海藻酸盐敷料在伤口换药中应用的研究进展

伤口修复受各类因素的影响,以伤口的局部换药为关键。目前创面的换药以棉质纱布为主,但因其表面粗糙、干燥,易损伤创面的新生肉芽组织,对创面有一定的刺激作用而日益显示其局限性。随着对伤口愈合机制的进一步研究,各种新型敷料应运而生。海藻酸盐敷料具有高吸水性、高透氧性、易去除性、凝胶阻塞性、止血、减轻疼痛、抑菌、无刺激、无毒副作用,并使创面保持湿润环境,可促进创面愈合,在各类伤口护理中具有潜在价值。对国内外关于海藻酸盐敷料在难愈性伤口应用的研究进展进行总结。     

Tunel法检测海藻酸钙敷料对成纤维细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨海藻酸钙敷料诱导成纤维细胞(L-929)的凋亡情况。方法:将成纤维细胞(L-929细胞)与海藻酸钙材料共培养72h作为实验组,另设空白培养液作为对照组,采用原位标记法(Tunel法)对细胞死亡类型进行检测,并在正置荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,计算凋亡率。结果:两组均出现凋亡细胞,且随培养时间呈现持续升高趋势,实验组凋亡检出率与对照组相比无明显差异。结论:海藻酸钙敷料无明显诱导细胞的凋亡,具有良好生物相容性,有望成为良好的新型伤口敷料。     

两性离子水凝胶敷料用于压疮创面的实验研究

目的观察两性离子(含磺酸甜菜碱甲基丙烯酸酯,SBMA)水凝胶敷料对大鼠压疮创面愈合的影响。方法取24只SD大鼠,根据压疮缺血-再灌注原理制作压疮模型。按随机数字表法将模型大鼠分为NS组、PEG组和SBMA组,每组8只,去除创面坏死组织后,分别采用生理盐水、含聚乙二醇甲基丙烯酸酯(PEG)水凝胶和两性离子水凝胶敷料处理创面,干预后第4、7、10、14天观察创面面积,干预后第7、14天观察组织结构及胶原沉积情况、免疫组织化学观察CD31、VEGF、Ki67、CK10表达。结果 SBMA组创面愈合率在各时间点显著高于其他两组(均P<0.05),且PEG组高于NS组(均P<0.05);干预后第7天SBMA组CD31、VEGF表达水平最高(P<0.05),第14天CD31、VEGF表达水平有所下降;上皮组织Ki67表达水平逐渐上升,SBMA组上升最快,PEG组次之,NS组最慢;三组均在第14天出现创面上皮化,相较于其他两组,SBMA组表皮分化程度最高。结论两性离子水凝胶敷料在促进压疮创面血管生成和再上皮化方面具有一定优势,能促进压疮创面愈合。     

几丁糖/海藻酸敷料对海水浸泡创面作用的实验研究

目的 观察几丁糖(chitosan,CTS)/海藻酸(alginate,ALG)敷料对大鼠海水浸泡创面的作用.方法 取健康SD大鼠25只,体重250～300 g,于脊柱两侧切取直径1.8 cm圆形创面,制作皮肤创面模型,左侧为实验组,右侧为对照组.将创面浸泡于预先配置的人工海水1 h后,实验组采用CTS/ALG敷料外敷创面,对照组用无菌纱布外敷.行大体观察并记录创面愈合时间;术后3、5、7、10、12 d切取包括创面在内的2 cm×2 cm皮肤标本,行HE染色和免疫组织化学Envision法染色,观察创面组织学改变及EGF受体(EGF receptor,EGFR)、bFGF表达情况.结果 实验组创面炎性反应轻,结痂收缩较快;对照组创面结痂收缩较慢.实验组创面完全愈合时间为(11.68±0.57)d,对照组为(12.51±0.54)d,比较差异有统计学意义(P＜0.05).实验组自术后3 d开始出现肉芽组织增生及细胞浸润,胶原组织增生,创面皱缩及上皮化,至术后10 d胶原组织已排列整齐,上皮化过程基本完成,可见皮肤附件出现,术后12 d完全愈合;对照组相应时间点细胞浸润出现晚,且出现肉芽组织伴溃疡,上皮化过程较晚.免疫组织化学观察示实验组术后3、5 dbFGF在血管内皮细胞和间质纤维母细胞内高表达,EGFR在血管内皮细胞内高表达,术后7、10、12 d呈低表达;对照组术后相应时间点bFGF及EGFR呈低表达和无表达.结论 CTS/ALG对海水浸泡创面具有促进愈合作用,但其机制仍有待进一步深入研究.     

