补体C3f去精氨酸片段对系统性硬化症小鼠皮肤纤维化模型构建及转化生长因子β1表达的影响

目的探讨补体C3f去精氨酸片段(DRC3f)对于系统性硬化症(SSc)小鼠皮肤纤维化模型构建和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法采用DRC3f联合博来霉素皮下注射的方法构建SSc小鼠模型,并用纤维染色和免疫组化方法比较联合与不联合DRC3f对SSc小鼠皮肤纤维化、皮肤增厚程度和TGF-β1表达的影响。结果联合DRC3f和博来霉素注射组与单用博来霉素和博来霉素联合无关多肽组比较,皮肤纤维化程度更加明显,TGF-β1的表达也明显增多(P0.05)。结论 DRC3f能够促进SSc模型小鼠皮肤纤维化和炎症因子TGF-β1的表达。     

姜黄素对COPD大鼠IL-1β和IL-17的影响

目的 探讨姜黄素干预对COPD大鼠IL-1β和IL-17水平的影响.方法 将雄性SD大鼠38只随机分为正常对照组、COPD模型组、姜黄素干预组和溶剂对照组,采用香烟烟熏加气管内注射脂多糖方法建立COPD大鼠模型,并按照分组情况对大鼠进行干预.干预结束后计数BALF中的炎症细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量,HE染色观察大鼠气道炎症及肺气肿程度,酶联免疫吸附测定检测血清和BALF中IL-1β、IL-17含量,实时荧光定量聚合酶链式反应检测肺组织中IL-1β、IL-17mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,COPD模型组BALF中炎症细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量均显著升高(P＜0.05);姜黄素干预组大鼠BALF中炎症细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量较COPD模型组降低(P＜0.05).组织病理学显示COPD模型组大鼠小气道周围大量炎症细胞聚集、肺泡腔扩张,姜黄素干预可减轻小气道周围炎症细胞聚集及肺泡腔扩张.与正常对照组相比,COPD模型组大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-17含量升高,肺组织中IL-1β、IL-17mRNA表达水平上调,差异有统计学意义(P＜0.05).姜黄素干预后COPD大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-17含量下降,肺组织中IL-1β、IL-17mRNA表达水平降低,与COPD模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对COPD具有保护作用,其机制可能与抑制IL-1β、IL-17炎症因子释放有关.     

单性日本血吸虫成虫感染性小鼠肝纤维化研究北大核心CSCD

目的观察和评估单性日本血吸虫成虫感染小鼠出现肝纤维化病变风险。方法将40只小鼠随机分为双性感染组、单性雄虫组、单性雌虫组和未感染组,每组10只,分别经腹壁皮肤接触感染雌雄尾蚴、雄性尾蚴、雌性尾蚴和不含尾蚴的去氯水,感染尾蚴数为(40±1)条/只。双性感染组小鼠感染周期为6周,其余3组为36周。取小鼠肝脏,观察肝脏大体形态;经HE和Masson染色镜下观察小鼠肝脏病理变化和胶原纤维增生情况;测定肝脏胶原纤维特有的羟脯氨酸含量;应用荧光定量PCR和Western blot检测肝组织α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA和蛋白表达水平。结果与无感染组比较,单性雄虫组小鼠肝脏颜色发黑,肝组织内有大量色素沉积,周围有炎性细胞浸润,色素沉积处有胶原纤维;单性雌虫组小鼠肝脏大体形态与无感染组相似,病理变化和胶原纤维增生明显轻于单性雄虫组。单性雄虫组、单性雌虫组、双性感染组和未感染组小鼠的肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.209±0.033)、(0.187±0.034)、(0.194±0.04)和(0.122±0.016)μg/mg,单性雄虫组、单性雌虫组均显著高于未感染组(P均<0.05),与双性感染组均无明显差异。单性雄虫组小鼠肝脏Col1(2.4±0.91)和α-SMA(0.22±0.1)mRNA表达都明显高于未感染组[Col1(1.05±0.29)、α-SMA(0.08±0.01)](P均<0.05),Col1(2.4±0.91)(P<0.01)和TGF-β1(4.28±2.58)(P<0.05)mRNA表达均显著高于双性感染组;单性雌虫组各基因mRNA表达水平与未感染组相比均无显著差异,Col1(1.34±0.18)和TGF-β1(3.55±1.34)mRNA表达水平也显著高于双性感染组[Col1(0.84±0.14)、TGF-β1(0.31±0.11)、α-SMA(0.36±0.11)、Col3(2.15±0.61)](P均<0.01),α-SMA(0.17±0.11)(P<0.05)和Col3(0.51±0.23)(P<0.01)mRNA表达则显著降低。单性雄虫组小鼠肝脏各基因蛋白表达水平与未感染组比较均无明显差异;单性雌虫组TGF-β1(1.03±0.39)蛋白表达量显著低于未感染组TGF-β1(1.78±0.29)(P<0.05)。结论单性血吸虫成虫会导致小鼠肝脏炎症细胞浸润,胶原纤维增生,羟脯氨酸增加、部分肝纤维化分子指标mRNA表达上调等肝纤维化特征和向肝纤维化演变趋势,并且单性雄虫比单性雌虫更易引发小鼠肝脏病变。     

