利多卡因对高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的：观察利多卡因（Lido）对高氧暴露的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和凋亡的影响,为防治早产儿高氧肺损伤提供依据。方法：原代培养的早产大鼠AECⅡ随机分为4组：空气组、高氧组、空气+Lido组、高氧+ Lido组。高氧、高氧+Lido组按5 L/min通入95%O2/5%CO2高纯混合气,10 min后密封。空气+Lido、高氧+Lido组加入20 μg/mL Lido。各组均置于培养箱(37℃,5%CO2)中培养24 h,收集各组细胞,采用流式细胞仪检测AECⅡ凋亡率和细胞周期;运用Western blot 检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。结果：与空气组比较,高氧组AECⅡ凋亡率增高,G2/M、S期细胞比例明显降低（P<0.01）;PCNA蛋白表达明显下调（P<0.01）。而Lido干预后可使AECⅡ凋亡率降低,G2/M、S期细胞比例增高,PCNA蛋白表达上调。结论：高氧可使早产大鼠AECⅡ凋亡增加,增殖抑制; Lido对高氧所致的AECⅡ损伤有直接的抑制作用。     

神经肽P物质对高体积分数氧暴露下大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的调控作用

目的 探讨神经肽P物质(SP)在高体积分数氧(高氧)肺损伤中的调控机制及其与c-Jun氨基末端激酶 (JNK)信号转导通路的关系.方法 分离纯化原代早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ),随机分为空气暴露组(空气组)、高氧暴露组(高氧组)、SP干预空气暴露组(空气加SP组)及SP干预高氧暴露组(高氧加SP组).空气组和高氧组分别置于氧体积分数为210 mL/L和950 mL/L密闭氧仓暴露48 h;空气加SP组及高氧加SP组于暴露前加入1×10-6 mol/L SP,再分别置于氧体积分数为210 mL/L和950 mL/L密闭氧仓中暴露48 h.各组分别于12、24、48 h取样,常规脱水、包埋、切片,电镜下观察AECⅡ的形态变化;3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率;蛋白质免疫印迹法检测磷酸化JNK的动态变化.结果 与空气组比较,高氧组暴露12、24、48 h后AECⅡ增殖率均明显降低(Pa＜0.05),凋亡率均明显升高(Pa＜0.05),高氧加SP组AECⅡ在暴露12、24、48 h后增殖率均明显升高(Pa＜0.05),凋亡率明显下降(Pa＜0.05),形态学损伤明显改善.高氧刺激可导致JNK的磷酸化激活,磷酸化JNK在高氧损伤的AECⅡ表达均明显增加(Pa＜0.05),SP干预后,磷酸化JNK表达明显降低(Pa＜0.05).结论 SP可促进高氧暴露下AECⅡ的增殖,并通过抑制JNK信号激活从而抑制AECⅡ的凋亡,对氧化应激状态下的AECⅡ细胞有保护作用.     

神经肽P物质对早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的调控作用

目的 探讨高氧对离体培养的早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)的影响及感觉神经肽P物质(SP)的保护作用及其与p38蛋白激酶(p38MAPK)信号转导机制的关系.方法 分离纯化原代早产鼠AEC Ⅱ,随机分为空气暴露组、高氧暴露组、SP干预空气暴露组及SP干预高氧暴露组.空气暴露组氧体积分数为0.21(21%),高氧暴露组氧体积分数为0.95(95%),SP干预组于暴露前加入SP 1×10-6mol/L,在置于氧体积分数为0.21(21%)和0.95(95%)中各组分别暴露12、24、和48h,电镜观察AEC Ⅱ的形态变化;MTT法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测磷酸p38MAPK的动态变化.结果 与空气暴露组比较,高氧组暴露12、24、48 h后AECⅡ增殖率明显降低,凋亡率明显增加,而SP干预后其增殖率明显增加,凋亡率明显下降,形态学的损伤也有明显的改善.高氧刺激可导致p38的磷酸化激活,磷酸化p38在高氧损伤的AECⅡ表达明显增加,SP干预后,磷酸化p38表达明显降低.结论 P物质可促进高氧暴露AECⅡ的增殖并抑制AEC Ⅱ的凋亡,SP通过抑制p38MAPK信号激活对氧化应激状态下的AEC Ⅱ细胞可起到保护作用.     

苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞的保护作用

目的 探讨苦杏仁甙对体外高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞(type 2 alveolar epithelial cell,AECⅡ)的保护作用机制。方法 原代培养早产鼠AECⅡ,建立高氧细胞模型,采用MTT比色法、流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,观察苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠AECⅡ增殖及表面活性物质蛋白(surfactant associated protein,SP)mRNA表达的影响。结果 高氧暴露导致早产鼠AECⅡ增殖抑制,AECⅡ SPs mRNA表达降低。MTT试验显示,苦杏仁甙50～200μmol／L时呈剂量依赖方式促进早产鼠AECⅡ细胞增殖,200μmol／L浓度时,其作用最强,400μmol／L浓度时反而呈抑制作用。200μmol／L苦杏仁甙可显著促进体外高氧暴露AECⅡ增殖,提高其SP mRNA表达水平。结论 高氧暴露导致早产鼠AECⅡ增殖抑制及SP mRNA表达降低,200μmol／L苦杏仁甙对体外高氧暴露的早产鼠AECⅡ有一定保护作用。     

需肌醇酶1介导的内质网应激通路参与高氧所致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡

目的探讨需肌醇酶1(IRE1)介导的内质网应激通路与高氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡的关系。方法原代培养早产大鼠AECⅡ,随机分为空气组和高氧组,建立高氧细胞损伤模型。在24、48及72h收集细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR及Westernblot分别检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、IRE1、X盒结合蛋白1(XBP1)及C/EBP同源蛋白(CHOP)m RNA及蛋白表达;免疫荧光检测CHOP表达。结果随着给氧时间延长,高氧组AECⅡ伸展呈不规则形,出现空泡样改变;高氧组AECⅡ凋亡率与同时间点空气组比较明显增加(P0.05);随着氧暴露时间延长,高氧组GRP78、IRE1、XBP1及CHOPm RNA及蛋白表达升高,且较同时间点空气组明显上升(P0.05);高氧组CHOP荧光强度高于同时间点空气组。高氧组CHOP蛋白表达与AECⅡ凋亡率、IRE1及XBP1蛋白表达呈显著正相关(r=0.97、0.85、0.88,均P0.05)。结论高氧所致AECⅡ凋亡可能是通过激活IRE1-XBP1-CHOP通路来实现。     

高氧暴露对新生鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化水平的调节作用

目的 研究体内及体外高氧暴露对Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC Ⅱ)转分化水平的影响,旨在阐明支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)肺上皮损伤的发生机制.方法 新生Wistar大鼠生后随机分为对照组(吸入空气)和模型组(吸入氧浓度为85％),于7d、14 d、21 d进行动物模型肺组织取材并分离AECⅡ.细胞标本检测Ⅰ型肺泡上皮细胞(type Ⅰalveolar epithelial cells,AEC Ⅰ)特异性标志物水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)及AECⅡ标志物表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)表达.从正常新生鼠肺分离的AECⅡ在体外原代培养24h后随机分为常氧组(21％ O2)和高氧组(85％ O2),培养48 h后收集细胞,应用免疫荧光双标染色观察AQP5和SP-C表达及定位,Western blot方法检测AQP5和SP-C蛋白表达水平,荧光实时定量PCR方法检测AQP5和SP-CmRNA表达水平.结果 BPD模型组大鼠AECⅡ中AQP5蛋白表达从7d开始较对照组增多,SP-C蛋白表达从14 d开始较对照组减少.模型组中AQP5 mRNA从7d开始表达增多,SP-C mRNA从7d开始表达减少(P＜0.05),且随高氧暴露时间延长两组间差异更加显著.由正常新生鼠肺分离的AECⅡ进行体外原代培养后,免疫荧光双染可见高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少,双染细胞明显增多.蛋白和mRNA定量检测结果均提示高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少(P＜0.01).结论 无论体内还是体外高氧暴露下,AECⅡ特异性标志物SP-C表达下调,而AEC Ⅰ特异性标志物AQP-5表达上调,提示AECⅡ过度转分化参与高氧肺损伤后的修复过程.     

