肺岩宁方干预Lewis肺癌小鼠移植瘤VEGF及其受体Flt-1、KDR蛋白表达的实验研究

目的：观察肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠移植瘤VEGF及其受体Flt-1、KDR蛋白表达的影响。方法：采用C57BL／6小鼠,接种Lewis肺癌细胞株,随机分为对照组、化疗组、肺岩宁组和综合组,在接种后5天肿瘤直径约为5min时,开始给予0．9％NaCl溶液、DDP、肺岩宁、DDP＋肺岩宁治疗。用药21d,第22天处死小鼠。观察各组肺转移灶抑制率,免疫组化测定肿瘤VEGF及其受体Flt-1、KDR蛋白表达。结果：与对照组相比,肺岩宁组及综合组能显著降低肺转移灶发生率（P〈0．05）。免疫组化结果显示：肺岩宁方能够显著降低肿瘤VEGF及其受体KDR水平。肺岩宁方能够减少肿瘤Flt-1表达,但无统计学意义。结论：益气养精、解毒散结的肺岩宁方具有明显的抗肺癌侵袭转移作用。肺岩宁方可以干扰VEGF与其受体（主要是KDR）的相互作用,从而抑制VEGF的生物活性,这可能是肺岩宁方抗肺癌侵袭转移的机制之一。     

肺金生方对Lewis肺癌小鼠VEGF-C、 nm23表达的影响

目的:探讨肺金生方对Lewis肺癌小鼠VEGF-C、nm23表达的影响。方法:取60只C57BL/6小鼠,常规接种Lewis肺癌瘤株,随机分为生理盐水组、环磷酰胺(CTX)组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、CTX加中药组,每组10只。各组给予相应药物灌胃14天后处死,取肺组织观察肺转移数,取肿瘤组织甲醛固定后免疫组化检测VEGF-C、nm23表达。结果:肺金生方中、高剂量对Lewis肺癌小鼠自发肺转移有抑制作用(P<0.01),中药肺金生方各剂量组及CTX、CTX加中药组均能降低VEGF-C表达(P<0.01、P<0.05),而中药中、高剂量组、CTX加中药组均能提高nm23的表达(P<0.01),中药中、高剂量组nm23表达比CTX加中药中剂量组更高(P<0.05)。结论:肺金生方抑制Lewis肺癌小鼠自发肺转移可能与其降低VEGF-C表达和提高nm23的表达有关。     

安体优抑制小鼠Lewis肺癌血管生长作用的实验研究

目的:探讨安体优抑制小鼠Lewis肺癌血管生长的作用及其抗Lewis肺癌转移的相关机理.方法:利用Lewis肺癌细胞肺转移模型,随机分为三组,分别予安体优、蒸馏水、环磷酰胺治疗,运用免疫组化方法对移植瘤中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达、微血管密度(MVD)等有关转移指标进行检测和分析.结果:安体优组移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)的高表达率30%和微血管密度(MVD)14.3±5.38,空白对照组VEGF的高表达率80%与MVD19.8±3.65,经统计学处理有显著性差异VEGF高表达率与MVD的关系经直线相关分析,呈显著正相关(P＜0.05).结论安优优可以降低移植瘤MVD与VEGF高表达率,VEGF表达率与MVD有呈正相关.     

