线性探针检测技术对痰标本中耐药结核分枝杆菌快速检测的应用评价

目的评价线性探针检测技术(LPAs)直接从痰标本中检测结核分枝杆菌复合群及其对耐多药结核病的快速检测。方法连续收取193例临床涂片抗酸染色阳性的痰标本,直接用LPAs法从痰标本中进行结核分枝杆菌复合群及其对利福平和异烟肼耐药性的检测,结果与MGIT960系统药物敏感性试验以及利福平、异烟肼耐药相关基因rpoB、katG、inhA和ahpC的基因测序结果进行比较,评价线性探针检测技术从痰标本中检测耐药结核分枝杆菌的灵敏度、特异度和符合率。统计学分析采用kappa检验。结果 LPAs法对涂阳痰标本结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度为100.0%,耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度分别为96.0%(48/50)、92.8%(64/69)和90.0%(45/50),特异度分别为99.3%(142/143)、100.0%(124/124)和99.3%(142/143),符合率分别为98.4%(190/193)、97.4%(188/193)和96.9%(187/193)。结论 LPAs法能够直接从涂阳痰标本中检测耐多药结核分枝杆菌,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的灵敏度和特异度,与MGIT960系统药物敏感性试验结果的一致性较好,能够明显缩短从样本接收到得到药物敏感性试验结果的报告周期,为临床准确、快速地诊断耐多药结核病提供可靠的实验室依据,有利于耐药结核病的早期诊断。     

线性探针技术在四川地区结核分枝杆菌耐药检测中的应用评价

目的评估线性探针技术(LPA)在四川地区结核分枝杆菌耐药检测中的应用价值。方法对2014-04收集的297例分枝杆菌分离培养物进行传统比例法药敏实验和线性探针检测,分析线性探针技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药性及MDR-TB的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、一致性及Kappa值。结果以传统比例法药敏为金标准,线性探针技术检测利福平耐药情况的灵敏度为90.00%,特异度为96.08%,阳性预测值为78.26%,阴性预测值为98.39%,一致性为95.25%,Kappa值为0.81;检测异烟肼耐药情况的灵敏度为85.00%,特异度为97.87%,阳性预测值为91.07%,阴性预测值为96.23%,一致性为95.25%,Kappa值为0.85;检测MDR-TB的灵敏度为88.46%,特异度为97.40%,阳性预测值为76.67%,阴性预测值为98.87%,一致性为96.61%,Kappa值为0.80。利福平耐药菌株中,rpoB主要突变位点为531、526和516,异烟肼耐药菌株的主要突变位点为katG S315T1。结论线性探针技术能够快速准确的检测利福平、异烟肼的药物敏感性,有利于耐多药结核病的快速筛查和诊断。在基层应用时应加强管理和人员培训。     

HAIN技术快速检测耐药结核病及耐多药结核病效果评价

目的评价线性探针(HAIN)技术快速检测耐药结核病及耐多药结核病(MDR-TB)的临床应用效果。方法应用HAIN技术和传统比例法药敏试验(简称"药敏法")检测300株结核分枝杆菌临床分离株的耐药性,以药敏法结果为金标准,分析HAIN技术对诊断耐药结核病及耐多药结核病的特异性、敏感性和符合率。结果 HAIN技术检测与药敏法检测临床毒株耐药率和耐多药率结果差异均无统计学意义(P值均>0.05)。HAIN技术检测菌株对利福平耐药性的敏感性、特异性和符合率分别为96.30%、99.20%和99.33%;对异烟肼耐药性的敏感性、特异性和符合率分别为97.47%、99.09%和99.33%;对MDR-TB耐药性的敏感性、特异性和符合率分别为92.86%、99.27%和99.33%。HAIN技术检测时间一般为≤6h,药敏法为4~6w。结论 HAIN技术能够快速检测耐药、耐多药结核病,可在有条件的实验室进行推广。     

