健脾疏肝抗毒汤对裸鼠MDA-MB-231-pAcGFP异种移植瘤生长及转移能力的影响

目的:观察健脾疏肝抗毒汤对荷MDA-MB-231-p Ac GFP裸鼠移植瘤生长及转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法:应用Fugene HD Transfection Reagent转染三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞,经G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的乳腺癌细胞(MDA-MB-231-p Ac GFP)。流式细胞仪检测荧光细胞百分率。采用皮下接种法建立MDA-MB-231-p Ac GFP细胞异种移植瘤裸鼠,观察移植瘤的生长情况,荧光成像技术观察各脏器转移瘤的数目和大小。结果:流式细胞仪检测乳腺癌细胞转染率高达96.5%,表达有绿色荧光蛋白的MDA-MB-231-p Ac GFP细胞成瘤率为100%。模型组(A组),健脾疏肝抗毒汤组(B组),趋化因子基质细胞衍生因子-1(CXCL12)特异受体(CXCR4)抑制剂组(C组)、健脾疏肝抗毒汤联合CXCR4抑制剂组(D组)瘤体质量分别为(1.30±0.11),(0.75±0.12),(0.48±0.09),(0.44±0.07)g,瘤体体积分别为(6.635±0.500),(4.017±0.466),(2.664±0.700),(2.323±0.492)cm~3,与模型组比较,3组瘤体质量及体积均明显降低(P0.05)。3组的抑瘤率分别为42.18%,62.95%,66.28%。A,C组肝脏可见散在荧光转移结节,B组及D组肝脏未见有荧光结节。结论:健脾疏肝抗毒汤具有抑制MDA-MB-231-p Ac GFP移植瘤生长及肝转移的能力,可为健脾疏肝抗毒汤防治三阴性乳腺癌的生长转移提供实验依据。     

从CXCL12/CXCR4生物学轴探讨乳移平配伍引经药抗乳腺癌肺转移机理体外研究

目的:探讨"乳移平"配伍肺经引经药"桔梗"对人乳腺癌肺高转移细胞株MDA-MB-231HM的增殖、趋化、迁移能力的影响及作用机制。方法:乳移平组、乳移平配伍桔梗组、乳移平配伍川牛膝组、阿霉素组和对照组SD大鼠含药血清的制备,MTT法测不同组含药血清对细胞增殖能力的影响,Transwell小室测细胞趋化活性的影响,实时定量PCR法测细胞CXCL12、CXCR4、PI3K的表达。结果:与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后可进一步抑制MDA-MB-231HM的增殖能力(P0.01)和趋化活性(P0.01)。实时定量PCR结果提示,与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后能进一步下调MDA-MB-231HM细胞株CXCL12、CXCR4基因(P0.05)。结论:乳移平配伍桔梗通过进一步下调CXCL12/CXCR4生物学轴及其介导的PI3K信号转导通路,发挥进一步的抑制乳腺癌肺高转移细胞株增殖能力和趋化活性的作用。     

乳移平配伍肺经引经药桔梗抗乳腺癌肺转移作用及机制的实验研究

目的从CXCL12/CXCR4生物学轴及癌基因HER-2角度出发,探讨＂乳移平＂配伍肺经引经药＂桔梗＂对人乳腺癌MDA-MB-435HM肺转移模型的抑制作用及机制。方法建立人乳腺癌细胞株MDA-MB-435HM肺转移模型,随机分为乳移平组、乳移平配伍桔梗组、乳移平配伍川牛膝组、阿霉素组及对照组。给药期间测原位瘤长、短径。给药结束后称瘤重,计算瘤重抑制率;行原位瘤及肺组织病理并定量分析各组肺转移情况;原位杂交法测各组原位瘤及肺组织中CXCL12、CXCR4及HER-2mRNA的表达。结果乳移平、乳移平配伍桔梗和阿霉素组对MDA-MB-435HM荷瘤裸鼠原位瘤和肺转移的发生均有一定的抑制作用。与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后可进一步提高荷瘤裸鼠原位瘤抑制率3.79%以及降低肺转移发生率26.44%。与对照组比较,乳移平和乳移平配伍桔梗组均能下调原位瘤中CXCR4和肺组织中CXCL12的表达;与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后可进一步下调原位瘤中CXCL12和肺组织中HER-2的表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后可进一步抑制乳腺癌肺转移的发生、发展,其作用机制可能通过调节CXCL12/CXCR4生物学轴及癌基因HER-2实现。     

疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2的影响

目的：研究疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231三阴性乳腺癌(TNBC)细胞凋亡及相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达的影响。方法：给大鼠灌胃疏肝健脾解毒方制备含药血清,设置空白对照组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组及阳性对照组,以流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot测定Bcl-12、Bax蛋白表达量。结果：各给药组凋亡率及Bax、Bcl-12蛋白表达水平与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);含药血清低、中、高剂量组Bax、Bcl-2蛋白表达水平与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：疏肝健脾解毒方对MDA-MB-231 TNBC细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与干预Bax、Bcl-2蛋白表达有关。     

癌痛平胶囊抑制肿瘤转移及其作用机制探讨

目的:观察癌痛平胶囊对H22荷瘤小鼠肿瘤生长转移的抑制作用,探讨其作用机制。方法:ICR小鼠接种H22肝癌细胞株,建立H22荷瘤小鼠模型。将H22荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、癌痛平高、低剂量组,模型组每日ig等容积生理盐水,癌痛平高、低剂量组每日ig癌痛平(36,18 g·kg~(-1)),顺铂组每日ip顺铂(2 mg·kg~(-1))。各组连续给药7 d,处死荷瘤小鼠,剥离瘤体称重,按公式计算抑瘤率。采用免疫组化检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,使用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)以及免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中C-X-C趋化因子配体12(CXCL12)及C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)基因以及蛋白表达的改变。结果:癌痛平高、低剂量显著抑制小鼠H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,癌痛平高剂量显著降低肿瘤组织中VEGF蛋白表达,并抑制CXCL12和受体CXCR4的基因及蛋白表达(P0.01)。结论:癌痛平胶囊对H22荷瘤小鼠肿瘤生长转移具有一定的抑制作用,其作用机制可能是通过降低肿瘤组织VEGF蛋白表达以及干预CXCL12/CXCR4生物轴抑制肿瘤转移。     

健脾养正消癥方对胃癌细胞MGC-803粘附和侵袭能力的影响

目的观察健脾养正消癥方体外对胃癌细胞MGC-803粘附和侵袭能力的影响。方法采用MTT法检测该方对MGC-803细胞粘附能力的影响,细胞划痕实验检测对细胞迁移能力的影响;使用Transwell小室观察该方对趋化因子CXCL12的诱导作用的干预情况;使用Real-time PCR方法检测该方对CXCR4表达的影响。结果该方对MGC-803细胞的粘附和迁移有明显的抑制作用,并能明显抑制CXCL12诱导的胃癌细胞穿透Transwell小室的能力,下调CXCR4的表达。结论健脾养正消癥方可抑制人胃癌细胞MGC-803的的粘附侵袭,其机制有可能是通过CXCL12-CXCR4轴来调控的。     

益气化瘀解毒方对人肝癌细胞MHCC97-H迁移能力及趋化因子CXCL12、CXCR4、CXCR7表达的影响

目的观察益气化瘀解毒方对人肝癌细胞MHCC97-H迁移能力及趋化因子CXCL12、CXCR4、CXCR7表达的影响,探讨其相关作用机制。方法以索拉非尼为阳性对照,CCK-8法测定益气化瘀解毒方及索拉非尼对MHCC97-H细胞增殖的作用及最佳作用浓度,划痕实验观察MHCC97-H细胞迁移能力;Western blot检测药物干预24 h后CXCL12、CXCR4、CXCR7的蛋白表达。结果益气化瘀解毒方及索拉非尼均能抑制MHCC97-H细胞生长,24 h半数抑制浓度分别为0.095 g/m L、10μmol/m L;益气化瘀解毒方及索拉非尼均有抑制MHCC97-H迁移的能力;经益气化瘀解毒方干预后,MHCC9-H细胞CXCL12、CXCR4、CXCR7蛋白表达量均下降。结论益气化瘀解毒方能抑制MHCC97-H细胞增殖及迁移,其机制可能是通过下调CXCL12/CXCR4/CXCR7趋化因子轴发挥作用。     

