NT-3高表达促进神经干细胞向胆碱能神经元分化

目的体外研究神经营养因子3(neurotrophin-3,NT-3)基因转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs)后对其向胆碱能神经元分化的影响,并探讨其机制。方法体外分离培养新生小鼠脑源NSCs,免疫荧光细胞化学法对其进行鉴定;将NSCs分为NSCs组(不作任何处理的NSCs)、GFP-NSCs组(转染GFP的NSCs)、NT-3-NSCs组(转染NT-3的NSCs),免疫荧光细胞化学法和ELISA法检测各组NSCs中NT-3的表达;免疫荧光细胞化学法和RT-PCR法检测各组NSCs向胆碱能神经元分化的能力;乙酰胆碱检测试剂盒检测乙酰胆碱分泌情况;RT-PCR法检测Notch信号通路相关靶基因Hes1、Mash 1和Neurogenin 1(Ngn1)表达情况。结果免疫荧光细胞化学法结果显示,NSCs表达其特异性标志蛋白Nestin和Sox2,与NSCs组和GFP-NSCs组相比,NT-3-NSCs组能够分化为更多的胆碱能神经元(P<0.01),分化的胆碱能神经元可分泌乙酰胆碱(P<0.01),且能够减少Notch通路靶基因Hes 1 mRNA的表达,增加Mash1、Ngn 1 mRNA的表达(P<0.05)。结论 NT-3高表达可促进NSCs分化为更多的胆碱能神经元,其机制可能与抑制Notch信号通路有关。     

NGF对神经干细胞内Mash1表达的影响

目的:以Mash1为切入点,深入研究NGF反应性NSCs向胆碱能神经元分化过程中的机制。方法:取体外培养传至第三代的神经干细胞,在含不同浓度NGF的神经干细胞分化培养基中进行分化诱导,采用RT-PCR法测定诱导后Mash1的mRNA相对表达水平。结果:各实验组均有Mash1的表达,其中空白对照组表达最少,以NGF100mg/L组表达量最高。结论:NGF能够促进NSCs内Mash1的表达。     

姜黄素对β-淀粉样蛋白损伤神经干细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对β-淀粉样蛋白损伤神经干细胞(NSC)增殖和凋亡的影响。方法选取NSC分为对照组、姜黄素组、Aβ组和观察组,其中姜黄素组、Aβ组和观察组分别加入终浓度为5μmol/L的姜黄素、0.5μmol/L的Aβ+DMSO(10μL)、5μmol/L的姜黄素+0.5μmol/L的Aβ,对照组加入DMSO(10μL)。使用姜黄素治疗NSC,通过细胞计数法计算NSC的增殖速度,噻唑蓝(MTT)测定NSC活性,逆转录。聚合酶链反应(RTPCR)测定NSC中Nestin mRNA及凋亡相关基因Caspase3 mRNA表达,免疫组化测定NSC向神经元和星形胶质细胞的分化潜能。结果与对照组比较,姜黄素组NSC的细胞活力、Nestin mRNA表达明显增加,Caspase3mRNA表达明显降低(P 0.05或P 0.01),而Aβ组和观察组NSC活力、Nestin mRNA表达和Tuj-1、GFAP明显降低,Caspase3 mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P 0.05或P 0.01)。与Aβ组比较,观察组NSCs细胞活力、Nestin mRNA表达和Tuj-1、GFAP明显增加,Caspase3 mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P 0.05或P 0.01)。结论姜黄素促进NSC增殖,促进NSC向神经元分化,逆转Aβ对NSC的损伤可能是由于抑制了凋亡基因表达。     

氯胺酮诱导大鼠海马神经元凋亡及机制

目的 研究氯胺酮对SD大鼠海马神经元的凋亡诱导作用,并探究其作用机制.方法 培养SD大鼠海马神经元细胞,将对数生长期的大鼠海马神经元分为对照组(不加氯胺酮)和实验组(加氯胺酮且其终浓度分别为10、20 μmol/L).24h后,缩胆囊素8肽(CCK-8)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白phospho-细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、Bax、Bcl-2的表达.结果 10、20 μmol/L实验组神经元的存活率分别为(73.7±1.5)％和(58.2±2.4)％,明显低于对照组的(97.2±1.8)％(P＜0.05);凋亡率分别为(24.5±7.4)％和(34.7±4.9)％,明显高于对照组的(4.7±2.3)％(P＜0.05);P-ERK、Bax表达量增加,Bcl-2表达量减少.结论 氯胺酮能够诱导大鼠海马神经元凋亡,可能是通过激活P-ERK、改变Bax/Bcl-2比值实现的.     

