EphA2与VEGF蛋白在喉鳞癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨沉默促红细胞生成素产生肝细胞受体(erythropoietin-producing hepatocellular re-ceptor,EphA2)与促血管生成因子(VEGF)蛋白在喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)组织中的表达及相关性。方法采用免疫组织化学技术检测EphA2、VEGF蛋白在69例喉鳞癌组织及15例癌旁黏膜组织中的表达,分析二者表达水平与临床病理特征的关系。结果 EphA2和VEGF蛋白在喉鳞癌组织中的阳性率均高于癌旁黏膜组织(P均<0.05),EphA2蛋白表达尚与肿瘤原发部位相关(P<0.05),且EphA2和VEGF蛋白表达均与喉鳞癌患者的临床分期(P均<0.05)及转移(P均<0.05)密切相关,而二者表达与患者年龄、性别、组织学分级均无明显相关(P均>0.05)。喉鳞癌组织中EphA2及VEGF蛋白表达存在正相关性(P<0.05)。生存分析结果显示EphA2及VEGF蛋白表达水平与患者5年总生存率密切相关(P<0.05)。多因素Cox比例风险回归模型进一步显示,淋巴结有无转移及EphA2蛋白表达水平为喉鳞癌患者预后的独立影响因素。结论 EphA2与VEGF蛋白在喉鳞癌组织中表达均上调,提示二者可能存在相互作用,共同在喉鳞癌的发生、发展中起作用。     

头颈鳞癌血管生成与颈淋巴结转移相关性研究

目的 :探讨头颈鳞癌血管生成与其颈淋巴结转移的关系以及血管内皮生长因子(VEGF)在头颈鳞癌血管生成中的作用。方法 :应用免疫组化SABC法检测 5 8例头颈鳞癌组织中微血管密度 (IMVD)及VEGF的表达。结果 :5 8例头颈鳞癌组织中IMVD为 2 3.93± 8.77,肿瘤分化程度 ,高与中、高与低间 ,IMVD差异有显著性意义 (均P <0 .0 5 ) ;中与低间 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。颈淋巴结转移组IMVD(2 7.92± 9.11)明显高于非转移组 (2 0 .6 9± 7.0 8) ,其差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。癌组织中VEGF表达与瘤内IMVD呈正相关 (rs=0 .4 87,P <0 .0 1)。结论 :瘤内IMVD可作为预测头颈鳞癌颈淋巴结转移的一个重要指标 ;VEGF可促进头颈鳞癌血管生成。     

下调组蛋白去乙酰化酶6对Hep-2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 观察下调组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylation 6,HDAC6)对人喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)Hep-2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用并探讨其体内抗肿瘤机制.方法 将喉鳞癌Hep-2细胞注射入裸鼠皮下,1周后裸鼠荷瘤模型建成.将裸鼠分为3组进行治疗,即空白对照组、空载体组和HDAC6小干扰RNA( siRNA)组,监测肿瘤生长变化.采用免疫组织化学法检测不同组别裸鼠移植瘤瘤体内Ki-67增殖情况的变化.采用Western blot法检测转染HDAC6前后不同组别裸鼠移植瘤组织凋亡相关基因B淋巴细胞-2(bcl-2)及bcl相关X蛋白(bcl-associated x protein,Bax)表达的变化.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL法)检测转染HDAC6前后裸鼠移植瘤组织凋亡情况的变化.结果 HDAC6 siRNA转染荷瘤裸鼠后,与空载体组及空白对照组相比,HDAC6 siRNA组荷瘤裸鼠肿瘤体积显著下降(F =64.783,P＜0.05);原位杂交、免疫组织化学及Western blot结果表明,HDAC6 siRNA转染组裸鼠肿瘤组织中HDAC6 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P值均＜0.05);Western blot结果显示HDAC6 siRNA转染组裸鼠肿瘤组织中Bax蛋白表达显著上调而Bcl-2的表达则显著下调,三组间比较差异具有统计学意义(P值均＜0.05);免疫组织化学结果显示转染HDAC6 siRNA组Ki-67染色阳性细胞数显著少于空载体组及空白对照组(F=25.793,P＜0.05);TUNEL结果表明,HDAC6转染组中细胞明显发生凋亡.结论 HDAC6 siRNA能有效抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的生长,并降低HDAC6和Bcl-2的表达,提高Bax的表达,为喉鳞癌的分子治疗提供了理论依据.     