乳癌术后方通过SDF-1/CXCR4生物轴对MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖和转移的影响

目的:以基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/趋化因子受体4(Chemokine receptor,CXCR4)生物轴为基础,探讨乳癌术后含药血清对乳腺癌细胞MDA-MB-453增殖和侵袭能力的影响。方法:建立SDF-1诱导的CXCR4高表达MDA-MB-453细胞模型,制备乳癌术后方含药血清及空白大鼠血清。实验分空白组,空白大鼠血清组,SDF-1+空白大鼠血清组,SDF-1+乳癌术后方组,AMD3100+SDF-1+空白大鼠血清组和AMD3100+SDF-1+乳癌术后方组。干预48 h,采用cell counting kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,transwell小室实验检测细胞侵袭能力,分别用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞CXCR4,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2,MMP-9 mRNA及蛋白表达情况。结果:与空白血清组比较,SDF-1为100μg·L~(-1)时,MDA-MB-453细胞增殖明显,CXCR4 mRNA表达明显增加(P0.05);与SDF-1+空白大鼠血清组比较,乳癌术后方能抑制SDF-1诱导的MDA-MB-453细胞增殖、侵袭行为,下调CXCR4,MMP-2,MMP-9 mRNA和蛋白表达水平(P0.05);经AMD3100预处理24 h,乳癌术后方对MDA-MB-453细胞增殖的抑制作用明显增强(P0.05);同时,乳癌术后方下调CXCR4,MMP-2,MMP-9 mRNA和蛋白表达的作用明显增加(P0.05)。结论:乳癌术后方可通过调控SDF-1/CXCR4生物轴,降低MDA-MB-453细胞MMP-2,MMP-9表达,减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解,进而抑制乳腺癌细胞转移的发生;与CXCR4抑制剂AMD3100具有协同效应。     

蛇床子-补骨脂配伍引经药对乳腺癌骨转移裸鼠CXCL12-CXCR4轴的影响

目的:观察蛇床子-补骨脂配伍引经药桔梗对裸鼠乳腺癌骨转移趋化因子12-趋化因子受体4(CXCL12-CXCR4)生物轴的影响,并探讨其机制。方法:采用左心室注射乳腺癌MDA-MB-231BO细胞法建立乳腺癌骨转移裸鼠模型,分别ig"蛇床子(1.28 g)-补骨脂(1.28 g)"煎液、"蛇床子(1.28 g)-补骨脂(1.28 g)-桔梗(0.32 g)"煎液、"蛇床子(1.28 g)-补骨脂(1.28g)-牛膝(0.32 g)"煎液,观察其对裸鼠模型上肢和下肢骨转移损伤、骨转移程度的影响,逆转录-PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测上下肢骨转移灶中CXCL12,CXCR4 mRNA和蛋白的表达。结果:"蛇床子-补骨脂"对裸鼠上肢、下肢骨转移程度、骨损伤程度、骨转移组织中CXCL12和CXCR4 mRNA的表达均有一定的抑制作用(P0.05),上行引经药桔梗可增强"蛇床子-补骨脂"对上肢骨转移程度、骨损伤程度、骨转移组织中CXCL12和CXCR4 mRNA和蛋白表达的抑制作用(P0.05)。下行引经药牛膝对上述指标无明显影响。结论:桔梗可增强"蛇床子-补骨脂"对乳腺癌骨转移裸鼠上肢骨转移的治疗作用,其机制可能与其增强"蛇床子-补骨脂"下调上肢骨转移灶中CXCL12,CXCR4 mRNA和蛋白表达有关。     