组蛋白H2AX在高体积分数氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞中的动态表达及其意义

目的研究组蛋白H2AX在高体积分数氧(高氧)暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中的动态表达,探讨其在高氧致肺细胞损伤中的作用。方法以原代培养的AECⅡ为研究对象,随机分为高氧组和空气组。在实验开始后6 h、12 h、24 h、48 h收集细胞,运用免疫荧光、Western blot及实时荧光定量PCR技术检测AECⅡ中H2AX的表达规律。结果高氧组H2AX蛋白平均荧光强度在实验开始后6 h、12 h均明显高于空气组(Pa<0.05),24 h与空气组比较差异无统计学意义(P>0.05),48 h明显低于空气组(P<0.05)。高氧组H2AX蛋白平均荧光强度随着高氧暴露时间延长渐下降(F=62.7,P<0.01),空气组无明显变化(F=0.3,P>0.05)。H2AX蛋白相对表达量和H2AX mRNA相对表达量的变化趋势与免疫荧光法结果基本相同,高氧暴露6 h后明显升高,随高氧暴露时间延长逐渐降低(F=126.6、244.4,Pa<0.01)。结论在高氧暴露早期,H2AX表达明显升高,随着高氧暴露时间的延长H2AX逐渐降低,这可能造成AECⅡ中DNA双链断裂修复障碍,导致细胞凋亡和坏死,提示H2AX可能与肺损伤密切相关。     

高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞硫氧还蛋白及其还原酶表达的影响

目的 探讨高体积分数氧(高氧)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)硫氧还蛋白(Trx)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)表达的影响.方法 无菌条件下取孕19 d SD大鼠的胎鼠肺组织,剪碎.采用1 g/L胰酶和1 g/L胶原酶消化19 d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化、原代培养胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至亚融合状态时,随机分为空气和高氧组.于培养箱内静置30 min后,空气组置于同一室内空气中,高氧组通以1 000 mL/L纯氧(2 l/min)10 min;然后密封培养瓶,置培养箱中培养.二组分别培养12、24、48 h,倒置相差显微镜下观察高氧对其细胞形态及活性的影响;并采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其Trx mRNA和TrxR mRNA表达.采用SPSS 13.0软件进行组间两样本均数t检验.结果 细胞爬片上AEC Ⅱ纯度为(94±2)%,表明所获细胞适合研究使用.与空气组比较,随时间延长,高氧暴露各时间点AEC Ⅱ生长状态明显不良;悬浮细胞增多,但大多数细胞仍具有活力;高氧暴露可促使AEC ⅡTrx mRNA、TrxR mRNA表达增加,且二者分别于24 h(t=2.471 P=0.033)和48 h(t=2.916 P=0.015)表达最强.结论 高氧暴露可促使胎鼠AEC ⅡTrx mRNA和TrxR mRNA表达上调;Trx和TrxR的表达上调可能是高氧肺损伤的重要保护作用机制之一.     

高浓度氧对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨高浓度氧（简称高氧）对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）增殖和细胞周期的影响。方法原代培养早产大鼠AECⅡ，建立高氧细胞损伤模型。血球计数板计数法对培养细胞计数，台盼蓝拒染法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞周期和Ki67表达。结果空气组AECⅡ在培养后其数目不断增加，高氧组给氧后48和72h，细胞数目减少、细胞活力降低。高氧使G0／G1期细胞比例显著增多，S和G2／M期细胞比例明显减少。高氧组给氧后24、48及72h，Ki67阳性细胞的表达率及荧光指数较同时间点空气组均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论原代培养的早产大鼠AECⅡ暴露在高氧环境中发生G1期阻滞，Ki67表达减少，细胞增殖受抑，这种增殖受抑与早产儿慢性肺损伤的发生密切相关。     