头颈鳞癌组织和细胞系中免疫球蛋白M表达的初步研究

目的 明确头颈鳞癌组织及传代细胞系中免疫球蛋白M(IgM)的表达情况.方法 采用免疫组化染色(SABC法)检测头颈鳞癌组织及阴性对照组织中IgM蛋白的表达情况,比较分析IgM在头颈鳞癌与对照组织间的表达差异;采用Western Blot、流式细胞仪间接免疫荧光法检测IgM在头颈鳞癌细胞系中的表达情况.结果 IgM在头颈鳞癌及阴性对照组织中的阳性表达率分别为68.6％和24.5％,差异具有统计学意义(P＜0.05).随着鳞状上皮及鳞癌细胞分化程度的降低,IgM的表达部位有从细胞膜向细胞浆转变的趋势(P＜0.05);头颈鳞癌细胞裂解液中存在与人IgMμ链分子量一致(75KD)且能与抗人IgMμ链抗体发生特异性反应的蛋白; 4种头颈鳞癌细胞系中IgM平均免疫荧光强度为9.25±0.82％ (CNE-1),8.76±0.54％ (Tca8113),13.72±1.73％ (Hep-2)和12.1±1.19％ (HNE-1),与阴性对照组1.87±0.24％比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 头颈鳞癌组织和传代细胞系中存在IgM蛋白的表达,且IgM表达部位与鳞状上皮细胞的分化程度有关,但IgM在头颈鳞癌表达的临床意义、生物学作用和机制等尚有待进一步探讨和研究.     

RNA干扰沉默Aurora-A基因抑制喉癌Hep-2细胞生长的实验研究

目的 研究RNA干扰沉默Aurora-A基因后对喉癌Hep-2细胞体外体内生长的抑制作用.方法 构建靶向Aurora-A的小干扰RNA(siRNA)表达质粒并转染喉鳞癌Hep-2细胞株,采用CCK-8实验、Transwell实验、软琼脂克隆形成实验和裸鼠体内接种观察Aurora-A沉默后Hep-2细胞的增殖、侵袭和克隆形成能力以及体内肿瘤生长情况,Western blot和免疫组化检测参与细胞黏附侵袭的重要因子黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达情况.结果 Hep-2细胞转染Aurora-A siRNA 后,siRNA-3实验组的Aurora-A蛋白的表达下降了52％,CCK-8实验中siRNA-3组细胞的平均(x±s)吸光度值为(3.268±0.106),低于Hep-2细胞组的(3.722 ±0.152),差异有统计学意义(F=17.634,P＜0.01);Transwell实验显示,siRNA-3组每个视野的平均侵袭细胞数目为(110.0±18.0)个,较Hep-2组的(236.0 ±26.0)个减少,两组差异有统计学意义(F=26.462,P＜0.01);克隆形成实验中,siRNA-3组平均集落数目(31.0±6.6)个,低于Hep-2组平均细胞集落数目(104.0±14.0)个(F=75.321,P＜0.001).接种后,体内移植瘤生长受到抑制,siRNA-3组的肿瘤平均体积为(127.77±174.83) mm3,低于Hep-2组的肿瘤平均体积(837.26±101.80) mm3(F=28.187,P＜0.001).在体外和体内黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达也下降.结论 抑制Aurora-A基因后,通过降低黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达,抑制Hep-2细胞的生长,减弱肿瘤细胞的恶性侵袭性,Aurora-A可以成为喉鳞癌治疗良好的干预靶点.     

