当归补血汤协同肌源性干细胞移植促造血重建的研究:Notch2、Jagged2和Hes5在鼠脾脏中的表达及作用

目的了解Notch2、Jagged2和Hes5在当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)协同肌源性干细胞(Muscle-derived stem cells,MDSCs)移植鼠脾脏中的表达及其临床意义。方法根据随机数字表将150只雌性昆明小鼠分成6组,于照射前1周分别给予6组不同剂量当归补血汤或生理盐水灌胃。在经8Gy 137Cs-γ射线照射后的小鼠尾静脉中移植骨髓细胞或肌源性干细胞。并于3周和8周末时采用实时定量PCR方法检测小鼠脾脏中Notch2、Jagged2和Hes5mRNA表达。结果移植3周末,与照射组相比,各给药组Notch2、Jagged2mRNA及给药3组Hes5mRNA表达上调,给药1组和给药2组的Hes5mRNA表达下调,且组间具有统计学差异(Notch2,F=4.777,P=0.012;Jagged2,F=11.650,P=0.000;Hes5,F=23.229,P=0.000)。移植8周末,与照射组相比,各给药组Notch2、Jagged2mRNA表达上调,Hes5mRNA表达下调,且仅Jagged2mRNA组间存在统计学差异(Notch2,F=2.979,P=0.056;Jagged2,F=18.796,P=0.000;Hes5,F=2.202,P=0.122)。结论在骨髓移植早期和晚期,以及MDSCs移植早期,Notch2和Jagged2均未参与B淋巴细胞的分化发育。Hes5在骨髓移植早期参与了脾脏中B淋巴细胞的发育调控。3倍剂量当归补血汤可在MDSCs移植早期通过调控Notch2及Jagged2来促进B淋巴细胞发育。     

当归补血汤协同肌源性干细胞移植对小鼠胸腺Notch4、Delta4和Hes5的影响

目的:研究当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)协同肌源性干细胞(Muscle-derived stem cells,MDSCs)移植对小鼠胸腺Notch4、Delta4和Hes5基因mRNA的影响。方法:将150只雌性昆明小鼠按照随机数字表随机分成照射模型组、骨髓移植组、MDSCs移植组、不同剂量(1、3和5倍)DBD预处理+MDSCs移植组。各组分别于照射前给予生理盐水或不同剂量DBD灌胃1周。经射线8Gy~(137)Cs-γ照射后,在小鼠尾静脉移植骨髓细胞或MDSCs。运用real-time PCR检测3周和8周末时小鼠胸腺中Notch4、Delta4和Hes5mRNA表达。结果:移植3周末,与模型组相比,各给药组Notch4、Delta4mRNA及给药2组Hes5mRNA表达上调,给药1组和给药3组的Hes5mRNA表达下调,骨髓移植组和MDSCs移植组Delta4mRNA表达下调,Hes5mRNA表达上调,骨髓移植组Notch4mRNA表达下调,MDSCs移植组Notch4mRNA表达上调,且组间具有统计学差异(Notch4,F=18.556,P=0.000;Delta4,F=5.635,P=0.007;Hes5,F=4.771,P=0.012)。移植八周末,与模型组相比,各给药组Delta4、Hes5mRNA及给药3组Notch4mRNA表达上调,给药1组和给药2组的Notch4mRNA表达下调,骨髓移植组和MDSCs移植组Notch4mRNA表达下调,Hes5mRNA表达上调,骨髓移植组Delta4mRNA表达下调,MDSCs移植组Delta4mRNA表达上调,且组间具有统计学差异(Notch4,F=19.057,P=0.000;Delta4,F=8.116,P=0.010;Hes5,F=4.545,P=0.015)。结论:Notch4、Delta4和Hes5在骨髓移植、MDSCs移植和DBD协同MDSCs移植中对T淋巴细胞分化和发育的作用相同,3倍剂量当归补血汤可通过Notch4和Delta4,并作用于下游靶基因Hes5来促进MDSCs向T细胞分化发育。     

