肝癌细胞β-catenin表达及其亚细胞内分布

目的肝癌细胞在细胞膜、细胞浆和细胞核β-catenin蛋白分布及其与肝癌分化程度的关系。方法利用免疫组织化学和Western Blotting两种方法检测正常肝、肝硬化和肝癌组织细胞表达pcatenin，及其在细胞膜、细胞浆和细胞核内分布情况。结果正常肝、肝硬化细胞膜β-catenin分布均匀、清晰、完整，细胞浆仅有少许黄色颗粒，Western Blotting显示胞浆及胞核无明显β-catenin分布。免疫组化显示肝癌细胞膜β-catenin分布不均匀、不连续，甚至缺如，低分化肝癌细胞膜β-catenin分布较高分化癌少，肝癌细胞浆呈现β-catenin高表达。18例（90％）肝癌细胞膜β-catenin表达量明显减少，10例（50％）胞膜分布不连续或缺如，细胞间界限不清楚，癌细胞大小也不一致；17例（85％）细胞浆明显的pcatenin积聚，而且细胞浆分布不均匀；随肝癌分化程度不同，pcatenin表达也有明显差异，7例（77．8％）高分化肝癌细胞膜pcatenin分布较为清楚连续，细胞间有界限，细胞浆表达量较多，分布均匀。4例（80％）低分化肝癌pcatenin细胞膜表达较少细胞界限不清楚，细胞浆pcatenin分布不均匀，呈点状积聚。中度分化的肝癌细胞膜和细胞浆内pcatenin分布界与高低分化之间，5例（83．3％）细胞浆pcatenin表达阳性。Western Blotting检测肝癌细胞浆和细胞核均有分布，且核内积聚免疫组化法难以观察。结论肝癌细胞pcatenin表达在细胞膜、细胞浆和胞核异常分布与Wnt信号细胞内转导异常，这可能与肝癌快速增殖、高侵袭和转移有关，为肝癌的临床治疗和新药研究提供了理论基础。     

β-catenin在良、恶性黑素细胞肿瘤中的表达

目的：探讨β-catenin在良、恶性黑素细胞肿瘤中的表达及意义.方法：应用免疫组织化学PowerVisionTM二步法检测25例皮内痣、45例恶性黑素瘤中β-catenin的表达情况.结果：β-catenin在恶性黑素瘤中异常表达率为73%（33/45），显著高于皮内痣中异常表达率36%（9/25），（P＜0.05）.结论：β-catenin表达异常在恶性黑素瘤发生、发展中可能起重要作用。     

抑制残癌细胞上皮间质转化能降低肝动脉结扎增强的肝癌转移潜能

目的 探讨抑制残癌细胞上皮-间质转化对肝动脉断流后肝癌增强的转移潜能的影响.方法 采用MHCC97肝癌细胞系和52只BALB/c-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植并肝动脉结扎(hepatic artery ligation,HAL)模型.另12只荷瘤裸鼠行假手术设为对照.分别观察肝动脉结扎+阻滞剂LY294002以及肝动脉结扎+不同剂量干扰素α(intererin-α,IFN-α)对移植瘤生长和肺转移率的影响.体外将肝癌细胞MHCC97置于缺氧环境中培养.Western blot检测细胞和移植瘤内HIF-1 α、E-cadherin、N-cadherin、Twist表达.结果 肝动脉结扎虽然减小肝癌移植瘤体积(2002.97 ±331.28) mm3 vs.(3921.23 ±786.21) mm3,t =4.052,P＜0.01),但增加荷瘤裸鼠肺转移率( 10/12 vs.4/12,P＜0.05).联合阻滞剂LY294002治疗不能进一步抑制肝癌生长,但显著减少裸鼠肺转移(1/6 vs.10/12 vs.100％,P＜0.05).中等以上剂量的IFN-α(7.5×106 U/kg)显著降低肝动脉结扎诱导的肺转移率(0/6 vs.2/6 vs.100％,P＜0.01,P＜0.05).对移植瘤和细胞样本的分析证实阻滞剂LY294002或中等以上剂量的IFN-α均抑制缺氧肝癌细胞内N-cadherin和Twist上调,增加E-cadherin表达.结论 阻断肝癌细胞上皮-间质转化能够抑制缺氧诱导的肝癌侵袭、转移.     