慢病毒介导的基质金属蛋白酶2基因沉默抑制喉癌侵袭生长的实验研究

目的 探讨siRNA(小干扰RNA)重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)基因沉默对喉鳞癌侵袭生长的抑制作用.方法 采用RNA干扰技术,将MMP-2基因siRNA的重组慢病毒(MMP-2-RNAi-Lentivirus)转染喉鳞癌Hep-2细胞,并运用蛋白印记法检测Hep-2细胞MMP-2基因的蛋白表达;通过博伊登(Boyden)侵袭小室观察MMP-2-RNAi-Lentivirus转染后喉癌细胞侵袭能力的变化.构建喉癌移植瘤裸鼠模型,瘤内注射MMP-2-RNAi-Lentivirns,观察抑瘤效果;透射电镜观察肿瘤形态;运用免疫组化方法检测移植瘤中增殖细胞核抗原的表达,以评估细胞增殖的情况.结果 MMP-2-RNAi-Lentivirus能高效地转染靶细胞,转染效率在90%以上.蛋白印迹法检测显示,转染后的Hep-2细胞中MMP-2蛋白表达阴性.侵袭实验显示,MMP-2-RNAi-Lentivirus转染后的实验组Hep-2细胞中穿过人工基底膜的平均细胞数(x±s,以下同)为(12±4)个,明显少于空载体对照组的(35±6)个(t=14.492,P<0.01).体内实验显示,MMP-2-RNAi-Lentivirus瘤内注射后,裸鼠移植瘤平均重量和平均体积均明显小于对照组,抑瘤率为44.2%.透射电镜观察到MMP-2-RNAi-Lentivims治疗组肿瘤细胞侵袭表型降低,治疗组肿瘤增殖细胞核抗原指数(49.588±6.995)也明显小于对照组(71.434±7.043,t=9.573,P<0.01).结论 siRNA重组慢病毒介导的MMP-2基因沉默能有效地抑制喉癌的侵袭、生长及增殖,为喉癌的基因治疗提供一定的实验依据.     

高迁移率族蛋白1在喉鳞状细胞癌组织及血清中的表达及意义

目的 研究高迁移率族蛋白1( high mobility group box-1,HMGB1) mRNA及蛋白在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)组织及患者血清中的表达及其临床意义.方法 反转录聚合酶链反应( RTPCR)及Western blot分别检测HMGB1 mRNA及蛋白在30例喉鳞癌患者肿瘤组织及癌旁黏膜组织中的表达;酶联免疫吸附试验( ELISA)检测HMGB1蛋白在喉鳞癌患者及正常志愿者血清中的表达.结果RT-PCR结果示HMGB1 mRNA(HMGB1/GAPDH)在喉鳞癌组织、癌旁黏膜组织中的相对表达量((x)±s)分别为1.25±0.12、0.32±0.04,差异有统计学意义(t=40.27,P＜0.05);Western blot结果示HMGB1蛋白(HMGB1/β-actin)在喉鳞癌和癌旁黏膜组织中的相对表达量分别为1.29 ±0.10、0.34±0.03,两组间差异有统计学意义(t=49.84,P＜0.05).结果显示HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平与患者的T分级、临床分期、有无淋巴转移及是否吸烟有关(P值均＜0.05);而与年龄、性别、是否饮酒及肿瘤病理分级无关(P＞0.05).ELISA结果显示,喉鳞癌患者及正常志愿者血清中HMGB1质量浓度分别为(24.80±14.08) ng/ml、(23.58±14.69)ng/ml,差异无统计学意义(t=0.37,P＞0.05).结论 HMGB1 mRNA及蛋白在喉鳞癌组织中的表达显著高于癌旁黏膜组织,且表达水平与T分级、临床分期及有无淋巴转移有关.     

