鸡新城疫病毒对人类口腔鳞癌细胞的杀伤作用

目的　检测鸡新城疫病毒 (newcastlediseasevirus ,NDV)对人口腔鳞癌细胞的杀伤作用。方法　利用MTT方法检测NDV对人口腔鳞癌 (oralsquamouscellcarcinoma ,OSCC)颈淋巴结转移癌细胞系 (GNM)及人舌鳞癌细胞系 (TSCCa)细胞株的杀伤性。结果　NDV作用后的人口腔鳞癌细胞株的细胞活性比对照组的细胞活性有显著下降 (P <0 0 1) ,NDV血凝效价值显著升高。结论　NDV能够通过在人口腔鳞癌细胞内增殖杀死癌细胞株。     

新城疫病毒对人胃癌细胞的抑制杀伤作用

目的：研究新城疫病毒（ＮＤＶ）对人胃癌细胞株的作用。方法：利用ＭＴＴ方法检测ＮＤＶ对人胃癌细胞株的杀伤性。结果：ＮＤＶ作用后的人胃癌细胞株的细胞活性比对照的细胞活性有显著下降（Ｐ〈０．０１），且ＮＤＶ血凝效价值显著升高，表明ＮＤＶ能杀死肿瘤细胞。结论：ＤＮＡ能够直接杀死肿瘤细胞，可作为治疗肿瘤的一种新生物制剂。     

新城疫病毒Lasota 弱毒株对人肿瘤细胞的体外修饰作用

 目的 研究新城疫病毒（NDV）弱毒株Lasota对体外培养的人肿瘤细胞株免疫功能的影响。方法 以不同病毒滴度作用于肿瘤细胞，采用MTT染色法检测NDV对肿瘤细胞的杀伤作用，同时用NDV处理过的小鼠黑色素B16细胞免疫小鼠，检测其对小鼠NK细胞活性影响。结果 NDV Lasota株对4种癌细胞株均具有较强的杀伤作用，用其处理小鼠黑色素瘤细胞株后，再次接种可提高小鼠体内的NK细胞活性。结论 NDV能够抑制肿瘤细胞生长，诱导其凋亡，免疫接种小鼠后，可提高小鼠的细胞免疫功能。     

新城疫病毒感染体外诱导胃癌细胞热休克蛋白70的表达及意义

目的 :观察NDV在体外抗胃癌细胞活性 ,研究NDV感染诱导胃癌细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及其意义。方法 :应用倒置显微镜观察细胞形态 ,MTT法测细胞生长抑制状况 ,血凝试验检测NDV在细胞中的增殖状况 ,免疫组化染色观察细胞中HSP70表达情况 ,流式细胞术检测胃癌细胞HSP70的表达。结果 :NDV在体外可使BGC 82 3胃癌细胞形成明显的细胞病变效应及生长抑制作用 ,且这种抑制作用与肿瘤细胞被NDV感染后HSP70表达增加呈正相关。结论 :NDV的抗BGC 82 3胃癌细胞活性显著 ,其杀伤机制之一为通过感染而诱导BGC 82 3产生过多的HSP70。     

热休克凋亡和冻融裂解人胃癌细胞株抗原负载树突状细胞体外刺激细胞毒T细胞活性比较

目的:比较热休克凋亡和冻融裂解人胃癌细胞株抗原负载树突状细胞(dendritic cell,DC)体外刺激细胞毒T细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)的活性。方法:分别制备热休克诱导凋亡胃癌细胞株和肿瘤细胞冻融裂解物,同时分离12例胃癌患者外周血单核细胞体外诱导DC进行负载,并以两种不同方式负载的DC进行淋巴细胞增殖反应及CTL杀伤实验,比较其刺激淋巴细胞增殖及激活的淋巴细胞杀伤靶细胞能力的差异。结果:负载热休克胃癌细胞的DC与负载反复冻融肿瘤细胞裂解物的DC都显示对靶细胞CTL活性,但前者的CTL活性显著高于后者(P<0.05)。结论:用热休克肿瘤细胞负载DC是一个更为有效的负载方式,为临床应用提供了一种可选择的负载方式。     