Notch信号在胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞与成纤维细胞共培养体系中的表达

目的 建立肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)与肺成纤维细胞(LF)共培养模型,检测胎鼠AECⅡ共培养和单独培养时Notch1、3受体表达的变化.方法 应用Millipore插入式培养皿和Costar六孔板构建AEC Ⅱ/LF共培养模型,将未接种LF的Millicell2PCF插入式细胞培养皿置于接种有AEC Ⅱ的培养板为AEC Ⅱ单独培养组.光镜、透射电镜观察共培养与单独培养条件下AECⅡ大体形态、超微结构;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其AEC Ⅱ增殖活力;反转录PCR法检测其AECⅡ分泌表面活性蛋白C(SP-C)功能,并用荧光定量PCR法检测其AEC Ⅱ Notch1、3 mRNA的表达.结果 AECⅡ/LF共培养组较AEC Ⅱ单独培养组稳定保持了其立方形结构和细胞表型并克隆样生长,增殖活力强.电镜下可见单独培养48 h AEC Ⅱ呈现AEC I样改变,而共培养AEC Ⅱ维持其正常生理形态.与单独培养组比较,共培养组AECⅡ分泌SP-C明显增多(P＜0.05),Notch1 mRNA表达显著升高(P＜0.05),而Notch3 mRNA显著降低(P＜0.05).结论 AECⅡ同型细胞培养时转分化为AEC I,不同型细胞(AECⅡ/LF)共培养抑制其转分化,此转分化过程受Notch信号分子调控.     

全氟化碳对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮损伤的保护机制研究

目的 探讨全氟化碳（perfluorocarbon,PFC）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用下胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡以及炎症反应的影响。方法 分离纯化原代胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,采用随机数字表法随机分为对照组、LPS组、PFC组、PFC＋ LPS组.LPS组培养液加入1μg/ml的LPS,PFC组培养液加入20％容积比的PFC,PFC＋ LPS组培养液加入1μg/ml LPS和20％容积比PFC,共同培养后lh后,电镜观察Ⅱ型肺泡上皮细胞的形态学变化,流式细胞仪鉴定各组细胞凋亡率,用ELISA方法检测各组细胞培养上清液中白细胞介素（interleukin,IL）-6及IL-10的浓度.结果 LPS组Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡率（14.29±1.93）％显著高于对照组（10.89±1.04）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;PFC＋ LPS组Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡率（12.22±1.47）％显著低于LPS组（P ＜0.05）;LPS组IL-6浓度[（482.58 ±26.84） pg/ml]显著高于对照组[（229.40 ±7.61） pg/ml] （P ＜0.05）,加入PFC后可显著减少LPS诱导的IL-6合成[（265.44 ±29.95） pg/ml] （P ＜0.05）;LPS组IL-10浓度[（1 497.29±191.89） pg/ml]显著高于对照组[（725.87 ±51.83） pg/ml] （P ＜0.05）,加入PFC对LPS诱导的IL-10合成无影响（P＞0.05）。结论 PFC可有效减轻脂多糖诱导的胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的炎性损伤,并减轻炎症反应的程度。     

高氧致早产鼠AECⅡ凋亡及其信号机制

目的：吸入高浓度氧气是导致新生早产儿肺发育障碍,并最终发展为慢性肺疾病(CLD)的主要原因,但其详细机制尚不清楚。本文旨在确定肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡在高氧诱导的早产鼠CLD形成中的作用及其主要信号机制。方法：93只新生早产大鼠随机分为两组:对照组(n= 45)吸入空气,模型组(n= 48)吸入≥95%氧气。分别采用原位末端标记技术(TUNEL)、电镜及逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测特定时间点各组大鼠肺组织细胞凋亡及其相关因子的表达。结果：模型组凋亡指数(AI)自7d起明显高于对照组(P<0. 05),发生凋亡的细胞是AECⅡ;模型组BaxmRNA3d起高于对照组(P<0. 05),Bcl 2自7d起低于对照组(P<0. 05);两组FasmRNA表达无差异(P>0. 05)。结论：早产大鼠CLD过程中存在AECⅡ凋亡,这可能是导致高氧诱导的CLD早产大鼠肺泡发育障碍的主要因素之一;凋亡信号的启动可能有Bax与Bcl 2比值变化的参与,而与Fas的转录表达无关。     

