扶正抗癌方联合吉非替尼抑制非小细胞肺癌增殖的机制研究

目的探讨扶正抗癌方联合吉非替尼对A549、H1650增殖的抑制作用及分子机制。方法用MTS活力检测法观察药物对细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测药物对p-EGFR、p-STAT3、p-ERK和p-Akt(Ser473)蛋白表达的影响。结果用扶正抗癌方(2 mg/mL)干预细胞,A549和H1650细胞活力明显下降(P0.01);扶正抗癌方(2 mg/mL)和吉非替尼(1μmol/L)联合作用后,与吉非替尼单独给药相比,A549和H1650细胞活力下降更加明显(P0.05);提示扶正抗癌方能抑制A549、H1650细胞的增殖,且联合吉非替尼后抑制效果更好。用扶正抗癌方(2 mg/mL)分别作用于A549细胞和H1650细胞,加药2 h开始抑制p-EGFR的激活,且随着时间的推移抑制作用更加明显;提示扶正抗癌方能以时间依赖性抑制p-EGFR的表达(P0.05)。扶正抗癌方组、吉非替尼组及联合给药组均能明显下调p-STAT3、p-ERK和p-Akt(Ser473)蛋白的表达(P0.05);与吉非替尼单药组相比,联合给药组对以上3种蛋白的下调作用更明显(P0.05)。结论扶正抗癌方联合吉非替尼可通过介导EGFR通路,抑制p-STAT3、p-ERK和p-Akt(Ser473)的表达,进而抑制A549、H1650细胞的增殖。     

扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌A549细胞的影响及机制

目的观察扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌A549细胞生长、凋亡的影响,探讨其协同抗肿瘤的可能机制。方法应用MTT法检测扶正抗癌方(0.211、0.316、0.474、0.711、1.067、1.6、2.4、3.6 mg/m L)和吉非替尼(3.95、5.92、8.18、13.33、20、30、45、67.5!mol/L)对A549细胞增殖的影响;用流式细胞术观察对照组(完全培养液组)、中药组(扶正抗癌方,1.6 mg/m L)、西药组(吉非替尼,45!mol/L)、联合组(扶正抗癌方1.6 mg/m L+吉非替尼45!mol/L)A549细胞凋亡;用Western blot检测各组EGFR、p-EGFR、EZH2、PPAR-γ及P53蛋白表达。结果扶正抗癌方及吉非替尼均有抑制肿瘤细胞增殖作用。扶正抗癌方联合吉非替尼干预后细胞凋亡率为(12.6±4.5)%,明显高于扶正抗癌方(4.6±0.7)%及吉非替尼(7.8±2.7)%,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,联合组p-EGFR、EZH2下调(P0.05),PPAR-γ及P53蛋白上调(P0.05),西药组及中药组EZH2下调(P0.05),中药组PPAR-γ上调(P0.05);与西药组比较,联合组p-EGFR下调(P0.05),PPAR-γ上调(P0.05);与中药组比较,联合组p-EGFR下调(P0.05)。结论扶正抗癌方联合吉非替尼能显著抑制A549细胞的增殖生长,促使肿瘤细胞凋亡;其协同抗肿瘤活性的机制可能与下调p-EGFR、EZH2及上调PPAR-γ、P53蛋白有关。     

扶正抗癌方诱导H1650细胞凋亡的分子机制

目的:观察扶正抗癌方对H1650细胞凋亡的影响,并探讨其诱导H1650细胞凋亡的分子机制。方法:以人肺腺癌细胞株H1650细胞为研究对象,用0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 g·L~(-1)扶正抗癌方处理H1650细胞24,48,72 h,另设空白组,四氮唑蓝盐化合物(MTS)法检测细胞增殖;用0.5,1.0,1.5 g·L~(-1)扶正抗癌方处理H1650细胞24 h,另设空白组,Annexin VFITC/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡;用0.5,1.0,2.0 g·L~(-1)扶正抗癌方处理H1650细胞24 h,另设空白组,半胱氨酸蛋白酶-3/7(Caspase-3/7)活力检测试剂盒检测Caspase-3/7活力;蛋白免疫印迹法检测扶正抗癌方对pro Casapse-3,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果:与空白组比较,扶正抗癌方能明显抑制H1650细胞的增殖(P0.05),且呈浓度和时间依赖性。与空白组比较,扶正抗癌方明显诱导H1650细胞的早期凋亡,增强Caspase-3/7的活力(P0.05),且呈浓度依赖性。与空白组比较,扶正抗癌方明显下调pro Casapse-3和PARP的表达(P0.05),呈浓度依赖性,明显上调Bax的表达(P0.05),且呈时间依赖性。结论:扶正抗癌方可通过激活Caspase-3和Bax诱导H1650细胞的凋亡。     