单性日本血吸虫成虫感染性小鼠肝纤维化研究北大核心CSCD

目的观察和评估单性日本血吸虫成虫感染小鼠出现肝纤维化病变风险。方法将40只小鼠随机分为双性感染组、单性雄虫组、单性雌虫组和未感染组,每组10只,分别经腹壁皮肤接触感染雌雄尾蚴、雄性尾蚴、雌性尾蚴和不含尾蚴的去氯水,感染尾蚴数为(40±1)条/只。双性感染组小鼠感染周期为6周,其余3组为36周。取小鼠肝脏,观察肝脏大体形态;经HE和Masson染色镜下观察小鼠肝脏病理变化和胶原纤维增生情况;测定肝脏胶原纤维特有的羟脯氨酸含量;应用荧光定量PCR和Western blot检测肝组织α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA和蛋白表达水平。结果与无感染组比较,单性雄虫组小鼠肝脏颜色发黑,肝组织内有大量色素沉积,周围有炎性细胞浸润,色素沉积处有胶原纤维;单性雌虫组小鼠肝脏大体形态与无感染组相似,病理变化和胶原纤维增生明显轻于单性雄虫组。单性雄虫组、单性雌虫组、双性感染组和未感染组小鼠的肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.209±0.033)、(0.187±0.034)、(0.194±0.04)和(0.122±0.016)μg/mg,单性雄虫组、单性雌虫组均显著高于未感染组(P均<0.05),与双性感染组均无明显差异。单性雄虫组小鼠肝脏Col1(2.4±0.91)和α-SMA(0.22±0.1)mRNA表达都明显高于未感染组[Col1(1.05±0.29)、α-SMA(0.08±0.01)](P均<0.05),Col1(2.4±0.91)(P<0.01)和TGF-β1(4.28±2.58)(P<0.05)mRNA表达均显著高于双性感染组;单性雌虫组各基因mRNA表达水平与未感染组相比均无显著差异,Col1(1.34±0.18)和TGF-β1(3.55±1.34)mRNA表达水平也显著高于双性感染组[Col1(0.84±0.14)、TGF-β1(0.31±0.11)、α-SMA(0.36±0.11)、Col3(2.15±0.61)](P均<0.01),α-SMA(0.17±0.11)(P<0.05)和Col3(0.51±0.23)(P<0.01)mRNA表达则显著降低。单性雄虫组小鼠肝脏各基因蛋白表达水平与未感染组比较均无明显差异;单性雌虫组TGF-β1(1.03±0.39)蛋白表达量显著低于未感染组TGF-β1(1.78±0.29)(P<0.05)。结论单性血吸虫成虫会导致小鼠肝脏炎症细胞浸润,胶原纤维增生,羟脯氨酸增加、部分肝纤维化分子指标mRNA表达上调等肝纤维化特征和向肝纤维化演变趋势,并且单性雄虫比单性雌虫更易引发小鼠肝脏病变。     