海藻酸钙敷料对大鼠创面愈合影响的组织学研究

目的：探讨海藻酸钙敷料对大鼠创面愈合的影响。方法：48只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只。制作大鼠背部全层皮肤缺损模型,在创面局部以海藻酸钙敷料（实验组）或干棉纱布（对照组）包扎,观察伤后3、7、14 d创面愈合率的变化;于伤后3、7、14 d取创面组织,石蜡包埋、切片、分别行HE和Masson染色,计算血管横断面面积与肉芽组织面积的比值、肉芽组织厚度和胶原蛋白含量（胶原面积与创面面积比值）。结果：术后第3天时实验组大鼠较对照组创面愈合率明显增加（P〈0.05）。术后第3天实验组与对照组肉芽组织厚度[分别为（1 540.0±118.5）μm和（1 504.6±131.8）μm,P〉0.05]和新生肉芽组织血管面积与肉芽组织面积之比[分别为0.118±0.007和0.113±0.007,P〉0.05）差异均无显著性,但术后3 d实验组胶原蛋白面积较对照组明显增多[分别为（45.7±5.3）%和（11.6±2.5）%,P〈0.05];术后第7天实验组以上指标均高于对照组（P〈0.05）,第14天时这种趋势依然存在（P〈0.05）。结论：海藻酸钙能提高伤口皮肤组织内的胶原蛋白含量,加速创面肉芽组织形成,促进伤口的愈合。     

携带人胰岛素基因慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的实验研究

目的构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和人胰岛素(insulin)基因的慢病毒载体,探讨其对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)的转染情况,为今后组织工程脂肪构建与体内回植研究奠定基础。方法采用DNA重组技术,将insulin基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(internal ribosome entry site,IRES)-EGFP中,筛选阳性克隆,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带目的基因的质粒pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP共同转染到293T细胞内包装病毒,荧光倒置相差显微镜观察包装细胞报告基因的表达情况。收集病毒上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度。取足月儿脐带以组织块培养法分离培养hUCMSCs,以不同感染复数(multiple of infection,MOI,分别为0、1、3、5、7、10、15、20)的重组慢病毒感染hUCMSCs,通过报告基因绿色荧光蛋白的表达筛选最适MOI;以最适MOI重组慢病毒感染hUCMSCs,应用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测细胞中insulin基因及insulin蛋白水平的表达情况。结果成功构建了共表达insulin基因和EGFP基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP,并对其成功包装、纯化及浓缩,病毒滴度为1.3×108TU/mL。不同MOI的重组慢病毒感染hUCMSCs后,通过绿色荧光蛋白表达的阳性细胞数筛选其最适MOI为10,此时对细胞的转染效率可达到90%。实时荧光定量PCR检测示转染组insulin mRNA表达阳性,未转染组为阴性;Western blot检测示转染组细胞内及上清液insulin蛋白表达阳性,未转染组均为阴性。结论构建的携带insulin基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP可有效转染hUCMSCs,表达insulin蛋白。     

不同浓度的海藻酸盐与异种骨构建组织工程载体研究

目的 探讨不同浓度的海藻酸盐凝胶与去抗原异种骨构建组织工程载体的生物学性能。方法 采用倒置显微镜，扫描电镜，对0．25、1、4和8％的海藻酸盐与去抗原异种骨构建的组织工程载体中的骨髓基质细胞形态及分泌性能。结果 海藻酸盐的浓度为0．25％和1％时，凝胶在异种骨中均匀复合，浓度为4％和8％时海藻酸盐仅复合在松质骨表面。体外培养4天后，0．25％海藻酸盐复合异种骨的表面大部分凝胶脱落；1％海藻酸盐均匀复合在异种骨的骨孔中，细胞在凝胶中生长均匀，形态饱满，有基质分泌；4％海藻酸盐中细胞生长受到限制；8％海藻酸盐凝胶质地不均匀，无法见到细胞结构。结论 1％海藻酸盐适宜与异种骨复合构建骨组织工程载体。     

海藻酸钙敷料的细胞毒性体外检测结果分析

目的:探讨海藻酸钙敷料对体外培养的成纤维细胞相对增殖率的影响,初步评价该材料的细胞毒性作用并探讨对细胞增殖影响最低的条件。方法:第一步:采用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度(0、50%和100%)敷料浸提液的吸光度,分别计算各浓度下成纤维细胞的相对增殖率,初步评价其细胞毒性。第二步:根据上述结果,继续采用MTT法检测细分浓度(0、10%、20%、30%、40%和50%)敷料浸提液对成纤维细胞增长率影响,测出对细胞增殖无影响的材料溶液浓度。结果:各浓度浸提液均出现较高相对细胞增殖率,其细胞毒性均为0或1级,无毒性。精检MTT结果提示,相对浸提液浓度低于10%海藻酸盐敷料浸提液对成纤维细胞的生长无任何影响,浓度高于20%的浸提液对成纤维细胞的生长开始产生影响,但仍未到毒性标准。结论:海藻酸钙敷料无细胞毒性,具有良好细胞相容性,满足人体植入材料体外细胞毒性实验要求,可作为安全的伤口敷料使用。     