荆芥方对痔术后疼痛大鼠背根神经节CXCL12/CXCR4表达的影响

目的：本研究通过建立大鼠疼痛模型,从分子水平研究复方荆芥熏洗剂参与术后止痛的作用机制,完善对复方荆芥方止痛原理的认识,充分发挥中医药外治的优势,为临床治疗提供更多的实验理论依据,拓展临床应用前景。方法：实验室SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为5组,分别为荆芥方组、抑制剂组、生理盐水组、模型组、空白组,每组12只。建立大鼠痔术后切口痛模型,荆芥方组给予荆芥方坐浴（1 000 mL,每天2次,每次10 min）,生理盐水组予0.9%氯化钠溶液坐浴,等量,每次10 min,抑制剂组予特异性拮抗剂普乐沙福（AMD3100）(1μg/10μL)外用。于给药的第3天取大鼠背根神经节,采用酶联免疫吸附法检测组织中炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6表达水平变化;免疫荧光法检测大鼠背根神经节中CXCL12和CXCR4的表达水平,使用荧光显微镜观察复方荆芥熏洗剂对信号通路表达的影响。结果：与空白组相比,生理盐水组、模型组样本炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6及信号通路CXCL12/CXCR4表达增高（P <0.05）。荆芥方组样本中炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6及信号通...     

疏肝健脾方药对肝郁脾虚证荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：观察肝郁脾虚因素刺激对荷瘤S180小鼠肿瘤生长和腹腔巨噬细胞功能的影响，以及疏肝健脾方药对该模型的反证作用。方法：昆明小鼠右前腋下接种S180肉瘤细胞12h后，给予肝郁脾虚因素刺激，治疗组给予疏肝健脾方药0．3ml／只，连续10d。小鼠于造模后第10天全部处死，测定巨噬细胞功能，并称取瘤重。结果：荷瘤小鼠经肝郁脾虚因素刺激后，与肿瘤组比较，其巨噬细胞各噬能力(P〈0．05)、杀瘤能力(P＜0．01)和产生N0的能力明显下降(P＜0．01)，且瘤重明显增大(P＜0．01)；经疏肝健脾方药治疗后，不仅能明显改善巨噬细胞功能，而且还能减轻瘤重。结论：肝郁脾虚因素刺激能抑制荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞功能，并能促进肿瘤细胞的生长。应用硫肝健脾方药能明显改善肝郁脾虚证荷瘤小鼠巨噬细胞的功能和减缓肿瘤细胞的生长。     

干蟾皮提取物对胃癌肝转移裸鼠CXCL12-CXCR4轴的影响

目的:观察干蟾皮提取物(华蟾素注射液)对裸鼠胃癌肝转移及CXCL12-CXCR4生物轴的影响。方法:MTT法测定华蟾素注射液对人胃癌BGC-823细胞体外增殖的抑制作用;经小鼠脾脏下极包膜注入BGC-823细胞建立胃癌肝转移模型;32只小鼠随机分为模型组、华蟾素低剂量组[CINO(低)]、华蟾素中剂量组[CINO(中)]、华蟾素高剂量组[CINO(高)];给予相应药物干预,观察不同浓度的华蟾素注射液对BGC-823细胞的抑制作用及对胃癌肝转移裸鼠生存时间、肿瘤抑制率,肿瘤组织中CXCL12、CXCR4的影响。结果:华蟾素对BGC-823细胞的增殖具有抑制作用;CINO高剂量组较模型组肝转移率明显下降(P<0.05);华蟾素注射液对胃癌肝转移组织中CXCL12和CXCR4蛋白的表达均有一定的抑制作用(P<0.05)。结论:华蟾素注射液可抑制BGC-823细胞的增殖,降低胃癌肝转移率,抑制肿瘤生长;其机理可能与其下调胃癌肝转移灶中CXCL12、CXCR4蛋白表达有关。     

补肾活血汤对骨髓间充质干细胞迁移及趋化因子受体4,趋化因子13表达的影响

目的:探讨补肾活血汤及其拆方对骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移及趋化因子(CXCL)13及趋化因子受体(CXCR)4表达的影响。方法:以大鼠BMSCs为研究对象,制备含药血清,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。通过Transwell实验观察补肾活血汤(全方组)及其拆方(补肾组、活血组)含药血清干预BMSCs体外迁移的能力,采用PCR法检测CXCL13及CXCR4RNA表达水平,采用WesternBlot法检测CXCR4蛋白表达水平。结果:通过培养获得高纯度的BMSCs.Transwell实验显示:全方含药血清干预的大鼠BMSCs,其迁移能力显著增强,与其它4组对比差异均有统计学意义(P0.05)。PCR结果显示:补肾活血汤全方含药血清能显著上调大鼠BMSCs的CXCL13及CXCR4RNA表达水平,与其它4组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:补肾活血汤全方含药血清能显著上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达水平,与其它4组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:全方组含药血清促BMSCs体外迁移的影响较显著,结合其影响CXCL13和CXCR4的表达水平,较其单纯的活血或补肾组效果更显著,其促进BMSCs体外迁移机制可能与同时上调CXCL13及CXCR4表达,从而激活CXCL13/CXCR5信号轴及SDF-1/CXCR4信号轴有关。合理配伍促进了补肾活血汤促BMSCs体外迁移的能力。     

