CXCR3 CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液和外周血中的表达

目的 在单细胞水平上，研究类风湿关节炎（RA）患者滑液及外周血中单核/巨噬细胞，T淋巴细胞上趋化因子受体CCR5及ＣＸＣＲ３的表达。并测定CCR5的配体MIP-1β。激活正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）及T细胞亚群，探讨其在RA发病中的作用机制。方法 分离RA患者滑液单个核细胞（SFMC），外周血单个核细胞（PBMC）及正常人PBMC（对照），以三色荧光素标记物进行流式细胞术分析CD14^ ,CD3^ 细胞膜表面趋化因子受体CCR5，CCR3及细胞内趋化因子MIP-1β，RANTES和细胞因子白细胞介素（IL）-4，干扰素（IFN）-γ的表达率。结果 与PBMC相比，RA患者SFMC中的单核/巨噬细胞，T细胞上趋化因子受体CCR4及CEXR3表达显著增高；且单核/巨噬细胞分泌趋化因子MIP-1β，RANTES的百分比较高；SFMC中Th1细胞亚群（即IFN-γ^ T细胞）的表达率与滑液及外周血中T淋巴细胞上趋化因子受体CCR4及CXCR3的表达率显著相关。结论 趋化因子受体CCR5^ ,CXCR3^ 的单核/巨噬细胞，T细胞积聚在RA患者的病变关节内，且单核/巨噬细胞分泌较多趋化因子；CCR5，CXCR3可能参与调节细胞移动。与Th1细胞亚群及其“伙伴”细胞在RA关节内积聚有关；可能与RA的发病相关。     

血清淀粉样蛋白A在类风湿关节炎患者体内表达的研究

目的 通过检测血清淀粉样蛋白A(SAA)在类风湿关节炎(RA)患者血清、关节液及滑膜中的表达,探讨其在RA发病机制中的作用.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测RA、骨关节炎患者和健康对照人群血清以及RA与骨关节炎患者关节液中SAA的水平;蛋白印迹法测定SAA在血清中的表达;免疫组织化学技术检测RA和骨关节炎滑膜中SAA的表达.应用t检验或Kruska-Wallis秩和检验进行统计分析.结果 RA血清中SAA含量[(318±132) μg/L]显著高于骨关节炎[(127±47) μg/L]和健康对照组[(127±41) μg/L,P均＜0.01].RA关节液中SAA含量[(571±473) μg/L]显著高于骨关节炎[(129±33) μg/L,t=2.46,P=0.04].蛋白印迹法结果显示各组血清样品中均有SAA条带;RA的SAA表达明显高于其他2组.病理结果显示SAA在RA关节滑膜高表达,位于血管内皮细胞、滑膜成纤维细胞、巨噬细胞以及血管周围;在骨关节炎,SAA仅见于关节血管周围和成纤维细胞.结论 RA血清和关节液中SAA的含量显著增高;SAA在RA滑膜组织中高表达,且表达位置与骨关节炎有明显差别,提示SAA可能参与了RA的炎症反应和关节损害.     

OPG RANKL RANK等因子在类风湿关节炎患者血清及滑膜液中的变化及意义

目的检测类风湿关节炎（RA）患者血清、滑膜液中骨保护素（OPG）、核刺激因子受体配体（RANKL）、核刺激因子受体（RANK）、白细胞介素（IL）-18和前列腺素E-2（PGE2）水平，探讨其与RA发生发展的相关意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测60例RA患者与60例同期入院骨外伤患者（作为正常对照组）血清、滑膜液中OPG、RANKL、RANK、IL-18和PGE2水平，分析其与RA的相关性。结果RA患者血清、滑膜液中OPG水平明显低于正常对照组（P〈0．05），RANKL、RANK、IL-18和PGE2水平明显高于对照组（p〈0．05）。结论RA患者血清、滑膜液中OPG水平降低，RANKL、RANK、IL-18和PGE2水平升高。推测上述细胞因子参与RA发病过程。     