复合枸杞多糖的海藻酸钙凝胶微球载体修复小鼠脊髓损伤的实验研究

[目的]研究复合枸杞多糖(LBPs)的海藻酸钙(ALG-Ca)凝胶微球对小鼠急性脊髓损伤的(SCI)修复作用。[方法]采用高压静电液滴法制备ALG-Ca凝胶微球、复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球,用扫描电镜观察微球结构。用脊髓撞击仪(NYU Impactor ModelⅡ)制作96例C57BL/6小鼠(T12)脊髓损伤模型,随机分为单纯损伤组(A组);单纯ALG-Ca微球组(B组);单纯LBPs组(C组);复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球组(D组),每组24只。对各组实验动物SCI后肢体功能恢复情况进行行为学评分(BMS评分),用尼氏(Nissl)染色和免疫荧光评估神经元内细胞结构的变化情况、小胶质细胞(microglia,MG)激活形态及在脊髓损伤区的分布情况。[结果]扫描电镜观察示ALG-Ca凝胶微球呈多空样结构;复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球能改善小鼠SCI后后肢功能恢复。D组优于其他组,各组间BMS评分差异有统计学意(P<0.05);Iba1免疫荧光染色平均光密度组间差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]ALG-Ca凝胶微球是LBPs治疗SCI的良好载体,具有潜在的应用前景;复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球载体可以通过抑制小胶质细胞的激活,减轻炎症反应,发挥保护神经元的作用,从而促进脊髓损伤恢复。     

纳米银敷料联合重组人表皮生长因子凝胶治疗烧伤创面疗效观察

目的:观察纳米银敷料联合重组人表皮生长因子凝胶治疗深Ⅱ度烧伤患者的临床疗效.方法:选取2017年5月-2020年5月笔者医院收治的180例深Ⅱ度烧伤患者,随机分为联合组、凝胶组和敷料组,每组各60例.凝胶组给予重组人表皮生长因子凝胶治疗,敷料组给予纳米银敷料治疗,联合组给予重组人表皮生长因子凝胶联合纳米银敷料干预治疗....     

人脐带间充质干细胞向血管内皮祖细胞诱导分化的实验研究

目的探讨人脐带间充质干细胞定向诱导分化为血管内皮祖细胞的可行性,为构建组织工程血管瓣膜内皮化提供新的细胞来源。方法无菌条件下取剖宫产新生儿脐带,复合胶原酶消化法获取脐带间充质干细胞进行培养,以流式细胞仪检测脐带间充质细胞的表面标志。取扩增3～6代的脐带间充质干细胞用VEGF和b-FGF诱导分化。用免疫荧光法鉴定内皮祖细胞的标志。结果脐带间充质干细胞可以诱导分化为血管内皮样细胞,表达CD34、CD133和vWF,且Dil-acLDL实验阳性。结论脐带间充质干细胞可以诱导分化为血管内皮祖细胞,可为构建组织工程血管瓣膜提供新的种子细胞来源。     

硅酮敷料结合重组人源胶原蛋白凝胶对颌面头颈部创口瘢痕的影响

目的:探究硅酮敷料结合重组人源胶原蛋白凝胶对颌面头颈部创口瘢痕的影响。方法:回顾性分析笔者医院经重组人源胶原蛋白凝胶治疗(对照组,49例)及硅酮敷料结合重组人源胶原蛋白凝胶治疗(观察组,49例)的行择期颌面头颈部肿物切除术的患者临床资料。记录两组创口愈合时间、术后1个月及术后3个月瘢痕情况[温哥华瘢痕量表(VancouverScar Scale,VSS)]、术后1周及术后1个月疼痛程度[视觉模拟评分(VisualAnalogueScale,VAS)]差异,并比较两组术前及术后3个月时容貌负面评价[相貌负面身体自我量表(NegativePhysicalSelfScale,NPSS)]、自尊水平[Rosenberg自尊量表(RosenbergSelf-EsteemScale,SES)]差异。结果:观察组创口愈合时间明显低于对照组(P0.05)。术后3个月,两组瘢痕情况指标(各维度VSS评分)均较术后1个月降低(P0.05),而观察组术后1个月、3个月各维度VSS评分均低于对照组(P0.05)。术后1个月,两组疼痛程度(VAS评分)均较术后1周降低(P0.05),而观察组术后1周及术后1个月VAS评分均低于对照组(P0.05)。术后3个月,两组容貌负面评价(NPSS评分)均较术前升高(P0.05),自尊水平(SES评分)则较术前降低(P0.05),且对照组变化幅度均大于观察组(P0.05)。结论:硅酮敷料结合重组人源胶原蛋白凝胶可有效改善颌面头颈部创口瘢痕状况,还能促进创口愈合,有效缓解患者术后疼痛,降低患者对瘢痕产生的负性情绪。     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.