原发于头颈以外恶性肿瘤的颈淋巴转移临床分析

目的探讨原发于头颈以外的恶性肿瘤的颈淋巴转移规律，以期对此类疾病进一步认识，为诊断提供依据。方法回顾性分析自1989年1月至2004年6月在北京协和医院住院治疗的466例发生颈淋巴转移的恶性肿瘤患者之中的77例原发灶位于头颈以外的病例，均经病理证实为恶性肿瘤颈淋巴转移。分析其发病特点，并按照颈淋巴结LEVEL分区探讨颈淋巴转移区域的特点。结果77例原发于头颈以外的恶性肿瘤病例，原发部位包括肺、胃、食管、乳腺、结肠、纵隔、卵巢、子宫、胰腺、肝脏、肠系膜、肾上腺、直肠。81．8％（63／77）的患者发生LEVELⅤ区颈淋巴转移，其中50例为左侧LEVELⅤ区转移；11．7％（9／77）发生LEVELⅣ区转移；5．2％（4／77）发生LEVELⅢ区转移；1．3％（1／77）发生LEVELⅠ区转移。原发灶位于头颈部以外的病例占各区域全部病例的比例分别为LEVELⅠ区2．1％，LEVELⅢ区3．7％，LEVELⅣ区14．3％，LEVELⅤ区70．8％。发生颈淋巴转移的头颈外恶性肿瘤中，低分化腺癌占51．9％，中分化腺癌占15．6％，低分化鳞癌占11．7％，中分化鳞癌占10．4％，其他组织学类型占10．4％。结论头颈部以外的多个器官的恶性肿瘤均可见颈淋巴转移，其中以肺癌最为常见，胃、食管、乳腺也是常见的原发灶。头颈部以外的恶性肿瘤发生颈淋巴转移的区域集中在LEVELⅤ区，尤其是左侧LEVELⅤ区。且发生于LEVELⅤ区的肿瘤转移病例，原发肿瘤位于头颈部以外的情况多于头颈部肿瘤。发生颈淋巴转移的头颈外恶性肿瘤，分化程度以中．低分化为主。     

沉默survivin抑制喉癌细胞Hep-2生长的实验研究

目的 探讨沉默survivin对喉癌细胞Hep-2生长的影响.方法 将重组质粒(psi-survivin)和阴性对照质粒(psi-scramble)用脂质体包裹转染人喉癌细胞株Hep-2,分别用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)从mRNA和蛋白水平检测survivin的表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)观察喉癌细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.建立裸鼠喉癌移植瘤模型,将psi-survivin和psi-scramble注射于肿瘤周围,观察其抗肿瘤的效果.免疫组化法和Western blot法检测重组质粒对肿瘤Survivin蛋白表达的影响.末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记技术(Tunel)观察肿瘤细胞的凋亡.结果 psi-survivin不仅在mRNA水平(抑制率为54.4%),而且蛋白水平也抑制Survivin表达,抑制率为37.0%.MTT证实psi-survivin明显抑制喉癌细胞的增殖,抑制率达71.7%.流式细胞仪结果显示psi-survivin组细胞凋亡明显增加,凋亡率达(13.05±0.56)%((-x)±s,下同).体内实验表明,质粒注射后第32天,盐水组瘤体积为(1443.9±230.5)mm3,psi-scramble组为(1348.5±198.4)Rim3,而psi-survivin组为(624.6±188.4)mm3,与对照组相比,差异有统计学意义(t=-5.917,P＜0.01).psi-survivin能明显抑制肿瘤survivin的表达,抑制率为41.8%,与对照组相比,差异有统计学意义(t=-80.343,P＜0.01).Tunel染色结果显示psi-survivin组肿瘤组织中出现较多凋亡细胞,而对照组未见凋亡细胞.结论 沉默survivin能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长.     

Jab1基因沉默对裸鼠人喉癌移植瘤生长影响的研究

目的 探讨Jab1重组质粒对人喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 利用喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过向瘤体内注射pJab1、阴性对照质粒和生理盐水,观察瘤体增长情况,通过免疫组化方法、反转录聚合酶链反应( RT-PCR)观察瘤体内Jab1、p27的mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 pJab1质粒组的肿瘤体积为(267.60±88.19)mm3((x)±s,以下同),与阴性对照组的(832.20±140.39) mm3及生理盐水组的( 895.40±145.93) mm3相比,差异有统计学意义(F=36.73,P＜0.001);免疫组化结果显示pJab1质粒组瘤内的Jab1蛋白的表达率降低为32.40％±5.59％,p27蛋白的表达率增高到76.80％±6.30％(P＜0.001),与阴性对照组及生理盐水组比较,差异有统计学意义;RT-PCR结果显示实验组瘤内Jab1的mRNA相对表达水平降低至0.65±0.03(F=558.00,P＜0.001),p27的mRNA无明显变化,为0.80±0.02(F=1.52,P＞0.05).结论 pJab1干扰质粒可明显降低裸鼠肿瘤组织内Jab1基因的表达并抑制瘤体的生长;pJab1质粒能有效抑制Jab1基因的表达,有望成为临床治疗喉癌的新途径.     