三氧化二砷抑制肝癌细胞侵袭转移的实验研究

目的了解三氧化二砷（As2O3）对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用。方法采用MTT法观察As2O3对HepG2细胞黏附能力的影响,以Transwell检测As2O3对HepG2细胞迁移、侵袭能力的影响。结果As2O3作用后30、60、90、120min时的细胞黏附率较对照组均明显下降,不同时间组与对照组之间差异均有显著性（P〈0.05）;As2O3作用后游走及侵袭穿膜细胞数也较对照组明显下降（P〈0.01）。结论As2O3可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力。     

E-cadherin、β-catenin表达与结肠癌术后转移关系

目的 探讨结肠癌患者肿瘤组织中β-catenin、E-cadherin表达情况及其对远处转移的预测作用.方法 采用免疫组化方法检测其β-catenin、E-cadherin表达情况.结果 在35例转移组中23例(65.71％)患者出现β-catenin阳性表达,25例(71.42％)E-cadherin阳性表达,均高于非转移组.结肠癌β-catenin、E-cadherin的表达与原发灶分化程度、T分期和N分期均没有明显联系.肿瘤组织中β-catenin、E-cadherin表达明显高于癌旁组织.二者均为阳性表达,其转移率明显高于均为阴性表达转移率,生存分析显示不同表达状态其远处转移出现时间差异有统计学意义(P =0.0369).结论 肿瘤组织中β-catenin、E-cadherin表达同结肠癌术后转移发生相关,两者联合检测有助于评估肿瘤转移程度.     

β-catenin的表达在乳腺癌发生发展中的作用

目的 观察β-catenin的表达在乳腺癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学Envision+法检测β-catenin在不同病理阶段的乳腺组织中的表达状况.乳腺囊性增生病27例,导管内乳头状瘤25例,囊性增生病伴异型26例,导管内癌(或伴早期浸润)29例,浸润性导管癌58例.结果 β-catenin在乳腺导管内乳头状瘤、囊性增生病、囊性增生病伴异型、导管内癌(或伴早期浸润)和浸润性导管癌中的阳性表达率分别为4.0%、3.7%、23.1%、72.4%和79.3%.各组间表达的差异有统计学意义(P<0.01).β-catenin的单纯膜表达与肿瘤直径的大小、TNM分期和淋巴结转移状况显著相关,直径小的表达率更高(P<0.01).膜表达与肿瘤的组织学分级(P>0.05)、患者年龄均无明显相关(P>0.05).β-catenin的膜浆共表达与淋巴结是否转移显著相关(P<0.05),与临床分期、组织学分级等无明显相关(P>0.05).β-catenin膜浆表达的淋巴结转移率高于膜表达组(P<0.05).结论 β-catenin在囊性增生病伴异型、导管内癌(或伴早期浸润)和浸润性导管癌中的阳性表达率明显高于囊性增生病和导管内乳头状瘤,它的作用可能始于癌变的早期并持续存在.β-catenin的膜浆表达与淋巴结转移呈正相关,提示β-catenin膜浆表达的乳腺癌易发生转移,两者可能是预后不良的因素.β-catenin的膜表达与肿瘤直径的大小、TNM分期和淋巴结转移状况呈负相关,可能提示预后较好.     

白藜芦醇通过抑制β-catenin表达诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化

[目的]观察白藜芦醇对人肌腱干细胞成骨分化的作用及其细胞信号通路。[方法]低密度接种法和胶原酶消化法分离培养人肌腱干细胞,结晶紫染色观察分离出的细胞形成的单克隆,体外诱导检测分离细胞的多向分化能力;在/无成骨诱导因子下,不同浓度白藜芦醇刺激人肌腱干细胞荧光定量PCR检测骨相关基因(Run x2和OCN)表达,免疫印迹检测Run x2蛋白表达,茜素红S染色观察钙盐沉积,免疫印迹检测β-catenin和NK-KB表达以检测相关细胞信号通路。[结果]成功从人髌腱组织中分离培养出肌腱干细胞,体外可被诱导成骨细胞和脂肪细胞;在/无成骨诱导因子影响下,白藜芦醇均促进骨相关因子Run x2和其下游因子OCN表达,且随着白藜芦醇的浓度升高而上调;无成骨诱导因子影响下,Run x2蛋白表达随着白藜芦醇浓度升高而增多,而在成骨诱导因子存在下,其蛋白表达变化不明显。在/无成骨诱导因子影响下,茜素红S染色显示白藜芦醇促进人肌腱干细胞的钙盐沉积。随着白藜芦醇浓度的提高,β-catenin表达减少,而NF-KB表达无明显变化。[结论]白藜芦醇可以体外诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化,可能通过调节β-catenin信号通路来调控。     