DHA促NGF诱导的PC12细胞分化与BMPs通路关系的研究

目的探讨DHA对神经生长因子NGF诱导PC12细胞的分化作用及其对BMP通路的影响。方法分别用100μg·L-1NGF和100μg·L-1NGF+10μmol·L-1DHA处理PC12细胞,并在3、6、9 d进行免疫荧光染色,观察细胞突起长度和突起数目的变化;气相色谱法分析3、6、9 d NGF+DHA组与NGF组PC12细胞的DHA含量;Western blot法检测NGF+DHA组与NGF组中BMP4、BMP7、BMPR-Ⅱ和pSmad 1/5/8蛋白的表达。结果 NGF+DHA处理组与NGF组相比,突起数目和突起长度明显增多和增长(P<0.01);胞内的DHA含量明显增加(P<0.01);BMP4、BMP7、BMPR-Ⅱ和p-Smad 1/5/8蛋白的表达升高(P<0.05)。结论 DHA能促进NGF诱导的PC12细胞分化,其机制可能与上调BMPs蛋白表达有关。     

阿尔茨海默病患者来源的诱导多能干细胞向神经干细胞及神经元的诱导分化

目的将阿尔茨海默病(AD)患者、年轻人和认知正常老年人的血细胞重编程为诱导多能干细胞(i PSC),进一步分化为神经干细胞(NSC)和神经元,观察不同来源i PSC向NSC和神经元分化时细胞表型和功能的变化。方法取年轻人、认知正常老年人和AD患者来源的外周单核巨噬细胞,引入转录因子Oct3/4,Sox2,c-Myc和Klf4重编程为i PSC,进一步诱导为NSC和神经元;应用Incu Cyte ZOOM动态细胞观察系统记录分化过程中细胞生长曲线及神经突生长情况;Ed U增殖试剂盒检测细胞增殖能力;采用NSC标记物Nestin,Sox1,Sox2和Ki67对诱导得到的NSC鉴定,双肾上腺皮质激素(DCX)对诱导得到的新生神经元鉴定;采用全细胞膜片钳记录分化神经元钠电流、钾电流以及诱发动作电位。结果经过7 d诱导,i PSC可分化为NSC,年轻人和认知正常老年人以及AD患者NSC均表达NSCs标记物Nestin,Sox1,Sox2和Ki67。NSC传代过程中,AD患者来源NSC生长曲线低于年轻人和认知正常老年人;Ed U结果显示AD患者来源NSCs中Ed U阳性细胞比例显著少于年轻人和认知正常老年人;AD患者来源NSC传代过程中DCX阳性细胞比例明显高于年轻人和认知正常老年人,且可记录到K+电流、Na+电流以及诱发动作电位;进一步将NSC向神经元定向分化结果显示,AD患者DCX阳性新生神经元比例以及神经突的生长速度明显大于年轻人和认知正常老年人;膜片钳结果显示AD患者来源神经元K+电流和Na+电流明显大于年轻人和认知正常老年人,动作电位频率和幅度也大于年轻人和认知正常老年人。结论年轻人、认知正常老年人和AD患者的i PSC能够诱导分化为NSC和神经元;AD患者来源NSC增殖能力显著低于年轻人和认知正常老年人;且AD患者来源NSC更容易向神经元分化,分化的神经元表现出更强的兴奋性。     