肺积1号方影响小鼠肺癌移植瘤细胞周期蛋白D1表达的实验研究

目的观察肺积1号方对Lewis肺癌小鼠移植瘤CyclinD1表达的影响。方法建立Lewis肺癌细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型,完全随机分为4组,每组8只：（1）模型组：生理盐水0.4 ml/只灌胃,1次/日,作为阴性对照;（2）肺积1号方小剂量组（肺小组）：按照肺积1号方生药20 g/kg给药,用含生药1.0 g/ml的中药混悬液0.4毫升/只灌胃,1次/日;（3）肺积1号方中剂量组（肺中组）：按照40 g/kg给药,用含生药2.0 g/m l的中药混悬液0.4毫升/只灌胃,1次/日;（4）肺积1号方大剂量组（肺大组）：按照80 g/kg给药,灌服含生药4.0 g/m l的中药混悬液0.4毫升/只,1次/日。连续用药14天,停药1天,次日颈部脱臼法处死各组小鼠,无菌条件下剥取肿瘤组织,免疫组化法检测肺积1号方对肿瘤组织Cyclin D1表达的影响。结果肺积1号方中、大剂量组CyclinD1的表达均较模型组降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论肺积1号方可下调Lewis肺癌肿瘤组织细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,可能是肺积1号方的抗肿瘤机制之一。     

肺岩宁及其拆方对小鼠Lewis肺癌端粒酶活性的影响

目的:观察肺岩宁及其拆方对小鼠Lewis肺癌端粒酶活性的影响,探讨该复方各种治法在抑制肿瘤中的作用及机制。方法:72只小鼠接种Lewis肺癌细胞株造模,随机分为生理盐水对照组、肺岩宁组、益气组、养精组、益气养精组、抗癌组及化疗组,分别给予相应药物干预21d。测定小鼠抑瘤率和肺转移抑制率,应用荧光标记引物的TRAP法检测端粒酶活性。结果:在改善荷瘤小鼠皮下移植瘤瘤重上,肺岩宁组、抗癌组、化疗组较生理盐水组有明显差异(P<0.01)。在抑制肺转移灶上,化疗组、肺岩宁组、抗癌组较生理盐水组疗效有明显差异(P<0.01),而肺岩宁组与益气养精组无差异(P>0.05)。在抑制荷瘤小鼠端粒酶活性上,肺岩宁组、养精组、益气养精组、抗癌组、化疗组的端粒酶活性相对值较低,较生理盐水组有显著的统计学差异(P<0.01);益气组、养精组、益气养精组端粒酶活性相对值较高,较化疗组有显著统计学差异(P<0.01);与肺岩宁组比较,益气组、养精组、益气养精组、生理盐水组端粒酶活性相对值较高,有显著统计学差异(P<0.01)。结论:针对肺岩宁立方原则,益气、养精、解毒散结等治法的综合运用在抗瘤上存在相互协同作用,肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肺癌转移的机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

肺积方对Lewis肺癌小鼠抑瘤率及EGFR、TNF-α表达的实验研究

目的观察肺积方对Lewis肺癌小鼠肿瘤表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）表达的影响。方法将48只近交系C57小鼠常规接种Lewis肺癌细胞,随机分为模型组、顺铂组、肺积方组、顺铂＋肺积方组,每组12只。治疗后处死,取肿瘤组织称重,计算抑瘤率,并将肿瘤组织固定于10%甲醛溶液,常规石蜡包埋切片,免疫组化检测、图像定量分析EGFR及TNF-α的表达。结果顺铂组、肺积方组、顺铂＋肺积方组,其对肿瘤均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为30.95%、15.54%、39.79%。与顺铂组比较,EGFR的积分光度由高到低、平均灰度由低到高分别为肺积方组、顺铂组、顺铂＋肺积方组（P〈0.05）。与顺铂组相比,TNF-α的积分光度由低到高、平均灰度由高到低分别为肺积方组、顺铂组、顺铂＋肺积方组（P〈0.05）。结论肺积方对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的生长具有一定的抑制作用,但低于顺铂组,顺铂与肺积方联合使用效果最佳,其机制可能与降低EGFR的表达及调节肿瘤坏死因子TNF-α的表达有关。     