转化生长因子β1诱导人肝癌细胞侵袭转移的实验研究

目的：观察TGF-β1体外诱导肝癌细胞发生上皮间质转化（EM T）样改变促进其增殖、侵袭和转移等生物学行为的实验证据。方法：首先将不同浓度细胞因子TGF-β1(5、10、20 ng/mL)加入到完全培养基中与肝癌细胞SMMC-7721共培养,通过光学显微镜观察形态学变化,MTT检测肝癌细胞增殖指数的变化情况,细胞划痕实验和Transwell小室穿过实验检测TGF-β1对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,蛋白印迹实验检测TGF-β1作用前后上皮间质转化相关标志物蛋白的表达情况。结果：不同浓度细胞因子TGF-β1(5、10、20 ng/mL)与肝癌细胞SMMC-7721分别共培养48 h后,肝癌细胞形态发生了明显变化,细胞间隙从紧密逐渐变得松散,细胞形态从立方形逐渐伸出触角并向成纤维细胞样转变,提示TGF-β1能够诱导肝癌细胞发生EMT样转变,并且呈现浓度依赖性。TGF-β1能够显著促进肝癌细胞SMMC-7721体外增殖、体外迁移和侵袭能力,具有时间和剂量依赖性。TGF-β1作用后肝癌细胞SMMC-7721上皮细胞标志物蛋白E-cadherin表达下调,间质细胞标志物Vimentin和β-ca...     

β-catenin在胰腺癌中表达的意义

目的 探讨β-catenin(连环素)在胰腺癌表达的临床意义。方法 对手术切除的46例胰腺癌标本进行免疫组化染色，检测β-catenin在胰腺癌中的表达，并分析其和胰腺癌的分级、分期以及有无转移等指标的关系。结果 β-catenin在胰腺癌细胞膜的异常表达率为54．3％，且分化越差则在细胞膜的异常表达率越高，有转移者高于无转移者；其在细胞浆的异常表达率为21．7％，与胰腺癌的分化、分期及有无转移无显著相关性，但23例术前介入化疗的患者中，肿块缩小者(14例)在细胞浆的异常表达率为0，显著低于9例肿块无缩小者的33．3％；β-cate-nin在细胞膜和细胞浆异常表达具有一致性，为63．0％。结论 β-catenin在细胞膜的异常表达能促进肿瘤转移，在细胞浆内的异常表达可能会促进肿瘤细胞的增殖。     

缺氧通过抑制E-cadherin促进胰腺癌细胞侵袭的研究

目的 观察缺氧对胰腺癌细胞E-cadherin表达的抑制以及侵袭性生物学行为的影响,探讨E-cadherin表达抑制的调控机制.方法 分别在常氧和缺氧环境下培养胰腺癌细胞Pane-1,通过Western blot和TransweU技术对比观察E-cadherin表达的差异以及细胞侵袭能力的变化.体外转染表达HIF-α siRNA的真核表达载体pGenesil-1-HIF-1α以及对照载体,进一步检测沉默HIF-α之后,Pane-1细胞E-cadherin和细胞侵袭能力的变化.结果 缺氧可以抑制Pane-1细胞E-cadherin的表达,并增强其在体外的侵袭能力.而通过RNAi技术沉默了HIF-α之后,则町以部分恢复缺氧微环境对Pane-1细胞E-cadherin表达的抑制,同时降低其在体外的侵袭能力.结论 缺氧微环境中HIF-α的活化可抑制E-cadherin的表达并加强胰腺癌细胞侵袭能力.     

靶向β-catenin的shRNA抑制结肠癌细胞增殖的体外实验研究

目的探讨靶向β-catenin的shRNA对结肠癌细胞Colo205的WNT通路的阻断和该基因沉默效应对结肠癌细胞在体外的生长抑制作用。方法构建靶向β-catenin的shRNA载体质粒和阴性对照载体.然后分别转染人结肠癌细胞Colo205。用RT-PCR和Western印迹法检测β-catenin的mRNA和蛋白的表达情况,细胞免疫荧光染色法检测β-catenin蛋白的表达。噻唑蓝实验评价转染后各组细胞的体外增殖情况。软琼脂集落形成实验检测各组细胞的非锚着依赖性生长的能力。结果成功构建了靶向β-catenin的shRNA和阴性对照质粒载体。特异性靶向β-catenin的shRNA能够明显下调β-catenin mRNA,并抑制β-catenin蛋白的表达,其抑制率分别为47.89％和45.26％（P〈0.05）。转染了特异性shRNA的实验组（CAT组）细胞增殖在转染后呈现随时间延长而进行性抑制的现象。在转染后72h,CAT组的细胞存活率为48.5％。与空白对照组的91.3％相比明显降低（P〈0.05）。在软琼脂里CAT组的细胞克隆数目（9个）明显少于空白对照组（46个）和阴性对照组（43个）（P〈0.05）。结论靶向β-catenin的特异性shRNA对结肠癌Colo205细胞具有沉默β-catenin基因表达从而阻断WNT信号通路的作用,并且能够有效地在体外抑制结肠癌细胞的增殖。     