线性探针耐药技术对两种方法培养的结核分枝杆菌药敏结果差异评价

目的比较BACTEC MGIT 960液体培养法和比例法培养出的结核分枝杆菌(MTB)对利福平(RFP)和异烟肼(INH)药敏结果的符合性,探讨不同方法下药敏结果不一致的原因和线性探针耐药技术对临床诊断的价值。方法从378例临床分离结核分枝杆菌中筛选出29株两种方法药敏结果不一致菌株,再用线性探针耐药检测技术检测MTB对RFP和INH耐药相关的rpoB、katG和inhA基因8个位点的基因突变判断其耐药性,比较三者结果的符合率。结果 BACTEC MGIT 960液体法和比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP、INH耐药性符合率分别为89.1%和88.9%;线性探针耐药法和BACTEC MGIT 960液体法对RFP、INH耐药性符合率分别为100.00%和94.44%;线性探针耐药法和比例法和对RFP、INH耐药性符合率分别为87.5%和82.35%;线性探针耐药法分析29株MTB中发现有12株可能存在异质性耐药。结论线性探针耐药法和BACTEC MGIT 960液体法对RFP、INH耐药性符合率明显高于线性探针耐药法和比例法;线性探针耐药检测技术比表型耐药更具精确、快速、敏感性高的特点,对结核分枝杆菌的耐药监测和早期治疗方案的确立具有重要意义。     

PCR-线性探针杂交酶显色法在结核病诊断与耐药性检测中的应用研究

目的对比PCR-线性探针杂交酶显色法(简称线性探针法)与BACTEC MGIT960液体培养及药敏在结核分枝杆菌检出率的差异,评价两种方法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的应用效果。方法选取医院结核科2013年8月-2015年5月369例确诊及疑似结核病的住院患者送检标本,同时采用线性探针法和BACTEC MGIT960对其进行结核分枝杆菌及利福平和异烟肼耐药性检测,数据采用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果线性探针法检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的灵敏度为90.4%、特异度为97.3%、Kappa值为0.872;对异烟肼耐药性检测的灵敏度为86.6%、特异度为96.3%、Kappa值为0.841,两种方法在利福平和异烟肼耐药性检测中具有较好的一致性。结论 PCR-线性探针杂交酶显色法是一种快速、准确的结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼耐药性的诊断方法,对耐多药结核病的快速诊断具有显著的优点。     

MTBDR-Plus线性探针技术检测耐多药结核病效果评价

目的评估线性探针技术(MTBDR-Plus)快速筛查耐多药结核病的可靠性和应用价值。方法对230例涂片阳性肺结核患者痰液标本进行线性探针技术检测耐异烟肼、耐利福平菌株,同时进行酸性罗氏培养和比例法药物敏感性试验结果相比较。结果两种方法检测对RFP均敏感者213例,均耐药者12例,二者结果一致率97.8%(225/230);对INH均敏感者205例,均耐药18例,二者结果一致率97.0%(223/230)。MTBDRPlus技术检测耐利福平的灵敏度为80.0%(12/15),耐异烟肼的灵敏度为'78.3%(18/23),耐利福平特异度为99.0%(213/215)、耐异烟肼特异度为99.0%(213/215)。结论线性探针技术检测时间短,敏感度高,特异性强,是快速检测耐多药结核病的有效诊断方法。     

PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的:建立PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变。方法:用比例法筛选出70株耐利福平结核分枝杆菌临床分离株,用PCR-SSCP方法检测菌株ropB基因突变,并与比例法检测结果进行对比。结果:70株耐利福平菌株中,单耐利福平菌株为12株,同时耐福平和异烟肼菌株为58株。扩增菌株rpoB基因,70株结核分枝杆菌临床分离株ropB基因突变率为91.43%(64/70),其中,耐多药菌株ropB基因突变率为91.38%(53/58),单耐利福平菌株ropB基因突变率为91.67%(11/12)。结论:用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性所用时间大幅缩短,检测出的结果与传统方法一致率高,但结核分枝杆菌表型耐药菌株,存在rpoB基因位点无突变的现象,是否存在其他耐药位点或耐药机制,值得深入研究。     

应用线性探针方法快速检测结核分枝杆菌耐药性的效果评价

目的评估线性探针方法快速检测结核分枝杆菌的耐药性效果。方法选取2013年-2014年江西省耐药监测点分离培养的阳性菌株,收集菌体,提取DNA,采用MTBDRplus试剂盒进行检测,以国际标准的比例法检测结果作为对照,评价其敏感度及特异度,并分析突变分布情况。结果检测利福平耐药的灵敏度为93.33%,特异度为98.35%;检测异烟肼的灵敏度为76.31%,特异度为98.83%。耐利福平基因突变频率最高的位点为rpo B H531L(57.89%),耐异烟肼基因突变频率最高的位点是kat G S315T1(60.61%)。结论可利用MTBDRplus快速检测利福平和异烟肼的耐药性,是快速发现耐药结核分枝杆菌的有效方法。     

