IL-1β对ATDC5成软骨分化细胞miR-455-3p的影响

目的：检测IL-1β对ATDC5成软骨分化细胞miR-455-3p表达的影响,探索miR-455-3p在骨关节炎中的作用。方法诱导ATDC5细胞成软骨分化后,予10 ng/ml的IL-1β刺激,在刺激4、12、24、48 h时应用实时荧光定量PCR检测miR-455-3p、C/EBPβ和软骨特征性标记物的表达情况;并利用抑制剂IKK-NBD阻断NF-κB通路后,应用实时荧光定量PCR检测IL-1β作用下miR-455-3p的表达水平。结果在IL-1β作用下的ATDC5成软骨分化细胞中miR-455-3p、C/EBPβ和软骨退变标记物（ MMP13、ADAMTS5）均上调,而软骨基质合成标记物（ ACAN、COL2A1、SOX9）则下调,且后期更为明显;而IKK-NBD可抑制IL-1β诱导的miR-455-3p表达。结论 IL-1β可上调ATDC5成软骨分化细胞miR-455-3p的表达水平,且受NF-κB通路的调节。     

SOX-9通过调控ADAMTS保护椎间盘

目的　探讨转录因子SOX-9和含Ⅰ型血小板反应蛋白的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)对椎间盘退行性变的影响及二者之间的关系,为进一步理解椎间盘退行性变发生机制提供实验依据。方法收集不同退行性变等级的椎间盘组织,通过实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白质印迹分析等方法检测椎间盘组织中SOX-9、DAMTS-4、ADAMTS-5的表达。原代培养正常椎间盘中的髓核细胞,通过转染小干扰RNA(siRNA)干扰SOX-9、ADAMTS-4、ADAMTS-5的表达,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹分析检测细胞外基质成分——Ⅱ型胶原(COL2A1)、蛋白聚糖(ACAN)、软骨寡聚物基质蛋白(COMP)的表达变化,通过荧光素酶实验评估SOX-9对ADAMTS-4、ADAMTS-5启动子活性的影响。结果与正常椎间盘组织相比,发生退行性变椎间盘组织中SOX-9表达降低,而ADAMTS-4、ADAMTS-5表达升高。单纯干扰髓核细胞中SOX-9的表达,COL2A1、ACAN及COMP表达均下调,ADAMTS-4、ADAMTS-5表达上调;同时干扰SOX-9、ADAMTS-4及ADAMTS-5表达后,COL2A1、ACAN及COMP表达较单纯干扰SOX-9表达明显升高。荧光素酶实验结果显示SOX-9可显著下调ADAMTS-4、ADAMTS-5启动子活性,提示二者具有直接调控关系。结论SOX-9通过直接调控ADAMTS-4、ADAMTS-5表达进而影响髓核细胞外基质成分的表达,最终发挥保护椎间盘的作用。     

糖尿病肾病早期miRNAs表达谱分析

目的：探讨mi RNAs在糖尿病肾病（DN）早期的表达谱的改变,从而为其在DN发病机制中的研究提供有力的平台。方法：腹腔单剂注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ,150 mg/kg）建立小鼠糖尿病模型,检测对照组和糖尿病小鼠尿白蛋白排泄率,采用PAS染色观察肾脏组织学的改变;MicroRNAs微阵列分析采用单通道Cy5荧光标记法,分析对照组和糖尿病mi RNAs表达谱,利用GO分析对差异表达mi RNAs进行靶通道测定。结果：糖尿病组白蛋白排泄率显著高于对照组（P〈0.05）;PAS染色提示糖尿病组小鼠肾小球内大量细胞外基质积聚,系膜区明显增宽,符合DN早期的病理改变。糖尿病组共检测出128个mi RNAs,其中显著上调者分别mi R-34a,mi R-214,mi R-2132;显著下调者为mi R-2143,mi R-1970,mi R-703;以上差异有统计学意义mi RNAs参与细胞周期、细胞黏附、凋亡、小G蛋白介导的细胞信号传导的调控。结论：DN早期mi RNAs表达谱发生差异有统计学意义,微阵列技术为DN发病机制的研究提供了全新的研究策略。     