氨溴索预处理对大鼠吸人性肺损伤的影响及其可能机制

目的 探讨氨溴索预处理对大鼠吸人性肺损伤的影响及其作用机制.方法 30只健康SD雄性大鼠按随机数字表法随机分为对照组、损伤组和氨溴索组各10只.对照组大鼠气道内滴人生理盐水,损伤组大鼠气道内滴入胃内容物,氨溴索组大鼠在损伤前给予氨溴索进行干预.观察肺组织湿重/干重比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)活性变化;酶联免疫吸附试验测定血清及肺组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)含量;蛋白质印迹法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)蛋白表达;光镜下观察肺组织结构变化.结果 损伤组与对照组比较,肺组织湿重/干重比值以及MPO活性增加[(5.01±0.22)比(2.42±0.12)、(3.50±0.24)U/g比(1.10±0.18)U/g,P＜0.05],血清及肺组织中TNF-α、IL1β含量增高[血清:(0.950±0.260) μg/L比(0.075±0.010) μg/L,(0.492±0.046) μg/L比(0.009±0.001)μg/L;肺组织:(0.860±0.160)μg/L比(0.080±0.011 )μg/L、(0.583±0.054)μg/L比(0.007±0.002) μg/L,P＜0.05],TLR4蛋白表达明显增高( 1.98±0.26)比(0.28±0.04)(P＜0.05),肺组织出现明显病理组织学损伤.与损伤组比较,氨溴索组肺组织湿重/干重比值(3.92±0.12)以及MPO活性[(2.76±0.52) U/g]降低(P＜0.05),血清及肺组织中TNF-α[ (0.720±0.130)、(0.620±0.060) μg/L]、IL-1β[ (0.318±0.025)、(0.408±0.036)μg/L]含量降低(P＜0.05),TLR4蛋白表达(1.24±0.15)明显下降(P＜0.05),肺组织病理学损伤减轻.结论 氨溴索预处理对大鼠吸人性肺损伤起防护作用,可能与通过下调TLR4功能抑制促炎症因子表达有关.     

创伤性脑组织匀浆条件下川芎嗪对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的最佳诱导剂量研究

目的观察创伤性脑组织匀浆条件下,川芎嗪诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元样细胞的分化,并寻找川芎嗪的最佳诱导浓度。方法①Wistar幼鼠麻醉后,取其股骨、胫骨和肱骨,从骨髓中分离BMSCs,接种于培养瓶培养并传代,于倒置显微镜下观察细胞形态。②采用Feeney自由落体撞击法制作中度脑损伤大鼠模型,取伤后24h大鼠创伤脑组织制作匀浆,用含1.00,1.15,1.30,1.45g/L 4种剂量盐酸川芎嗪的达氏修正伊氏培养基(DMEM)对体外培养的第4代BMSCs诱导12h。③倒置显微镜下观察细胞诱导后形态学变化,应用免疫细胞化学染色技术检测细胞内神经元特异性烯醇化酶(NSE)和细胞巢蛋白(Nestin)的表达,并比较4种剂量川芎嗪诱导后各组神经元样细胞抗原的表达率。结果原代细胞接种3d后多数细胞贴壁,传代后细胞贴壁速度和增殖更快,诱导后细胞出现类似神经元细胞样形态;免疫细胞化学方法检测显示多数细胞巢蛋白、NSE阳性表达,1.30g/L浓度组细胞的NSE阳性表达率最高,表达量为(66.4±4.7)%,细胞巢蛋白表达量为(62.23±4.47)%。结论川芎嗪可诱导BMSCs分化为神经元样细胞,在创伤性脑组织匀浆条件下1.30g/L为其最适诱导剂量。     

银杏内酯对拟AD模型大鼠空间学习记忆能力和脑内ChAT表达的影响

目的探讨银杏内酯对拟AD大鼠学习记忆能力影响的可能机制。方法大鼠海马OA(Okadaic acid)微量注射,银杏内酯灌胃。水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;West-ern blot实验检测大鼠海马烟碱型胆碱能受体的表达;免疫组化观察大鼠脑内ChAT的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.01),烟碱型胆碱能受体表达减少(P<0.05),ChAT免疫阳性神经元减少(P<0.05)。与模型组相比,银杏内酯组大鼠学习记忆能力明显提高(P<0.01),烟碱型胆碱能受体表达增多(P<0.05),ChAT免疫阳性神经元增多(P<0.05)。结论银杏内酯提高拟AD大鼠的学习记忆能力可能与其改善模型鼠胆碱能系统的功能有关。     