升清胶囊干预脂代谢异常对乳腺癌肝转移的影响

目的探讨中药升清胶囊通过干预CXCL12-CXCR4信号通路对脂代谢异常的调节及其对乳腺癌肝转移的影响。方法(1)选用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,分为对照组(Con)、空白血清组(Black)、表阿霉素组(Epirubicin)以及升清胶囊血清低浓度组(SQ-L)、高浓度组(SQ-H)。采用MTT法检测药物血清对细胞增殖的影响,并用划痕愈合实验和Transwell实验检测其对细胞迁移及侵袭能力的影响。同时采用Western blotting法检测CXC趋化因子配体12(CXCL12)与其特异性受体CXCR4以及蛋白激酶B(AKT),磷酸化蛋白激酶B(p-AKT),B淋巴白血病-淋巴瘤-2基因(Bcl-2),基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平的变化。(2)建立脂代谢异常乳腺癌肝转移动物裸鼠模型,用升清胶囊0.25 g·kg~(-1),或表阿霉素5μg·g~(-1)干预治疗,检测血浆游离脂肪酸(FFA)、三酰甘油(TG)水平变化及对乳腺癌肝转移的影响。结果 (1)MTT结果表明,升清胶囊和表阿霉素药物血清干预后,MDA-MB-231细胞存活率显著降低,且呈浓度依赖性持续降低(P0.05)。Transwell和划痕愈合实验结果表明,升清胶囊药物血清能够显著抑制细胞的侵袭和迁移能力。Western blotting结果表明,与对照组比较,升清胶囊药物可降低趋化因子CXCL12以及受体CXCR4蛋白表达水平(P0.05),同时下调MMP-9和Bcl-2蛋白表达,且p-AKT水平降低(P0.05)。(2)动物实验表明,升清胶囊可以显著降低脂代谢异常裸鼠TG、FFA水平(P0.05),抑制乳腺癌肝转移。结论升清胶囊能够通过抑制趋化因子CXCL12-CXCR4和相关信号通路活性,下调血脂水平,抑制乳腺癌转移。     

黄芪多糖对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤生长及肿瘤相关凋亡蛋白的影响

目的:观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其对肿瘤细胞凋亡的影响,研究APS抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231生长、诱导其凋亡的作用及其分子机制。方法:通过将人乳腺癌细胞MDA-MB-231接种于BALB/c-nu雌性裸鼠右侧腋窝皮下建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型; 18只乳腺癌荷瘤裸鼠随机分为3组:模型组(每天予生理盐水),APS低、高剂量组(200,400 mg·kg~(-1)),每组6只;每天灌胃给药200μL,连续21 d。实验结束,观察比较APS低、高剂量组与模型组荷瘤鼠肿瘤质量、瘤体体积的变化,计算肿瘤抑制率;苏木精-伊红(HE)染色观察瘤体组织细胞形态学变化;原位末端标记法(TUNEL)检测乳腺癌肿瘤组织的凋亡;蛋白免疫印迹法检测肿瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)等凋亡相关蛋白表达。结果:与模型组比较,APS低、高剂量组中的乳腺癌肿瘤体积、瘤重减小(P 0. 05,P 0. 01),其肿瘤抑制率分别为37. 9%,57. 57%; HE染色观察APS干预组肿瘤组织均呈现明显形态学改变,组织细胞出现凋亡状态; TUNEL染色显示APS组肿瘤组织细胞凋亡率增加;蛋白免疫印迹法发现,与模型组比较,APS低、高剂量组肿瘤组织中Bcl-2蛋白水平下降(P 0. 05,P 0. 01),Bax,Caspase-9,Caspase-7蛋白表达水平上调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:APS能有效抑制MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤生长,诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡,其作用机制与APS影响乳腺癌细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-9,Caspase-7蛋白表达水平有关。     