从Wnt/β-catenin信号通路探讨透骨消痛胶囊对关节软骨的保护作用

目的:从Wnt/β-catenin信号通路观察透骨消痛胶囊对大鼠膝骨关节炎关节软骨的保护作用。方法:60只健康清洁级2月龄雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组和透骨消痛胶囊组,每组20只。模型对照组和透骨消痛胶囊组采用质4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射,成功复制骨关节炎模型后,透骨消痛胶囊组给予透骨消痛胶囊287.5 mg·kg~(-1),正常对照组和模型对照组给予相同剂量的生理盐水。给药2个月后,采用Western blot法观察各组关节软骨中含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)、Wnt-4、β-catenin和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组ADAMTS-5、Wnt 4、β-catenin和MMP-13表达升高(P0.05);与模型对照组比较,透骨消痛胶囊组ADAMTS-5、Wnt 4、β-catenin和MMP-13表达降低(P0.05)。结论:透骨消痛胶囊对关节软骨的保护作用与其降低Wnt/β-catenin信号通路表达相关。     

大鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体对退变髓核细胞的影响

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体对退变髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响。方法:利用全骨髓法提取SD大鼠骨髓内贴壁细胞,通过成骨、成脂、成软骨三系分化及流式细胞技术鉴定所提取细胞是否为BMSCs,鉴定成功后,收取细胞培养液上清,对上清液进行差速离心,Western-blot(WB)法测定离心沉淀物质CD63、CD81、TSG101、Calnexin蛋白表达情况,并对沉淀物进行透射电镜观察鉴定是否为外泌体。取SD大鼠尾NPCs,传代培养,通过细胞衰老β-半乳糖苷酶染色法鉴定P6 NPCs是否较P2 NPCs产生退变;在激光共聚焦显微镜下观察BMSCs外泌体被P6 NPCs摄取情况;设置P6 NPCs为对照组,BMSCs和P6 NPCs一起培养为共培养组,直接加入BMSCs外泌体诱导P6 NPCs为实验组。培养3d、7d、10d、14d后用RT-PCR法检测3组NPCs中蛋白聚糖(ACAN)、Ⅱ型胶原(COL2)、性别决定区Y方框9(SOX-9)、金属蛋白酶组织抑制剂1 (TIMP1)、基质金属蛋白酶1 (MMP1)基因m RNA的相对表达量;WB法检测ACAN、COL2、SOX-9、TIMP1、MMP1对应蛋白的相对表达情况。结果:通过成骨、成脂、成软骨三系分化及流式细胞技术鉴定利用全骨髓法提取的贴壁细胞为BMSCs。BMSCs培养液上清利用差速离心法提取的沉淀物形态为直径30～100nm的圆形或椭圆形,与文献记载的经典外泌体大小吻合,沉淀物CD63、CD81、TSG101高表达,Calnexin未表达。通过细胞衰老β-半乳糖苷酶染色法鉴定P6 NPCs较P2 NPCs产生明显退变。在激光共聚焦显微镜下观察到外泌体能够被P6 NPCs所摄取。ACAN、COL2、SOX-9、TIMP1基因mRNA的相对表达量在3d、7d、10d、14d共培养组较对照组明显升高(P0.05),实验组较共培养组明显升高(P0.05),共培养组和实验组组内7d较3d明显升高(P0.05)、10d较7d明显升高(P0.05)、14d较10d明显升高(P0.05);MMP1基因mRNA的相对表达量在3d、7d、10d、14d共培养组较对照组明显降低(P0.05),实验组较共培养组明显降低(P0.05),共培养组和实验组组内7d较3d明显降低(P0.05)、10d较7d明显降低(P0.05)、14d较10d明显降低(P0.05);ACAN、COL2、SOX-9、TIMP1、MMP1基因相对应蛋白质表现出同样趋势。结论:在体外实验中,大鼠BMSCs能够分泌外泌体且外泌体能够被退变NPCs摄取,外泌体能够改善退变NPCs标志基因及基因对应蛋白质的表达,可为髓核细胞退变类疾病的治疗提供一种新的思路。     