基于Notch4和Delta4研究当归补血汤协同肌源性干细胞移植促造血重建的作用

目的:基于Notch4和Delta4探讨当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)协同肌源性干细胞(Musclederived stem cells,MDSCs)向造血方向调控的作用机制。方法:将雌性昆明小鼠随机分成6组,分别为照射模型组、骨髓移植组、MDSCs移植组、等效剂量DBD预处理+MDSCs组(给药1组)、3倍DBD预处理+MDSCs组(给药2组)和5倍DBD预处理+MDSCs移植组(给药3组)。照射前各组分别给予生理盐水和不同剂量DBD灌胃1周,经8Gy~(137)Cs-γ射线照射后,尾静脉分别移植骨髓细胞和MDSCs。用real-time PCR检测3周末时小鼠骨髓中CD34、Notch4和Delta4 mRNA表达量。结果:与照射模型组比,干预组中CD34 mRNA上调(P0.05),且以给药3组上调幅度最大;Notch4 mRNA下调(P0.05),且给药1组下调幅度最大;除骨髓移植组外,其余各组Delta4 mRNA均上调(P0.05),且给药3组上调幅度最大。结论:当归补血汤协同肌源性干细胞移植能促进受照射小鼠造血重建,且5倍当归补血汤协同MDSCs移植效果最佳。Notch4和Delta4在骨髓造血干细胞移植和MDSCs移植中的作用不同,其促进骨髓造血干细胞、MDSCs向造血细胞分化的具体调控机制尚待深入探索。     

经当归补血汤干预的肌源性干细胞Wnt信号相关基因表达分析

目的:探讨在体外造血微环境中肌源性干细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达情况及当归补血汤(DBD)载药血清的干预作用。方法:将分离纯化并经流式细胞仪鉴定的MDSCs与BMSCs体外培养,根据实验需要随机分为6组进行药物干预,即空白对照组、共培养Wnt激动剂组、共培养Wnt抑制剂组、DBD+共培养组、DBD+共培养激动剂组及DBD+共培养抑制剂组。Real-time PCR检测各实验组MDSCs Wnt通路上下游节点基因Wnt3、Wnt3a、β-catenin及MDSCs增殖分化相关基因Cyclin D1、C-myc、CD34 mRNA的表达变化。结果:流式细胞仪检测结果显示MDSCs CD34、Sca-1阳性。倒置显微镜下观察:共培养Wnt激动剂组、DBD+共培养组、DBD+共培养激动剂组MDSCs较空白对照组生长密集且生长速度快,激动剂组聚团明显,共培养Wnt抑制剂组MDSCs增殖明显受到抑制。Real-time PCR检测结果显示:DBD+共培养激动剂组的Wnt3、Cyclin D1、CD34 mRNA表达水平最高,共培养激动剂组与DBD共培养组其次,空白对照组最低。结论:当归补血汤载药血清作用于共培养体系下的肌源性干细胞,Wnt信号通路持续激活后,体外造血微环境中的MDSCs更易增殖并分化。     

纤维蛋白胶对骨髓源性心肌干细胞增殖、迁移和缺血缺氧后的保护作用

目的探讨纤维蛋白胶（FG）对骨髓源性心肌干细胞（MCSC）增殖、迁移和存活的作用,为临床应用干细胞移植治疗心肌梗死等缺血性疾病提供实验手段和理论依据。方法将MCSC接种于FG中制备FG-MCSC,经AO/EB染色选择合适浓度的FG,用细胞计数法检测MCSC在FG中的增殖,通过损伤和自然迁移实验评价MCSC从FG中的迁出。建立细胞缺血缺氧模型（OGD）,用AO/EB染色和乳酸脱氢酶（LDH）泄漏法检测FG对MCSC的保护作用。结果 MCSC在低浓度FG中保持较高的活力和增殖能力。接种后1d和2d,仅有少量细胞从FG的刮除线边缘迁出。在接种后3d,有大量细胞从FG中迁出。经缺血缺氧处理后,MCSCOGD组中存活、凋亡和坏死细胞数目分别为14.09±2.05、61.11±5.20和24.80±4.99。与MCSC OGD组相比,FG-MCSC OGD组MCSC的存活数目（61.01±8.86）较高,凋亡（31.67±8.27）和坏死（7.33±2.70）细胞数目较低。MCSC经缺血缺氧处理后,FG-MCSC OGD组LDH的水平明显低于MCSC OGD组。结论低浓度FG作为一种天然生物材料可以为MC-SC的生长提供良好的微环境。在缺血缺氧条件下,低浓度FG能够保护MCSC免受缺血缺氧损伤,促进细胞存活。     