淋巴细胞功能相关抗原-1调节Treg细胞对炎症性肠病的疗效观察

背景:Treg细胞对炎症性肠病(IBD)具有免疫保护作用,淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)参与了IBD时Treg细胞的分化和迁移。目的:探讨LFA-1调节Treg细胞对IBD疗效的影响。方法:将LFA-1基因缺失小鼠和相同遗传背景野生型小鼠各20只分别随机分为炎症组和治疗组。小鼠饮用2.5%DSS溶液诱导结肠炎模型,治疗组小鼠通过尾静脉回输体外诱导的Treg细胞。观察小鼠一般情况和结肠组织学表现,流式细胞术检测外周血、脾脏、肠系膜淋巴结中Treg细胞比例,ELISA法检测血清TGF-β1、IL-10、IL-17A、IFN-γ水平,实时PCR检测结肠组织TGF-β1、IL-10mRNA表达。结果:LFA-1缺失治疗组结肠组织学评分与野生型治疗组无明显差异。LFA-1缺失治疗组肠系膜淋巴结Treg细胞比例显著高于相应炎症组(P0.05);LFA-1缺失治疗组外周血、脾脏、肠系膜淋巴结Treg细胞比例显著低于野生型治疗组(P0.05)。与相应炎症组相比,野生型和LFA-1缺失治疗组血清TGF-β1、IL-10以及结肠组织TGF-β1 mRNA表达显著升高(P0.05),IL-17A、IFN-γ以及IL-10 mRNA表达显著降低(P0.05)。野生型治疗组血清TGF-β1、IL-10以及TGF-β1、IL-10 mRNA表达显著高于LFA-1缺失治疗组(P0.05),IL-17A、IFN-γ显著降低(P0.05)。结论:LFA-1参与了Treg细胞功能的调控,能促进Treg细胞分泌抗炎因子TGF-β1、IL-10等。Treg细胞治疗LFA-1缺失结肠炎小鼠的疗效低于野生型小鼠,可能与Treg细胞功能和细胞因子的分泌受到抑制相关。     

青蒿琥酯对日本血吸虫诱导的早期肝纤维化小鼠热休克蛋白47表达影响的研究

目的研究青蒿琥酯对日本血吸虫诱导的早期肝纤维化小鼠血清和肝组织中热休克蛋白47(HSP47)表达的影响,探讨青蒿琥酯抑制日本血吸虫病肝纤维化作用的可能机制。方法 30只ICR小鼠随机分成感染模型组、感染治疗组和健康对照组等3组,每组10只。感染组每鼠经腹部皮肤贴壁感染日本血吸虫尾蚴(20±1)条,健康对照组不感染。感染后第6周,用吡喹酮300 mg/kg 2日疗法杀虫,同时感染治疗组小鼠按60 mg/kg剂量每天腹腔注射0.3 ml青蒿琥酯,连续2周;感染模型组和健康对照组腹腔注射灭菌生理盐水0.3 ml。治疗结束次日,各组小鼠用戊巴比妥钠麻醉后采血,应用ELISA检测血清HSP47和转化生长因子β1 (TGF-β1)含量,取小鼠肝、脾称重,计算脏器指数。取部分肝组织,应用碱水解法检测肝羟脯氨酸含量。取部分肝组织,用10%多聚甲醛固定,行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,观察肝组织病理学变化和胶原增生情况。取部分肝组织,应用实时荧光定量PCR检测肝脏HSP47 mRNA、Ⅰ型胶原α1链mRNA表达水平。结果健康对照组小鼠肝脏指数为(4.72±0.52),低于感染模型组(10.50±0.57)和感染治疗组(8.31±0.52)(P 0.01),感染治疗组小鼠肝脏系数与感染模型组差异有统计学意义(P 0.01);健康对照组小鼠脾脏系数为(0.38±0.04),低于感染模型组(2.41±0.44)和感染治疗组(2.26±0.06)(P 0.01),感染治疗组小鼠脾脏系数与感染模型组差异无统计学意义(P 0.05)。HE染色结果显示,感染治疗组小鼠肝脏肿大程度和表面虫卵结节较感染模型对照组轻、小。Masson染色结果显示,感染治疗组小鼠肝脏肉芽肿大小和胶原纤维面积均较感染模型组小,感染模型组胶原增生面积为(25.78±2.61)%,高于感染治疗组的(6.87±3.54)%和健康对照组的(1.19±0.18)%(P 0.01)。ELISA检测结果显示,感染治疗组小鼠血清HSP47、 TGF-β1含量分别为(169.81±20.94) pg/ml、(20.82±1.90) ng/ml,均低于感染模型组[(203.14±46.29) pg/ml、(27.49±6.81) ng/ml](P 0.05),二者HSP47、TGF-β1含量均高于健康对照组(P 0.01)。羟脯氨酸含量和肝组织HSP47 mRNA、Ⅰ型胶原α1链mRNA表达量与血清HSP47、 TGF-β1含量的趋势一致:感染治疗组小鼠肝羟脯氨酸含量为(0.27±0.08) mg/g肝湿重,低于感染模型组的(0.69±0.07) mg/g肝湿重(P 0.01),二者肝羟脯氨酸含量均高于健康对照组[(0.11±0.04) mg/g肝湿重](P 0.05);感染治疗组小鼠肝脏HSP47 mRNA、Ⅰ型胶原α1链mRNA表达水平分别为(0.49±0.27)、(0.67±0.09),均低于感染模型组的(0.84±0.17)、(0.91±0.11)(P 0.05),二者HSP47 mRNA、Ⅰ型胶原α1链mRNA表达水平均高于健康对照组(0.24±0.04、 0.24±0.05)(P 0.01)。血清HSP47水平与TGF-β1水平呈正相关关系(r=0.928 0);血清HSP47水平、 TGF-β1水平与肝组织Ⅰ型胶原α1链mRNA表达水平间均呈正相关关系(r=0.926 2、 0.872 8)。结论青蒿琥酯对日本血吸虫诱导的小鼠早期肝纤维化具有较好的干预效果,其机制可能系通过下调HSP47的表达水平抑制胶原合成,进而减轻肝纤维化程度。     