扶正抗癌方抑制PC9细胞转移的分子机制

目的:探讨扶正抗癌方抑制PC9细胞转移的分子机制。方法:台盼蓝活力检测探索扶正抗癌方对PC9细胞增殖的影响;transwell实验探索扶正抗癌方对PC9细胞侵袭和迁移的影响;基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活力检测探索扶正抗癌方对MMP-9活力的影响,Real-time quantitative PCR探索扶正抗癌方对MMP-9 mRNA表达的影响,蛋白质印迹法探索扶正抗癌方对MMP-9、磷酸化的信号转导子及转录激活子3[p-STAT3(Tyr705)]蛋白表达的影响并探讨两者的关系。结果:扶正抗癌方以浓度依赖性抑制PC9细胞的增殖、侵袭和迁移(P0.05);以浓度依赖性下调MMP-9活力、mRNA和蛋白的表达(P0.05),以时间依赖性下调p-STAT3(Tyr705)蛋白的表达(P0.05);过表达STAT3逆转了扶正抗癌方对MMP-9的下调(P0.05)。结论:扶正抗癌方通过抑制STAT3的表达下调MMP-9,进而抑制PC9细胞的转移。     

肺岩宁方联合吉非替尼对肺腺癌H1975细胞体外增殖的影响

目的 观察吉非替尼耐药肺腺癌H1975细胞在肺岩宁方、吉非替尼作用下体外增殖情况,探讨肺岩宁方逆转吉非替尼耐药可能的机制。方法 选取肺腺癌T790M突变耐药株H1975细胞,分为对照组、吉非替尼组、肺岩宁方组和联合干预组。CCK-8法检测各组细胞在不同时间点(0 h、24 h、48 h、72 h)的增殖率;Western blot检测EGFR-PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,肺岩宁方组对于H1975细胞在体外增殖呈剂量依赖性抑制,即随着药物浓度的提高而增加;联合干预组对于抑制细胞体外增殖效果较单药明显。Western blot显示,联合干预组可下调p-EGFR、p-Akt、pmTOR的表达。结论 肺岩宁方联合吉非替尼可抑制H1975细胞的体外增殖,体外抑制效果较单药治疗明显;其延缓吉非替尼耐药机制可能与下调EGFR-PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达有关。     

扶正解毒方药调控T790M及c-Met改善吉非替尼获得性耐药

目的:探讨扶正解毒方药改善吉非替尼获得性耐药的作用机制。方法:建立肺癌干细胞荷瘤小鼠模型,随机分为生理盐水组、吉非替尼组、扶正解毒方药联合吉非替尼组、扶正中药联合吉非替尼组、解毒中药联合吉非替尼组,测定荷瘤小鼠抑瘤率,应用ARMS法检测肿瘤组织T790M突变,RT-PCR法检测肿瘤组织c-Met基因扩增。结果:吉非替尼单药对肺癌干细胞荷瘤小鼠抑瘤率为31.02%;解毒中药联合吉非替尼组为33.43%;扶正中药联合吉非替尼组为37.51%;扶正解毒方药联合吉非替尼组为45.11%。上述各组与生理盐水组比较差异有统计学意义(P0.05或P0.01);扶正解毒方联合吉非替尼组与吉非替尼单药组比较差异有统计学意义(P0.05);吉非替尼单药组T790M基因突变和c-Met基因扩增显著增加,与生理盐水组比较差异有统计学意义(P0.01),扶正解毒方药联合吉非替尼组能够降低T790M基因突变和c-Met基因扩增,与吉非替尼单药组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:扶正解毒方药能够改善吉非替尼获得性耐药,其作用机制与降低T790M突变及抑制c-Met扩增有关。     