补阳还五汤对Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中的作用

目的探讨Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖中的作用及补阳还五汤促神经再生的机制。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠脑缺血模型,将野生型(wild type,WT)和小凹蛋白-1基因敲除小鼠(caveolin1 gene knockout,Cav1 KO)分别随机分为假手术组、模型组、补阳组,每组12只,腹腔注射Brd U标记增殖细胞,干预7 d后,采用免疫荧光Brd U/Nestin双标法检测小鼠缺血侧海马NSCs增殖情况,Western blot法检测Notch1、NICD、Hes1蛋白表达,Real time PCR法检测Notch1、Hes1m RNA表达。结果 MCAO法成功复制了小鼠脑缺血模型;WT模型组、补阳组和KO模型组、补阳组缺血侧海马Brd U/Nestin双标阳性细胞,Notch1、NICD、Hes1蛋白表达及Notch1、Hes1m RNA表达均增加,与相应假手术组比较,差异有统计学意义(P0.01,P0.05),同时,WT模型组要高于KO模型组(P0.05),WT补阳组要高于WT模型组和KO补阳组(P0.01,P0.05)。结论Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中发挥重要调控作用;通过上调Cav1/Notch1/Hes1通路活性是补阳还五汤促进缺血海马神经再生作用机理之一。     

活血通络汤中药对激素性股骨头坏死造模家兔中BMP2和Jagged1表达的影响

目的:探讨中药预防性治疗激素性股骨头坏死(SANFH)的疗效及作用机制。方法:将192只日本大耳兔随机分为模型组A(48)、模型组B(48)、模型对照组C(48)、空白对照组D(48),A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料,A、B、C组第3周开始造模,每组分别于第2周末、第5周末、第8周末随机抽取8只取双侧股骨头标本,做病理镜检及计算空骨陷窝率,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)对兔血清BMP2的含量进行测定,实时荧光定量PCR(RT-PCR)对兔血清Jagged1蛋白基因表达进行测定。结果:病理镜检及空骨陷窝率显示造模成功,BMP2阳性表达的强度及面积均明显高于造模组,结果有统计学意义(P0.05),模型组A、模型组B、模型对照组C的Jagged1均呈上调趋势。结论:1表明活血通络汤中药对股骨头坏死的预防治疗作用确切;2活血通络汤中药可能是通过促进Jagged1的上调并维持股骨头BMP2浓度,共同促进骨修复和血管生成起治疗作用。     