β-catenin基因敲减与Sox9过表达联合对人间充质干细胞早期成软骨分化作用的实验研究

背景:β-catenin基因抑制人间充质干细胞(hMSCs)成软骨分化,而Sox9基因促进hMSCs成软骨分化,但两者联合在hMSCs早期成软骨分化中的作用及其可能机制目前尚不明确。目的:探究β-catenin基因敲减与Sox9过表达联合对hMSCs早期成软骨分化的作用。方法:将骨髓来源hMSCs分为4组:阴性对照组,β-catenin基因敲减组,Sox9过表达组,β-catenin基因敲减与Sox9过表达联合组,加入成软骨分化培养基培养7 d。转染24 h,RT-PCR检测β-catenin基因敲减效率与Sox9过表达效率,RT-PCR检测COL2A1和ACAN的m RNA表达量,番红固绿染色、甲苯胺蓝染色、免疫细胞化学检测COL2A1和Aggrecan蛋白。结果:RT-PCR结果显示转染成功,β-catenin基因敲减效率与Sox9过表达效率较高(P<0.05)。β-catenin基因敲减与Sox9过表达联合组中COL2A1和ACAN的mRNA表达量显著高于其他3组(P<0.05),软骨成分染色更深(P<0.05)。免疫组化结果显示β-catenin基因敲减与Sox9过表达联合组的COL2A1和Aggrecan蛋白表达量显著高于其他3组(P<0.05)。结论:β-catenin基因敲减与Sox9过表达联合对hMSCs早期成软骨分化有促进作用。     

独活寄生汤通过miRNAs调控炎症性骨关节炎软骨细胞功能改变的机制探讨

软骨细胞功能改变在骨关节炎病理过程中发挥重要的调控作用。炎症因子是介导骨关节炎软骨退变的主要因素,其表达与Micro RNAs(mi RNAs)密切相关。mi RNAs是一类在转录后水平调控基因表达的非编码蛋白的RNA分子,参与了软骨细胞增殖、分化,以及合成与分解代谢等生物学过程。中医药治疗骨关节炎独具特色,能够靶向调节mi RNAs介导的炎症反应,独活寄生汤长期运用于临床,能有效抑制关节炎症,其药效机制可能是通过调节骨关节炎软骨细胞中mi RNAs的表达,以及改变mi RNAs和炎症因子之间的相互协调作用而发挥对炎症性骨关节炎的治疗作用。多层次、多角度地探讨独活寄生汤的作用机制及药效物质基础,可为阐明独活寄生汤治疗炎症性骨关节炎提供新的研究思路。     

创伤后关节软骨中MMP-3的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在创伤后关节软骨退变中的作用。方法手术建立单纯软骨缺损的动物模型,术后4周、8周对软骨退变进行大体评分,用免疫组织化学方法检测MMP-3在关节软骨中的表达。结果术后关节软骨发生退变,MMP-3在关节软骨中的表达与退变有关。结论MMP-3在创伤后软骨退变过程中发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶家族在骨关节炎软骨组织中表达的研究

[目的]观察骨关节炎关节软骨中MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,探讨其与软骨退变的关系及可能的作用机制。[方法]选取20例因骨关节炎行关节置换的软骨组织,常规HE染色观察其组织学形态,ABC免疫组化法观察关节软骨MMP-7、MMP-9、MMP-13和TIMP-1的表达,2例因意外受伤截肢患者的正常膝关节软骨标本作为对照。统计采用Mann-Whitney U非参数检验及相关分析。[结果]骨关节炎关节软骨出现裂隙、纤维化,软骨细胞增多、排列紊乱,并出现大量簇聚软骨细胞和肥大软骨细胞。MMP-7和MMP-13在正常软骨全层均呈低表达,但在退变软骨中的表达则明显增多,光密度值行U检验,两组差异有显著性(P<0.01)。在正常与OA软骨的浅层,MMP-9和TIMP-1的表达无显著性差异(P>0.05);但在深层软骨中,OA软骨MMP-9和TIMP-1的表达较正常软骨明显增多,两组差异有显著性(P<0.01)。[结论]MMP-7,13在OA软骨全层表达均多于正常软骨;MMP-9,13仅在OA软骨深层出现过多表达。MMPs与TIMPs的失衡是导致关节软骨发生组织学退变的原因之一。     

