蝎毒多肽干预K562/BALB/c-nu小鼠Hedgehog通路传导的机制研究

目的探究蝎毒多肽干预K562/BALB/c-nu白血病荷瘤小鼠Hedgehog通路信号传导的机制,从基因、蛋白水平解析蝎毒多肽抑制慢性粒细胞白血病发展的分子机制和作用靶点。方法将K562/BALB/c-nu白血病荷瘤小鼠分为对照组、模型组、伊马替尼(50 mg/kg)组和蝎毒多肽高、中、低剂量(0.3、0.6、1.2 mg/kg)组,药物干预14 d后,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测小鼠瘤组织Hedgehog信号通路上游因子Shh、Ptch、Smo m RNA表达水平,Western blotting法检测Shh、Ptch、Smo蛋白表达水平,ELISA法检测小鼠瘤组织Hedgehog信号通路下游因子Gli1蛋白表达水平。结果与模型组比较,蝎毒多肽干预组小鼠瘤组织Shh m RNA和蛋白表达水平均升高;蝎毒多肽低、中剂量组小鼠瘤组织Ptch、Smo m RNA及蛋白表达水平均降低;伊马替尼组各上游因子与模型组比较差异不显著;蝎毒多肽低、中剂量组小鼠瘤组织Gli1蛋白表达水平降低,蝎毒多肽高剂量组、伊马替尼组Gli1蛋白表达水平无显著差异。结论蝎毒多肽能够抑制Hedgehog信号通路上游因子Ptch、Smo以及下游因子Gli1的表达,而伊马替尼对Hedgehog信号通路无明显抑制作用。     

半夏泻心汤调控Shh信号通路对BMSCs外泌体诱导的人胃癌细胞BGC-823增殖的影响

目的观察半夏泻心汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体诱导的人胃癌细胞BGC-823增殖的影响,探讨其相关作用机制。方法利用Transwell小室将BMSCs外泌体与BGC-823细胞进行非接触共培养,实验分为空白组、模型组、阳性对照组和半夏泻心汤高、中、低剂量组,荧光染料Dil标记BMSCs外泌体,激光共聚焦显微镜观察BGC-823细胞对BMSCs外泌体的摄取,计算平均光密度(MOD);实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;RT-q PCR检测Shh、Ptch1、Smo、Gli1及C-myc m RNA的表达。结果与空白组比较,模型组细胞内可见大量红色荧光标记,MOD值显著增加(P0.05);模型组20~50 h细胞指数(CI)显著增加(P0.05),G_1、G2期细胞比例降低,S期细胞比例升高(P0.05),Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达显著升高(P0.05);与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组红色荧光标记减弱,其中半夏泻心汤高、中剂量组MOD值明显减少(P0.05),半夏泻心汤各剂量组20~50hCI显著减少(P0.05),G_1、G2期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P0.05),Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达显著降低(P0.05)。结论半夏泻心汤可抑制BMSCs外泌体诱导的BGC-823细胞增殖,其机制可能与下调Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达,抑制Shh信号通路有关。     

莪术含药血清抑制HSCs中Shh和Gli1表达的机制研究

研究莪术含药血清抑制活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中Hedgehog(Hh)信号通路关键因子Shh(sonic hedgehog),Gli1(glioma-associated oncogene homolog-1)表达的机制。清洁级SD大鼠均分2组,分别给予莪术水煎剂、生理盐水灌胃取血制备含药血清。体外培养大鼠HSCs,分为7组:空白组、模型组、Hh通路抑制剂组、莪术组、Hh通路抑制剂+莪术组、Hh通路激动剂组、Hh通路激动剂+莪术组。除空白组外,其余各组均给予100μg·L-1瘦素诱导后,各组再予以相应药物干预24 h,经MTT法检测HSCs增殖情况,RT-PCR法检测Shh,Gli1的mRNA表达,Western blot法检测Shh,Gli1蛋白表达及免疫荧光法检测Gli1蛋白表达。经瘦素活化的大鼠HSCs中Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达均显著上调(与空白组比较P0.01)。Hh通路抑制剂、莪术含药血清分别干预后,Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);莪术含药血清与Hh通路抑制剂协同干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);Hh通路激动剂干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著上调(与模型组比较P0.01)。用莪术含药血清干预Hh通路激动剂组后,Shh,Gli1mRNA和蛋白表达显著下调(与Hh通路激动剂组比较P0.01)。莪术含药血清可通过抑制瘦素诱导活化的HSCs中Shh,Gli1的表达,参与Hh信号通路抑制HSCs的活化,发挥抗肝纤维化的作用。     