白细胞介素-17A调节转化生长因子β1对病毒性心肌炎小鼠心肌纤维化的影响

目的 在小鼠病毒性心肌炎（viral myocarditis,VMC）心肌纤维化的发展过程中,观察白细胞介素-17A（interleukin-17A,IL-17A）是否通过调节转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）参与心肌纤维化.方法 IL-17A基因敲除（IL-17A-deficient,IL-17A-/-）Balb/c小鼠和野生型（wild-type,WT） Balb/c小鼠分别按电脑随机数字表法分为4组,腹腔注射TCID50为10-5的柯萨奇病毒B3 （coxsackie virus B3,CVB3） 0.1 mL培养液建立小鼠VMC模型,于注射病毒后第0、14、28和42天处死小鼠,然后无菌取心脏组织,苏木素-伊红和Masson染色观察心肌组织形态学,并分别计算心肌病理积分和胶原容积积分（CVF）.实时荧光定量聚合酶链反应检测心肌组织TGF-β1mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法检测心肌组织TGF-β1蛋白的表达水平.结果 WT小鼠的心肌纤维化随着VMC的病程发展不断加重,TGF-β1于14 d表达显著升高,28 d和42 d后逐渐下降,但仍高于正常水平,差异有统计学意义（P＜0.05）.与同时点WT小鼠相比,IL-17A-/-小鼠心肌组织的心肌纤维化程度明显减轻,TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 IL-17A参与VMC的心肌纤维化过程,并可能通过调节TGF-β1的表达而参与这一过程.     