Cobra Venom NGF Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis of Hepatic Stellate Cell

目的:从眼镜蛇毒中分离纯化神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF),观察眼镜NGF对肝星状细胞HSC-T6增殖、调亡活性的影响,进一步为蛇毒NGF在抗肝纤维化治疗提供依据.方法:采用shephadex G-75和CM Sepharose CL-6B二步柱色谱对眼镜蛇毒NGF进行纯化分离;PC12细胞测定各洗脱峰的活性,再用SDS-PAGE鉴定具有NGF活性洗脱峰的纯度和相对分子质量.实验设立空白对照和NGF处理组,分别作用于HSC-T6,培育相应时间,MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞活力影响;HE染色、紫外激光显微镜与透射电镜观察HSC-T6细胞的形态学变化;TUNEL、流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响.结果:眼镜蛇毒经PC-12细胞鉴定第Ⅵ峰具有NGF活性;SDS-PAGE检测为电泳纯,相对分子质量为22.3KD;NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(2μg/ml NGF的抑制率为49.66％±6.50％,P＜0.05;6.25 μg/ml NGF的抑制率为71.33％±1.53％,P＜0.05);TUNEL法检测发现NGF干预组的凋亡率28.71％±1.59％(2ug/ml NGF)和34.4％±2.49％(5 μg/mlNGF)明显高于对照组的15.85％±1.58％(P＜0.05);流式细胞仪也有同样的发现,NGF干预组的凋亡率16.12％±3.02％(2 ug/mlNGF)和21.15％±3.31％(5 μg/ml NGF)明显高于对照组的2.7％±1.55％( P＜0.05).结论:眼镜蛇毒NGF能抑制肝星状细胞HSC-T6增殖并诱导其凋亡.     

同型半胱氨酸对体外大鼠神经干细胞增殖及Notch信号通路相关基因表达的影响

【摘要】目的 研究同型半胱氨酸（Hcy）对体外大鼠神经干细胞(NSCs)增殖及Notch信号通路相关基因Notch1和Hes1mRNA表达的影响。方法 采用无血清培养原代培养新生大鼠NSCs,细胞分为对照组(Hcy-C)、Hcy低剂量组（Hcy-L）、Hcy中剂量组（Hcy-M）、Hcy高剂量组（Hcy-H）。采用免疫组化法检测Nestin、β-tubulin Ⅲ及GFAP的表达对NSCs进行鉴定,MTT法检测细胞增殖情况,Real-time PCR检测Notch1、Hes1基因mRNA表达。结果 无血清培养条件下,所培养细胞形成大量呈Nestin抗原阳性细胞组成的神经球;诱导分化6d后,形成β-tubulin Ⅲ表达呈阳性的神经元和GFAP表达呈阳性的星形胶质细胞;Hcy干预组细胞活力低于对照组,且有剂量依赖性(P<0.05)。Hcy干预组Hes1mRNA表达低于对照组(P<0.05)。Hcy-H组Notch1mRNA表达低于其他3组(P<0.05);Hcy-M组Notch1mRNA表达低于对照组和低剂量组(P<0.05)。结论 Hcy能抑制大鼠新生鼠NSCs的增殖,可能与下调Notch信号通路中Notch1和Hes1mRNA表达有关     