英夫利西单抗对类风湿关节炎患者外周血单核细胞CD147表达的影响

目的 探讨抗肿瘤坏死因子-α人鼠嵌合单克隆抗体英夫利西单抗(infliximab)治疗前后类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞CD147表达的变化.方法 30例经甲氨蝶呤(MTX)治疗至少3个月病情仍处于活动期的RA患者按3:1:1比例由计算机程序产生随机分配方案分为A、B、C 3组,A组接受为期14周的英夫利西单抗(3 mg/kg)治疗;B组接受为期6周的英夫利两单抗(3 mg/kg)治疗;C组接受为期14周的安慰剂治疗.治疗期间继续口服原剂量的MTX.流式细胞术检测RA患者外周血CD14+单核细胞CD147平均荧光强度水平(MFI)变化,并观察其与临床相关指标的关系.数据采用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析、Spearman相关分析和Kruskal-Wallis秩和检验.结果 ①治疗前RA患者外周血CD14+单核细胞CD147 MFI为(101±25),健康志愿者为(78±18),差异有统计学意义(P=0.019).RA患者外周血CD147 MFI与病情活动指标DAS28(r=0.471,P=0.000)、红细胞沉降率(ESR)(r=0.371,P=0.000)、C反应蛋IQ(CRP)(r=0.249.P=0.010)、晨僵持续时间(r=279,P=0.010)呈正相关.②3组患者治疗后外周血CD14+单核细胞CD147 MFI均有下降,第18周与基线相比,A组平均改变差值(-26.9±21.7)、B组平均改变差值(-35.4±15.5)与C组平均改变差值(-10.0±6.0)相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 活动期RA患者外周血CD14+单核细胞CD147表达增高;与单用MTX相比,英夫利西单抗联合MTX治疗CD147 MFI表达下降更明显.     

类风湿关节炎患者血清和滑膜骨桥蛋白的测定

目的 研究骨桥蛋白(OPN)在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的浓度变化及在滑膜的表达,探讨OPN在RA患者中的发病机制.方法 收集91例RA患者以及29名正常对照人群临床资料和血清,用酶联免疫吸附试验(ELIsA)方法检测OPN在RA患者外周血中的浓度,分析其变化和RA临床及实验室指标的关系.收集7例RA患者和1名正常对照的滑膜组织,用免疫组织化学的方法观察OPN的表达情况.结果 与正常对照组相比,活动组和非活动组的RA患者外周血中OPN水平均明显升高(p＜0.01),且与RA患者的部分临床指标有相关性:与压痛关节数(r=0.435,P=0.005)、关节的X线分期(r=-0.415,P=0.007)、关节功能(r=0.394,P=0.012)显著相关.OPN在RA滑膜组织大量表达,而在正常对照仅见OPN的少量表达.结论 OPN在RA患者外周血中浓度显著升高,且在滑膜表达明显,OPN可能与RA滑膜增生、骨侵蚀有关.     

外周血单核细胞DcR3基因过度表达在间质性肺疾病发病中的意义

间质性肺疾病 (ILD)是一组病因复杂、发病机制尚不十分明确的疾病 ,大量资料表明 ,ILD发病与免疫功能紊乱有关 ,Fas/FasL系统介导的凋亡障碍在某些免疫性疾病发病中起重要作用[1] ,但其作用机制尚不清楚 ,对此调节系统方面的研究报道很少。最近发现一个可溶性受体蛋白 诱导受体 3(DcR3) ,能竞争性与FasL结合 ,从而阻断FasL诱导的细胞凋亡 ,使Fas/FasL功能失调 ,在自身免疫性疾病及ILD发病中起一定作用[2 ,3 ] 。我们的实验采用逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)法在国内首次检测DcR3基因在ILD患者及健康人外周血单核细胞 (PBMC)…     