慢性肺疾病早产鼠的肺组织中HoxB5 mRNA表达及其对肺发育的影响

目的 探讨高氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠的肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育抑制的影响机制.方法 将孕21 d剖宫取出的新生鼠(即早产鼠)80只随机分为实验组及对照组(每组均为40只),采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,分别于实验后1、3、7、14、21 d采集肺组织,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,测定肺组织HoxB5、AQP-5、SP-B mRNA水平,并同期观察肺发育的评价指标放射状肺泡计数(RAC)的变化.结果 生后1 d和3 d,实验组和对照组的HoxB5、AQP-5及SP-B mRNA水平和RAC均差异无统计学意义(P＞0.05);生后7 d,与对照组比较,实验组RAC开始减少(6.35±0.83vs.7.67 ±0.52),HoxB5(0.98±0.14vs.1.20±0.16)及AQP-5(0.78±0.11vs1.04±0.19)mRNA也明显降低(P＜0.05)、SP-B(1.34±0.04vs1.04±0.11)反而明显升高(P＜0.05);生后14 d,实验组RAC逐渐减少,HoxB5及AQP-5 mRNA持续下降,21 d,HoxB5(0.64±0.11vs.1.18±0.13)及AQP-5(0.67±0.12vs.0.97±0.01)mRNA降至最低(P＜0.01),而SP-B(1.43±0.07vs.1.12±0.09)mRNA升至最高(P＜0.01);实验组肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关(γ=0.685,P＜0.01).结论 暴露高氧中早产鼠的肺组织HoxB5基因呈低水平表达,其表达降低可能导致的Ⅱ型肺泡上皮细胞向Ⅰ型肺泡上皮细胞的分化障碍与CLD肺发育停滞密切相关.     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

降钙素基因相关肽调控细胞外信号调节激酶减轻高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高体积分数氧(高氧)暴露下胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞( AECⅡ)氧化损伤的影响,及其作用是否由细胞外信号调节激酶(ERK)所介导.方法 原代分离培养孕21 d胎鼠AECⅡ,培养12 h待细胞贴壁后分为6组:空气组、空气CGRP组、空气CGRP拮抗剂组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组.空气组和高氧组分别在氧体积分数为210 mL·L-1的空气或850 mL·L-1的氧气中培养18 h.CGRP组和CGRP拮抗剂组分别在空气或高氧暴露前加入CGRP或同时加入CGRP和其受体拮抗剂CGRPS-37,终浓度分别为10-8 mol·L-1和10-7 mol·L-1.用免疫比浊法测定培养液LDH、AKP和丙二醛(MDA)水平,流式细胞术测定细胞内活性氧(RoS)水平,荧光显微镜检测胞质表面活性蛋白C(SP-C)的表达情况,Western blot检测磷酸化ERK1,2(p-ERK1/2)的表达水平.结果 高氧组MDA、LDH、AKP、ROS及p-ERK1/2水平均明显高于空气组[(2.29±0.10) μmol ·L-1 vs (1.06 ±0.14)μmol·L-1,( 58.79±5.01)U·L-1 vs(25.92±3.68)U·L-1,(24.63±2.92)U·L-1 vs (10.34±1.78)U·L-1,47.74±3.35 vs 25.96±5.04,1.21±0.06 vs 0.45±0.05,Pa＜0.01],而细胞内SP-C表达则明显低于空气组(22.75±3.31 vs 43.50±4.42);与高氧组及高氧CGRP拮抗剂组比较,高氧CGRP组MDA、LDH、ROS及AKP水平显著降低,而p-ERK1/2及SP-C的表达水平则明显增高(Pa＜0.01).空气组、空气CGRP组、空气CGRP拮抗剂组组间MDA、LDH、ROS、AKP及SP-C表达水平比较差异均无统计学意义;空气CGRP组p-ERK1/2表达水平明显高于空气组及空气CGRP拮抗剂组(Pa＜0.01).结论 CGRP可减轻高氧对AECⅡ的氧化损伤,其作用机制可能是通过ERK的活化来介导.     