β-catenin和Survivin蛋白在胆囊癌中的表达及意义

目的 探讨β-catenin、Survivin蛋白在胆囊癌中的表达及意义.方法 免疫组织化学检测90例胆囊良恶性病变中β-catenin、Survivin蛋白的表达,分析与临床病理参数的关系.结果 (1)β-catenin在胆囊癌、腺瘤及慢性胆囊炎组织中的阳性率为86.0%、80.0%和25.0%,差异有统计学意义(P＜0.01),与分期、转移、生存时间及病程长短相关(P＜0.05).(2)Survivin蛋白阳性率分别为64%、20%和10%,差异有统计学意义(P＜0.05),与分期和转移相关(P＜0.05).(3)两者表达呈正相关(rs=0.298,P＜0.05).结论 (1)Wnt信号通路和细胞黏附功能的异常可能与胆囊癌的发生、发展有关.(2)凋亡可能在胆囊癌的发生、发展中起作用,且Survivin蛋白表达与其不良生物学行为有关.(3)两者可能在胆囊癌的发生、发展中起协同作用.     

Wnt/β-catenin信号通路重要分子及其靶基因在原发性肝癌中的作用机制

肝癌是我国及某些亚非地区常见的恶性肿瘤之一,死亡率较高.近年来我国肝癌的发生率有上升趋势,因此了解肝癌的发生发展机制及其治疗刻不容缓.但目前对其发生机制仍不清楚.其中细胞信号转导对其发生、发展、转移起着至关重要的作用.如Notch信号通路、Wnt信号通路、Ras、Jnk信号通路、mTOR通路等,目前倍受关注的是Wnt/β-catenin转导途径.经典Wnt信号通路研究最多且相关机制解释较为清楚,其激活的重要标志是β-catenin于胞质稳定表达及核内定位.研究表明,Wnt信号通路各蛋白表达水平改变及相关基因突变参与了原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生.     

CXCR4和β-catenin在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的检测胰腺癌组织中的CXCR4和β-catenin的表达,并探讨两者的相互关系及其在胰腺癌侵袭和转移中的临床意义。方法应用免疫组化SP法对48例胰腺癌及20例正常胰腺组织中的CXCR4和β-catenin蛋白进行检测,并结合临床资料进行分析,采用Kaplan-Meier法分析目标蛋白的表达与临床预后的关系,2组间的生存率曲线比较的假设检验采用Log-rank法;多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果 CXCR4与β-cate-nin在胰腺癌组织中的表达阳性率分别为85.4%(41/48)和75.0%(36/48)。CXCR4与β-catenin的共表达率为70.8%(34/48)。CXCR4的阳性表达与淋巴结转移、TNM分期有关(P值分别为0.012、0.005),β-catenin的阳性表达与淋巴结转移有关(P=0.047)。Kaplan-Meier生存曲线提示CXCR4阳性表达是胰腺癌预后差的一个指标。Cox多因素方差分析提示CXCR4、TNM分期、淋巴结转移是影响胰腺癌预后的独立因素。结论胰腺癌中CXCR4及β-catenin均异常表达,与胰腺癌的生物学效应密切相关;CXCR4的异常表达可能是胰腺癌侵袭、转移的分子机理之一。     

小儿恶性肿瘤β-catenin基因突变的研究进展

β-catenin是一种重要的信号转导分子和细胞间黏附分子,在小儿恶性肿瘤中突变率较高,可能与肿瘤的发生和转移都有关系.肝母细胞瘤中突变率约48%,肾母细胞瘤中突变发生在有WT1突变的病例中,神经母细胞瘤中已发现有a-catenin突变.     