养阴解毒方对人肺腺癌耐药细胞PC9/R信号蛋白AKT磷酸化及PTEN表达影响研究

目的:研究养阴解毒方对人肺腺癌耐药细胞PC9/R信号蛋白AKT磷酸化及抑癌基因PTEN的表达影响。方法:选择吉非替尼获得性耐药细胞株PC9/R,采用血清药理学的方法,研究养阴解毒方及其结合吉非替尼的体外增殖抑制作用,流式细胞术法检测对PC9/R的细胞凋亡及周期的影响;Western-blot法检测PC9/R细胞株的PI3K/Akt信号通路中的关键激酶Akt磷酸化和PTEN表达。结果:养阴解毒方对耐药株PC9/R有增殖抑制作用,并有量效关系,低剂量组联合吉非替尼抑制PC9/R效果最优(P0.01),增效作用明显(Q值均0.85);养阴解毒联和吉非替尼组较吉非替尼单药组可明显提高PC9/R细胞凋亡的能力,有显著统计学意义(P0.01),养阴解毒方组及联合用药组对PC9/R细胞S期均较吉非替尼单药细胞周期缩短(P0.01);养阴解毒方组与联合用药组均比单药吉非替尼能够明显抑制PC9/R的p-AKT活化位点Thr308和Ser473的磷酸化,有统计学意义(P均0.05),联合用药组PC9/R的PTEN表达显著高于其余各组,有统计学意义(P均0.05)。结论:养阴解毒方可增加人肺腺癌耐药株细胞PC9/R对于吉非替尼的药物敏感性,两药联用有协同作用,养阴解毒方可提高PTEN的表达,抑制信号通路关键蛋白AKT的磷酸化,从而起到抑制肿瘤生长、逆转耐药的双重作用。     

扶正抗癌方联合吉非替尼治疗PS≤2分晚期NSCLC的疗效与安全性研究

目的探讨扶正抗癌方联合吉非替尼治疗体力状况评分(PS)≤2分且EGFR基因突变型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效与安全性。方法连续入组51例PS≤2分的ⅢB/Ⅳ期病理组织学确诊且EGFR基因突变型NSCLC患者,随机分为治疗组25例及对照组26例,分别接受扶正抗癌方汤剂1次/d联合吉非替尼250 mg 1次/d和单药吉非替尼250 mg1次/d治疗,比较2组患者治疗后无进展生存时间(PFS)、总生存时间(OS)、客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)及毒性反应。结果治疗组PFS与OS较对照组显著延长(P均0.05),2组ORR及DCR比较均无显著性差异(P均0.05)。2组均出现Ⅰ~Ⅱ度皮疹、腹泻或口腔溃疡,治疗组少于对照组,但无显著性差异(P0.05)。结论扶正抗癌方联合吉非替尼治疗PS≤2分且EGFR基因突变型晚期NSCLC,可延长患者PFS及OS,且两药联合使用毒副反应有减少趋势,提示扶正抗癌方对吉非替尼有增效减毒的作用。     