新城疫病毒感染体外诱导胃癌细胞热休克蛋白70的表达及意义

目的：观察NDV在体外抗胃癌细胞活性，研究NDV感染诱导胃癌细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达及其意义。方法：应用倒置显微镜观察细胞形态，MTT法测细胞生长抑制状况，血凝试验检测：NDV在细胞中的增殖状况，免疫组化染色观察细胞中HSP70表达情况，流式细胞术检测胃癌细胞HSP70的表达。结果：NDV在体外可使BGC-823胃癌细胞形成明显的细胞病变效应及生长抑制作用，且这种抑制作用与肿瘤细胞被NDV感染后HSP70表达增加呈正相关。结论：NDV的抗BGC-823胃癌细胞活性显著，其杀伤机制之一为通过感染而诱导BGC-823产生过多的HSP70。     

MicroRNA对肿瘤细胞活性的影响

MicroRNA(miRNA)是一类非编码蛋白的短序列RNA片段,长度大约为21～23个核苷酸。它是通过结合到目标mRNA上抑制该mRNA翻译,起着调控基因功能的作用。本试验将4种miRNA的反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide ofmiRNA,AMR)转染至不同的肿瘤细胞后,用MTT法测定细胞活性来检测miRNA对肿瘤细胞活性的影响。1材料与方法1.1肿瘤细胞人胃癌细胞株MGC803、人胶质瘤细胞株U373、人上皮样宫颈癌细胞株HeLa、人结肠癌细胞株SW620均来自本中心细胞室。1.2主要试剂RPMI1640培养基(Gibco,美国);胎牛血清(中国医学科学院血液研究所);胰…     

新城疫病毒D90毒株致肺癌A549细胞死亡的方式

新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)属副黏病毒,可以引起禽类的新城疫.新城疫病毒在人类癌细胞中的复制效率是在正常细胞中的10 000倍, 因此,NDV可以选择性杀伤肿瘤细胞,这提示人们可将它作为潜在的抗癌因子.目前,已经应用于人癌症治疗的NDV毒株有73-T、MTH-68等溶癌毒株和Μlster等非溶癌毒株, 其中NDV73-T已经被证明可以在体外杀死人的多种肿瘤细胞,同时在体外试验中,该毒株被证明不会杀死正常的、增生性的白细胞或人的正常皮肤纤维原细胞,但是在于人的肿瘤细胞具有明显的杀伤作用.本研究在新城疫病毒D90株明显抑制肺癌A549细胞生长并导致细胞死亡的基础上,对其可能的致死亡作用方式进行了探讨.     

脐血单个核细胞的抗肿瘤细胞活性

目的 :探讨脐血单个核细胞对HO9810肿瘤细胞株的杀伤活性 ,并观察重组人干扰素α 2b(rhIFNα 2b)的调节作用。方法 :采集脐血及成人周围血 ,将分离所得的单个核细胞按是否添加处理因素分组进行培养 ,2 4h后用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测对HO9810细胞的杀伤作用。结果 :静止脐血单个核细胞对HO9810肿瘤细胞的杀伤活性较弱 ,经rhIFNα 2b激活后显著增强 ,P <0 0 5 ,与成人外周血单个核细胞的杀伤活性差异无显著意义 ,P >0 0 5。结论 :脐血单个核细胞能被rhIFNα 2b激活为杀伤细胞 ,激活后对HO9810细胞株有较强的杀伤作用 ,具有良好的临床应用前景     