辅助性T细胞9在类风湿关节炎发病中的作用探讨

目的 探讨Th9细胞及相关细胞因子在类风湿关节炎(RA)中表达的改变及可能的机制.方法 采集20例健康人(HC)和20例RA患者(RA组)的外周血,用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-9、IL-4、转化生长因子(TGF)-β和干扰素(IFN)-γ水平;流式细胞术检测Th9细胞数;实时定量PCR检测IL-9 mRNA、转录因子PU.1 mRNA,分析这些指标可能的相互关系.结果 RA组患者外周血中CD4+ IL-9+T细胞、CD4+ PU.1 +T细胞、CD4+ IL-9+ PU.1 +T细胞均缺如.细胞因子检测:IL-9水平在HC组为(1.24±0.44)×10-9 g/L,RA组为(1.33 ±0.53)×10-9 g/L(P =0.558);IL-4水平在HC组为(8.59±4.07) ×10-9 g/L,RA组为(5.95±5.73) ×10-9 g/L(P =0.101);TGF-β水平在HC组为(1238±329) μg/L,RA组(712±254) μg/L,(P=0.00);IFN-γ水平在HC组均低于检测水平,RA患者中5例IFN-γ水平升高.HC组IL-9 mRNA表达为(0.24±0.04),RA组为(0.24±0.02) (P =0.764);HC组PU.1 mRNA表达为(0.38 ±0.02),RA组(0.13±0.02) (P =0.000).结论 RA组患者外周血促Th9分化关键细胞因子水平降低.抑制其分化关键细胞因子平有所升高,导致PU.1 mRNA表达受抑,PU.1蛋白无法合成不能支持IL-9mRNA表达.RA患者外周血不存在Th9细胞分化条件,推测循环血Th9细胞可能不参与RA发病机制.     

蒲公英提取物调控程序化死亡基因 5对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的 探究蒲公英提取物通过调控程序化死亡基因5(PDCD5)的表达对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 选取2018年1月至2019年6月武汉科技大学附属孝感医院获得接受关节置换的5例骨关节炎病人骨组织,从中分离、培养骨关节炎软骨细胞,蒲公英提取物高、中、低剂量组处理软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)和PDCD5蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测细胞PDCD5 mRNA表达水平;过表达或者沉默PDCD5基因,检测其对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响.结果 与对照组相比,蒲公英提取物2.5 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L组软骨细胞活性升高[48 h:(0.68±0.05)、(0.83±0.06)、(1.06±0.06)比(0.56±0.03);72 h:(0.97±0.07)、(1.42±0.07)、(1.89±0.07)比(0.79±0.05)],细胞凋亡率降低[(19.40±1.10)％、(12.31±0.59)％、(7.68±0.54)％比(22.10±1.20)％];P21、Bax表达水平降低,cyclin D1、Bcl-2表达水平升高,PDCD5 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-PDCD5组软骨细胞活性升高[48 h:(0.86±0.05)比(0.56±0.03);72 h:(1.33±0.07)比(0.79±0.05)],细胞凋亡率降低[(14.23±1.02)％比(21.98±1.12)％];P21、Bax表达水平降低,cyclin D1、Bcl-2表达水平升高(P<0.05).与蒲公英提取物5 g/L+pcDNA3.1组比较,蒲公英提取物5 g/L+pcDNA-PDCD5组软骨细胞活性降低[48 h:(0.70±0.05)比(0.86±0.06);72 h:(1.15±0.07)比(1.51±0.07)],细胞凋亡率升高[(16.88±1.02)％比(9.56±0.63)％];P21、Bax表达水平升高,cyclin D1、Bcl-2表达水平降低(P<0.05).结论 蒲公英提取物可促进软骨细胞的增殖,抑制其凋亡,其可能通过调控PDCD5基因的表达发挥对骨关节炎软骨细胞的增殖促进、凋亡抑制作用.     

褪黑素对痴呆大鼠胆碱能功能的修复

目的　通过观察褪黑素对淀粉样 β多肽 2 5～ 35片段(Aβ2 5～ 3 5)所致学习记忆功能障碍大鼠海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)和胆碱酯酶 (AChE)活性的影响 ,从而探讨Aβ和胆碱能系统在阿尔采末病 (AD)病理机制中的作用 ,以期为AD的有效治疗提供新的思路。方法　采用双侧海马内注射Aβ2 5～ 3 5诱导大鼠学习记忆功能障碍模型 ;用Moriss水迷宫法检测学习记忆功能 ;分别使用免疫组化和比色法检测ChAT和AChE的变化。结果　大鼠双侧海马内注射Aβ2 5～ 3 5(2 0 μg)可引起大鼠空间学习记忆功能障碍 ,ChAT免疫反应阳性神经元数量减少 ,且着色变淡 ;而脑组织中胆碱酯酶的活性改变不显著。褪黑素 (0 1、1、10mg·kg-1)连续给予 (ig) 10d ,对上述改变有不同程度的拮抗作用。 结论　褪黑素改善Aβ2 5～ 3 5诱导的大鼠学习记忆功能障碍可能与其改善胆碱能系统的功能有关     