高浓度氧对早产鼠II型肺泡上皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨高浓度氧(简称高氧)对早产鼠II型肺泡上皮细胞(AECII)增殖和细胞周期的影响。方法原代培养早产大鼠AECII,建立高氧细胞损伤模型。血球计数板计数法对培养细胞计数,台盼蓝拒染法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和Ki67表达。结果空气组AECII在培养后其数目不断增加,高氧组给氧后48和72h,细胞数目减少、细胞活力降低。高氧使G0/G1期细胞比例显著增多,S和G2/M期细胞比例明显减少。高氧组给氧后24、48及72h,Ki67阳性细胞的表达率及荧光指数较同时间点空气组均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论原代培养的早产大鼠AECII暴露在高氧环境中发生G1期阻滞,Ki67表达减少,细胞增殖受抑,这种增殖受抑与早产儿慢性肺损伤的发生密切相关。     

高体积分数氧致慢性肺疾病早产鼠肺上皮细胞凋亡及其调控机制

目的 探讨高体积分数氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠肺泡上皮细胞(AEC)凋亡的动态变化规律及Caspase-3 mRNA、Bax和Bcl-2基因的调控作用.方法 将60只早产SD鼠生后1 d内随机分为高体积分数氧暴露组(高氧组)和空气组(对照组)各30只,制备高体积分数氧致CLD早产鼠模型,应用脱氧核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术及链霉亲和素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学方法,检测生后1、3、7、14及21 d AEC的凋亡指数(AI)和肺组织Caspase-3 mRNA、Bax及Bcl-2基因蛋白的表达.相关分析采用Spearman分析.结果 与对照组比较,高氧组3 d AEC的AI、肺组织Caspase-3 mRNA水平及Bax基因蛋白表达开始升高,7～21 d明显增加,Caspase-3 mRNA水平在此期间持续于高水平;Bcl-2基因表达7 d开始降低,14～21 d明显降低.高氧组AEC的AI与肺组织Caspase-3 mRNA及Bax表达均呈正相关,与Bcl-2表达呈负相关.结论 高体积分数氧可致CLD早产鼠肺组织Caspase-3 mRNA基因表达增强,使Bax和Bcl-2介导Bax/Bcl-2基因表达比例失衡,是CLD早产鼠肺上皮细胞凋亡的重要机制之一.     

1,25(OH)2D3对载脂蛋白E缺乏鼠主动脉内皮细胞增生与凋亡及一氧化氮合酶表达的影响

目的 了解1,25(OH)2D3对载脂蛋白E缺乏鼠(apoE-/-)主动脉内皮细胞(EC)增生、凋亡及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 apoE-/-鼠主动脉EC分离培养,MTT法观察1,25(OH)2D3影响apoE-/-鼠EC生长,TUNEL检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bc1-2、Fas mRNA和eNOS mRNA表达.结果 细胞对照组与无水乙醇对照组EC增生率差异无统计学意义[(0.162±0.031)vs.(0.158±0.006),p＞0.05],1,25(OH)2D3在10-4、10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L时EC增生率高于对照组(P＜0.01),但不同浓度1,25( OH)2D3作用组之间差异无统计学意义[分别为(0.189±0.013)、(0.285±0.011)、(0.296±0.026)、(0.284±0.017)、(0.233±0.010),P ＞0.05],选定10-6mol/L 1,25(OH)2D3为研究浓度,干预分离培养apoE-/-鼠主动脉EC.1,25( OH)2D310-6mol/L组、细胞对照组、无水乙醇对照组凋亡指数分别为(15.14±3.19)、(18.94 ±4.22)、(19.27±4.58),Bcl-2 mRNA分别为(0.78±0.16)、(0.46±0.21)、(0.42±0.17),Fas mRNA分别为(0.43±0.12)、(0.79±0.21)、(0.81±0.20),eNOS mRNA分别为(0.56±0.16)、(0.39±0.13)、(0.35±0.11).25(OH)2D3干预组EC凋亡指数、Fas mRNA、eNOS mRNA降低,Bcl-2 mRNA增高(P均＜0.01),细胞对照组与无水乙醇对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析发现在1,25(OH)2D3干预组,eNOS表达量与凋亡指数、Fas mRNA呈负相关(r=-0.676、-0.758),与Bcl-2表达呈正相关(r =0.762),差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 1,25(OH)2D3刺激apoE-/-鼠主动脉EC增生、抑制主动脉EC凋亡,影响凋亡相关基因Bcl-2、Fas mRNA表达,上调eNOS mRNA表达.