类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞TIM-3 mRNA的表达

目的观察类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4 T细胞TIM-3mRNA的表达,探讨TIM-3在RA发病中的作用。方法应用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测25例RA患者和18名健康对照组外周血CD4 T细胞TIM-3mRNA的表达,并分析TIM-3mRNA的表达与类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)的相关性。结果RA患者外周血CD4 T细胞TIM-3mRNA的相对表达较健康对照组明显增多(0.84±0.09vs0.55±0.07,t=11.73,P<0.01),且与RF水平呈正相关(r=0.84,P<0.01);高度活动组RA患者TIM-3mRNA的表达高于低中度活动组(0.89±0.06vs0.81±0.09,t=2.49,P<0.05)。结论RA患者CD4 T细胞TIM-3mRNA的表达异常增多并与RF水平呈正相关,高度活动组TIM-3mRNA的表达高于轻中度活动组,提示TIM-3mRNA的表达与RA的病情活动有关,TIM-3可能在RA的发病中起重要作用。     

Etanercept对类风湿关节炎患者血清MMP-3的影响

目的观察Etanercept治疗对类风湿关节炎（RA）患者血清基质金属蛋白酶3（MMP-3）的影响。方法16例RA患者,采用Etanercept治疗36周,应用ELISA法分别检测治疗前及治疗后1、2、4、8、12、24、36周外周血清中MMP-3的水平变化。结果Etanercept治疗2周后,MMP-3水平即较基线明显下降（P〈0．01）,第12周后下降至最低点。结论Etanercept治疗可使活动性RA患者外周血MMP-3水平下降,可用于监测患者的治疗反应。     

类风湿关节炎患者外周血及滑液NKp44+自然杀伤细胞的表达和临床意义探讨

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血及滑液NKp44+自然杀伤细胞的临床意义.方法 采用流式细胞术检测20例活动期RA患者[疾病活动指数(DAS)28≥2.6]、15例缓解期RA患者(DAS28＜2.6)及20名健康对照者外周血NKp44+自然杀伤细胞比例及10例活动期RA患者滑液NKp44+自然杀伤细胞比例.多重非参数检验比较3组间NKp44+自然杀伤细胞比例差异.采用Spearmar相关分析NKp44+自然杀伤细胞与临床指标[DAS28评分、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)]的相关性.结果 ①活动期、缓解期RA患者及健康对照者外周血NKp44+自然杀伤细胞比例分别为(1.480±4.750)%、(0.540±0.590)%、(0.000±0.000)%,活动期RA患者外周血NKp44+细胞比例明显高于缓解期和健康对照(x2=46.708,P=0.000).②10例活动期RA患者滑液NKp44+自然杀伤细胞比例为(15.6±11.7)%,明显高于其外周血NKp44+自然杀伤细胞比例(3.6±2.5)%(z=-3.780,P=0.000).③活动期RA患者外周血NKp44+自然杀伤细胞比例与DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关(r=0.777,P=0.000;r=0.967,P=0.000),与RF无相关性(r=-0.343,P=0.138).滑液NKp44+自然杀伤细胞比例与DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关(r=0.930,P=0.000;r=0.867,P=0.001),与RF无相关性(r=0.564,P=0.09).结论 NKp44+自然杀伤细胞在RA患者外周血及滑液中明显增高,且与DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关,提示NKp44+自然杀伤细胞与疾病活动度和病情严重程度相关.

Abstract：

Objective To investigate the clinical significance of NKp44+NK cells in the peripheral blood and synovial fluid of rheumatoid arthritis (RA) patients.Methods The proportions of NKp44+NK cells in the PB of 20 active and 15 remission patients with RA and 20 healthy individuals were detected using flow cytometry.The proportions of NKp44+NK cells in the SF of 10 active patients were detected.Multiple nonparametric test was used to compared the difference of NKp44+NK cells proportions.Clinical data including DAS28,anti-CCP antibody and RF were collected.The relationship between NKp44+NK cells and clinical data was analyzed by Spearman correlation analysis.Results The proportions of NKp44+NK cells in PB of active and remission patients and healthy individuals were (1.480±4.750)%,(0.540±0.590)%,(0.000±0.000)%respectively.The proportion of NKp44+NK cells in PB of active patients was significantly higher than that of remission patients and healthy individuals (x2=46.708,P=0.000).The proportion of NKp44+NK cells in the SF of ten active RA patients was significantly higher than matched PB.There was positive correlation between NKp44+NK cells proportion in PB and SF of active patients and DAS 28 and anti-CCP antibody level.There was no correlation between NKp44+NK cells proportion in PB,SF and RF.Conclusion There is a marked increase in the proportion of NKp44+NK cells in PB and SF of RA patients.Moreover,NKp44+NK cells are positively correlated with DAS28 and anti-CCP antibody,suggesting that NKp44+NK cells may be correlated with disease activity and severity.     