乐山市应用线性探针法快速检测耐药结核病研究

目的评价线性探针法在四川省乐山市结核耐药性检测中的应用效果。方法收集2017-04/2019-02乐山各县区疾控中心结核病实验室痰培养获得的270株结核菌株作为研究对象,同时采用线性探针法和标准方法比例法检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药情况,采用一致性检验和χ2检验进行分析,计算Kappa值评价线性探针法和比例法结果的一致性,以P0.05为差异具有统计学意义。结果 270株结核菌株标本中,使用线性探针法检测异烟肼耐药性的灵敏度为84.00%,特异度为97.54%,阳性预测值为77.78%,阴性预测值为98.35%,Kappa值为0.79;对利福平耐药性的灵敏度为95.83%,特异度为96.34%,阳性预测值为71.88%,阴性预测值为99.58%,Kappa值为0.80;对耐多药结核的灵敏度为80.00%,特异度为98.03%,阳性预测值为80.00%,阴性预测值为98.81%,Kappa值为0.73。与标准方法比例法相比,两者具有高度的一致性。结论线性探针法具有高度的特异性和敏感性,且高效、快速,能有效的弥补标准方法的不足,为乐山市耐药结核病的早发现、早治疗提供了有力的保障。     

DNA芯片联合检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌及其临床应用

目的 开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变的DNA芯片.方法 根据结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果 .结果 35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果 与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外.结论 用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测.     

肺结核患者结核杆菌耐药情况及耐多药结核病的危险因素

目的 明确肺结核患者的耐药情况，探索耐多药结核病（MDR-TB）的危险因素，为MDR-TB的防治提供依据。方法 收集肺结核患者468例，分为初治患者365例和复治患者103例。采用比例法检测结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性。应用单因素及多因素logistic回归分析MDR-TB发生的危险因素。结果 468例患者的总耐药率、耐多药率和广泛耐药率分别为25.85%、11.97%、3.21%。复治患者总耐药率（49.51%）、耐多药率（34.95%）和广泛耐药率（10.68%）高于初治患者（分别为19.18%、5.48%、1.10%），差异均有统计学意义（P<0.05）。6种抗结核药中，总体耐药顺位由高至低依次为：异烟肼（INH） > 利福平（RFP） > 氧氟沙星（OFX） > 乙胺丁醇（EMB） > 链霉素（SM） > 卡那霉素（KM）。单因素及多因素logistic回归分析显示，居住农村（OR=2.316，95% CI：1.604~5.118）、复治（OR=6.150，95% CI：4.728~13.824）、有结核空洞（OR=3.219，95% CI：2.405~8.627）、治疗过程中断（OR=5.826，95% CI：4.610~12.507）及首次治疗未联合用药（OR=2.508，95% CI：1.813~5.646）是MDR-TB的危险因素。结论 肺结核患者耐药率较高，影响MDR-TB发生的危险因素较多，需积极采取干预措施，控制MDR-TB的发生。     

结核分枝杆菌利福平分子药敏结果与其表型药敏差异的研究

目的 分析结核分枝杆菌利福平耐药的分子药敏(Xpert MTB/RIF)检测与在表型药敏(Bactec MGIT 960)检测结果不一致的机制。 方法 从2015年10月－2018年4月在长沙医学院第一附属医院进行 Xpert MTB/RIF 检测的8 274位患者中筛选出 Xpert MTB/RIF 检测利福平耐药而 Bactec MGIT 960 利福平敏感的患者39例,以及Xpert MTB/RIF 检测利福平敏感而 Bactec MGIT 960 利福平耐药的患者7例,共46例患者标本复苏其分离株,然后提取基因组DNA并进行rpoB的利福平耐药决定区域(rifampicin resistance determining region, RRDR)测序,同时对所有复苏的分离株进行最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)测定,观察不同突变菌株的耐药程度。 结果 46例患者中有2例菌株复活失败、2例菌株丢失,剩下42例菌株完成测序,其余有5株菌株RRDR区未发生突变,剩余的37株在rpoB基因的RRDR区有不同位点及不同类型的变异,其中有2株在508和509位点发生缺失突变,其它突变的位点有511、516、526、531、533。多数突变位点集中在526位,突变类型包括His526Asn、His526Leu、His526Gly、His526Cys四种,其余位点突变形式为Leu511Pro、Asp516Tyr、Leu533Pro。在511、516、526、533位点突变中,MIC测定除了一株突变类型为His526Leu的菌株为32 μg/ml外,其余位点突变均表现为低水平耐药或敏感,而531位点突变中Ser531Trp、Ser531Leu均表现为高水平耐药。 结论 基于rpoB测序和MIC测定的结果显示特定rpoB基因突变可能导致结核分枝杆菌利福平耐药水平的改变,结核分枝杆菌利福平耐药(Xpert MTB/RIF)检测与(Bactec MGIT 960)检测结果不一致。     