脊索瘤中microRNA的差异性表达及其RNA编辑

目的 :检测脊索瘤组织中micro RNA(mi RNA)的差异性表达情况,探讨其RNA编辑。方法 :使用RTq PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技术检测骶骨脊索瘤组织11种候选mi RNA的表达水平,将其与髓核组织中的表达水平进行比较,对表达异常的mi RNA前体(pri-mi RNAs)的DNA和c DNA序列进行对比,检测是否存在RNA编辑。使用蛋白印迹法(Western blot)检测脊索瘤组织中RNA编辑的关键酶RNA腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)的表达。构建ADAR的表达载体,同时构建ERBB2和HOXA1的3′-非翻译区报告载体并转染mi RNA模拟物和抑制物,将其和ADAR的表达载体共转染至人胚肾细胞293T(HEK293T细胞),用q RT-PCR检测mi RNA的表达水平,并通过荧光素酶报告基因活性分析法对已测得异常表达的mi RNA的靶基因ERBB2和HOXA1进行活性分析,检测ADAR与测得异常表达的mi RNA的靶基因的关系。结果:与髓核组织相比,脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的相对表达程度明显下调(P<0.05)。脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的前体c DNA序列中出现了腺苷酸向鸟苷酸(A-G)突变,而在髓核组织中mi R-10a和mi R-125a前体的c DNA序列中无此改变,mi R-10a和mi R-125a在成熟过程中出现了A-I RNA编辑。4组脊索瘤组织中有3组存在ADAR1过度表达,2组存在ADAR2过度表达。转染了mi RNA抑制物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现上调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现下调,mi R-10a的靶基因ERBB2和mi R-125a的靶基因HOXA1的荧光素酶活性显著增高;相反,转染了mi RNA模拟物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现下调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现上调,ERBB2和HOXA1的荧光素酶活性显著降低。结论:ADAR1的过度表达可能通过介导A-I RNA编辑影响mi R-10a和mi R-125a的成熟和表达,参与脊索瘤发生中的细胞异常增殖调控。     

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。     

基质金属蛋白酶9及TGF-β1 mRNA和蛋白在骨关节炎中的表达

目的 TGF-β1对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨起保护作用,探讨OA中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的相关性,为临床治疗OA寻找有效的干预靶点提供理论依据。方法取自愿捐赠的关节软骨及滑膜标本,其中OA患者60例(实验组),外伤截肢、交叉韧带断裂、盘状软骨损伤与半月板损伤患者20例(正常对照组)。行HE染色观察关节软骨与滑膜的病理组织学改变,免疫组织化学染色观测MMP-9及TGF-β1蛋白表达,原位杂交技术检测MMP-9及TGF-β1 mRNA表达;并进行相关性分析。结果 HE染色显示实验组关节软骨细胞固缩、坏死、排列紊乱,细胞外基质断裂,关节滑膜细胞肥大增生、淋巴细胞和单核细胞浸润,多数小血管增生;正常对照组软骨细胞排列整齐、基质染色均匀,滑膜组织无慢性炎症表现、无明显增生。两组均可见MMP-9、TGF-β1 mRNA和蛋白阳性表达,阳性细胞包括软骨细胞、滑膜衬里层细胞及滑膜下层的血管内皮细胞、成纤维细胞、炎性浸润细胞等。实验组MMP-9及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P<0.01)。实验组MMP-9 mRNA与蛋白表达成正相关(r=0.924,P=0.000),TGF-β1 mRNA及蛋白表达亦成正相关(r=0.941,P=0.000);实验组MMP-9及TGF-β1蛋白表达成负相关(r=—0.762,P=0.000),MMP-9 mRNA及TGF-β1 mRNA表达成负相关(r=?0.681,P=0.000)。结论 OA中TGF-β1的高表达下调了关节软骨与滑膜中MMP-9的表达,对OA关节软骨起保护作用,从而延缓OA进展。     

胃癌细胞中miR-455-3p的表达及其对增殖和凋亡的影响

目的:探讨mi R-455-3p在胃癌细胞中的表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用q RT-PCR检测mi R-455-3p在正常胃黏膜上皮细胞RGM-1及5种胃癌细胞系(AGS、Hs746T、MGC-803、SGC-7901及BSG-823)中的表达。将胃癌细胞mi R-455-3p模拟物后,分别用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞p27 kip1、p21的蛋白表达,分光光度法检测细胞caspase酶活性。结果:mi R-455-3p在5种胃癌细胞系中的表达水平明显低于RGM-1细胞系,其中在AGS细胞中降低最为明显(均P0.05)。AGS细胞转染mi R-455-3p模拟物后,增殖能力明显降低而胞凋亡率明显升高,p27 kip1蛋白表达量明显升高,caspase-3与caspase-9相对活性明显升高(均P0.05),但p21蛋白表达量与caspase-8相对活性无明显改变(均P0.05)。结论:mi R-455-3p在胃癌细胞表达下调,增加其表达可抑制胃癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与其上调p27 kip1表达及增强caspase-3、caspase-9活性有关。     