SC及NDV修饰的瘤苗治疗胃癌的实验疗效研究

目的 :研究中药三棱、莪术的提取物SC修饰构建的肿瘤细胞疫苗对SGC 790 1胃癌细胞株的抗瘤效应及联合新城鸡疫病毒疫苗的实验杀瘤疗效。方法 :对SGC 790 1胃肿瘤细胞进行系列处理 ,用SC(sparganiumstoloniferumBuehhum、Curcumazedoariarosc SC ,Chinesetraditionalmedicine )及NDV (新城鸡瘟病毒 )对其进行生物构建 ,修饰构建的瘤苗经免疫小鼠 (1次 /周× 4 ) 2 8d后 ,接种SGC 790 1胃肿瘤细胞 ,观察抑制肿瘤肺转移、皮下结节形成及生存时间状况。结果 :经SC修饰构建的SC SGC 790 1瘤苗能明显阻止胃癌细胞的肺转移 ,显著抑制皮下肿瘤结节形成 ,能明显延长荷瘤鼠的生存时间 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5 )。由NDV构建的疫苗的抗瘤作用低于SC瘤苗组 ,在延长荷瘤鼠生存期方面和单瘤苗组相近 ,SC与NDV联合构建的瘤苗其抗瘤未呈生物放大及相加效应。结论 :SC修饰构建的SGC 790 1新型疫苗可以增强胃肿瘤细胞的免疫原性 ,对胃癌有较好的实验治疗效果     

莪术醇生物修饰构建的瘤苗治疗胃癌的实验研究

目的探讨中药莪术的提取物——莪术醇修饰构建的肿瘤细胞疫苗对SGC-7901胃癌的抗瘤效应及联合新城鸡疫病毒(NDV)疫苗的综合效应。方法对SGC-7901胃肿瘤细胞进行系列处理,用莪术醇及NDV对其进行系列生物构建,修饰构建的瘤苗经免疫小鼠(1次/周×3)21天后,接种SGC-7901胃肿瘤细胞,根据设计观察各组抑制肿瘤肺转移、皮下结节形成、生存时间状况及LAK细胞的杀伤效应。结果经莪术醇修饰构建的SGC-7901肿瘤疫苗与对照组相比能明显阻止胃癌细胞的肺转移,显著抑制皮下肿瘤结节形成,明显延长荷瘤鼠的生存时间(P<0.05);用各组免疫接种后长期存活的脾细胞制备的LAK细胞,较同龄未免疫小鼠的脾细胞制备的LAK细胞具有更强的抗瘤效应(P<0.05);由NDV构建的疫苗的抗瘤作用低于莪术醇瘤苗组,莪术醇与NDV联合构建的瘤苗其抗瘤作用未呈现生物放大及相加效应。结论莪术醇修饰构建的SGC-7901新型肿瘤疫苗可以增强胃肿瘤细胞的免疫原性,对胃癌有较好的实验治疗作用。     

加热和病毒感染对胃癌细胞HSP 70表达及细胞周期的影响

目的:研究加热法及新城疫病毒(NDV)单独或联合体外诱导BGC-823胃癌细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达及其意义。方法:通过加热及NDV感染BGC-823胃癌细胞,经倒置显微镜观察细胞形态变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测胃癌细胞的增殖状况,经流式细胞仪分析法及RNA斑点杂交检测感染及加热后细胞凋亡、细胞分裂周期各时相的变化及胃癌细胞HSP70的表达。结果:加热及NDV感染对BGC-823胃癌细胞的杀伤作用明显。加热和感染均可使细胞高表达HSP70及其mRNA,细胞凋亡率增加,G2、S期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:加热法与NDV感染法单独或联合应用均可增强胃癌细胞HSP70及其mRNA的表达且有较强的杀瘤作用。     