当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞增殖和PI3K/AKT信号转导通路的影响

目的:从PI3K/AKT信号转导通路探讨当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的调控机制。方法:C57BL/6小鼠20只,雌雄各半,28～32 g。给模型组小鼠每日腹腔注射1次环磷酰胺380 mg·kg~(-1),正常小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续3 d。造模后,以脱颈椎法处死各组小鼠,取出股骨,剔除肌肉和结缔组织,剪开股骨两端,用6号针头以生理盐水反复冲洗骨髓腔,并将冲出的骨髓打碎,再用4号针头过滤制成单个细胞悬液,在离心机上2000 r/min,离心10 min,去上清液,加入4 mL冷70%乙醇固定,上振荡器摇匀制成骨髓干细胞样本。细胞实验分为6组,包括正常组、模型组、EPO组、EPO+(G-CSF)组、当归多糖组、黄芪多糖组、两药配伍组。直接给药当归多糖0.2 mg/mL,黄芪多糖0.2 mg/mL,EPO 50 U/mL,(G-CSF)50 U/mL于骨髓干细胞体外培养体系中,培养3 d,室内18～20℃,20%相对湿度,5%CO_2,37℃孵育箱。采用MTT法检测骨髓干细胞生长和增殖的情况;采用ELISA检测骨髓干细胞中pPI3K和p-AKT的蛋白含量;采用RT-qPCR法检测骨髓干细胞中PI3K、AKT、PTEN的mRNA表达。结果:(1)对小鼠骨髓干细胞生长和增殖的影响。①造模后24 h,各给药组与模型组比较均有明显差异。当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用不如单用当归多糖。②造模后48 h,各给药组与模型组比较均有明显差异,药物组之间差异均没有统计学意义。当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。③造模后72 h,各给药组与模型组比较均有明显差异。当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。(2)对PI3K、AKT的mRNA表达的影响。各给药组与模型组PI3K、Akt的mRNA比较均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升PI3K、Akt的mRNA作用,两药交互作用无统计学意义。(3)对pPI3K、p-AKT蛋白含量的影响。各给药组与模型组pPI3K、p-ATK的蛋白含量比较均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。(4)对PTEN mRNA表达的影响。各给药组与模型组PTEN mRNA比较均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖交互作用明显,合用比单一用药好。结论:(1)当归多糖、黄芪多糖及其配伍能够促进化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞增殖,两药配伍的作用优于单一用药。(2)当归多糖、黄芪多糖及两药配伍能够上调PI3K、AKT mRNA的表达,增加pPI3K和p-AKT的蛋白含量,下调PTEN mRNA的表达,两药配伍的作用优于单一用药。(3)当归多糖、黄芪多糖及两药配伍激活了PI3K/AKT信号转导通路,两药治疗化疗性骨髓抑制的作用可能与PI3K/AKT通路有关。     

Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中的作用及补阳还五汤的影响

目的 探讨Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马神经干细胞（neural stem cells, NSCs）增殖中的作用及补阳还五汤促神经再生机制。方法 采用大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion , MCAO)法复制小鼠脑缺血模型,将野生型（wild type, WT）和小凹蛋白-1基因敲除（caveolin1 gene knockout,Cav1 KO）小鼠分别随机分为假手术组、模型组、补阳组,每组12只,腹腔注射BrdU标记增殖细胞,干预7d后,采用免疫荧光BrdU/ Nestin双标法检测小鼠缺血侧海马NSCs增殖情况,Western blot法检测Notch1、NICD、Hes1蛋白表达,Real time PCR法检测Notch1、Hes1mRNA表达。结果 MCAO法成功复制了小鼠脑缺血模型;WT模型组、补阳组和KO模型组、补阳组缺血侧海马BrdU/Nestin双标阳性细胞,Notch1、NICD、Hes1蛋白表达及Notch1、Hes1mRNA表达均增加,与相应假手术组比较有显著性差异(P< 0.01或P <0.05）,同时,WT模型组要高于KO模型组(P <0.05),WT补阳组要高于WT模型组和KO补阳组（P< 0.01或P <0.05）。 结论Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中发挥重要调控作用;通过上调Cav1/Notch1/Hes1通路活性是补阳还五汤促进缺血海马神经再生作用机理之一。     