喉癌微血管生成中P53 nm23蛋白和血管内皮生长因子的作用

目的　探讨P5 3、nm2 3蛋白和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfacor,VEGF)在喉癌微血管生成及转移中的作用。方法　通过免疫组化SP法对 42例喉癌标本中P5 3、nm2 3蛋白、VEGF及微血管密度 (microvesseldensity,MVD)进行了检测。结果　喉癌中P5 3、nm2 3蛋白及VEGF的阳性表达率分别占 47 6 %、5 7 1%和 71 4%。P5 3基因和VEGF呈正相关 (P <0 0 5 ) ,在有淋巴结转移的喉癌标本中P5 3、VEGF阳性表达率及MVD明显高于非转移组 (P <0 0 5 )。而nm2 3基因和VEGF在喉癌标本中无直接相关性 ,在nm2 3蛋白表达阴性和VEGF阳性标本中MVD较高 ,这种现象多见于有淋巴结转移的喉癌中。结论　突变型P5 3基因通过调控VEGF的表达影响肿瘤内MVD ,促使喉癌发生转移 ;而nm2 3基因可能不是通过调控VEGF的表达 ,而是通过其它途径影响喉癌转移。     

喉鳞癌微血管密度与颈淋巴结转移及病理临床分期的相关性研究

目的研究喉鳞癌微血管密度与颈淋巴结转移及病理临床分期的相关性。方法采用抗Ⅷ因子相关抗原的抗体标记肿瘤血管内皮细胞并测定喉鳞癌组织微血管密度。结果①颈淋巴结转移组喉鳞癌的微血管密度显著高于非转移组(32.1518±6.489∶18.0672±4.983,P<0.01);②喉鳞癌微血管密度大于均数组则颈淋巴结转移率显著增高(P<0.01);③病理临床分期晚期组喉鳞癌的微血管密度明显高于早期组(P<0.01)。结论喉鳞癌微血管密度可作为预测其颈淋巴结转移的一项指标。     

Role of P53, nm23 proteins and vascular endothelial growth factor in angiogenesis and metastasis of laryngeal cancer]

OBJECTIVE: To elucidate the role of P53, nm23 proteins and vascular endothelial growth factor (VEGF) on angiogenesis and metastasis of laryngeal cancer. METHODS: Specimens of 42 laryngeal carcinomas were studied by immunohistochemical staining for P53 protein, nm23 protein, VEGF and CD34 antibody. RESULTS: Positive expressions of P53 protein, nm23 protein and VEGF were found in 47.6%, 57.1% and 71.42% of laryngeal cancer specimens respectively. There was a positive relationship between P53 and VEGF expression. The microvessel density (MVD) in P53- or VEGF--positive tumors was significantly higher in patients with cervical lymph node metastases than those without metastases. No correlation was identified between nm23 and VEGF staining. The MVD in nm23-negative and VEGF--positive tumors was significantly high. These phenomena were more easily found in patients with cervical lymph node metastases than in patients without metastases. CONCLUSION: P53 gene play roles in the metastasis of laryngeal cancer through regulating VEGF expression and reacting MVD in tumor; and nm23 gene reacts through approaches other than regulating VEGF expression.     