白藜芦醇抑制肝癌细胞侵袭能力的研究

白藜芦醇（resveratrol）是一种从葡萄、虎杖等植物中提取出的一种天然药物，具有保护心肌细胞、改善微循环等众多生理功能。近年来又发现其抗肿瘤的功能，且对于肝癌细胞，白藜芦醇有着明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用，我们从肿瘤细胞黏附、运动及侵袭三个方面探讨白藜芦醇对不同肝癌细胞株侵袭能力的影响。     

Smad2、Smad3和β-catenin在病理性瘢痕中的表达和意义

目的 研究Smad2、Smad3和β-catenin在病理性瘢痕中的表达,探讨TGF-β/Smad信号传导通路和Wnt/β-catenin信号传导通路在病理性瘢痕发病机制中的作用及相互关系.方法 应用免疫组化技术检测Smad2、Smad3和β-catenin在30例瘢痕疙瘩(A组)、30例增生性瘢痕(B组)及20例正常皮肤(C组)中的表达,并进行统计学分析.结果 Smad2、Smad3在A、B组中的阳性率高于C组,但其差异无统计学意义(P＞0.05),但在核内积聚较C组明显,且其差异有统计学意义(P＜0.05).βcatenin在A、B组中的表达与C组比较,其差异有统计学意义(P＜0.01),但A、B组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TGF-β/Smad信号传导通路与Wnt/β-catenin信号传导通路联合作用,导致病理性瘢痕形成.     

LYN通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的 探讨LYN对胃癌细胞迁移、侵袭等生物学行为的影响,并分析其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制.方法 选取2017年10月-2018年5月承德医学院附属医院收治的胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织样本,采用qRT-PCR检测在临床收集的胃癌和癌旁组织样本中的LYN表达水平.以胃癌AGS细胞为实验对象,利用脂质...     

缺氧诱导因子2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究缺氧诱导因子2(HIF-2)在肝癌组织及血清中的表达及其与临床病理因素之间的关系,探讨血清中HIF-2对于肝癌的诊断价值。方法 收集具有完整病例及随访资料的90例患者肝癌组织标本,免疫组织化学法检测肝癌组织中HIF-2的表达,酶联免疫吸附试验ELISA检测患者术前血清中HIF-2的表达,探讨HIF-2的表达与患者临床病理因素的关系。受试者工作曲线(Receiver operating characteristics,ROC)分析比较HIF-2和血清AFP值单独以及联合对肝癌的诊断价值。结果 90例肝癌组织中69例显示出HIF-2阳性表达(76.7%),显著高于癌旁组织(11/90,12.2%),且HIF-2高表达的与血管浸润、肿瘤包膜不完整、TNM分期晚以及病理Edmondson分级高密切相关。肝癌患者术前血清中HIF-2的表达水平明显增高,且其表达与血管浸润、肿瘤包膜、肿瘤TNM分期、病理Edmondson分级以及肝硬化程度相关,ROC曲线分析提示HIF-2联合AFP较HIF-2或AFP拥有更大的曲线下面积。结论 人肝癌组织中HIF-2高表达,其表达与血管浸润、肿瘤包膜、TNM分期以及病理分级相关;联合血清HIF-2和AFP检测可提高肝癌检出率;HIF-2可能作为肝癌早期诊断及预后预测的潜在分子标记物。     

β-catenin、APC表达异常在肾上腺皮质腺瘤形成中的作用

目的 观察β-连环素(β-catenin)、APe在肾上腺皮质腺瘤(ACA)发生中的作用.方法 运用免疫组织化学SP法检测36例ACA,10例周围正常肾上腺组织中β-catenin及APC蛋白表达.聚合酶链反应(PCR)-DNA双向测序法分析ACA及正常组织中β-catenin基因外显子3突变.结果 免疫组织化学染色显示正常组织β-catenin为细胞膜着色,无胞质或胞核内染色.ACA中12例存在胞质或胞核内β-catenin异常染色,异位表达率为33.3%(12/36).APC在正常组织中表现为胞质着色(10/10),阳性表达率为100.O%.36例ACA中29例为胞质内正常染色,7例APC胞质内不同程度表达缺失,阳性表达率为80.5%(29/36).PCR-DNA双向测序法检测正常组织中未见β-catenin基因外显子3突变(0/10),ACA中可见5例存在β-catenin外显子3点突变,突变率为13.8%(5/36),ACA细胞中β-catenin、APC的异常表达及β-catenin外显子3突变与正常组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 β-catenin外显子3突变及β-catenin、APC蛋白的异常表达在ACA形成过程中是一种频发事件.