冠心康对microRNA-126和VEC的调控及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:观察冠心康对小鼠主动脉及血管内皮细胞miRNA-126及其下游相关信号GRS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1表达的调控,探索中医药抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:体外细胞实验中,将小鼠血管内皮细胞随机分为5组,即对照组、模型组、中药高剂量含药血清组、中药低剂量含药血清组。不同组别VEC分别经不同含药血清干预后,观察细胞增殖和凋亡情况,采用qRT-PCR和Western-blot检测VEC中pri-miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达;体内实验采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度,采用qRT-PCR和Western-blot检测主动脉pri-miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结果:体外实验结果显示,与对照组相比,中药高低剂量组的VEC凋亡率和增殖率明显优于模型组(P均0.05),中药高剂量组和中药低剂量组VEC增殖率比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组VEC中miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1 mRNA表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组VEC中RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1蛋白表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05)。体内实验结果显示,小鼠主动脉HE染色结果,对照组小鼠主动脉血管管径厚薄均匀,内膜光滑平整,无动脉粥样硬化病灶,模型组小鼠血管管径厚薄不均匀,斑块形成明显,血管管壁厚度、AS斑块截面积显著大于其他各组。中药高低剂量组小鼠主动脉各层结构正常,炎性细胞浸润较轻,病变轻,AS斑块较小,病变程度明显轻于模型组。与对照组相比,中药高低剂量组主动脉miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1 mRNA表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组主动脉RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1蛋白表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05)。结论:冠心康抑制动脉粥样硬化斑块的形成的作用机制可能与调控miRNA-126及其下游相关信号GRS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1表达有关。     

健脾消癌方对结肠癌肝转移裸鼠模型肿瘤微环境转移相关因子表达的影响

目的 研究健脾消癌方对结肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中趋化因子受体4（CXCR4）、转化生长因子-β（TGF-β）、整合素α_v β₅（ITGα_v β₅）、血清钙结合蛋白A4（S100A4）、血清钙结合蛋白A8（S100A8）、血清钙结合蛋白A9（S100A9）等肿瘤微环境转移相关因子蛋白表达的影响,探讨其抗结肠癌肝转移的可能作用机制。方法 将BALB/c裸鼠随机分为正常组、模型组、健脾消癌方低、中、高剂量组。建立人结肠癌肝转移裸鼠模型。健脾消癌方低、中、高剂量组分别灌胃5.4、10.8、21.6 g·kg^-1药液,模型组及正常组给予等体积蒸馏水灌胃,每天给药1次,连续给药3周。末次给药后24 h脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,并通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织中CXCR4、TGF-β、ITGα_v β₅、S100A4、S100A8、S100A9等肿瘤微环境中转移相关因子蛋白表达情况。结果 模型组、健脾消癌方低、中、高剂量组转移瘤面积占比分别为73%、72%、55%、42%。健脾消癌方高剂量组明显低于模型组（P<0.05）。与模型组比较,健脾消癌方高、中剂量组CXCR4、TFG-β、ITGα_v β5、S100A8、S100A9表达均明显降低（P<0.05）;健脾消癌方高、中、低剂量组S100A4表达均明显降低（P<0.05）。健脾消癌方低剂量组CXCR4、TFG-β、ITGα_v β5、S100A8、S100A9与模型组比较表达差异无统计学意义。结论 健脾消癌方能抑制结肠癌肝转移,其机制可能与降低CXCR4、TGF-β、ITGα_v β5、S100A4、S100A8、S100A9等肿瘤微环境中转移相关因子的表达相关。     