鼻咽癌组织内四种肿瘤相关蛋白表达及其与微血管密度和颈淋巴转移的关系

目的 研究人类前列腺癌转移抑制基因（kang ai 1，KAI1）、肿瘤转移抑制基因（nonmetastasis23，nm23）、E26转录因子（E26 transformation-specific-1，ETS-1）、血管内皮生长因子（vascular endothdial growth factor，VEGF）在鼻咽癌组织中的表达，并用CD34标记微血管测定密度，探讨它们之间的相关性及其与鼻咽癌淋巴转移和预后的关系。方法 应用免疫组织化学Envision二步法检测首诊时有颈淋巴转移的鼻咽非角化性癌（non-keratinizing carcinoma，NKC）50例、无淋巴转移的NKC30例和30例鼻咽黏膜慢性炎症组织内KAI1、nm23、ETS-1、VEGF蛋白的表达水平，并分析与NKC组织内微血管密度的关系。结果 KAI1、nm23蛋白在颈淋巴转移组、无颈淋巴转移组和鼻咽黏膜慢性炎症组织中的阳性表达率依次递增（χ^2=6．2，P〈0．05；χ^2=7．4，P〈0．01）；ETS-1、VEGF蛋白在3组间的阳性表达率依次递减（χ^2=12．8，P〈0．01；χ^2=9．1，P〈0．01）。80例NKC病例中KAI1、nm23蛋白阳性表达者的微血管密度（microvascular density，MVD）分别低于其阴性表达者（t=2．4，P〈0．05；t=2．0，P〈0．05）；ETS-1、VEGF蛋白阳性表达者MVD分别高于其阴性表达者（t=2．6，P〈0．05；t=3．6，P〈0．01）。KAI1和nm23蛋白共同阳性表达较两者各自单独阳性表达时MVD降低（t=2．5，P〈0．05，t=2．3，P〈0．05）；淋巴转移率降低（χ^2=5．2，P〈0．01；χ^2=4．3，P〈0．05）；ETS-1和VEGF蛋白共同表达较两者单独表达时MVD增高（t=2．1，P〈0．05；t=2．2，P〈0．05），淋巴转移率增加（χ^2=4．1，P〈0．01；χ^2=4．1，P〈0．01），提示KAI1与nm23蛋白及ETS-1与VEGF蛋白的表达有相互协同的作用。KAI1与nm23蛋白及ETS-1与VEGF蛋白阳性表达成正相关关系（r=0．5，P〈0．05；r=0．4，P〈0．01）。NKC患者有或无颈淋巴转移与治疗后5年生存期的高低差异有统计学意义（χ^2=4．4，P〈0．05）。结论 KAI1、nm23、ETS-1和VEGF蛋白的表达与鼻咽癌组织的微血管密度有明显相关性，与鼻咽癌的淋巴转移和预后密切相关，提示它们可以作为预测鼻咽癌颈淋巴转移及评估预后的参考指标。     

环氧化酶-2在喉鳞状细胞癌中的表达及其与微血管密度的关系

目的：检测喉鳞状细胞癌（LSCC）中环氧化酶-2（COX-2）、兔抗人Ⅷ因子（FⅧ）的表达,探讨LSCC中COX-2的表达情况与微血管密度（MVD）的关系。方法：利用免疫组织化学SABC法检测42例LSCC及其癌旁正常组织中COX-2、FⅧ的表达,分析其与LSCC的临床病理、淋巴结转移、MVD等的关系。结果：LSCC组织中COX-2阳性率为71．4％,癌旁正常组织中COX-2的阳性率为19．1％,肿瘤组织中COX-2的表达明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义（P〈0．05）;COX-2在LSCC中的表达与患者的性别、年龄、病变原发部位、分化程度和T分期无关（均P〉0．05）：与病理分期、颈淋巴结转移和MVD密切相关。结论：COX-2在LSCC中的高表达对肿瘤的发生、发展及淋巴结转移起促进作用,COX-2可能是促进肿瘤血管形成的主要因子。     

兔VX2舌癌颈深淋巴转移模型建立及其转移特性观察

目的 建立兔VX2舌癌颈深淋巴转移模型并研究颈淋巴转移特点.方法 新西兰白兔16只,分别于左舌腹黏膜下接种VX2瘤,随机数字表法分成4组,每组4只,分别在接种VX2瘤后第7、14、21和28天分4批处死动物,观察舌癌形成和颈深淋巴转移情况.结果 VX2舌肿瘤成瘤率100%.接种后第7、14、21和28天,舌肿瘤最大平均直径分别为(0.74±0.06)cm(x±s,以下同)、(1.62±0.06)cm、(1.82±0.04)cm和(2.52±0.07)cm.接种后第7天组、14天组和21天组,所有兔双侧颈部均未触及肿大淋巴结;第28天组,4只兔同侧均触及肿大颈淋巴结.病理结果显示,接种后第7天组4只兔无颈淋巴转移,第14天组、21天组和28天组,同侧颈深淋巴转移率均为100%,该淋巴结位于喉气管旁;第28天组4只兔中有2只兔出现对侧颈深淋巴转移.接种后第7天组、14天组、21天组和第28天组,同侧颈深淋巴结最大平均横径分别为(0.52±0.03)cm、(0.78±0.04)cm、(0.82±0.03)cm和(1.42±0.08)cm.颈浅淋巴结和颌下淋巴结未发现肿瘤转移.结论 兔舌腹接种VX2肿瘤后,只有颈深淋巴结出现转移,接种后第2周起可以建立VX2舌癌颈深淋巴转移模型.     

