA的表达,采用ELISA检测培养细胞上清中ICAM-1蛋白的浓度。采用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的活性。结果HG组ICAM-1/GAPDH吸光度是NG组的2.9倍(P<0.01)。5μmol/L及20μmol/L罗格列酮均可显著抑制ICAM-1 mRNA的表达。HG刺激系膜细胞1 h可使NF-κB活性增强2.5倍(P<0.01),高糖诱导的NF-κB的活化可被罗格列酮(20μmol/L)所抑制(0.8±0.2vs2.5±0.3,P<0.01)。结论罗格列酮可通过抑制NF-κB信号传导途径降低高糖诱导的系膜细胞ICAM-1的表达。     

NF-κB及JNK通路与高糖下内皮细胞凋亡

高糖在内皮细胞功能异常尤其是凋亡中起重要作用,高糖诱导的活性氧簇增加参与NF-κB和JNK通路激活,经半胱天冬酶-3促进细胞凋亡的发生.NF-κB与JNK通路间存在密切联系,NF-κB使JNK磷酸化激活从而形成如下凋亡通路:高糖-活性氧簇-NF-κB-JNK-半胱天冬酶-3-凋亡,但NF-κB和JNK通路引起高糖下内皮细胞凋亡的机制还不完全清楚,两通路间的确切联系也有待进一步阐明.     

NF-κB及JNK通路与高糖下内皮细胞凋亡

高糖在内皮细胞功能异常尤其是凋亡中起重要作用,高糖诱导的活性氧簇增加参与NF-κB和JNK通路激活,经半胱天冬酶-3促进细胞凋亡的发生。NF-κB与JNK通路间存在密切联系,NF-κB使JNK磷酸化激活从而形成如下凋亡通路:高糖-活性氧簇-NF-κB-JNK-半胱天冬酶-3-凋亡,但NF-κB和JNK通路引起高糖下内皮细胞凋亡的机制还不完全清楚,两通路间的确切联系也有待进一步阐明。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠梗死心脏核因子κB活性的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞对心肌梗死的治疗效果,以及心肌梗死后炎症因子表达的影响,探讨其治疗心肌梗死的可能机制.方法 提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养、纯化扩增.采用结扎冠状动脉前降支方法复制大鼠心肌梗死模型,将建立的模型随机分为:1)假手术组(仅穿线不结扎血管,n=8);2)PBS溶液注射组(n=8);3)干细胞移植组(n=8).模型制作成功即刻,将骨髓间充质干细胞通过心外膜分4点注射到梗死周边部位.4周后测定血流动力学指标.随后通过Western blot方法测定核因子κB活性,RT-PCR和westernblot法测定肿瘤坏死因子α、白介素6 mRNA和蛋白表达.结果 1)4周后,假手术组大鼠死亡率20%(2/10),治疗阴性对照组大鼠死亡率33.3%(4/12),干细胞移植组大鼠死亡率20%(2/10),3组死亡率没有统计学差异(P=0.646);2)与注射PBS溶液相比,骨髓间充质干细胞移植可以改善心肌梗死大鼠血流动力学指标;3)骨髓间充质干细胞可以抑制大鼠梗死心肌核因子出活性,下调肿瘤坏死因子α和白介素6 mRNA和蛋白表达水平.结论 骨髓间充质干细胞可以改善心肌梗死大鼠的心功能,同时可调节大鼠梗死心脏炎症反应.     

系统性红斑狼疮B细胞中CD154诱导转录因子NF-κB核转移异常的研究

目的对配体CD154在系统性红斑狼疮(SLE)患者B淋巴细胞中刺激转录因子NF-κB核转移的异常进行研究.方法分离正常人对照、SLE患者外周血B淋巴细胞及扁桃体生发中心B淋巴细胞,并以后者为参照,观察与正常人对照相比,SLE外周血B淋巴细胞中CD154和抗CD154抗体对NF-κB核转移或基础活化的影响.结果①正常人外周血B细胞CD154刺激主要诱导NF-κB亚单位p50、p65及c-Rel进入细胞核,而SLE外周血B细胞与扁桃体B细胞相似,刺激前细胞核内功能性p50和c-Rel基础值即高于正常人对照,CD154刺激只进一步诱导p65进入细胞核;②抗CD154抗体可抑制SLE外周血CD154高表达的B细胞核中p65和c-Rel的基础活化值,亦与扁桃体B细胞相似.结论与正常人对照相比,SLE外周血B淋巴细胞中CD154诱导NF-κB核转移存在显著异常,类似生发中心表型.     

槲皮素通过抑制核因子-κB表达诱导A549细胞凋亡

目的观察槲皮素对人肺腺癌A549细胞核因子(NF)-κB信号通路的影响,探讨其诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用机制。方法体外培养A549细胞,实验分为槲皮素组(给予终浓度为30μg/ml槲皮素)、顺铂组(给予终浓度为3μg/ml顺铂)及对照组〔给予等体积二甲基亚砜(DMSO)〕。采用ELISA法检测Caspase-3浓度;采用免疫组化荧光染色检测PARP裂解片段阳性细胞荧光强度;采用Western印迹分析检测NF-κB蛋白的相对表达强度。结果槲皮素可明显升高Caspase-3浓度、增强多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)裂解片段阳性细胞荧光强度、抑制NF-κB的表达,与对照组差异显著(P0.05,P0.01)。结论槲皮素可通过抑制NF-κB表达而诱导A549细胞凋亡,可能是其抗NSCLC的机制之一。     

核因子—κB的研究现状

自 198 6年发现核因子 κＢ(ＮＦ κＢ)以来 ,由于在炎症性疾病中的特殊作用 ,引起了人们的广泛兴趣。ＮＦ κＢ是在进化学上高度保守的一种转录因子。广泛存在于各种组织中 ,并调节多种前炎症介质的表达。1　ＮＦ κＢ/ＲＥＬ的生物学特性ＮＦ κＢ亚单位克隆已经揭示其内部有一个保守的中心区域 ,Ｒｅｌ同源结合域。内含ＤＮＡ结合区 ,二聚体化区和核定位序列 ,分别负责ＤＮＡ结合 ,二聚体化和与ＩκＢ家族成员相互作用以及携带核定位信号 (ＮＬＳ)。在哺乳动物中ＮＦ κＢ/Ｒｅｌ家族有 5个多肽链亚基 ,Ｐ5 0 /Ｐ10 5 ,Ｐ65 /ＲｅｌＡ ,…     

核因子κB的信号转导机制及研究策略

核因子кB(nuclear factor of кB,NF-кB)是一种广泛存在的转录因子,几乎每个真核细胞中都存在NF-κB,不同的刺激信号激活该转录因子后,参与相应的基因表达的调控,如细胞的生长、分化、凋亡、炎症反应、肿瘤发生等[1-2].由于其广泛的生物学活性,对NF-кB的研究为阐明某些疾病的发病机制及治疗具有重要的意义.     

高糖环境对肾系膜细胞NF-κB/IκB通路的影响及其调控机制

探讨高糖对肾系膜细胞IκB-α mRNA和IKB-α、NF-κB p65蛋白表达和NF-κB p65核转位的影响及作用途径.结果发现高糖促进IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,特异性泛素-蛋白酶体阻断剂MG132可明显逆转高糖导致的IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,提示高糖可通过泛素-蛋白酶体途径导致NF-κB信号通路的活化.