兔骨关节炎中基质金属蛋白酶-1、3与白细胞介素-1β表达及关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察骨关节炎(OA)中基质金属蛋白酶(MMP)-1、3与白细胞介素-1β(IL-1β)的表达及关节软骨细胞凋亡,探讨其在OA发病机制中的作用.方法 将20只中国大白兔随机分成正常组(A组)、实验组(B组),每组10只,A组未造模,B组采用Hulth法制成OA模型,4周后取胫骨平台关节软骨进行组织病理学检查,采用免疫组织化学和原位末端标记细胞凋亡检测法分别检测关节软骨和滑膜中的MMP-1、3、IL-1β及软骨细胞凋亡指数(AI)的水平.结果 组织病理学检查可见,B组关节软骨退变程度明显重于A组,符合OA关节软骨退变特征;通过检测MMP-1、3,IL-1β和AI,A组的结果分别是21.005±9.406、18.697±8.225、0.100±0.040和14.900±3.400,B组的结果分别是56.147±22.340、46.182±20.561、0.180±0.060和25.400 ±5.200;B组MMP-1、3和AI的水平均明显高于A组(P＜0.01),B组IL-1β水平高于A组(P＜0.05).结论 MMP-1、MMP-3、IL-1β的表达及关节软骨细胞凋亡在OA发病机制中作用重要,其异常升高与OA关节软骨退变和炎症反应密切相关.     

miR-92a-3p靶向EZH2对IL-1β诱导软骨细胞合成基质降解酶的影响

目的研究miR-92a-3p靶向zeste基因增强子同源物2(EZH2)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞合成基质降解酶的影响。方法分离培养人软骨细胞,分成Normal、IL-1β(IL-1β处理)、miR-NC+IL-1β(mimics control转染后IL-1β处理)、miR-92a-3p+IL-1β(miR-92a-3p mimics转染后IL-1β处理)组,RT-PCR方法测定miR-92a-3p表达变化,Western blot检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达。靶基因预测软件发现EZH2可能为miR-92a-3p的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将p CDNA3.1-EZH2和miR-92a-3p mimics共同转染到软骨细胞中,检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达情况。结果与Normal比较,IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达减少,MMP-13、MMP-1表达增多,COLⅡ表达减少(P0.05)。与miR-NC+IL-1β比较,miR-92a-3p+IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达增多,MMP-13、MMP-1表达减少,COLⅡ表达增多(P0.05)。miR-92a-3p靶向负调控EZH2表达。p CDNA3.1-EZH2可以逆转miR-92a-3p mimics对IL-1β条件下软骨细胞中MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达影响。结论 miR-92a-3p靶向下调EZH2抑制IL-1β诱导的软骨细胞合成基质降解酶。     

MMP-1、MMP-9 mRNA在创伤性骨关节炎软骨中的表达

目的 研究兔前交叉韧带横断术(ACLT)创伤性骨关节炎(OA)动态模型软骨中MMP-1、MMP-9 mRNA的表达,探讨MMP-1、MMP-9在OA软骨退变中的作用.方法 30只新西兰兔随机分为对照组(10只)、ACLT组(20只),ACLT组行右膝ACLT,对照组行关节囊切开缝合术,ACLT组于术后4、8 w各处死10只,对照组术后4 w处死.解剖显微镜观察股骨内髁软骨形态学变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测股骨内髁软骨MMP-1、MMP-9 mRNA的表达.结果 形态学示ACLT组软骨退变重于对照组(P<0.05),且ACLT 8 w组重于4 w组(P<0.05);RT-PCR示ACLT组MMP-1、MMP-9 mRNA表达量均高于对照组(P<0.01),且ACLT 8 w组均高于4 w组(P<0.01).结论 创伤性OA软骨退变过程中伴随着MMP-1、MMP-9 mRNA表达的上调,软骨中MMP-1、MMP-9 mRNA的表达一定程度上反映了OA软骨的退变程度.     