广西圆斑蝰蛇毒中提取的NGF对Aβ25-35诱导的AD模型小鼠脑乙酰胆碱及其代谢酶含量的影响

目的观察广西圆斑蝰蛇毒中提取的NGF对Aβ25-35诱导的AD模型小鼠胆碱能神经系统的影响。方法采用脑立体定位仪自侧脑室注射Aβ25-35建立AD小鼠模型,分别给予不同剂量NGF对AD小鼠进行治疗,测定不同实验组小鼠脑组织乙酰胆碱（Ach）含量变化及乙酰胆碱脂酶（AchE）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）活性变化。结果广西圆斑蝰蛇毒NGF呈剂量依赖性的对AD小鼠脑内胆碱能系统产生调节作用。与模型组比较,NGF中剂量组（0.4μg·μL^-1与高剂量组（0.56μg·μL^-1小鼠脑组织AchE活性均有显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,且各剂量组间呈逐渐下降的趋势;各剂量组（0.28,0.40,0.56μg·μL^-1小鼠脑组织Ach含量均显著增加（P〈0.05）,其中高剂量组（0.56μg·μL^-1ChAT活性明显升高（P〈0.05）,且各剂量组间这两个指标均呈逐渐上升的趋势。结论广西圆斑蝰蛇毒NGF可促进ChAT的表达,增加Ach的合成;降低脑组织AchE的活性,抑制Ach分解,增加脑内Ach含量,改善AD模型小鼠的学习、记忆障碍。     

神经生长因子对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的观察神经生长因子(NGF)对分离的新生大鼠脑细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的影响。方法以Fura -2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂 ,测定谷氨酸(Glu)及过氧化氢(H2O2)诱导的新生大鼠脑细胞内[Ca2 ]i,观察NGF对此影响。结果新生大鼠脑细胞内静息[Ca2 ]i208±22nmol/L,NGF对神经细胞静息[Ca2 ]i无明显影响 ,NGF1～100μg/L能剂量依赖地抑制Glu和H2O2 引起的[Ca2 ] i升高 ,其IC50 分别为42 5和27 3μg/L。结论NGF通过降低[Ca2 ]i的水平来保护大脑皮质神经元抗谷氨酸毒性及过氧化氢损伤     

哮喘患儿外周血半胱胺酰白三烯水平及其临床意义

目的 探讨外周血半胱胺酰白三烯(cysLTs)水平作为哮喘患儿气道高反应性评价指标的可行性,研究其临床表现、炎性因子、基因三者之间的关系.方法 哮喘组48例哮喘患儿在急性发作期按不同病情级别分成轻、中、重3个组,分别为15、27、6例,对照组20例为健康儿童.抽取2组儿童外周血检测cysLTs浓度及5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP) mRNA表达水平.采用Spearman秩相关分析法分析cysLTs浓度与哮喘患儿病情严重程度和控制急性发作所需时间的相关关系.结果 哮喘组患儿外周血cysLTs浓度[(60±19) μg/L]及FLAP mRNA表达水平(0.37 ±0.27)均明显高于对照组[(24±18) μg/L,(0.27±0.14)],差异有统计学意义(P＜0.01).cysLTs与患儿病情严重程度和控制急性发作所需时间呈正相关.结论 外周血cysLTs浓度作为气道高反应性程度的评价指标.     