益气活血方对胃癌前病变大鼠胃黏膜Sonic Hedgehog信号通路的影响

目的:研究益气活血方对1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)诱导的新生大鼠胃癌前病变胃黏膜组织Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的影响。方法:48只雄性乳鼠随机分为正常组8只,造模组40只。造模组灌服800mg/L的MNNG 0.1mL/只,正常组灌服等量0.9%氯化钠溶液,共10d。23周后将造模组随机均分为模型组,中药高、中、低剂量组,环耙明组。正常组、模型组灌服0.9%氯化钠溶液10mL/kg,中药高、中、低剂量组分别灌服38.4、19.2、9.6g/kg的益气活血方流浸膏,环耙明组腹腔注射0.2mg/kg环靶明,均每日1次,12周后HE染色观察胃黏膜组织病理学变化,免疫组化检测胃黏膜PCNA的表达,qRT-PCR法检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc mRNA的表达,Western Blot检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc、p-c-Myc蛋白表达。结果:与模型组比较,益气活血方高、中、低剂量组和环耙明组大鼠胃黏膜炎症及异型增生程度均显著减轻,PCNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Ptch1及SUFU mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Shh、Smo、Gli-1、CyclinD1及p-c-Myc蛋白的相对表达量显著降低而Ptch1及SUFU蛋白的表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血方可能通过下调Shh信号通路的表达起到对胃癌前病变的防治作用。     

基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果 SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。     

薏苡仁油对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响和机制

目的:观察薏苡仁油对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响,探讨薏苡仁油对人结肠癌HT-29细胞Hedgehog(Hh)信号通路的影响。方法:分别使用不同浓度薏苡仁油处理人结肠癌细胞株HT-29,另取空白培养基做对照组。采用噻唑蓝还原法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测各组细胞增殖情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q-PCR)检测Ptch、Smo、Shh和Gli-1 mRNA表达,采用蛋白印迹检测CyclinD1、p21、Caspase-3、Bcl-2、Ptch、Smo、Shh和Gli-1蛋白的表达。结果:MTT法观察到薏苡仁油可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,各浓度水平组HT-29细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.05),抑制率随着薏苡仁油浓度的增加而升高。流式细胞术观察到薏苡仁油可诱导HT-29细胞凋亡,各浓度水平组HT-29细胞凋亡率差异均有统计学意义(P0.05),凋亡率随着薏苡仁油浓度的增加而升高。与空白对照组比较,薏苡仁油各组Ptch、Smo、Shh和Gli-1 mRNA的表达降低,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,薏苡仁油各组CyclinD1、Bcl-2、Ptch、Smo、Shh和Gli-1蛋白的表达降低,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,薏苡仁油各组p21和Caspase-3蛋白的表达升高,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐升高,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:薏苡仁油能抑制人结肠癌HT-29细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能和薏苡仁油抑制Hh信号通路相关。     