Abstract：

Objective To investigate the biological characteristics of human umbilical cord derived mesenchymal stem cells(UCMSCs) and inducing them to differentiate into neurons in vitro,in order to provide stem cell resource for the tissue engineering artificial nerve. Methods UCMSCs were cultured from Wharton jelly of human umbilical cord in the condition of sterilitas,surface antigens of UCMSCs were detected by immunohistochemistry.The frist group of cells were added by virgin nutrient,the second group of cells were induced by merely growth factors,the third of cells were induced by merely astragalus mongholicus and the fourth by the astragalus mongholicus with growth factor,observed the morphology of the cells of the two groups under inverted microscope,and determine the positive expression rate of nerve cells' markers,such as NSE,NF and GFAP.The results were statistically analyzed.Results UCMSCs were strongly positive for CD29,CD44,CD105,weakly positive for CD105 and negative for CD34,CD45.After induced by Astragalus mongholicus,UCMSCs were strongly positive for GFAP,NSE. Conclusion UCMSCs can be successfully cultured from the adherent tissue pieces,Astragalus mongholicus can successfully induce them to differentiate into neurons in vitro,to provide a new method of making the tissue engineering artificial nerve and treat theperipheraly nervus defect.     

条件培养液诱导人脐带间充质干细胞分化为Leydig细胞的实验研究

目的:探讨睾丸Leydig细胞(LC)来源的条件培养液诱导人脐带间充质干细胞(Hu MSCs)分化为LC的可行性。方法:用贴壁法和酶消化法分别分离培养Hu MSCs和LC。用LC来源的条件培养液诱导Hu MSCs,诱导前的Hu MSCs作为对照。培养3、7、10 d后,对干细胞进行RT-PCR检测LHR、St AR和3β-HSD的mRNA表达;培养2周后,对诱导后的干细胞进行CYP11A1、CYP17A1和3β-HSD免疫荧光检测;培养4周后,Western印迹检测3β-HSD。结果:干细胞诱导3、7、10 d后,RT-PCR发现LHR、St AR及3β-HSD表达阳性;诱导2周后,免疫荧光检测发现CYP11A1、CYP17A1、3β-HSD表达阳性;诱导4周后,Western印迹检测发现3β-HSD表达阳性。对照组各项检测均为阴性。结论:在LC来源的条件培养液诱导下,Hu MSCs具有向合成类固醇激素的细胞分化的可能,并最终可能分化为LC。     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.     

不同浓度人脐带间充质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

[目的]比较不同浓度人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)移植修复大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的疗效.[方法]利用NYU Impactor model-Ⅱ打击器制作大鼠T10 SCI模型,分组为:80只W istar大鼠随机分为DMEM实验对照组(A组)、1×1004 HUCM5C、移植组(B组)、1×105HUCMSC、移植组(C组)和1×106 HUCMSC,移植组(ll组),每组20只.对各组实验动物SCI后肢体功能恢复情况进行行为学评分(BBB评分),并以HF染色和免疫组化染色及生物素葡聚糖胺(BDA)顺行示踪皮质脊髓束( corticospinal tract,CST)染色观察SCI处轴突再生情况.[结果]与实验对照组相比,HUCMSCs移植能促进SCI后轴突再生,改善大鼠后肢功能恢复.D组优于其他组,各组问BBB评分差异有统计学意义(P<0.05); NF-200免疫荧光染色累积光密度各组间差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]HUCMSC、在体内可向神经元及神经胶质细胞分化,促进SCI后轴突再生和肢体功能恢复.     

人脐带间充质干细胞移植预防兔缺血性胆道病变的初步实验研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSC)移植在防治兔肝内缺血性胆道病变中的作用。方法将18只新西兰大白兔随机分成3组(每组6只):(1)A组(假手术组),仅切开腹腔,不予任何特殊处理,术后分层关腹;(2)B组(实验模型组),建立肝内缺血性胆道病变模型;(3)C组(hUC-MSC移植组),术前12h经耳缘静脉注射hUC-MSC(2×106/kg)5ml,然后按B组实验操作建立肝内缺血性胆道病变模型。术后定时监测生化指标变化情况。术后4周开腹行胆道造影。处死动物后,取第一肝门处汇管区肝组织做病理学检查。结果与A组比较,B组和C组术后多个时间点各项生化指标均有不同程度升高(均为P<0.05),但C组的生化指标升高程度明显低于B组(均为P<0.05),下降趋势明显。术后4周胆道造影、病理学检查结果示,B组的肝内胆管上皮细胞破坏严重,C组的胆管上皮细胞破坏较B组明显减轻,管壁结构完整。结论术前hUC-MSC移植能够有效减轻缺血性胆道病变的程度,预防缺血性胆道病变的发生。