miR-381-3p通过靶向ERK1/2/ETS1信号通路影响MC3T3-E1细胞成骨分化

目的 探讨miR-381-3p对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响和作用机制。方法 慢病毒转染细胞后实验分为NC mimic miR-381-3p组、mimic miR-381-3p组、NC inhibitor miR-381-3p组和inhibitor miR-381-3p组;运用实时荧光定量PCR(qR T-PCR)法检测不同组miR-381-3p的表达水平以验证转染效率;诱导MC3T3-E1细胞成骨分化后,检测各组细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性水平;茜素红染色法检测各组细胞的成骨矿化能力; qR T-PCR测定各组细胞中ALP、Runx2、PPARγ和ETS1 mR NA表达水平;蛋白免疫印迹法测定各组细胞中collagenⅠ、ALP、Runx2、PPARγ、ETS1、P-ERK1/2水平;并用MAPK/ERK通路抑制剂(PD98059)干预各组细胞后进行目的蛋白检测。结果 与NC mimic miR-381-3p组、mimic miR-381-3p组及NC inhibitor miR-381-3p组比较,inhibitor miR-381-3p组中细胞中ALP、Runx2、ET...     

miR-124-3p靶向Axin1 调控糖尿病骨质疏松成骨的研究

目的 研究miR-124-3p靶向Axin1 调控糖尿病骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells ,BMSCs）成骨分化的作用。方法 20只糖尿病大鼠模型-SPF级SD雌性大鼠分为分组对照组10例、实验组10例,经过药物注射,测血生化指标,测骨密度。BMSCs培养,流式细胞学鉴定。检测对照组和实验组miR-124-3p mRNA的表达。过表达miR-124-3p（模拟物）7、14、21 d,检测ALP、茜素红染色成骨能力。第7天检测miR-124-3p mRNA表达水平。实验组细胞用miR-124-3p模拟物转染,分为高糖组和低糖组,检测中Axin1 mRNA水平。构建载体,与模拟物共转染,荧光素酶报告基因检测miR-124-3p和Axin1靶向结合。将实验组BMSCs分为高糖组和低糖组,检测实验组BMSCs高糖组及低糖组miR-124-3p、Runx2 mRNA的表达及茜素红染色和ALP染色结果。检测实验组模拟物在高糖组及低糖组miR-124-3p、Runx2 mRNA的表达及茜素红染色和ALP染色结果。结果 ELISA检测血生化指标,实验组TG、TC、FPG、HbA1C值上调,β-CTX和SOST上调,OC和骨密度下调。BMSCs培养,流式细胞学鉴定显示CD73和CD105的表达为阳性, CD34 和 CD45 的表达呈阴性。符合间充质干细胞的抗原特点,证实为BMSCs。实验组miR-124-3p表达明显低于对照组。过表达miR-124-3p（模拟物）7、14、21 d,ALP、茜素红染色随时间逐渐升高。第7天miR-124-3p表达水平显著升高。实验组细胞用miR-124-3p模拟物转染,结果高糖组Axin1 mRNA表达水平上调,但用miR-124-3p模拟物转染时水平下降。荧光素酶报告基因检测miR-124-3p和Axin1可以靶向结合。RT-qPCR检测实验组BMSCs高糖摄入显著降低了miR-124-3p、Runx2表达;高糖可抑制成骨分化,减少钙沉积,减少ALP表达。高血糖条件下miR-124-3p过表达（模拟物）中Runx2的表达显示,高糖+对照明显低于低糖+对照组;高糖+miR-124-3p模拟物明显高于高糖+对照组。茜素红染色和ALP染色显示,高糖+对照明显低于低糖+对照组;高糖+miR-124-3p模拟物明显高于高糖+对照组。结论 miR-124-3p能通过靶向抑制Axin1促进糖尿病骨质疏松症大鼠BMSC的成骨发生。     

IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用

目的 探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法 不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果 不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB...     

Hey1表达对BMP-9诱导下C3H10T1/2细胞的成骨分化及增殖影响

目的探讨Notch信号通路重要靶点Hey1表达水平改变对BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化与增殖的影响。方法构建过表达Hey1慢病毒LV-Hey1、抑制Hey1表达慢病毒LV-sh Hey1,分别感染C3H10T1/2细胞干预Hey1表达水平,以LV-Blank(空质粒)感染C3H10T1/2细胞作为对照;以荧光显微镜对慢病毒感染效果、实时荧光定量PCR以及Western blot对Hey1表达水平进行验证,筛选不同Hey1表达水平的稳定细胞系。用含BMP-9的条件培养基诱导不同Hey1表达水平的C3H10T1/2细胞(分别为BMP-9+C3H10T1/2组、BMP-9+C3H10T1/2-Hey1组、BMP-9+C3H10T1/2-sh Hey1组),以正常培养基培养的细胞作为对照(C3H10T1/2组、C3H10T1/2-Blank组)。培养后48 h,实时荧光定量PCR及Western blot测定成骨分化相关转录因子Runx2、骨桥蛋白、骨钙素m RNA及蛋白表达水平;4、5、6、7 d行MTT检测及4、5、10 d行流式细胞仪测定细胞增殖能力;4、7 d时ELISA测定细胞ALP表达水平并行染色观察。结果成功建立不同Hey1表达水平稳定细胞系。成骨方面,各时间点与BMP-9+C3H10T1/2组比较,BMP-9诱导下Hey1过表达的BMP-9+C3H10T1/2-Hey1组细胞Runx2、骨桥蛋白、骨钙素m RNA及蛋白表达水平以及成骨分化标志物ALP含量均显著增加(P0.05),抑制Hey1表达的BMP-9+C3H10T1/2-sh Hey1组细胞以上指标均显著降低(P0.05)。对细胞增殖活力影响方面,与BMP-9+C3H10T1/2组比较,BMP-9+C3H10T1/2-Hey1组MTT检测吸光度(A)值及细胞G2+S期百分比均提高(P0.05);而抑制Hey1表达BMP-9+C3H10T1/2-sh Hey1组以上指标均降低(P0.05)。结论 Hey1表达是BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化重要环节,同时影响细胞早期增殖。     