吴茱萸碱通过调控Hedgehog信号通路诱导结直肠癌HCT-116细胞凋亡的研究

目的:基于Hedgehog信号通路研究吴茱萸碱抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖和诱导凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞和人正常结肠上皮NCM-460细胞增殖的影响;显微镜观察吴茱萸碱对HCT-116细胞形态的影响;结晶紫染色考察吴茱萸碱对HCT-116细胞克隆形成能力的影响;细胞划痕试验检测吴茱萸碱对细胞水平迁移的影响;Hoechest33324/PI染色观察吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡的影响;试剂盒检测吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡相关因子Caspase-9和Caspase-3活性的影响;蛋白免疫印迹试验(Western blotting)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、细胞周期相关蛋白Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关蛋白SHH、Gli1、SMO、c-Myc表达的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA表达的影响。结果:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的增殖且在高剂量和长时间给药情况下对人正常结肠上皮NCM-460细胞产生一定的抑制效应。此外,HCT-116细胞经吴茱萸碱5、10、20μmol/L干预后形态发生改变,细胞水平迁移能力和克隆形成能力显著下降,染色质固缩,细胞核呈致密浓染,Caspase-9和Caspase-3活性升高(P<0.01);吴茱萸碱10、20μmol/L作用HCT-116细胞48 h后,Bax mRNA和蛋白表达随吴茱萸碱浓度增高而上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);吴茱萸10、20μmol/L碱诱导了周期调节因子Cyclin D1 mRNA和蛋白的下调(P<0.01);Hedgehog信号通路中的关键因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA和蛋白表达也在吴茱萸碱干预后显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的生长、增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能涉及抑制Hedgehog信号通路的激活。     

左归丸对去卵巢致骨质疏松症大鼠Hedgehog/Smo/GLI1表达的影响

目的通过去卵巢复制骨质疏松症(OP)模型大鼠,观察去势大鼠骨中Hedgehog信号通路中的Smo、GLI1以及血清TRACP的蛋白表达变化,探讨左归丸治疗骨质疏松症的作用机制,为左归丸的临床应用提供科学依据。方法实验采用去卵巢的方法建立绝经骨质疏松症模型。SPF级雌性大鼠随机分为正常组、模型组、福善美组及左归丸组,术后2d开始给药干预,6次/周,持续12周后取材。检测各组大鼠股骨中骨密度(BMD),酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞中的7次跨膜蛋白(Smoothened, Smo)、Gli家族锌指蛋白-1(Gli family zinc finger-1,Gli-1)以及大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)的含量。结果经双能X线骨密度仪检测发现,与模型组比较,正常组、福善美组、左归丸组大鼠骨密度有明显提高(P0. 01);经ELISA检测发现,与模型组相比,正常组、福善美组、左归丸组Smo、GLI1均有所升高,TRACP均有所下降。结论①Hedgehog信号通路的Smo、Gli1的变化可能引起骨质疏松症;②左归丸可以改善大鼠体内Smo、Gli1、TRACP蛋白的表达;③左归丸能够有效治疗骨质疏松,这种作用可能通过Hedgehog信号通路来实现。     

黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对慢性萎缩性胃炎大鼠Hedgehog信号通路的调控影响

目的探讨黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对慢性萎缩性胃炎大鼠Hedgehog信号通路的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组、Purmorphamine组及叶酸组,运用幽门弹簧法制备萎缩性胃炎模型。应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织Hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠Shh、Ptch、Gli-1基因及蛋白含量均显著降低(P0.05),SUFU蛋白表达明显升高(P0.01),Cyclin D1表达减弱(P0.01)。与模型组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P0.05),各给药组均能显著升高Ptch蛋白含量(P0.05)。人参皂苷Rg1高剂量组、Purmorphamine组Gli-1蛋白表达明显升高(P0.05),黄芪甲苷高剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组和Purmorphamine组SUFU蛋白表达明显减弱(P0.05)。黄芪甲苷高剂量组和Purmorphamine组Cyclin D1蛋白表达增强(P0.05)。结论黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对Hedgehog信号通路关键因子有一定的激活作用,进而改善慢性萎缩性胃炎大鼠的胃黏膜病变。     

益气活血法对MNNG诱导萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控作用

目的探讨益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组、Purmorphamine组、环巴明组及叶酸组,运用MNNG负荷多因素法制备萎缩性胃炎癌前病变模型。应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠血清PGⅠ/PGⅡ和GAS含量显著降低(P0.01),Shh、Ptch基因及蛋白含量均明显下调(P0.05,P0.01),Smo蛋白表达减弱(P0.01)。与模型组相比,三七组、黄芪三七组及Purmorphamine组PGⅠ/PGⅡ明显升高(P0.01),黄芪组、三七组及黄芪三七组GAS含量显著升高(P0.05)。三七组、黄芪三七组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P0.05),三七组和Purmorphamine组Ptch蛋白表达增多(P0.05),黄芪组、三七组、黄芪三七组和Purmorphamine组Smo蛋白表达显著增强(P0.05,P0.01)。结论益气活血法可激活hedgehog信号通路,对萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜病变起到改善作用。     