芪丹通脉片联合骨髓间充质干细胞修复损伤内皮细胞Caspase-3、c-IPI-1和c-IPI-2的表达

目的:通过对中药复方芪丹通脉片(QDTMP)逆转内皮细胞损伤的机制做进一步研究,为中药治疗血管疾病提供理论依据,也为干细胞修复研究提供更多的思路。方法:采用全骨髓贴壁法和酶消化法分别分离骨髓间充质干细胞(Mes-enchymal stem cell,MSC)和人脐静脉内皮细胞(Human umbilicalve in endothelial cells,HUVEC),采用免疫荧光法对HUVEC鉴定。将HUVEC接种在Tanswell下室,用HCY诱导凋亡,24 h后将MSC接种在Tanswell上室并分别加入不同浓度的含QDTMT血清(0.15%、1.5%、15%),对各组用流式细胞仪观察凋亡情况,采用Westernblot检测caspase-3,c-IPI-1,c-IPI-2的表达。结果:修复干预后的凋亡率有明显下降,W estern b lot结果显示各修复组活化的caspase-3明显减弱,并且各修复组的c-IPI-1,c-IPI-2的表达增强,其中各种变化都以15%血清组的变化最明显。结论:含QDTMP血清联合MSC能通过提高c-IPI-1,c-IPI-2抑制了caspase-3的活化,逆转了由HCY诱导的HUVEC的凋亡。     

大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤的干预作用

目的建立缺氧/复氧大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,观察心肌细胞肌浆网钙调控相关蛋白表达及当归补血汤对H9c2细胞缺氧/复氧损伤钙超载的影响。方法 JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,Fluo-3 AM钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度,RT-PCR荧光相对定量检测大鼠心肌肌浆网Ca转运ATP酶(SERCA2a)、L型钙通道(CAV1.3)、兰尼碱受体(RyR1,RyR2)、受磷蛋白(PLB)、肌集钙蛋白(CASQ)的mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组细胞早期凋亡显著增加(P0.05),细胞内钙离子浓度增加明显(P0.05),CAV1.3mRNA表达水平显著升高(P0.05),RyR1和CASQmRNA表达明显降低(P0.05)。SERCA2a和PLB mRNA表达水平亦降低但差异无统计学意义。当归补血汤干预后,与模型组比较,能够显著降低复氧损伤细胞的早期凋亡率(P0.05),细胞内钙离子浓度降低,差异具有统计学意义(P0.05)。SERCA2a和CASQ mRNA水平显著增加(P0.05),PLB和RyR1 mRNA虽有不同程度的增加,CAV1.3mRNA水平降低,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后出现明显的钙超载及肌浆网钙调节蛋白调节紊乱现象,当归补血汤能够通过升高肌浆网钙调节蛋白SERCA2a和CASQ mRNA的表达,减轻复氧后钙超载,降低复氧损伤H9c2心肌细胞早期凋亡率。     

当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的转录因子GATA1、BCL11A、KLF1、NFE2影响

目的:通过实验研究当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞转录因子GATA1、BCL11A、KLF1、NFE2的影响。方法:C57BL/6小鼠20只,雌雄各半,28～32 g。给模型组小鼠每日腹腔注射1次环磷酰胺380 mg·kg~(-1),正常小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续3 d。造模后,以脱颈椎法处死各组小鼠,取出股骨,剔除肌肉和结缔组织,剪开股骨两端,用6号针头以生理盐水反复冲洗骨髓腔,并将冲出的骨髓打碎,再用4号针头过滤制成单个细胞悬液,在离心机上2000 r/min,离心10 min,去上清液,加入4 mL冷70%乙醇固定,上振荡器摇匀制成骨髓干细胞样本。细胞实验分为7组,包括正常组、模型组、EPO组、EPO+(G-CSF)组、当归多糖组、黄芪多糖组、两药配伍组。直接给药当归多糖0.2 mg/mL,黄芪多糖0.2 mg/mL,EPO50 U/mL,(G-CSF) 50 U/mL于骨髓干细胞体外培养体系中,培养3 d,室内18～20℃,20%相对湿度,5%CO_2,37℃孵育箱。采用MTT法检测骨髓干细胞生长和增殖的情况;采用ELISA检测骨髓干细胞中GATA1的蛋白含量;采用RT-qPCR法检测骨髓干细胞中BCL11A、KLF1、NFE2的mRNA表达。结果:(1)造模后模型组GATA1蛋白含量明显下降,与正常组比较差异均有统计学意义(P0.05)。各给药组与模型组GATA1均有明显差异,药物组之间差异均有统计学意义,当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。(2)造模后模型组小鼠骨髓干细胞BCL11A、KLF1、NFE_2mRNA明显下降,与正常组比较差异均有统计学意义(P0.05)。①各给药组与模型组BCL11A均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升BCL11A作用,两药交互作用明显,合用比单一用药好;②各给药组与模型组KLF1均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升KLF1作用,两药交互作用明显,合用不如单用黄芪多糖;③各给药组与模型组NFE2均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升NFE2作用,两药交互作用明显,合用比单一用药好。结论:当归多糖、黄芪多糖及两药配伍能够显著提升GATA1蛋白含量,上调骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的BCL11A mRNA、KLF1 mRNA、NF-E2 mRNA的表达水平,对珠蛋白基因的调控网络起到促进作用,从而为促进骨髓干细胞红系分化发育创造条件。两药配伍的作用优于单一用药。     