结核分枝杆菌临床分离株耐药性分析

[目的]了解肺结核分枝杆菌耐药性特点,为临床用药提供参考。[方法]收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,获取培养阳性标本136份,采用绝对浓度间接法试验对全部培养阳性标本进行4种抗结核药物(RFP、INH、SM、EMB)的耐药性测定。[结果]总耐药率62.5%(85),初始耐药率47.1%(40),初始耐多药率31.8%(27),获得性耐药率88.2%(45),获得性耐多药率58.8%(30)。耐药顺序为RFP﹥INH﹥SM﹥EMB,耐药率分别为:51.5%,48.5%,26.5%,19.9%。[结论]本地结核菌耐药率远远高于全国平均耐药率(46%),因此应加强抗结核药物的耐药性监测,根据药敏结果选择有效化疗方案,彻底治疗结核病人。     

基因芯片法与线性探针法对痰标本中结核分枝杆菌检测的应用价值

目的探讨基因芯片法与线性探针法检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)的应用价值。方法海南医学院第二附属医院2018年3—7月门诊和住院的106例疑似肺结核患者纳入研究,采用基因芯片法、线性探针法对患者送检的痰进行检测,并与改良罗氏培养法进行比较;以比例法药敏试验为金标准,分析上述两种方法检测利福平和异烟肼耐药性的效能。结果对106份痰标本进行改良罗氏培养,阳性率为52.83%(56/106),经鉴定其中46份标本为MTB阳性。基因芯片法和线性探针法分别检出MTB46、53株,基因芯片法、线性探针法与改良罗氏培养法检测MTB结果比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对利福平的耐药性比较,差异均无统计学意义,且具有较好一致性(均P0.05,均Kappa0.75)。对利福平的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为84.62%、90.00%,线性探针法分别为84.62%、85.00%。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对异烟肼的耐药性比较,差异均无统计学意义,但一致性一般(均P0.05、均Kappa0.75)。对异烟肼的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为69.23%(18/26)、95.00%(19/20),线性探针法分别为65.38%(17/26)、85.00%(17/20)。结论基因芯片法和线性探针法均可准确、快速地从大部分疑似结核病患者的痰标本中鉴定出MTB,也适用于利福平和异烟肼耐药结果的快速检测,从而指导临床用药,值得临床推广。     

上海市奉贤区结核杆菌耐药性分析

[目的 ]　了解初治和复治肺结核病人对抗结核化学药物的敏感性。　 [方法 ]　收集 2 0 0 2年 1月至 2 0 0 3年7月痰菌阳性标本 ,用改良罗氏培养基绝对浓度法试验 ,最终获取培养阳性标本 2 14份 ,对全部培养阳性标本进行 5种抗结核药物 (SM、INH、PAS、EMB、RFP)的耐药性测定。　 [结果 ]　总耐药率为 3 9.2 5 % ( 84/2 14 ) ;初始耐药率为 11.83 %( 11/93 ) ,初始耐多药率为 7.5 3 % ( 7/93 ) ;获得性耐药率为 60 .3 3 % ( 73 /12 1) ,耐多药率为 47.93 % ( 5 8/12 1)。对抗结核药物的耐受 ,主要是耐受SM ( 75 .0 0 % ,63 /84)和INH( 63 .10 % ,5 3 /84)。　 [结论 ]　获得性耐药率高于初始耐药率 ,应进一步加强对结核杆菌药物敏感性监测。     