类风湿关节炎患者关节软骨细胞人类白细胞抗原-DR的表达

目的：观察人类白细胞抗原（HLA）-DR抗原在类风湿关节炎（RA）患者软骨细胞的表达情况,及其在软骨细胞诱导的自身T细胞增殖反应中的作用。方法：采用流式细胞仪和组织免疫荧光染色法检测HLA-DR抗原在7例RA患者软骨细胞和2例正常软骨细胞的表达,同时采用氚标记的胸腺嘧啶掺入法观察软骨细胞诱导的自身T细胞增殖反应。结果：流式细胞仪检测结果显示,HLA-DR表达阳性率在7例RA患者软骨细胞为（29±15）%,而在2例正常软骨细胞分别为3.7%和8.4%。组织免疫荧光染色结果显示,HLA-DR阳性软骨细胞主要位于软骨中上层。RA软骨细胞诱导自身T细胞增殖反应的刺激指数（SI）为5.8±2.9,高于2例正常软骨细胞的1.12和2.97。用抗HLA-DR单克隆抗体封闭软骨细胞表面的HLA-DR抗原后,SI下降为3.8±1.7。结论：RA软骨细胞有HLA-DR抗原的高表达,并能刺激自身T细胞增殖反应,提示RA软骨细胞具有抗原提呈功能。     

肝细胞癌患者血清DcR3水平与临床意义

目的:探讨血清DcR3水平对HCC的诊断价值及临床意义.方法:采用ELISA检测67例HCC、8例肝硬化、17例胆囊炎患者和28例正常人血清DcR3水平; 化学发光法测定血清AFP水平; 免疫组织化学二步法检测HCC癌组织中DcR3蛋白的表达.结果:HCC组和肝硬化组血清DcR3水平均明显高于正常对照组( P<0.01), HCC血清DcR3水平与伴有肝硬化、包膜浸润和复发转移有关( P<0.05). DcR3蛋白在HCC癌组织中的表达与血清水平呈正相关( r = 0.395, P<0.01), 但DcR3血清阳性率明显高于癌组织IHC( P<0.05). AFP与DcR3联合检测对HCC的诊断灵敏度可由单项检测的82%和76%提高到93%.结论:血清DcR3升高在HCC的发生发展及浸润转移中起重要作用, 通过监测高危人群以及肝癌患者血清中的DcR3水平, 同时联合检测AFP, 可能对HCC的筛查、诊断和判断预后有一定意义.     

类风湿关节炎外周血与滑液细胞CD147分子表达的研究

目的　为了探讨关节内CD14 7表达细胞的来源与类风湿关节炎 (RA)的关系 ,研究CD14 7分子在RA患者及正常健康人外周血与滑液细胞中的表达水平。方法　取 10例活动期RA患者用药治疗前后外周血、治疗前滑液及 10名正常健康对照外周血 ,外周血和滑液分离后细胞悬液采用双色免疫荧光标记 ,流式细胞术测量淋巴细胞 (CD3+ T)、CD14 + 单核细胞和中性粒细胞表达CD14 7阳性率及表达荧光强度水平。结果　①与正常对照相比 ,RA患者外周血CD3+ T淋巴细胞与CD14 + 单核细胞的表面CD14 7表达强度较高 (P <0 0 1) ,而其表达率比较差异无显著性。中性粒细胞表面CD14 7的表达率与表达强度与正常人相比差异均无显著性 ;②正常对照外周血细胞膜表面CD14 7的分子的表达在IFN γ刺激后有显著增多 ,而RA患者在刺激前后差异无显著性 ;③关节滑液中淋巴细胞、单核细胞与中性粒细胞上的CD14 7表达强度均比外周血细胞表达高 ,且淋巴细胞的表达率较高。结论　CD14 7在RA中各种炎细胞上均有较高表达 ,提示其在RA的病理损伤中起到重要作用。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞和血浆中miR-155和miR-146a的表达