Smad7在大鼠肺间质纤维化中的表达及白介素-7的治疗作用

目的探讨Smad7和转化生长因子β_1(TGF-β_1)在肺间质纤维化中的作用及其相互关系,并观察白介素-7(IL-7)的治疗作用。方法将48只健康Wistar大鼠分为3组,盐水对照组(N组,12只);肺间质纤维化组(F组,18只)：通过气管内注射博莱霉素(BLM)建立肺间质纤维化大鼠模型;IL-7治疗组(Ⅰ组,18只)：给予IL-7腹腔内注射,5次/周,连续2周。测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)及透明质酸(HA)含量,光镜下观察肺组织病理形态,采用免疫组化法检测肺Smad7和TGF-β_1的表达。结果①Ⅰ组HYP含量[(2．06±0．23)ng/ml]较同期F组明显下降[(2．99±0．27)ng/ml](P＜0．01)。②Ⅰ组肺泡炎及肺纤维化程度较同期F组明显下降。③与同时间点N组相比,F组TGF-β_1表达均明显增加(P均＜0．01);与同时间点F组相比,Ⅰ组TGF-β_1表达显著降低(P均＜0．01)。④与同时间点N组相比,F组Smad7表达均明显降低(P均＜0．01);与F组相比,Ⅰ组Smad7表达均明显增高(P均＜0．01)。结论TGF-β_1表达增加和Smad7表达不足在肺纤维化发病中起重要作用,IL-7可通过刺激Smad7表达、降低TGF-β_1表达来治疗BLM诱导的肺纤维化。     

γ-促分泌酶抑制剂阻断Notch信号对支气管哮喘模型小鼠气道炎症的影响

目的 研究γ-促分泌酶抑制剂阻断Notch信号对支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠气道炎症反应的影响,为哮喘治疗寻找新的药物提供理论基础.方法 制作小鼠哮喘模型,在小鼠激发阶段尾静脉注射γ-促分泌酶抑制剂MW167,采用RT-PCR方法检测小鼠肺T细胞IL-4 mRNA及IFN-γmRNA的表达,ELISA方法检测外周血清及BALF上清中IL-4及IFN-γ水平.结果 MW167注射组较哮喘组病理学改变减轻,而肝及肾无明显形态学改变,MW167阻断Notch信号后,MW167注射组小鼠肺T细胞IL-4 mRNA的表达较哮喘组减弱,而IFN-γ mRNA的表达增强(IL-4:0.119±0.045比0.414±0.214,P＜0.01; IFN-γ:0.459±0.205比0.170±0.050,P＜0.01);MW167注射组外周血清及BALF中IL-4的表达较哮喘组减弱[血清:(19.601±0.870) ng/L比(26.046±2.211) ng/L,P＜0.05;BALF:(75.077±14.438) ng/L比(113.478±8.628) ng/L,P＜0.01)];外周血清中及BALF中IFN-γ的表达较对照组增强[血清:(10.644±3.338) ng/L比(5.119±2.230) ng/L,P＜0.01]; BALF:(26.131±3.608) ng/L比(21.299±2.830) ng/L,P＜0.01].结论 静脉注射γ-促分泌酶抑制剂抑制了哮喘模型小鼠气道炎症,对哮喘有潜在的治疗价值.     

Th17、Treg在肺纤维化小鼠外周血、肺组织中的表达及意义

目的观察CD4+IL-17+辅助性T细胞(Th17)及Th17/CD4+CD2+5Foxp3+调节性T细胞(Treg)在博来霉素皮下注射致小鼠肺纤维化模型外周血及肺组织的表达及意义。方法 20只雌性BALB/c小鼠随机分为模型组和对照组各10只:模型组皮下注射博莱霉素4周,对照组相同条件下注射0.1 mL PBS。采用HE染色和Masson’s染色观察两组肺组织炎症和纤维化的病理改变;流式细胞术检测两组肺组织及外周血Th17、Treg及Th17/Treg的表达;应用酶联免疫吸附试验检测两组血清IL-17水平;免疫荧光定量PCR法检测两组肺实质组织中IL-17和维甲酸相关孤独受体(RORγt)的mRNA的表达,并分析上述各指标的相互关系。结果模型组肺部纤维化评分、肺组织炎症程度和羟脯氨酸的含量均显著高于对照组(P均<0.01);外周血和肺组织Th17、Th17/Treg及外周血IL-17含量较对照组均显著增高(P均<0.01);肺实质RORγt和IL-17 mRNA水平较对照组明显增高(P均<0.05)。相关性分析结果显示,外周血和肺组织Th17及Th17/Treg、外周血IL-17的水平与肺组织羟脯氨酸水平、肺部纤维化评分、肺组织炎症反应均呈显著正相关(P均<0.01)。结论肺纤维化模型Th17及Th17/Treg表达均增高;Th17可能通过分泌IL-17参与肺纤维化的发病,Th17/Treg失衡可能通过加重肺纤维化免疫炎症,促进肺部胶原纤维的沉积,在肺纤维化的发病发挥重要作用。     