藤黄酸对非小细胞肺癌EGFR-TKI 耐药细胞H1975耐药的逆转作用及机制探讨

目的：观察藤黄酸（GA） 联合埃克替尼（Icotinib） 对非小细胞肺癌（NSCLC） 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI） 耐药细胞H1975 增殖的影响,探讨GA 逆转耐药可能的作用机制。方法：通过持续诱导的方式建立EGFR-TKI 耐药细胞株H1975,采用MTT 法检测单用埃克替尼、单用GA 与二者联用对耐药细胞株H1975 细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI 双染色法检测药物处理对耐药细胞株H1975 细胞凋亡的影响;Transwell 实验检测药物处理对耐药细胞株H1975 细胞迁移的影响;Western blot 法检测药物处理对耐药细胞株H1975 细胞蛋白表达的影响。结果：①单独应用GA 与埃克替尼对耐药细胞株H1975 细胞增殖的抑制效果呈浓度依赖性,即药物浓度越高抑制效果越强。GA 联合埃克替尼对耐药细胞株H1975 细胞增殖的抑制效果显著强于单独应用埃克替尼（P＜0.05）。②单独应用GA 与埃克替尼诱导耐药细胞株H1975 细胞凋亡效果与空白组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;GA 联合埃克替尼可以有效促进耐药细胞株H1975 细胞凋亡,其效果显著优于单独药物处理（P＜0.05）。③单独应用GA 与埃克替尼对耐药细胞株H1975 细胞迁移无显著影响（P＞0.05）,GA 联合埃克替尼可以有效抑制耐药细胞株H1975 细胞迁移,其效果显著优于单独药物处理（P＜0.05）。④GA 联合埃克替尼组磷酸化表皮生长因子受体（p-EGFR）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK） 蛋白表达量均显著低于空白组、埃克替尼组与GA 组（P＜0.05）。结论：GA 联合埃克替尼可以有效抑制EGFR-TKI 耐药细胞H1975 增殖,并抑制细胞迁移,诱导细胞凋亡,对肺癌EGFR-TKI 耐药起到逆转作用,其具体作用机制可能与抑制EGFR 信号通路分子磷酸化,调节蛋白表达有关。     

南方红豆杉水提物抑制T790M突变及c-MET扩增导致的吉非替尼耐药体外研究

目的研究南方红豆杉水提物抑制T790M突变及c-MET扩增所致吉非替尼耐药机制。方法应用MTT法检测不同浓度南方红豆杉水提物(0.25、0.5、1、2、4 mg/mL)和吉非替尼(3、6、12、18、30μmol/L)对H1975、H820细胞株增殖的影响,根据结果筛选最佳后续实验药物浓度,计算各组半数抑制浓度(IC_(50))和两药联合指数(CI);将对照组(1640培养液)、南方红豆杉组(0.25μmol/L)、吉非替尼组(3μmol/L)及联合组(南方红豆杉0.25μmol/L+吉非替尼3μmol/L)H1975和H820细胞药物处理72 h后,采用Western Blot检测EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT及PI3K蛋白表达,采用qRT-PCR检测EGFR、PI3K及AKT mRNA表达。结果在H1975和H820细胞中联合组达到IC_(50)所需的吉非替尼浓度明显小于吉非替尼组,且CI1。在H1975细胞中,与对照组比较,南方红豆杉组EGFR、p-EGFR、PI3K及p-AKT蛋白表达降低(P0.01,P0.05),吉非替尼组AKT蛋白表达降低(P0.05),联合组EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT及PI3K蛋白表达降低(P0.01,P0.05)。与吉非替尼组比较,南方红豆杉组EGFR、p-EGFR、p-AKT蛋白表达降低(P0.01),联合组EGFR、p-EGFR、PI3K及p-AKT蛋白表达降低(P0.01)。在H820细胞中,与对照组比较,南方红豆杉组EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达下调(P0.01),联合组p-EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P0.01)。与吉非替尼组比较,南方红豆杉组EGFR、p-AKT蛋白表达降低(P0.01,P0.05),联合组p-EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P0.01)。在H1975及H820细胞中,与对照组比较,吉非替尼组AKT及PI3K mRNA表达降低(P0.01,P0.05),南方红豆杉组及联合组EGFR、AKT及PI3K mRNA表达降低(P0.01)。与吉非替尼组比较,联合组EGFR、AKT及PI3K mRNA表达降低(P0.01)。结论南方红豆杉水提物能增强吉非替尼对H1975、H820细胞增殖抑制作用,可抑制T790M突变和c-MET扩增所致的吉非替尼耐药,其机制与抑制EGFR/PI3K/AKT通路有关。     