消癌解毒方对H22荷瘤小鼠基因表达谱的影响

目的 通过对H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因表达谱的检测,探讨消癌解毒方抗肿瘤的作用机制。方法 H22荷瘤小鼠随机分为空白对照组,消癌解毒方低、中、高剂量组和顺铂组。应用基因芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织的差异表达基因;应用pathway分析,找出与消癌解毒方抗癌机制相关的信号通路和基因,并针对趋化因子信号通路进行分析。结果 消癌解毒方能显著影响多个与肿瘤生长、凋亡和免疫相关的信号通路,并能下调趋化因子信号通路中CCL3、CXCL2等基因的表达。结论 消癌解毒方可能通过影响趋化因子信号通路中的某些基因的表达来发挥抗肿瘤生长和侵袭的作用。     

左归丸抗乳腺癌转移及其作用机制

目的:观察左归丸的抗乳腺癌转移作用,探讨其作用机制。方法:采用股骨内注射法建立人乳腺癌细胞MDAMB-231骨转移裸鼠模型,受试裸鼠随机分为空白组(蒸馏水),左归丸低、高剂量(21,42 g·kg-1)组。连续给药8周后,采用巢式聚合酶链式反应(PCR)检测裸鼠骨髓组织中人细胞角蛋白(ck19)基因的表达,确定肿瘤转移情况;采用Oris法,检测左归丸含药血清对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移能力的影响;采用重组基底膜侵袭法,观察左归丸含药血清的体外抗侵袭作用;采用Alexa Fluor488标记的鬼笔环肽(Phalloidin)进行荧光染色,观察左归丸含药血清对乳腺癌细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)聚合的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测左归丸含药血清对MDA-MB-231细胞甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)和4型趋化因子受体(CXCR4)表达的影响。结果:与空白组比较,左归丸高、低剂量均可显著抑制小鼠骨髓组织中人ck19基因表达(P0.01)。Oris迁移表明,左归丸含药血清可显著抑制转化生长因子-β(TGF-β)诱导的MDA-MB-231细胞迁移;重组基底膜侵袭实验显示,左归丸含药血清也可显著抑制乳腺癌细胞对重组基底膜的侵袭能力。给药组侵袭细胞数较空白组显著降低(P0.01)。Phalloidin荧光染色结果显示,左归丸含药血清可显著抑制F-actin聚合,抑制F-actin聚合体的形成。Western blot结果表明,左归丸含药血清可显著抑制乳腺癌细胞PTHr P,CXCR4蛋白表达。结论:左归丸具有明显的抗乳腺癌骨转移作用,其机制与抑制肿瘤细胞PTHr P,CXCR4表达,从而直接抑制其体外运动活性相关。     

白头翁总皂苷调控CXCR4/CXCL12信号通路抑制小鼠结肠癌肝转移的机制研究

目的 观察白头翁总皂苷对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,并探讨其通过调节趋化因子受体4(CXCR4)/趋化因子12(CXCL12)通路发挥作用的机制.方法 将50只BALB/c裸小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、白头翁总皂苷低剂量、高剂量组(100、200 mg/kg),每组10只.以希罗达组(267 mg/kg)作为阳性对照药,采用结肠癌细胞脾脏注射法制备小鼠CT26细胞肝转移模型.白头翁总皂苷低剂量、高剂量组和希罗达组每日灌胃给药,连续治疗3周,假手术组和模型组均给予等量生理盐水灌胃.小鼠处死后取肝、脾组织及瘤组织,比较各组小鼠肝脏、脾脏质量和抑瘤率;ELISA实验检测小鼠血清中白介素-6(IL-6)、转化生长因子-α(TNF-α)水平,免疫组化检测小鼠肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板内皮细胞黏附分子(CD31)的蛋白阳性表达;Western-blot及RT-PCR检测脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白和mRNA表达.结果 与假手术组相比,模型组小鼠肝、脾质量明显上升(P<0.01),小鼠血清中IL-6、TNF-α 水平及肝组织中VEGF、CD31的阳性表达明显升高(P<0.01),小鼠脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达均显著增多(P<0.01).白头翁总皂苷低、高剂量组小鼠肝、脾质量显著低于模型组,抑瘤率分别为45.8％、52.3％;血清IL-6、TNF-α 水平、肝组织VEGF、CD31阳性表达以及脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达较模型组均明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 白头翁总皂苷可显著抑制小鼠CT26细胞结肠癌肝转移,其机制可能与下调瘤组织中CXCR4/CXCL12信号通路的表达相关.