肺抑瘤合剂治疗肺癌及对小鼠Lewis肺癌cyclinD1表达影响的临床和实验研究

【论文特点介绍】肺癌为当前世界各地最常见的恶性肿瘤之一，中医药治疗肿瘤是我国的特色和优势，通过辨证论治配合化疗等起到减毒增效、带瘤延年的良好效果。本研究为一个续贯课题，结合山东中医药大学附属医院呼吸内科多年的临床治疗肺癌的经验，根据中医基础理论，筛选出以益气养阴，清热解毒，化痰散瘀为主要治法的肺抑瘤合剂治疗中晚期肺癌。我们在临床观察治疗了78例肺癌患者，同时进行了肺抑瘤合剂对小鼠Lewis肺癌cyclinD1表达影响的实验研究，进一步探明了肺抑瘤合剂在肺癌综合治疗中发挥的作用机理。     

消瘤冲剂对lewis肺癌小鼠免疫功能影响的实验研究

目的:观察消瘤冲剂对lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。方法:取C57BL/6J小鼠分别皮下接种lewis肺癌细胞悬液,给予消瘤冲剂按7.5g/kg、15.0g/kg、30.0g/kg三个剂量连续灌胃10天,分别观察抑瘤率、T淋巴细胞转化功能及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果:消瘤冲剂能明显提高lewis肺癌小鼠T淋巴细胞转化功能(P0.05,P0.01)和巨噬细胞吞噬功能(P0.05)。结论:消瘤冲剂具有提高lewis肺癌小鼠免疫功能的作用。     

肺复康对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤及细胞周期的影响

目的:观察肺复康对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤及细胞周期的影响。方法:复制Lewis肺癌小鼠模型,将60只造模后的小鼠随机分成6组,每组10只,造模后次日开始给药,分别采用肺复康大中小剂量、紫杉醇以及肺复康联合紫杉醇对其进行治疗,观察小鼠的生存状态及肿瘤生长抑制率,通过流式细胞术分析Lewis肺癌移植瘤细胞周期。结果:肺复康大剂量组肿瘤生长抑制率为36%,高于肺复康小剂量组和中剂量组。与紫杉醇合用,肿瘤生长抑制率为60%,与模型对照组比较有较显著性差异(P<0.01)。细胞周期分析表明肺复康将肿瘤细胞阻滞于G1期。结论:肺复康能明显改善小鼠生存状态,并对Lewis肺癌移植瘤有显著抑制作用,其抗肿瘤作用可能与调控肿瘤细胞周期及诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达的影响

目的：观察肺岩宁（Feiyanning,FYN）方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中趋化因子CXCL12及其受体（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）mRNA及蛋白表达的影响。 方法：建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、化疗组、肺岩宁组和综合组（肺岩宁加化疗组）。给予相应干预21d后观察肺转移情况,采用逆转录聚合酶链反应法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中CXCL12和CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。 结果：肺岩宁组与综合组小鼠的肺转移率低于模型组。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达CXCL12和CXCR4,肺岩宁组与综合组小鼠肺癌中CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组与化疗组（P〈0．05）,而4组小鼠Lewis肺癌组织中CXCL12 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）． 结论：肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调趋化因子受体CXCR4的表达,影响CXCL12-CXCR4生物轴的作用有关。     

肺岩宁方及其拆方对Lewis小鼠肿瘤肺转移与VEGF/KDR表达关系的影响

目的:观察肺岩宁方及其拆方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其激酶功能区受体(kinase-domain insert containing receptor,KDR)mRNA与蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只。分别给予相应药物干预,均灌胃21 d,第22天处死。观察肺转移情况,取肿瘤组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中VEGF和KDR mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠的肺转移率明显低于模型组与益气组(P<0.05)。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达VEGF和KDR,但肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05),肺岩宁方组和抗癌组小鼠肿瘤组织中KDR mR-NA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调VEGF及其受体KDR mRNA和蛋白表达有关。     