金复康口服液对吉非替尼耐药肺腺癌H1975细胞有氧糖酵解的影响

目的 探讨金复康口服液联合吉非替尼对肺腺癌H1975细胞有氧糖酵解的影响。方法 首先采用CCK-8法检测不同浓度金复康口服液和吉非替尼对H1975细胞增殖的影响;然后实验分为空白组、吉非替尼组、金复康口服液组和联合用药组,采用2-NBDG荧光探针和乳酸测试盒分别检测各组细胞葡萄糖摄取能力及乳酸生成量,酶活性试剂盒检测细胞中糖酵解关键限速酶[己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)]的活性,Western blot法检测细胞中己糖激酶2(HK2)、P型磷酸果糖激酶(PFKP)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白表达情况,JC-1、DCFH-DA荧光探针分别检测细胞线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平。结果 金复康口服液对H1975细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性增强,差异均有统计学意义(P均<0.05);与不同浓度吉非替尼单独作用48 h比较,相应浓度吉非替尼联合金复康口服液作用后的H1975细胞增殖抑制率均更高(P均<0.05)。各给药组细胞葡萄糖相对摄取量与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);各给药组细胞乳酸生成量均明显低于空白组(P...     

扶正抗癌方联合吉非替尼治疗 PS≤2 分晚期 NSCLC 的疗效与安全性研究

目的探讨扶正抗癌方联合吉非替尼治疗体力状况评分（Ps）≤2分且EGFR基因突变型晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效与安全性。方法连续入组51例PS≤2分的ⅢB／Ⅳ期病理组织学确诊且EGFR基因突变型NSCLC患者,随机分为治疗组25例及对照组26例。分别接受挟正抗癌方汤剂1次／d联合吉非替尼250mg1次／d和单药吉非替尼250mg1次／d治疗,比较2组患者治疗后无进展生存时间（PFS）、总生存时间（OS）、客观缓解率（ORR）、疾病控制率（DCR）及毒性反应。结果治疗组PFS与OS较对照组显著延长（P均〈0．05）,2组ORR及DCR比较均无显著性差异（P均〉0．05）。2组均出现I～Ⅱ度皮疹、腹泻或I：／腔溃疡,治疗组少于对照组,但无显著性差异（P〉0．05）。结论扶正抗癌方联合吉非替尼治疗PS≤2分且EGFR基因突变型晚期NSCLC,可延长患者PFS及OS,且两药联合使用毒副反应有减少趋势,提示扶正抗癌方对吉非替尼有增效减毒的作用。     

扶正抗癌方联合吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌患者血浆差异蛋白比较分析

目的通过比较扶正抗癌方联合吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌患者1个月前后血浆蛋白,找出差异蛋白,为扶正抗癌方联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌进一步研究提供差异蛋白组学证据基础。方法收集8例扶正抗癌方联合吉非替尼治疗的晚期非小细胞肺癌患者治疗前及治疗1个月后血浆,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离血浆蛋白质,PDQuest 7.1.0图像分析软件识别差异蛋白点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱及液相色谱-电喷雾串联质谱技术鉴定差异蛋白。结果图像分析软件识别出11个差异蛋白点。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定7种差异蛋白(异构体2的纤维蛋白原α链、载脂蛋白E、簇蛋白亚型2、甲状腺素、未知功能蛋白、皮质类固醇结合球蛋白、载脂蛋白A 4),未鉴定出的蛋白用液相色谱-电喷雾串联质谱技术鉴定出为Ⅱ型细胞骨架蛋白1。结论扶正抗癌方联合吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌对患者血浆蛋白有一定的影响,液相色谱—电喷雾串联质谱技术可作为基质辅助激光解析电离飞行时间质谱的补充使用。     

β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞A549肿瘤干性的影响

目的探讨β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞A549肿瘤干性的影响。方法采用MTS法检测β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞活性的作用;Transwell检测细胞侵袭能力;细胞划痕检测细胞迁移能力;流式细胞检测细胞凋亡、细胞周期;Western blot检测上皮-间质转化相关标记分子(E-Cadherin、N-Cadherin、ZEB1、Vimentin)。结果榄香烯浓度在0～50μmol/L内对肺癌细胞(A549、H522、H1299、PC-9)活性无显著影响。与对照组比较,β-榄香烯(40μg/mL)联合吉非替尼(5μmol/L)能显著抑制A549细胞活性(P0.01);降低S期细胞比例(P0.05),但不影响A548细胞凋亡,抑制A549细胞的侵袭与转移(P0.05,P0.01),上调E-Cadherin蛋白表达,下调N-Cadherin、ZEB1、Vimentin蛋白表达(P0.01)。结论榄香烯(≥50μmol/L)能抑制肺癌细胞增殖,呈剂量依赖;β-榄香烯(40μg/mL)联合吉非替尼抑制肺癌细胞的侵袭、转移及上皮-间质转化(EMT)。     

扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌细胞株PC-3体外增殖能力的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法测定不同浓度扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测其对PC-3细胞凋亡及细胞周期的影响,并以Western blot分析扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞凋亡调控蛋白bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果:扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞体外增殖抑制作用明显,呈浓度及时间依赖性。流式结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可诱导PC-3细胞凋亡,并能够增加G_2/M期细胞比例,降低S期细胞比例,呈浓度依赖性。Western blot结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可下调bcl-2蛋白的表达,而上调bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:扶正利湿抗癌方含药血清可以通过调节bcl-2和bax蛋白的表达发挥体外抑制PC-3细胞增殖的作用。     

扶正抗岩方联合吉非替尼治疗气虚血瘀型非小细胞肺癌(Ⅳ期)的前瞻性、平行随机、安慰剂对照临床研究

目的观察扶正抗岩方联合吉非替尼治疗气虚血瘀型非小细胞肺癌(Ⅳ期)的临床疗效。方法将60例气虚血瘀型非小细胞肺癌(Ⅳ期)患者随机分为对照组与治疗组,每组30例。对照组予吉非替尼+中药安慰剂,治疗组予吉非替尼+扶正抗岩方。两组均服药至肿瘤进展而终止,观察比较近期疗效、远期疗效(无进展生存期)、KPS评分变化及不良反应情况。结果①试验期间,无病例脱落。②治疗组有效率、肿瘤控制率分别为53.33%、93.33%,对照组相应分别为43.33%、90.00%;组间近期疗效比较,差异无统计学意义(P0.05)。③组间无进展生存期比较,差异有统计学意义,治疗组明显长于对照组(P0.05)。④组间治疗后比较,治疗组KPS评分明显高于对照组(P0.05)。⑤两组不良反应比较,腹泻、恶心或呕吐发生情况等级差异有统计学意义,治疗组明显轻于对照组(P0.05)。结论扶正抗岩方联合吉非替尼治疗气虚血瘀型非小细胞肺癌(Ⅳ期),可以明显延长患者的无进展生存期,改善其生活质量,减轻EGFR-TKI药物的不良反应。     

蟾毒灵联合吉非替尼对肺癌细胞H1975的影响及机制研究

目的 观察蟾毒灵联合吉非替尼对肺癌细胞H1975生长的影响,探讨蟾毒灵增强吉非替尼抗肿瘤作用的可能机制。方法 应用MTT法检测蟾毒灵（1～100 nmol/L）、吉非替尼（0.1～20 μmol/L）及两药联合干预对H1975细胞增殖的抑制作用;流式细胞术观察蟾毒灵（10 nmol/L）、吉非替尼（1 μmol/L）及联合用药对H1975细胞凋亡的影响;Western blot检测单独用药或联合用药对表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、Met信号通路相关蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,吉非替尼浓度超过5 μmol/L时才见到其对H1975细胞生长的抑制作用;蟾毒灵与吉非替尼联合后,可明显抑制肿瘤细胞的生长。流式细胞术结果显示,蟾毒灵联合吉非替尼干预后肿瘤细胞凋亡率为（61.64±5.61）%,明显高于单用蟾毒灵的（18.34±3.42）%和单用吉非替尼的（7.32±1.08）%,差异有统计学意义（P<0.01）。Western blot结果显示,蟾毒灵联合吉非替尼能明显下调H1975细胞p-EGFR、p-Met、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）蛋白表达。结论 蟾毒灵联合吉非替尼可显著抑制H1975细胞的增殖,促使肿瘤细胞凋亡;其抗肿瘤活性的机制可能与阻断EGFR－磷酯酰肌醇－3激酶（PI3k）/Akt信号通路有关。     