基质金属蛋白酶-9在大鼠终板软骨细胞中的表达及意义

目的 观察大鼠终板软骨细胞体外自然退变过程中基质金属蛋白酶(MMP)-9表达变化及意义.方法 酶消化法及自然传代法获取大鼠腰椎终板软骨细胞,选取P1代及P7代并分别定义为实验组和对照组,倒置相差显微镜、HE染色、甲苯胺蓝染色及实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定终板软骨细胞.实时RT-PCR及Western免疫印迹检测MMP-9变化.结果 实验组终板软骨细胞增殖速度减慢并呈梭型,Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖表达均明显下调,MMP-9表达明显增加.结论 MMP-9可能参与终板软骨细胞退变过程,早期调节其表达有可能会阻止终板软骨细胞退变,为椎间盘退变防治提供新的理论依据.     

miRNA-135a在肝癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨mi RNA-135a(mi R-135a)在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR检测20例肝癌组织及其癌旁组织中mi R-135a的表达水平,并通过脂质体介导的方法将mi R-135a模拟物(mi R-135a mimics)转染肝癌细胞株Hep G2,采用实时荧光定量PCR测定转染后细胞中mi R-135a的表达水平;通过平板克隆实验和MTT法分别检测转染后细胞克隆形成率和存活率的变化,并对mi R-135a调控相关靶细胞的基因表达水平进行检测,观察mi R-135a在肝癌细胞维持正常功能中的作用。结果 通过对20例肝癌组织及其癌旁组织中mi R-135a的表达水平进行检测,结果 mi RNA-135a的表达在正常组织中相对更高,且两组之间存在显著性差异(P0.05);与阴性对照组比较,转染mi R-135a mimics后Hep G2细胞中mi R-135a表达水平显著提高(P0.05),而形成单克隆能力和细胞存活率均显著下降(P0.05),同时转染组细胞中与mi R-135a细胞调控相关靶基因FOS、PI3、Jak2、Stat3的m RNA表达量相较于NC组均显著降低(P0.05),表明mi R-135a表达提高后抑制细胞形成单克隆能力并降低存活率。结论 mi R-135a在正常组织和肝癌组织中差异表达,同时当mi R-135a表达提高时抑制肝癌细胞形成单克隆能力和降低细胞存活率,表明mi R-135a可能通过一些相关靶基因直接或间接调控Hep G2肝癌细胞的存活,在肝癌的发生过程中可能起到作用,mi R-135a可能成为临床治疗肝癌和预后的重要靶点。     

正常和战士损伤半月板的低场MRI研究

目的 认识正常膝关节半月板低场MRI表现,以提高对损伤半月板诊断的正确率.方法 20例正常膝关节按年龄分成五组,观察半月板及关节软骨的信号并测量其厚度.根据正常半月板及关节软骨的低场MBI征像,结合102例战士损伤半月板MBI和关节镜检查的对照研究,参照Stoller半月板退变和损伤的MRl分级标准,拟订了损伤半月板低场MRI诊断标准,即半月板退变、半月板单纯撕裂和复杂撕裂,统计学采用t检验.结果 低场MRI显示正常半月板内线条状高信号,不延伸至关节面或游离缘,半月板和关节软骨的厚度随年龄不同而变化.低场MRI对损伤半月板诊断的正确率为93.14%(95/102).结论 拟订的半月板损伤低场MBI诊断标准具有简单、实用性强的特点,值得在临床推广应用.     

体外IL-β诱导股骨头建立软骨退变模型

目的:IL-1β诱导体外培养大鼠的股骨头致其快速退变,为药物筛选和治疗提供可靠的软骨退变模型。方法:取2周龄SD幼鼠的股骨头,左右股骨头对应为对照组和实验组,分别培养于正常培养基和诱导培养基中(其中含50 ng/ml的IL-1β),每2 d换液1次,至第3天取出股骨头,固定于4%多聚甲醛,经过脱钙和脱水、石蜡包埋、切片后经甲苯胺蓝和臧红-固绿染色及细胞免疫荧光检测软骨标志基因Ⅱ型胶原和Sox9以及软骨退变相关基因MMP13和ADAMTS5等基因的原位表达。结果:实验组的股骨头外缘,在培养3 d后甲苯胺蓝染色明显淡染,臧红-固绿染色阳性,提示软骨退变。免疫荧光显示Ⅱ型胶原和Sox9表达减弱,MMP13和ADAMTS5表达增强。结论:IL-1β培养大鼠股骨头3 d 即诱导其退变,建立软骨组织体外培养诱导其退变的模型。