VEGF反义寡核苷酸抑制小鼠Lewis肺癌生长的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对C57BL/6小鼠Lewis肺癌肿瘤生长的抑制作用。方法制备C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,随机分为3组,每组10只VEGF反义寡核苷酸(ASPODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SPODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,分别皮下注射ASPODN及SPODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,每周2次,连续4周;观察各组小鼠肿瘤的生长情况、游标卡尺测量肿瘤体积大小。所有C57BL/6小鼠于接种后第25天先用二维超声观察肿瘤的实时图象,利用脉冲多普勒获取血流频谱,获得收缩期峰值速度(PS),阻力指数(RI)。断颈处死小鼠,光镜及电镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化,免疫组化法检测微血管密度(MVD)。结果与对照组瘤重比较(7.83±0.78)g、VEGF-ASPODN组(4.49±0.43)g能明显抑制小鼠肿瘤生长(P<0.01)、VEGF-SPODN组(7.73±0.69)g则无明显作用(P>0.05)。VEGF-ASPODN组、VEGF-SPODN组抑瘤率分别为42.7%、5.9%。组织形态学及超微结构观察,VEGF-ASPODN对肿瘤生长具有抑制作用。VEGF-ASPODN组与对照组相比较PS及RI有明显差异(P<0.01);VEGF-SPODN组与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论肿瘤原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。     

丹参注射液对小鼠lewis肺癌上皮型钙黏素表达的影响

目的观察丹参注射液对小鼠lewis肺癌上皮型钙黏素（E—cadherin，E—cad）的表达。方法建立lewis肺癌小鼠模型，用免疫组织化学方法检测丹参对肿瘤细胞E—cad表达的影响，测肿瘤体积、瘤重。结果生理盐水组E—cad阳性表达率与丹参组和环磷酰胺组有显著性差异，而后两组差异无显著性。结论丹参可抑制小鼠lewis肺癌上皮型钙黏素的异常表达并抑制小鼠lewis肺癌生长。     

克拉霉素治疗小鼠Lewis肺癌的实验研究

目的　研究克拉霉素对小鼠Lewis肺癌的治疗效果和作用机制 ,为临床应用提供实验依据。方法　C5 7BL/6小鼠右肋处皮下接种Lewis肺癌 ,6h后随机分为 2组 ,每组 15只 ,分别接受克拉霉素 5 0mg·kg-1·day-1(实验组 )或等体积 5 %葡萄糖 (对照组 )腹腔内注射 ,每日 1次 ,连用 2 1d。观察比较实验组与对照组小鼠存活时间、移植瘤体积、肿瘤组织内微血管度和肺脏转移瘤数目。结果　实验组小鼠的平均存活时间为 (2 7 0± 2 6)d ,肿瘤组织内微血管密度为 18 7± 11 4,肺脏表面的转移瘤数目为 12 0±2 9,对照组小鼠的上述参数分别为 (19 1± 2 0 )d、2 4 5± 13 7和 18 6± 5 4,两组差异非常显著 (P <0 0 5 )。结论　克拉霉素具有抗肿瘤血管生成和抗肿瘤转移的作用 ,在肿瘤的综合治疗中具有一定的应用价值     

抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响

[目的]观察抗肺癌合剂对C57BL／6小鼠Lewis肺癌的抑制作用,并从分子水平观察其对肿瘤组织VEGF表达的影响。[方法]C57BL／6近交系小鼠50只,造模后,抗肺癌合剂（低、中、高3个剂量）、生理盐水、CTX分别作用于动物模型。15d后处死所有动物,剥取瘤组织称重,并计算抑瘤率;应用免疫组化法及图像分析技术检测瘤组织VEGF表达的积分光密度。[结果]在平均瘤重上,中药高剂量组与模型组有显著性差异（P〈0.05）;在肿瘤组织VEGF表达上,中药高剂量组与模型组有显著性差异（P〈0.05）。Ee论]抗肺癌合剂能抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,并能降低Lewis肺癌小鼠肿瘤组织VEGF表达。     