基于PI3K/Akt信号通路探究补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植治疗脊髓损伤的作用机制

目的 探讨补阳还五汤联合骨髓间质干细胞（BMSCs）移植治疗脊髓损伤（SCI）的作用机制。方法 用不同浓度（12.5、25、50 g·kg^-1）的补阳还五汤灌胃,通过改良Tarlov评分测定大鼠脊髓功能,筛选出补阳还五汤最合适的浓度。再将SD大鼠分为6组,即假手术组（灌胃等体质生理盐水）、模型组（灌胃等体质生理盐水）、补阳还五汤组（灌胃25 g·kg^-1补阳还五汤）、BMSCs移植组（尾静脉注射BMSCs 1 mL）、补阳还五汤+BMSCs组（灌胃25 g·kg^-1补阳还五汤同时尾静脉注射BMSCs 1 mL）、补阳还五汤+BMSCs+LY294002组（灌胃25 g·kg^-1补阳还五汤,同时尾静脉注射BMSCs 1 mL和LY294002 40 mg·kg^-1）,各10只。改良Tarlov评分、斜板试验和皮层体感诱发电位波潜伏期测定大鼠脊髓功能;免疫组化法检测脊髓组织中5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）标记的阳性细胞数;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脊髓组织中磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、糖蛋白130（gp130）、白细胞介素-6（IL-6）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组的Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显降低（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均明显升高（P<0.05）。与模型组比较,假手术组和各治疗组的Tarlov评分和倾斜平面临界角度均明显升高（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均明显降低（P<0.05）。和BMSCs组比较,补阳还五汤+BMSCs组Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显升高（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达明显降低（P<0.05）,移植5周后,补阳还五汤+BMSCs组Brdu标记阳性细胞数明显增多（P<0.05）。和补阳还五汤+BMSCs组比较,补阳还五汤+BMSCs+LY294002组Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显升高（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达明显降低（P<0.05）,移植5周后,补阳还五汤+BMSCs+LY294002组Brdu标记阳性细胞数明显增多（P<0.05）。结论 补阳还五汤通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信号促进BMSCs迁移进而恢复脊髓功能。     

Bcl-2和Bax在脾阳虚大鼠下丘脑组织中的表达和大建中汤的干预作用

目的 研究Bcl-2和Bax在脾阳虚大鼠下丘脑组织的表达变化和大建中汤对其表达变化的影响.方法 采用饮食失节伤脾气,劳倦过度伤脾气及苦寒泻下伤脾阳的方法,建立脾阳虚模型.实验分为正常对照组,模型组,大建中汤治疗组.采用免疫组织化学染色法对下丘脑Bcl-2和Bax进行染色,观察下丘脑组织Bcl-2和Bax表达的变化.结果 与正常对照组相比,脾阳虚模型组大鼠Bcl-2表达减少而Bax表达增加,差异具有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比,大建中汤能显著增加脾阳虚大鼠下丘脑Bcl-2蛋白的表达(P＜0.01),减少Bax蛋白的表达(P＜0.01).结论 脾阳虚症能使下丘脑组织Bcl-2表达下降,Bax表达增加,大建中汤能上调脾阳虚症动物下丘脑Bcl-2的表达及下调Bax的表达,其作用机制可能涉及多方面因素.     