VEGF和iNOS在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)和诱生型一氧化氮合成酶 (iNOS)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系 ,并分析两者表达的相关性。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 4 0例新鲜喉鳞状细胞癌标本和远离肿瘤的正常喉组织中的VEGF和iNOS的mRNA表达。结果 :VEGF和iNOS在肿瘤组织中的阳性表达率明显高于正常组织 (P <0 .0 1) ;在肿瘤组织中 ,两者的表达与患者的性别、年龄、病变部位、T分期无关 (P>0 .0 5 ) ,而与病理分化程度和颈淋巴结转移相关 (P<0 .0 5及 P<0 .0 1) ,在肿瘤组织中两者的表达存在相关性 (P <0 .0 5 )。结论 :VEGF和iNOS在喉鳞状细胞癌的生长、发展和转移中起重要作用 ,两者可能通过相互上调表达而密切相关 ,共同参与喉鳞状细胞癌的生长、发展和转移。     

多基因共沉默对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤影响的研究

目的 应用基因克隆技术构建一个载体同时编码四个不同基因的真核表达质粒,并与单基因质粒作对比,通过裸鼠成瘤实验研究其对体内鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响.方法 构建同时表达血管内皮生长因子(VEGF)、致癌基因蛋白(c-myc)、存活素(survivin)和端粒酶反转录酶(hTERT)并含荧光素标记的短发夹RNA质粒(命名为P-1),并构建单独表达VEGF、c-myc、survivin 和hTERT的质粒(分别命名为P-2、P-3、P-4和P-5),建立人鼻咽癌细胞CNE-2Z细胞株裸鼠皮下接种模型,分别将其转染于荷瘤裸鼠瘤体内,以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的转染及表达情况.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)在mRNA水平上检测对目的基因表达的抑制作用,免疫印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果.脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测各组移植瘤细胞凋亡率.结果 所有裸鼠均接种成功,l周左右可见皮下肿瘤形成,并随时间延长不断增大.各质粒组载体转入瘤体后,共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达,而空白对照组未见绿色表达荧光.肿瘤体积生长曲线表明,单基因组和多基因组肿瘤生长明显受到抑制,以多基因组肿瘤体积抑制最为明显.肿瘤抑制率在Pl～5组分别为82.4%、46.2%、48.5%、51.9%和46.8%.RT-PCR和免疫印迹法在体内实验证实单基因质粒组主要引起单个基因mRNA和蛋白的表达下降,而多基因质粒组可以同时下调四个不同基因mRNA和蛋白的表达,TUNEL实验表明多基因质粒能更有效地促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的生长.结论 多基因共沉默对鼻咽癌基因治疗有着潜在的应用前景,同时阻断多个基因可能是恶性肿瘤基因治疗的一个希望所在.     

环氧化酶-2和血管内皮生长因子与甲状腺癌颈淋巴转移的关系

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与甲状腺乳头状癌颈淋巴转移的相关性.方法 采用免疫组织化学方法对79例甲状腺乳头状癌患者肿瘤组织的COX-2和VEGF蛋白表达进行检测,其中伴有颈淋巴结转移(N )的甲状腺乳头状癌患者46例,不伴颈淋巴结转移(N-)患者33例.结果 颈淋巴结转移组(Ⅰ～Ⅱ期)甲状腺乳头状癌原发灶标本COX-2和VEGF的表达阳性率分别为81.6%和86.8%,不伴颈淋巴结转移组甲状腺乳头状癌原发灶标本COX-2和VEGF的表达阳性率分别为54.5%和66.7%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.05).在颈淋巴结转移组中,原发灶组织COX-2和VEGF的表达具有相关性(P＜0.05).结论 COX-2在甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移中起着重要作用,其作用可能通过调控VEGF途径来实现.