结核分枝杆菌Lsr2蛋白原核重组表达及其多克隆抗体制备

目的 利用原核系统获得重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备抗Lsr2多克隆抗体。 方法 以临床标准株 H37Rv DNA为模板,合成引物PCR扩增Lsr2核酸序列,插入原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,柱上复性纯化后,重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备并纯化抗Lsr2多克隆抗体,采用间接ELISA和Western-blotting实验对抗体进行验证。 结果 成功构建pET28a-Lsr2表达质粒,重组蛋白Lsr2经SDS-PAGE电泳鉴定分子量为14 kD。亲和层析及柱上复性后,纯化的重组蛋白纯度在95%左右。制备的抗Lsr2多克隆抗体效价在1:5.5×10⁶以上,并能特异性识别纯化的重组蛋白和结核分枝杆菌菌体蛋白。 结论 成功在原核系统内表达并纯化了重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备了高效价的抗Lsr2多克隆抗体,为进一步研究Lsr2蛋白的功能,筛选其下游相互作用蛋白以及相关分子机制研究奠定了基础。     

结核分枝杆菌L型特征及临床意义研究进展

结核病是影响公共卫生健康安全的一种慢性传染性疾病。其病原菌是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB),而结核分枝杆菌L型(Mycobacterium tuberculosis L-forms,MTB-L)是MTB细胞壁缺失的一种特殊形态,在显微镜下呈现抗酸染色阴性、形态多样的特点,且目前临床实验室检测率低,较难发现。近年来MTB-L型在临床中的报道越来越多,本文通过对MTB-L的生物学特征、耐药性和临床致病力等方面进行综述。     

悬浮阵列技术在结核分枝杆菌检测中的研究进展

悬浮阵列技术(Luminex xMAP技术)是一种将编码微球捕获特定检测物的抗原、抗体或核酸探针等分子的有效方法。本文综述了结核分枝杆菌检测的研究进展,探讨以结核分枝杆菌的Rpo B基因和CYP141基因为靶标应用Luminex xMAP技术,构筑悬浮阵列体系,建立一种快速、灵敏、特异的方法,实现结核分枝杆菌及其耐药基因联合检测,拓展出一条更为经济、迅速、便捷的结核分枝杆菌快速检测新路径。     

乐山地区多重耐药菌感染的临床分析与耐药性监测

目的 探讨乐山地区多重耐药菌(multidrug-resistant organism,MDRO)感染情况与耐药性。 方法 选择2017年1月—2018年12月在乐山市3家三甲医院住院患者送检的各类标本分离出的耐药菌为研究对象,进行细菌鉴定和药敏试验,分析MDRO的来源、临床分布和耐药性特征。 结果 2017年1月—2018年12月乐山市3家三甲医院共分离出非重复菌株13 287株,其中MDRO3 257株(占24.51%),MDRO主要为产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)大肠埃希菌、产ESBLs肺炎克雷伯菌和多重耐药鲍曼不动杆菌(multi-drug resistance Acinetobacter baumannii,MDR-AB),MDRO标本主要来源为痰标本(44.67%)和尿液(19.25%);MDRO标本主要临床来源为重症监护室(intensive care unit,ICU)(19.19%),其次为新生儿科(15.23%)和神经外科(14.15%)。产ESBLs大肠埃希菌、产ESBLs肺炎克雷伯菌对美罗培南和亚胺培南敏感,MDR-AB对氨苄西林/舒巴坦敏感,多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌(MDR-PA/ PDR-PA)仅对左氧氟沙星敏感,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对替加霉素敏感,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)对万古霉素、替加霉素敏感。 结论 乐山地区多重耐药菌以产ESBLs大肠埃希菌最多,其次为产ESBLs肺炎克雷伯菌和MDR-AB,临床治疗时应结合MDRO药敏结果合理使用抗菌药,严格掌握药物指征,同时积极采取预防措施,减少医院感染暴发流行。     

全基因组测序技术在结核病分子流行病学中的应用进展

结核病给全球带来了严重的疾病负担,防控结核病具有重要意义.结核病分子流行病学将结核分枝杆菌分型技术与流行病学资料相整合,在研究结核病的传播和流行特点中起到了极其重要的作用.全基因组测序能够构建生物体基因组的完整DNA序列,具有高分辨率、高通量、结果精确等优势,在结核病分子流行病学研究中非常有吸引力和发展潜力.比较全基因...