转录活化子1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和胶原表达的影响

目的 观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和羟脯氨酸表达的影响.方法 将45只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、博来霉素组和寡核苷酸组,每组15只,分别在气管内灌注并雾化吸入生理盐水、博来霉素、STAT1反义寡核苷酸.分别于雾化后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠.肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变,免疫组织化学SP法测定肺组织中TGF-β_1、PAI-1表达,逆转录PCR测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量.样本均数间比较采用单因素方差分析和q检验.结果 寡核苷酸组大鼠各时间点的肺泡炎和肺纤维化程度均较博来霉素组减轻.博来霉素组和寡核苷酸组大鼠肺组织中TGF-β、PAI-1表达水平均明显高于生理盐水组,博来霉素组和寡核苷酸组大鼠雾化后第7天TGF-β、PAI-1的积分吸光度值分别为182±12和169±12、128±11和113±13,明显高于生理盐水组的21±6和27±9,第28天时(68±7和87±7、54±8和57±8)仍高于生理盐水组(22±7和26±7);雾化后第7天、第14天和第28天,寡核苷酸组大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为1.36±0.10、1.19±0.28、1.22±0.24和1.20±0.09、0.62±0.09、0.76±0.12,明显低于博来霉素组(3.29±0.28、2.04±0.25、1.91±0.30和1.63±0.15、1.58±0.13、1.12±0.09),寡核苷酸组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量(mg/g)分别为3.02±0.13、3.24±0.31和3.60±0.16,明显低于博来霉素组的3.76±0.10、3.92±0.30和4.62±0.28.结论 STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β_1、PAI-1的表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少,羟脯氨酸含量降低有关.     

白介素17及其受体在大鼠重症肺炎克雷伯菌肺炎中的表达

目的 探讨白介素17(interleukin-17,IL-17)及IL-17受体(interleukin-17 receptor,IL-17R)在大鼠重症肺炎克雷伯菌肺炎发病过程中的表达.方法 72只SD大鼠随机分为模型组和对照组,通过气管内注射肺炎克雷伯菌3.6×10~9cfu/只,建立大鼠重症肺炎模型,采用实时荧光定量PCR方法检测各时间点肺组织IL-17、IL-17R、IL-1β、肿瘤坏死因子α mRNA表达水平;动态观察支气管肺泡灌洗液白细胞总数和中性粒细胞分类计数,并取肺组织病理学观察.结果 IL-17及IL-17R mRNA的表达于造模后4 h开始升高,第3天达到高峰,分别为对照组的(282.32±21.22)倍、(18.01±0.67)倍(P<0.01),至第7天基本降至基础水平.IL-1β及肿瘤坏死因子α mRNA的表达高峰延迟于IL-17及IL-17R,于第5天达到高峰.IL-17 mRNA的表达量与支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数呈显著正相关(r=0.82,P<0.01).模型组肺组织明显充血、水肿及出血,于第3天出现显著炎症细胞浸润.结论 IL-17及其受体在重症肺炎中高表达,是参与重症肺炎克雷伯菌肺炎发生发展的重要细胞因子,其促炎作用与上调中性粒细胞聚集及刺激IL-1β、肿瘤坏死因子α等细胞因子表达有关.     