CD133及Notch1基因在上皮性卵巢癌中的表达和临床病理意义

目的探讨卵巢癌组织中CD133及Notch1的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测46例上皮性卵巢癌组织、18例良性上皮性卵巢肿瘤组织及10例正常卵巢组织中CD133及Notch1的表达情况。结果正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中CD133及Notch1的表达呈升高趋势,组间比较有显著性差异。CD133及Notch1表达水平与卵巢癌的分期、病理分级及淋巴结转移相关,而与年龄及组织类型无关。Spearman相关性分析显示CD133表达与Notch1的表达呈正相关。结论 CD133及Notch1的高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关。     

PI3K、AKT和PTEN在侵袭性垂体瘤中的表达和相关性研究

目的探讨PI3K、AKT、PTEN在侵袭性垂体瘤和非侵袭性垂体瘤中的表达情况以及三者在侵袭性垂体瘤中的相关性。方法将58例手术切除垂体瘤标本分为侵袭性组31例和非侵袭组27例。采用免疫组织化学技术检测2组标本中PI3K、AKT及PTEN的表达情况。结果 PI3K、AKT在侵袭组中的阳性表达率明显高于非侵袭组(P均0.05),PTEN在侵袭组中的阳性表达率明显低于非侵袭组(P0.05)。在侵袭组中,PTEN与PI3K、AKT表达呈显著负相关(r=-0.39,P=0.029;r=-0.52,P=0.002),而PI3K与AKT表达呈显著正相关(r=0.45,P=0.019)。结论侵袭性垂体瘤中PI3K、AKT阳性表达率较高,且与PTEN表达呈负相关,而PI3K与AKT表达呈正相关,为侵袭性垂体瘤提供了新的靶向治疗方向。     

电针联合脂肪源性干细胞移植对脑缺血/再灌注大鼠SDF-1和CXCR4表达的影响

目的 探讨电针联合脂肪源性干细胞（ADSC）移植对大鼠缺血/再灌注损伤后趋化因子SDF-1及其受体CXCR4的影响.方法 成年大鼠随机分为模型组、电针组、ADSC移植组、电针＋ADSC组.线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血（MCAO）2 h再灌注模型,电针组取大椎穴和内关穴行电针治疗.ADSC组尾静脉注射PKH26标记的ADSC细胞悬液,电针＋ADSC组联合电针和ADSC移植治疗.缺血7 d后行神经功能损害评分（NSS）,采用Western bolt法及实时荧光定量PCR检测海马区SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达.结果 电针＋ADSC组海马区PKH-26标记的细胞个数高于ADSC组（P＜0.05）.与模型组比较,电针组、ADSC组和电针＋ADSC组NSS评分均显著降低,海马区SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达增加（P＜0.05）.其中电针＋ADSC组较电针组和ADSC组NSS评分显著降低,而SDF-1、CXCR4蛋白和mRNA表达显著增加（P＜0.05）.结论 电针联合脂肪源性干细胞移植促进脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复作用优于单独治疗组,其机制可能与电针上调脑海马区SDF-1和CXCR4表达,促进移植的ADSC迁移和存活有关.     