BVT-14225通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶1还原活性促进神经干细胞增殖和迁移

目的探讨BVT-14225(BVT)通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)的还原活性对神经干细胞(NSC)增殖、分化和迁移的影响。方法取孕15 d SD胎大鼠的大脑皮质,分离培养原代NSC,采用免疫荧光染色法对NSC标志物巢蛋白和性别决定基因相关转录因子2(Sox2)进行染色,鉴定原代细胞;逆转录聚合酶链反应及核酸凝胶电泳法检测11β-HSD1 mRNA在NSC上的表达。细胞随机分为5组:细胞对照组(培养48 h)、溶剂对照组(0.1%DMSO孵育48 h)、DHC模型组(DHC 10.0μmol·L~(-1)处理48 h)、BVT对照组(BVT 10.0μmol·L~(-1)处理48 h)和BVT干预组(BVT 10μmol·L~(-1)处理1 h后再给予DHC10.0μmol·L~(-1),继续处理48 h)。5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖试剂盒检测NSC的增殖能力;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞毒性;超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)检测11β-HSD1酶的还原活性;Western印迹法检测11β-HSD1蛋白表达水平;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(NeuN)抗体免疫荧光染色检测NSC的分化能力;划痕实验检测NSC的迁移能力。结果巢蛋白和Sox2免疫染色鉴定原代培养细胞为NSC,核酸凝胶电泳条带图证明11β-HSD1 mRNA在NSC定性表达。LDH释放实验结果显示,DHC 10.0μmol·L~(-1)和BVT 10.0μmol·L~(-1)对NSC均无毒性作用。UPLC-MS实验结果显示,BVT 10.0μmol·L~(-1)能显著降低11β-HSD1的还原活性(P<0.01)。Western印迹结果显示,DHC 10.0μmol·L~(-1)和BVT 10.0μmol·L~(-1)均不改变11β-HSD1蛋白表达水平。EdU实验结果显示,DHC 10.0μmol·L~(-1)可抑制NSC增殖(P<0.01),但BVT 10.0μmol·L~(-1)预处理可显著缓解DHC 10.0μmol·L~(-1)对NSC增殖的抑制(P<0.05)。GFAP和NeuN的免疫荧光染色实验结果表明,DHC 10.0μmol·L~(-1)和BVT 10.0μmol·L~(-1)均不影响NSC分化。划痕实验结果显示,DHC 10.0μmol·L~(-1)不影响NSC的迁移,但BVT 10.0μmol·L~(-1)预处理可显著促进NSC迁移(P<0.05)。结论糖皮质激素浓度显著升高时,BVT可通过抑制NSC 11β-HSD1的还原活性促进NSC增殖和迁移,但对分化无影响。     

线粒体融合蛋白2在原发性高血压患者血管组织和平滑肌细胞中表达的研究

目的 观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)在人血管组织和平滑肌细胞(VSMCs)中的表达情况.方法 选取2006年10月至2007年10月在北京安贞医院行冠状动脉旁路移植术的患者60例,分为高血压组和正常血压组各30例,收集术中剩余桥血管(乳内动脉).取1例正常产妇产新生婴儿脐带,进行人乳内动脉和VSMCs培养.提取乳内动脉组织和VSMCs总RNA,RNA的反转录-cDNA的聚合酶链式扩增(RTPCR),观察2组患者Mfn2的表达情况.用不同浓度血小板源性生长因子(PDGF-BB)诱导VSMCs增殖并检测Mfn2表达情况.结果 2组患者血压水平、体质指数差异有统计学意义(P＜0.05).人乳内动脉血管组织和VSMCs均有Mfn2表达,高血压组Mfn2表达水平均低于正常血压组(人乳内动脉血管组织:0.42±0.10比0.49 ±0.12,P=0.014;VSMCs:0.29 ±0.07比0.33 ±0.08,P=0.041).高血压组原代VSMCs细胞计数高于正常血压组(0.48 ±0.15比0.38 ±0.11,P=0.005).与对照组相比,随PDGF-BB浓度增加VSMCs计数增加(对照组:0.36 ±0.09,10 μg/L组:0.53 ±0.13,100 μg/L组:0.54±0.12),VSMCs的Mfn2表达减少(对照组:0.31 ±0.08,10μg/L组:0.22±0.06,100μg/L组:0.21±0.05,P＜0.05);100 μg/L组与10 μg/L组相比,VSMCs细胞计数和VSMCs的Mfn2表达差异无统计学意义(P值分别为0.862和0.755).结论 在人血管组织和培养的VSMCs中验证了高血压和正常血压入选者存在Mfn2的表达差别.