放疗对lewis肺癌荷瘤小鼠MMP、VEGF、MVD的影响

目的 建立lewis肺癌荷瘤小鼠动物模型,研究局部放疗对与肿瘤生长、转移密切相关的基质金属蛋白酶(MMPs)、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)表达的影响.方法 建立负载lewis肺癌细胞的C57BL/6荷瘤小鼠动物模型,随机分为放疗组和未放疗组.当肿瘤细胞接种后14 d,肿瘤体积增至190 mm3左右时,放疗组应用医用直线加速器6MV-X射线对原发肿瘤分次照射,5 Gy/次,隔日1次,共20 Gy/4次.当放疗结束后第8 d(即接种后28 d),小鼠开始出现呼吸困难时,同时处死放疗组、未放疗组小鼠.解剖小鼠取原发瘤、癌旁正常组织.免疫组化法检测原发瘤及癌旁正常组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、原发瘤中VEGF、MVD的表达.结果 肿瘤组织中MMP2、MMP9表达高于癌旁正常组织(P＜0.05);放疗组肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD较未放疗组表达增强(P＜0.05),而癌旁正常组织中MMP2、MMP9无明显变化.结论 放疗增强了lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD 的表达,为临床联合运用放疗与MMP抑制剂以及其它抗血管生成治疗,提高肿瘤治疗疗效提供了实验依据.     

CIK对Lewis肺癌小鼠细胞因子水平影响的实验研究

目的 观察CIK(cytokine—induced killer)细胞的体外增殖和杀瘤活性及对Lewis肺癌小鼠脾细胞分泌细胞因子浓度变化的影响。方法 常规方法培养CIK和LAK细胞,建立Lewis肺癌小鼠模型,给予CIK和LAK细胞治疗3周后,杀鼠取脾,用ELISA方法分别测定C57小鼠脾细胞上清液的IL2、IL4、IFN-γ浓度,用MTT方法测定C57小鼠脾细胞上清液TNF-α浓度。结果 CIK治疗的Lewis肺癌小鼠脾细胞培养上清液细胞因子水平明显高于LAK组。结论 CIK细胞对Lewis肺癌小鼠治疗有效,杀瘤活性强于LAK,CIK治疗组荷瘤鼠的细胞因子水平也高于LAK组。     

肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及E-cadherin、Vimentin和TGF-β表达的影响

目的 研究肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及癌、癌旁组织中上皮-间质转化(EMT)相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响.方法 40只小鼠随机分为肺复康组(17.2 g生药/kg)、5-Fu组(25 mg/kg)、Lewis肺癌模型组、正常组.检测肿瘤体积、肿瘤质量以及癌、癌旁组织中E-cadherin、Vimentin和TGF-β的蛋白表达情况.结果 与模型组相比,肺复康组肿瘤体积减小(P＜0.01),肿瘤质量降低(P＜0.01);肺复康组抑瘤率为36％.与正常组比较,模型组癌及癌旁组织E-cadherin表达降低(P＜0.01),Vimentin、TGF-β表达升高(P＜0.01);与模型组癌及癌旁组织相比,肺复康组癌及癌旁组织E-cadherin表达升高(P＜0.01),而Vimentin、TGF-β无显著性差异(P＞0.05).结论 肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用;并能上调E-cadherin的表达,从而促进肿瘤细胞间的同质粘附而抑制肿瘤的侵袭、转移.     

VEGF和MMP-2在肺癌中的表达及其与浸润和转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在肺癌发展、浸润和转移中的作用.方法应用免疫组织化学法检测42例肺良性病变和52例肺癌组织中VEGF和MMP-2表达情况.结果VEGF随肺癌的发展阳性率逐渐增高(P＜0.05),侵及胸膜层组VEGF阳性率显著高于未侵及胸膜层组(P＜0.005),淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05).MMP-2随肺癌的发展阳性率逐渐增高(P＜0.05),侵及胸膜层组MMP-2表达率高于未侵及胸膜组(P＜0.05),淋巴结转移组MMP-2表达率显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05).VEGF和MMP-2表达关系密切(P＜0.005).结论VEGF和MMP-2均参与肺癌的发展、浸润和转移,可作为了解肺癌的生物学行为和判断预后的指标.