电针联合脂肪源性干细胞移植对大鼠脑缺血/再灌注PARP和NF-κB表达的影响

目的:探讨电针联合脂肪源性干细胞(ADSC)移植对大鼠缺血/再灌注损伤后海马区炎症介质NF-κB、PARP表达和神经功能恢复的影响。方法:成年大鼠随机分为模型组、电针组、ADSC移植组、电针+ADSC组。NSS法行神经功能损害评分,应用Western bolt法及实时荧光定量PCR检测海马区NF-κB和PARP的表达。结果:电针+ADSC组NSS评分低于单独治疗组,海马区PKH-26标记的细胞个数高于ADSC组。与模型组比较,电针+ADSC组和电针组NF-κB和PARP表达降低。结论:电针联合ADSC移植促进脑缺血大鼠神经功能恢复作用优于单独治疗组,其机制可能与电针下调炎症递质NF-κB和PARP的表达,抑制炎性反应,促进移植的ADSC迁移和存活有关。     

补肾活血方对骨髓间充质干细胞移植治疗薄型子宫内膜大鼠子宫内膜CD34、整合素ανβ3、LIF表达的影响

目的探讨补肾活血方对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植治疗薄型子宫内膜模型大鼠子宫内膜血管内皮细胞标志蛋白CD34、子宫内膜容受性标志物整合素ανβ3、白细胞抑制因子(LIF)表达的影响。方法从6～8周龄雄性SD大鼠股骨骨髓中分离提取BMSCs,采用全骨髓贴壁法将其纯化,实验选用纯度较高的第3代细胞,分别采用尾静脉(IV)和宫腔注射(IU)的方法移植到雌性SD大鼠体内;给予雌性SD大鼠宫腔灌注95%无水乙醇及灌胃羟基脲加尾静脉注射高分子右旋糖苷,建立肾虚血瘀薄型子宫内膜模型;将实验大鼠分为正常组、模型组、阳性对照组、BMSCs+IV组、BMSCs+IU组、BMSCs+IV+中药组、BMSCs+IU+中药组;各干预组分别给予BMSCs静脉或宫腔移植并联合中药干预后经过大鼠3个动情周期,处死取材。免疫组化、Western blot检测子宫内膜中CD34、整合素ανβ3及LIF的表达情况。结果 BMSCs+IV组、BMSCs+IU组、BMSCs+IV+中药组、BMSCs+IU+中药组均能一定程度地增加子宫内膜CD34、整合素ανβ3、LIF的表达(P 0.05);在免疫组化检测整合素ανβ3表达方面,BMSCs+IV组与BMSCs+IU组差异有统计学意义(P 0.01); BMSCs+IV+中药组与BMSCs+IV组,BMSCs+IU+中药组与BMSCs+IU组在免疫组化检测整合素ανβ3表达及Western blot检测整合素ανβ3、LIF表达方面差异有统计学意义(P 0.05)。结论尾静脉注射BMSCs增加整合素ανβ3表达优于宫腔注射BMSCs,加用补肾活血方后能更好地增加整合素ανβ3和LIF的表达。     

黄芪注射液联合骨髓间充质干细胞对心梗模型大鼠在IL-3、IL-6、Caspase-3以及VEGF表达的影响

目的:研究黄芪注射液联合骨髓间充质干细胞对心梗模型大鼠在IL-3、IL-6、Caspase-3以及VEGF表达的影响。方法:采用结扎左冠脉法造心梗模型大鼠,造模成功后,干细胞组在心尖部注射骨髓间充质干细胞,黄芪组注射黄芪注射液,以及联合干预大鼠模型,对比各组实验动物在IL-3、IL-6、Caspase-3以及VEGF表达的影响。结果:ELISA检测血清IL-3,正常组较模型组高表达,黄芪组及黄芪联合BMSCs组较模型组表达升高(P0.05);IL-6检测结果为正常组较模型组低表达,黄芪组以及黄芪联合BMSCs组表达低于模型组(P0.05);Caspase-3的结果为正常组较模型组低表达,黄芪组以及黄芪联合BMSCs组表达低于模型组(P0.05);VEGF检测结果,正常组与模型组比较低表达,黄芪组及黄芪联合BMSCs组与模型组比较表达升高(P0.05)。结论:黄芪注射液对心梗模型大鼠IL-3、VEGF促进表达作用较突出,黄芪注射液联合BMSCs在Caspase-3、IL-6抑制表达作用较明显。