目的 通过检测miR- 155和miR-146a在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞( PBMC)和血浆中的表达,探讨miR-155和miR-146a表达在RA发病中的作用.方法 RA患者34例,其中高活动组23例,低活动组11例;健康对照组15名.取外周血分离PBMC和血浆,提取和纯化miRNA,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-155和miR-146a的表达,以小分子RNA U6作为内对照,计算标准化后的2-ΔCt值表示miRNA的相对表达含量.采用SPSS 13.0软件包进行方差齐性分析和t检验.结果 RA患者PBMC和血浆miR-155的表达分别是对照组的1.74倍(0.08±0.08与0.05±0.03,t=-2.225,P＜0.05)和4.65倍(5.9±6.7与1.3±2.0,t=-3.677,P＜0.05);miR-146a的表达分别是对照组的1.68倍(1.3±1.2与0.8±0.6,t=-2.154,P＜0.05)和2.47倍(741±1001与300±295,t=-1.669,P＞0.05);RA患者中高活动组和低活动组PBMC中miR-155和miR-146a的表达差异无统计学意义;而血浆miR-155和miR-146a的表达高活动组明显高于低活动组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-155和miR-146a在RA患者PBMC和血浆中异常高表达,且血浆miR-155和miR-146a的表达与RA活动度相关,提示血浆miR-155和miR-146a可以作为RA及RA活动度的预测指标.     

类风湿关节炎成纤维滑膜细胞端粒保护蛋白TPP1及POT1 mRNA表达的研究

目的 检测端粒保护蛋白TPP1及POT1 mRNA在类风湿关节炎(RA)、骨关节炎(OA)患者及健康人成纤维样滑膜细胞(SFs)的表达水平.探讨其在RA发病机制中可能的作用.方法 体外培养SFs,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测28例RA、15例OA和3名健康者SFs TPP1,POT1mRNA的表达水平,并与疾病活动性等临床指标进行分析.结果 TPP1,POT1 mRNA在RA SFs组的表达低于OA组及健康对照组(P均＜0.05).OA组和健康对照组间差异无统计学意义.TPP1 mRNA在RA SFs的表达水平与RA患者抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体及类风湿因子(RF)呈负相关(P均＜0.05),与疾病活动指数(DAS)、红细胞沉降率(ESR)、血清C反应蛋白(CRP)无相关性;POT1 mRNA表达与DAS、CCP、RF均无相关性.结论 端粒保护蛋白TPP1、POT1基因表达的降低可能在RA SFs出现转化细胞特性中发挥重要作用;TPP1基因表达降低可能与RA出现关节侵蚀性改变密切相关.通过调整端粒保护蛋白TPP1、POT1基因的表达水平,有望为RA的治疗寻找新的靶点.     

类风湿关节炎患者血清滑液和滑膜组织白细胞介素-18的水平及意义

目的 研究类风湿关节炎（RA）患者血清、滑液中白细胞介素－18（IL－18）蛋白及滑膜组织IL－18mRNA表达水平，探讨其在RA致病中的作用。方法 应用双抗夹心酶免疫吸附（ELISA）法和细胞生物法分别测定RA患者血清、滑液中IL－28蛋白水平和生物活性，同时还检测NO、前列腺素E2的含量；有用半定量RT－PCR法检测膜组织IL－18m RNAG表达水平。以骨关节炎（OA）病人及因外伤截肢的正常人作对照。结果 RA患者血清、滑液中IL－18蛋白水平和生物活性均显著高于对照组，滑液中量及活化性比血清高；RA滑膜组织IL－18mRNA表达水平也明显高于对照组。结论 过度表达的IL－18参与了RA的致病过程,；选择性地抑制IL－18生物活性，将是RA治疗的新途径。