基于P38 MAPK信号通路探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞增殖、凋亡及p38 MAPK通路的作用。方法：应用CCK-8法观察扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪分析扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞凋亡的影响,Western Blot法检测LNCaP细胞p38 MAPK、p-p38MAPK、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等蛋白的表达。结果：扶正利湿抗癌方含药血清能够以剂量依赖性地抑制LNCaP细胞增殖并诱导其凋亡,上调p-p38 MAPK、Bax、Caspase-3及p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平。结论：扶正利湿抗癌方含药血清可能通过激活p38 MAPK信号传导通路抑制LNCaP细胞增殖并促进其凋亡。     

金复康口服液对人肺腺癌耐吉非替尼PC-9R细胞凋亡的影响

目的:探讨金复康口服液对人肺腺癌吉非替尼获得性耐药细胞株PC-9R的凋亡的影响及机制。方法:流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,免疫组化法检测Caspase-3、Caspase-8的表达。结果:对于G1、G2期细胞数含量,金复康药物血清+吉非替尼组与金复康药物血清组、吉非替尼组比较,P<0.05,有统计学差异,对于S期细胞数含量,金复康药物血清+吉非替尼组、金复康药物血清组、吉非替尼组,P>0.05,无统计学差异,表明吉非替尼联合金复康药物血清后,金复康口服液增强了吉非替尼将细胞周期阻滞在G2期;在凋亡率方面,金复康药物血清+吉非替尼组与金复康药物血清组、吉非替尼组比较,P<0.05,有统计学差异,表明吉非替尼联合金复康药物血清后,金复康口服液增强了吉非替尼对PC-9R细胞的凋亡诱导作用;吉非替尼组、金复康药物血清+吉非替尼组与Con组比较,Caspase-3、Caspase-8的阳性表达率有统计学差异(P<0.05)。结论:金复康口服液能够逆转人肺腺癌吉非替尼获得性耐药细胞株对吉非替尼的凋亡抵抗,可能与上调caspase-3、caspase-8的表达有关。     

扶正抗癌方对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对IL-12和Survivin表达的影响

目的:通过实验研究扶正抗癌方对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对IL-12和Survivin表达的影响。方法:85只小鼠,随机抽取15只作为正常对照组(A),将剩余70只小鼠共同造模:在右腋皮下种植相同量的H22瘤株悬液,将造膜成功的小鼠随机纳入60只,采用每只右腋皮下接肝癌细胞悬液0.2mL再随机分成4组,于接种瘤细胞悬液24小时候开始给药。空白对照组(A):用生理盐水0.2mL/只/d;荷瘤对照组(B):用生理盐水0.2mL/只/d;连续给药14d,替加氟组(C):给予替加氟配置的液体灌胃0.2mL/只/d;扶正抗癌方组(D):浓度为1.89g/mL的中药煎剂灌胃,0.2mL/20g,1次/d,连续共14d;(扶正抗癌方组+替加氟组)联合用药组(E)组:扶正抗癌方浓缩浓度为3.78g/mL,0.1mL/20g,1次/d,替加氟浓缩浓度为30mg/mL的水溶液灌胃,0.1mL/20g,1次/d,联合灌胃。经口灌胃14d后,取瘤体称重,用免疫组化法检测各组IL-12和Survivin的表达。结果:联合用药组及、扶正抗癌方组、替加氟组各治疗组瘤组织Survivin表达显著下降,与荷瘤对照组比较具有非常显著性差异(P0.01);IL-12检测结果示:联合用药组与扶正抗癌方组及替加氟组比较具有显著性差异(P0.05),扶正抗癌方组与替加氟组比较无显著性差异(P0.05);结论:扶正抗癌方具有抑制肝癌侵袭转移的作用,联合西药治疗可减毒增效,提高免疫功能,改善生存质量;其机制与抗肿瘤下调抑制细胞凋亡的Survivin同时促进IL-12的表达及抗肿瘤侵袭与转移有关。