CHB患者Th17-Treg失衡中IL-21的作用及机制

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周Th17/调节性T细胞(Treg)失衡中IL-21的作用及其初步机制。方法流式细胞仪分别检测59例CHB患者和20例健康人外周血细胞中Th17细胞和Treg细胞频数,同时以ELISA法检测血清细胞因子IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β水平。体外分别以IL21、IL-2刺激CHB患者外周血单核细胞(PBMC),以实时PCR检测培养细胞转录因子RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,以ELISA法检测培养上清细胞因子IL-17、IL-10和TGF-β水平。结果与正常人群相比,IL-21、IL1 7、TGF-β水平显著升高(P均0.05),CHB患者外周Th17/Treg比例显著升高(P0.05),IL-21水平与Th1 7/Treg比例呈正相关(P=01.008)。与IL-2相比.IL-21刺激CHB患者PBMC的RORγt mRNA表达水平明显升高(P=0.016)而Foxp3 mRNA表达水平明显降低(P=0.018),相对应的培养上清中,IL-1 7水平显著上升(P=0.049)而IL-10、TGF-β水平明显降低(P=0.017,P=0.004)。结论 C、HB患者中IL-21能通过提高RORγt mRNA表达,同时抑制Foxp3 mRNA表达进而促进Th1 7/Treg失衡。     

烟草烟雾暴露大鼠中CD4白细胞介素-17+T细胞与CD+4Foxp3+调节性T细胞的变化及意义

目的 观察烟草烟雾暴露大鼠外周血与BALF中CD+4白细胞介素(IL)-17+T细胞(Th17细胞)与CD; Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)及相关因子的水平变化,探讨Th17和Treg细胞在烟草诱导气道炎症和COPD的发生与发展中的作用.方法 将40只健康清洁级雄性Wistar大鼠分为暴露12周组和24周组、对照12周组和24周组,每组10只.用烟熏法复制大鼠气道炎症的动物模型.收集BALF进行细胞学计数和分类,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清和BALF上清液中IL-17和IL-6水平,用流式细胞术检测Th17和Treg细胞比例,用实时荧光定量PCR法检测IL-17和Foxp3 mRNA的表达.多组间比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用SNK法和GamesHowell法.结果 暴露12周组和24周组大鼠外周血IL-17浓度分别为(52.6±1.8) ng/L和(75.4±6.0) ng/L,BALF中IL-17浓度分别为(78.1 ±5.8) ng/L和(95.0±6.8)ng/L,均显著高于对照12周组[(40.0±3.2) ng/L和(54.5±4.6) ng/L]及24周组[(36.7±3.2) ng/L和(53.9±3.7) ng/L],暴露24周组与其他3组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).暴露24周组大鼠外周血中IL-6浓度为(31.4±2.1)ng/L,显著高于对照24周组[(11.5±0.5)ng/L];暴露12周组和24周组大鼠BALF中IL-6浓度分别为(33.3 ±2.3)ng/L和(44.6±3.0)ng/L,显著高于对照12周组和24周组[(15.6±1.8)ng/L和(18.0±1.9) ng/L].暴露12周组和24周组大鼠外周血中Th17细胞比例分别为(1.81±0.19)％和(3.74±0.55)％,BALF中Th17细胞比例分别为(7.84±0.28)％和(8.01±0.39)％,均显著高于对照12周组[(0.97±0.08)％和(5.64±0.54)％]及24周组[(1.08±0.10)％和(5.95±0.48)％],暴露24周组与其他3组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).暴露12周组和24周组大鼠BALF中Treg细胞比例分别为(8.81±0.49)％和(11.98±0.72)％,均显著高于对照12周组和24周组[(4.34±0.28)％和(5.21±0.42)％].暴露12周组和24周组大鼠外周血中IL-17 mRNA表达量分别为25.7±2.0和33.9±1.5,BALF中IL-17 mRNA表达量分别为22.2±1.8和34.7±4.2,均显著高于对照12周组(11.3±2.6和11.6 ±2.4)及24周组(11.1±2.0和13.5±3.4);暴露12周组和24周组大鼠BALF中Foxp3 mRNA表达量分别为24.4±2.7和30.3±2.7,显著高于对照12周组和24周组(12.7±2.7和14.6±3.8).暴露组大鼠BALF中Th17细胞与其BALF中细胞总数和巨噬细胞数呈正相关(r值分别为0.512和0.543,均P＜0.05).结论 烟草暴露可导致大鼠气道炎症模型的Th17细胞和Treg细胞及相关炎症因子水平升高,提示Treg细胞可能参与气道炎症的免疫调节,Th17细胞异常升高可能与大鼠气道炎症反应的发生及持续进展有关.     