慈菇消脂方对TGF-β1诱导LX2细胞miR-378a-3p表达及Hh信号通路的影响

目的 观察慈菇消脂方对TGF-β1诱导活化LX2细胞miR-378a-3p表达及Hh信号通路的影响。方法 将细胞分为对照组、诱导组、含药血清组、miR-378a-3p inhibitor组、miR inhibitor NC组。CCK-8法检测各组细胞活力，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，RT-qPCR检测各组细胞miR-378a-3p表达，RT-qPCR和Western blot法检测各组细胞Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果 与对照组比较，诱导组细胞活力及Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA和蛋白表达升高(P<0.01),miR-378a-3p表达降低(P<0.01)。与诱导组比较，含药血清组细胞活力、Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA及α-SMA、Gli2蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率及miR-378a-3p表达升高(P<0.01);miR-378a-3p inhibitor组细胞活力、Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA及Gli1、G...     

Hedgehog 信号通路与慢性肝损伤后肝再生的调控

目的 初步探讨小肝细胞样祖细胞增殖过程中Hedgehog 信号通路的表达及其变化.方法 按Gordon's方案,Fisher344 大鼠腹腔注射倒千里光碱后,择期行部分肝切除术诱导小肝细胞样祖细胞的增殖,反转录聚合酶链反应、实时荧光定量PCR 及免疫组化等方法检测原代再生细胞均浆中Hedgehog 信号通路相关成分在不同时间点的表达,并以同期正常大鼠原代肝细胞作对照.结果 小肝细胞样祖细胞增殖过程中Hedgehog 信号通路多种成分表达,其中IHH、PTCH、Smo、Gli1、Gli2、Gli3 mRNA 持续表达并呈动态变化,SHH 表达阴性.信号分子IHH,以及反映通路活动状态的3 个标志(PTCH,Gli1,Gli3)在同一时间点与对照组之间差异有统计学意义,在实验组内不同时间点之间差异也有统计学意义(均P ＜0.001),时间与处理组之间有交互效应.免疫组化证实PTCH、Gli1 在蛋白水平的表达.结论 Hedgehog 信号通路在小肝细胞样祖细胞增殖过程中持续激活,可能是调控慢性肝损伤后肝再生的一条新的重要的信号通路.     

补骨脂素介导Hedgehog信号通路促进骨髓MSC成骨分化作用研究

目的:观察补骨脂素不同剂量含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞Shh、Ptch1、Gli1 mRNA及蛋白表达的影响,探讨补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:采用SPF级SD雌性大鼠灌服高、中、低剂量补骨脂素配制对应用药组的含药血清5 d,取血清后,用各含药血清(补骨脂素高剂量组、补骨脂素中剂量组、补骨脂素低剂量组)对大鼠骨髓间充质干细胞进行干预6、9、12 d,以大鼠血清组为正常对照组,小牛血清组为空白对照组,成骨转化诱导液组作为阳性对照组。ELISA法检测第6、9、12天大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白含量; ELISA法及qRT-PCR法检测第9天大鼠骨髓间充质干细胞Shh、Ptch1、Gli1 mRNA及蛋白表达。结果:各用药组均能提高大鼠间充质干细胞ALP蛋白表达,第9天达到峰值。补骨脂素能够上调Shh、Gli1,下调Ptch1 mRNA及蛋白表达,其中补骨脂素中剂量组最显著。结论:补骨脂素含药血清能够促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其作用机制可能与Hedgehog信号通路的活性有关。     