联合应用新城疫病毒及其 HN基因对小鼠黑色素瘤抑制效应的研究

背景与目的:尽管新城疫病毒( Newcastle disease virus, NDV)对多种肿瘤具有抑制作用 ,但其抑瘤机制尚不完全清楚.以前的研究结果表明,该病毒的血凝素神经氨酸酶( hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因在该病毒的抗肿瘤作用上发挥重要作用且 HN蛋白表达后能够定位于肿瘤细胞膜上,以 HN蛋白作为肿瘤细胞的外源抗原来研究其抑瘤作用尚未见报道.本研究拟探讨 HN蛋白作为外源抗原在新城疫病毒抗肿瘤的作用以及二者联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应.方法:在 C57BL/6小鼠右后肢皮下接种 B16黑色素瘤细胞 2× 105个.荷瘤第 2天,左后肢肌肉注射含新城疫病毒 HN基因的重组质粒,荷瘤第 7天,瘤内注射新城疫病毒 2× 109pfu;同时设单独 HN基因或 NDV治疗组及注射 PBS的对照组.通过抑瘤率观察动物体内的抑瘤效果;通过特异性细胞毒 T淋巴细胞( cytotoxic T lymphocyte,CTL)实验, ICAM Ⅰ、 CD48及新城疫病毒 HN蛋白在肿瘤细胞表面表达检测,探讨 HN蛋白所介导的抑瘤作用.结果:联合应用新城疫病毒及该病毒 HN基因对肿瘤的抑制效果明显好于单独 HN基因及新城疫病毒,抑瘤率达 82.8%,特异性 CTL反应增强,对靶细胞的杀伤率为 18.4%;单独 HN基因及新城疫病毒治疗组的抑瘤率分别为 56.6%、 41.0%,特异性 CTL活性分别为 4.4%、 10.1%;瘤内注射 NDV的肿瘤细胞表面检测到 HN分子的表达, ICAM Ⅰ、 CD48分子表达上调.结论:定位于肿瘤细胞表面的 HN蛋白介导机体对肿瘤细胞的特异性杀伤,联合应用新城疫病毒及该病毒 HN基因显著增强了机体对肿瘤细胞的杀伤效应.     

新城疫病毒处理瘤细胞的免疫实验研究

目的：观察新城疫病毒（简称ＮＤＶ）对体外培养的肿瘤细胞免疫原性的影响。方法：将经新城疫病毒处理的小鼠肝癌细胞Ｈ２２为活瘤进行免疫接种。结果：ＮＤＶ处理瘤细胞制备的瘤苗可完全排斥再次接种未经病毒处理瘤细胞的生长,瘤苗能增强小鼠体内细胞免疫。结论：ＮＤＶ处理后的瘤细胞能使肿瘤生长减慢、荷瘤生存期明显延长。     

6株NDV鄱阳株对肝癌细胞杀伤作用的初步研究

目的:研究从江西鄱阳湖野鸭分离的6株NDV对肝癌细胞的杀伤效应,进一步筛选NDV溶瘤毒株。方法:用MTT法研究6株NDV鄱阳株对两株传代肝癌细胞株Novikoff和HepG-2及一株正常肝细胞株HL-7702的杀伤效应。结果:6株NDV鄱阳株对肝癌细胞株Novikoff和HepG-2有显著杀伤效应,而对人正常肝细胞HL-7702无明显影响;病毒对细胞的杀伤活性与病毒作用剂量和病毒作用时间成正比;病毒在肝癌细胞中有明显复制增殖现象;Novikoff肝癌细胞对NDV敏感性强于HepG-2肝癌细胞。结论:6株NDV鄱阳株对Novikoff及HepG-2肝癌细胞产生显著的杀伤作用,而对正常肝细胞HL-7702未见明显影响。     

榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27的体内外作用的初步研究

背景与目的：近年来,许多研究表明榄香烯脂质体在临床治疗消化道肿瘤及其恶性胸腹水中应用广泛。本研究结合体内和体外实验旨在观察榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27生长的抑制作用。方法：在体外实验中,应用机器视觉-全自动活细胞观测分析系统(Cell-IQ)对不同浓度下的榄香烯脂质体进行观测,以筛选出对人胃癌HGC-27细胞产生抑制作用的最佳浓度,并通过流式细胞术分析在最佳浓度下,榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27凋亡的影响。在胃癌腹膜转移的裸鼠模型中,观察榄香烯脂质体、顺铂(cisplatin,DDP)等药物对裸鼠腹膜肿瘤指数(peritoneal cancer index,PCI)的影响,并用免疫组化检测CD31标记的肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤中的表达,以期对榄香烯脂质体抑制胃癌HGC-27细胞腹膜转移的机制进行探讨。结果：榄香烯脂质体作用于人胃癌细胞HGC-27后,Cell-IQ分析抑制作用随浓度增加,逐渐增强,以100 μg/mL为最佳,榄香烯脂质体浓度再增高,其抑制肿瘤作用不再增强。最佳作用时间为4~19 h。应用流式细胞术检测,100 μg/mL榄香烯脂质体作用于人胃癌HGC-27细胞24 h后,肿瘤细胞凋亡率为45%,对照组仅有0.019%。处理组的细胞凋亡率明显高于对照组。人胃癌腹膜转移裸鼠模型建立后给予榄香烯脂质体等药物干预,腹膜转移瘤PCI指数有明显差异,其中以联合治疗组下降明显,免疫组化检测发现CD31-MVD及VEGF蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论：榄香烯脂质体对于人胃癌细胞有明确抑制作用,最佳质量浓度为100 μg/mL,最佳作用时间为4~19 h;榄香烯脂质体对人胃癌裸鼠腹腔转移有明确预防作用;榄香烯脂质体对人胃癌细胞抑制作用的主要机制可能为诱导凋亡。     

NDV7793体外激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌细胞的杀伤作用及其机制

 目的
初步研究NDV7793激活的小鼠单核巨噬细胞（MΦ）对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用,并探讨其杀伤机制与TNF-
α和TRAIL的关系。 方法从腹腔分离6周龄BALB/C小鼠MΦ, 用NDV7793于体外刺激小鼠MΦ,以ELISA分别测定
NDV7793刺激小鼠MΦ后产生的TNF-α及TRAIL水平;NDV7793体外刺激MΦ后,与小鼠肝癌Novikoff细胞混合培养,
以LDH微量释放法测定小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤效应。同时设立3组实验对照组：IFN-β阳性对照组
、紫外线灭活NDV（UV-NDV）对照组以及空白对照组。 结果与3个对照组相比,NDV7793在体外能提高MΦ分泌TNF-
α、TRAIL的水平;NDV体外刺激后的小鼠MΦ能杀伤小鼠肝癌Novikoff细胞。结论NDV7793在体外能激活小鼠MΦ,
小鼠MΦ被NDV7793刺激后,对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用增强,NDV激活后的小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细
胞的杀伤机制可能与TNF-α和TRAIL有关。     

新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤的治疗

目的：寻求有效的肿瘤基因治疗方法，研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法：建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型，瘤内注射脂质体包裹的真核重组子pVHN和pVVP3。观测pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的效果，免疫组化法检测肿瘤细胞Bcl2和PCNA的表达。结果:经HN基因和VP3基因联合治疗组的小鼠与荷瘤对照组小鼠相比，肿瘤体积明显缩小，抑瘤率可达70%。病理组织切片表明，治疗组裸鼠体内肿瘤细胞大量凋亡，局部地方可见细胞消失。免疫组化表明， Bcl2和PCNA蛋白在荷HCT裸鼠对照组与各治疗组均有表达，其中Bcl2表达在荷瘤对照组与pVHN治疗组差异有显著意义（P<0.05），PCNA表达在荷瘤对照组与pVHN+pVVP3治疗组差异极其显著（P<0.01）。结论: NDV HN基因与凋亡素VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤细胞的增殖有一定抑制作用，可诱导其凋亡,其凋亡可能与下调Bcl2表达有关。     

新城疫病毒长春株和四平株致细胞死亡方式的研究

目的：研究NDV长春株和四平株致细胞死亡的方式,方法：采用空斑试验、细胞抑制试验、琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法进行研究。结果：NDV长春株和四平株对鸡胚成纤维细胞（CEF）、BHK、HeLa,Hep-2,HCT和OS－732等肿瘤细胞产生明显的病变,而对人的羊膜细胞（Wish细胞）无明显影响。结论：长春株对肿瘤细胞的抑制作用强于四平株,长春株对肿瘤细胞的抑制不存在量效关系,只有量适剂量才引起最强的抑制作用,长春株和四平株在体外引起细胞死亡的途径不完全一致,长春株导致细胞死亡以凋亡为主,而四平株导致细胞死亡以坏死为主。