Elevation of soluble interleukin-2 receptor levels in the bronchoalveolar lavage from patients with systemic sclerosis

This study was designed to investigate the levels of IL-2 and its soluble receptor (sIL-2R) in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) from patients with systemic sclerosis (SSc). We studied 18 patients with SSc and 10 healthy volunteers. Based on high-resolution computed tomography lung scans the patients were divided into two groups, those with (SSc-ILD group, n= 10) and those without (SSc group, n = 8) evidence of interstitial lung disease (ILD). Both groups showed significantly higher total cell and neutrophil counts in the BALF than controls. The SSc group also showed significantly higher levels of lymphocytes than controls. IL-2 was not detectable in BALF. The patients showed significantly higher levels of sIL-2R than controls (77.8% vs 20%, P=0.005). The median sIL-2R levels detected did not differ between the two patient groups (SSc-ILD 270 pg/ml, SSc 232 pg/ml). This study suggests that SSc patients with or without ILD have elevated levels of sIL-2R in BALF and that in some of these patients this finding could be explained by subclinical pulmonary inflammation.     

HO-1对肺气肿大鼠模型肺组织MCP-1和TGF-β1表达的影响

目的观察血红素加氧酶1（HO-1）对肺气肿大鼠模型肺组织单核细胞趋化蛋白1（MCP1）和转化生长因子B。（TGF-β1）表达的影响。方法Wistar雄性大雄18只,随机分为正常未暴露组（c）、烟雾暴露组（sM）、氯化血红素（Hemin）＋烟雾暴露组（H）,每组6只。利用烟雾暴露方法建立大鼠肺气肿模型,采用HE染色观察肺组织病理形态学变化,细胞学计数和分类BALF,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF、血清中MCP1的浓度,免疫组织化学法测定肺组织内的HO-1、TGF-β1。表达情况。结果与SM组比较,H组病理改变轻,BALF中白细胞总数、巨噬细胞（AM）、中性粒细胞数下降,肺组织HO—1的表达明显升高,肺组织TGF-β1,的表达及BALF中MCP1的浓度明显下降。结论MCP—1和TGFG-β1与COPD的发病密切相关,HO-1的早期干预可抑制AM、中性粒细胞、MCP-1、TGF-β1,表达,从而减轻了肺组织及气道炎症。     

粉尘螨Ⅲ类重组变应原致敏的小鼠哮喘模型致敏效果分析

目的 探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原（Der f3）诱导的小鼠哮喘模型的致敏效果。方法 30只6~8周龄雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为PBS组（阴性对照组）、卵清蛋白（OVA）组（阳性对照组）和Der f3组（实验组）,OVA组和Der f3组分别使用OVA和纯化Der f3蛋白于第0、7、14天进行腹腔注射致敏,于第21d开始雾化吸入,连续7d,PBS组则换成PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后一次雾化吸入24h后,分别观察肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞计数,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF和脾细胞培养上清中IL-4、IL-2、IL-17和IFN-γ的含量及血清中IgG1、IgE抗体水平变化;结果OVA组和Der f3组小鼠肺部支气管、血管粘膜下及周围肺组织有明显的炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落,血管壁明显水肿等,而PBS组未见明显病理改变;Der f3组的BALF中白细胞总数[(19.99±1.03)×106个/ml]及嗜酸性粒细胞（EOS）[(1.81±0.07)×106个/ml]计数均明显高于PBS组（P<0.01）;与PBS组相比：BALF中IL-4 [(80.99±9.06) pg/ml]、IL-17 [(209.69±31.86) pg/ml]呈高水平表达（P<0.01）,而IL-2 [(8.29±1.27) pg/ml]和IFN-γ [(55.04±18.85) pg/ml]含量则显著下降（P<0.01）;上述指标在脾细胞培养上清中出现类似的变化。Der f3组血清中IgE [(31.92±2.68) U/ml]、IgG1 [(16.46±4.32) μg/ml]的含量表现为Th2型反应增强趋势;但OVA组和Der f3组间所有指标差异均无统计学意义（P>0.05）;结论 粉尘螨重组Der f3蛋白可成功建立小鼠变态反应性气道及肺部炎症动物模型。