芹菜素对胰腺癌BxPC-3细胞Sonic Hedgehog信号通路调控和自我更新能力的影响

目的：探讨芹菜素对胰腺癌 BxPC-3 细胞 Sonic Hedgehog 信号通路的调控作用和自我更新能力的影响。方法：用不同浓度 （10、20 和 50 μmol/L） 芹菜素干预胰腺癌 BxPC-3 细胞。应用流式细胞仪法检测胰腺癌肿瘤干细胞 （CD24⁺CD44⁺） 比例,利用 RT-PCR 和 Western blot 法检测 Sonic Hedgehog 信号通路成员 SHH、PTCH1、SMO 和 GLI1 在 mRNA 和蛋白水平的表达情况,采用无血清培养成球实验观察胰腺癌细胞自我更新能力。结果：BxPC-3 细胞经不同浓度 （10、20 和 50 μmol/L） 芹菜素干预 48 h 后,胰腺癌 CD24⁺CD44⁺细胞比例均呈不同程度的下降 （P<0.01）。与对照组比较,20、50 μmol/L 芹菜素可显著下调胰腺癌肿瘤干细胞比例 （P<0.01）,且显著抑制 Hedgehog 信号通路成员 SHH、PTCH1、SMO 和 GLI1 在 mRNA 和蛋白水平的表达...     

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病Hedgehog信号转导通路分子基因表达影响的研究

目的:以人类慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562为模型,探讨三氧化二砷(ATO)对CML的Hedgehog(Hh)信号转导通路相关分子的基因表达的作用,为ATO应用于具有Hh异常活化的CML提供理论基础。方法:将不同浓度的ATO作用于K562细胞48 h,免疫印迹(WB)技术检测ATO对CML致病关键分子P210/Bcr-Abl的影响,采用实时定量PCR(q RT-PCR)检测Hh信号转导通路关键分子Gli2、Gli1、SMO和Ptch在mRNA水平的变化。结果:ATO处理后,P210/Bcr-Abl蛋白表达呈剂量依赖性抑制(P0.05),ATO对Gli1和Gli2 mRNA的表达具有显著的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖性(P0.05)。ATO对ptch mRNA的表达具有上调作用(P0.05)。但Smo mRNA的表达在各浓度ATO的作用下均未受到影响(P0.05)。结论:在CML细胞中,ATO可通过抑制Gli1和Gli2 mRNA,上调Hh通路的抑制因子ptch mRNA的表达,并通过降解P210/Bcr-Abl蛋白发挥作用,且该研究为扩大ATO应用于CML提供了理论基础。     

半枝莲通过Hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新

目的:研究半枝莲对结肠肿瘤干细胞(CSC)自我更新的影响,从Hedgehog信号通路阐明其作用机制。方法:制备半枝莲乙醇提取物,从HT-29人结肠腺癌上皮细胞中分拣出结肠CSC,用Aqueous法,研究半枝莲对结肠CSC体外活性的影响,用干细胞球形成试验研究半枝莲对结肠CSC自我更新的影响。用qRT-PCR研究半枝莲对结肠CSC标记物基因CD133和Lgr5表达的影响,和对结肠CSC中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1表达的影响。结果:终浓度为125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml的半枝莲乙醇提取物可以剂量依赖性地抑制结肠CSC体外活性,抑制结肠CSC自我更新,下调结肠CSC标记物基因CD133和Lgr5 mRNA水平,降低结肠CSC中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1 mRNA转录。结论:半枝莲可以抑制结肠CSC自我更新,其机制在于抑制Hedgehog信号通路的活性。     

多模式肝损伤后Hedgehog信号通路的表达分析

目的初步探讨多种模式肝损伤后Hedgehog信号通路的表达及其变化,为其天然植物阻断剂和中药新药开发及中药治疗肝病提供依据。方法雄性Fisher344大鼠140只适应性喂养1周后,随机分为药物组、手术组、干细胞增生组与正常对照组。按 Gordon’s 方案分次腹腔注射倒千里光碱或对照剂,手术组和干细胞增生组择期行部分肝切除术诱导急性肝损伤与干细胞增殖,药物组、正常对照组予假手术。实时荧光定量PCR、real-time PCR及免疫组化等方法检测原代肝细胞及组织切片中Hedgehog信号通路相关成分在不同时间点的表达。结果多种因素所致肝损伤都可引起Hedgehog信号通路的异常激活,相关成分IHH、PTCH、Smo、Gli1、Gli2、Gli3 mRNA动态表达(SHH阴性),信号分子IHH及通路激活标志(PTCH、Gli1)3个指标在时间与处理组之间存在交互效应(均P＜0.001)。免疫组化证实PTCH在蛋白水平表达,且不同损伤模式下表达持续的时间不同。结论 Hedgehog信号通路在各种肝损伤后异常激活,可能是参与调控肝损伤后反应的最重要的信号通路之一。     

基于Hedgehog信号通路探析白头翁汤抗结直肠癌HCT116细胞机制

目的：探讨白头翁汤水煎液通过调控经典Hedgehog(Hh)信号通路诱导人结直肠癌细胞HCT116凋亡的作用及其机制。方法：用白头翁汤(25、50、100、200、500、750、1 000 mg·L^-1)处理HCT116细胞24 h,然后用噻唑蓝(MTT)比色法检测白头翁汤对细胞增殖的影响;分别设置空白组、白头翁汤组(125、250、500 mg·L^-1)和五氟尿嘧啶(5-FU)组(40 mmol·L^-1),显微镜观察细胞给药前后形态变化;划痕实验检测白头翁汤对细胞迁移的影响;Hoechest 33324/碘化丙锭(PI)染色法评价白头翁汤对细胞凋亡的影响;流式细胞术检测白头翁汤对HCT116细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平及Hh信号通路关键因子音猬因子(SHh)、GLI家族锌指蛋白1(Gli1)、G蛋白偶联受体蛋白Smoothened(Smo)、苏氨酸蛋白激酶Fused抑制因子(SuFu)、c-核蛋白类基...     

中药复方WCAP及拆方对人胰腺癌皮下移植瘤裸小鼠模型及IL-6/STAT3信号通路的影响

目的 观察中药复方WCAP及其拆方对人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤生长及对白介素-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)信号通路的影响。方法 建立人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤模型，将30只SPF级裸小鼠随机分为6组，即空白对照组、5-氟尿嘧啶（5-FU）组、复方组、健脾组、清热解毒组和软坚散结组，每组5只，观察各组裸小鼠皮下移植瘤瘤质量及抑瘤率，实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）和Western blot法分别检测瘤组织中IL-6/STAT3通路及其下游靶基因c-myc癌基因（c-myc）、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的mRNA和蛋白表达水平。结果 (1)与空白对照组比较，各干预组瘤质量均轻于空白对照组，5-FU组、复方组及各拆方组均可抑制裸小鼠皮下移植瘤的生长（P<0.05），复方组抑瘤率高于各拆方组（P<0.05）。(2)与空白对照组比较，5-FU组、复方组和软坚散结组IL-6/STAT3通路及其下游靶基因c-myc、cyclin D1、VEGF...     

头针抑制脑出血后神经细胞凋亡机制初探*

目的:观察"百会"透"曲鬓"针刺法对脑出血大鼠出血半暗带神经细胞凋亡的影响及Shh信号通路在此过程发挥的作用。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、模型+针刺组(针刺组)、模型+激动剂组(激动剂组)、模型+非经非穴组(非经非穴组),每组各15只。将50μL自体血注入右脑尾状核复制脑出血模型(假手术组以同剂量生理盐水代替),随后每日1次"百会"透"曲鬓"针刺治疗。连续干预5 d后,Bederson神经功能评分观察大鼠神经功能恢复,HE染色观察出血半暗带病理损伤,TUNEL检测凋亡神经细胞,Western blot检测Shh通路Smo、Gli1蛋白表达。结果:针刺可明显促进脑出血大鼠神经功能恢复,改善出血半暗带病理损伤,下调该区凋亡细胞率,并促进Smo、Gli1蛋白表达。结论:"百会"透"曲鬓"针刺法可明显促进脑出血大鼠神经功能恢复,这可能与其激活Shh通路,继而抑制脑出血半暗带区神经细胞凋亡有关。