miR-137靶向作用RUNX2调控MC3T3-E1细胞成骨分化

目的探讨miR-137对RUNX2的靶向作用及其对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。方法通过软件预测miR-137与成骨标志基因RUNX2的结合位点。检测MC3T3-E1细胞诱导成骨分化过程中miR-137的表达变化。转染miR-137 mimics或miR-137 inhibitor后,再诱导MC3T3-E1细胞成骨分化,检测成骨分化标志物(RUNX2、ALP、OPN、OCN及OSX)表达变化。结果经软件预测,miR-137与靶基因RUNX2有结合位点。MC3T3-E1细胞成骨分化过程中,miR-137表达下调。转染miR-137mimics的MC3T3-E1细胞成骨标志基因表达受到抑制,而转染miR-137 inhibitor组成骨标志基因呈不同程度表达上调。结论miR-137通过靶向作用RUNX2基因调控MC3T3-E1细胞成骨分化。     

miR-148-5p靶向H型血管调控因子Slit3的实验研究

目的 观察绝经后骨质疏松症中H型血管调控因子Slit3表达差异,进一步探讨其上游靶向调控miRNAs。方法 雌性SD大鼠随机分假手术组和模型组,Real-time PCR和免疫组化检测骨组织Slit3 mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测可能与Slit3-3’UTR互作的miRNAs,构建野生型和突变型Slit3-3’UTR重组荧光素酶报告载体,和miRNAs表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶报告基因测定荧光素酶活性验证miRNA对Slit3-3’UTR的靶向作用。结果 与假手术组相比,模型组Slit3 mRNA表达水平略上调和平均光密度显著上调,生物信息学预测Slit3-3’UTR与miR-148a-5p、miR-148b-5p、miR-410-3p、miR-129-5p和miR-374-5p存在碱基结合位点,野生型Slit3-3’UTR共转染miR-148b-5p荧光活性下调至空白对照组的68.91%,突变型Slit3-3’UTR共转染miR-148b-5p荧光活性未见下调。结论 Slit3可能是绝经后骨质疏松症H型血管的调控基因,miR-148b-5p与Slit3-3’UTR的靶向结合直接调控Slit3的表达水平。     

miR-122-3p通过wnt/β catenin信号通道调控小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化

[目的]探究miR-122-3p在小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化中的调控机制。[方法]从6只雄性C57BL/6小鼠获取m ADSCs,成骨诱导培养基中培养,观察成骨情况。miR-122-3p、miR-NC、antimiR-122-3p和anti-NC基因慢病毒转染m ADSCs,q RT-PCR检测miR-122-3p表达以及成骨特异性基因Ocn及Alp的m RNA表达。Western blotting检测β-catenin的蛋白表达量。[结果]成骨诱导培养后,m ADSCs开始成骨分化,ALP染色和茜素红染色阳性。经转染后,过表达miR-122-3p会抑制m ADSCs成骨分化。反之,敲减miR-122-3p会促进m ADSCs成骨分化。Western Blotting检测表明,过表达miR-122-3p会激活Wnt/β-catenin信号通路。反之,敲减miR-122-3p会抑制Wnt/β-catenin信号通路。[结论] miR-122-3p通过调控Wnt/β-catenin信号通路,影响小鼠m ADSCs成骨分化。     

miR-432-5p靶向UCK2调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的:探讨miR-432-5p调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的分子机制.方法:过表达或敲低miR-432-5p后,检测乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平.敲低miR-432-5p后,检测miRDB数据库在线分析的靶标的mRNA水平.通过荧光素酶报告系统检测miRNA是否与潜在靶标直接结合.过表达或敲低靶标后,分析乳腺癌细胞M...     

IL-1β对ATDC5成软骨分化细胞miR-455-3p的影响

目的：检测IL-1β对ATDC5成软骨分化细胞miR-455-3p表达的影响,探索miR-455-3p在骨关节炎中的作用。方法诱导ATDC5细胞成软骨分化后,予10 ng/ml的IL-1β刺激,在刺激4、12、24、48 h时应用实时荧光定量PCR检测miR-455-3p、C/EBPβ和软骨特征性标记物的表达情况;并利用抑制剂IKK-NBD阻断NF-κB通路后,应用实时荧光定量PCR检测IL-1β作用下miR-455-3p的表达水平。结果在IL-1β作用下的ATDC5成软骨分化细胞中miR-455-3p、C/EBPβ和软骨退变标记物（ MMP13、ADAMTS5）均上调,而软骨基质合成标记物（ ACAN、COL2A1、SOX9）则下调,且后期更为明显;而IKK-NBD可抑制IL-1β诱导的miR-455-3p表达。结论 IL-1β可上调ATDC5成软骨分化细胞miR-455-3p的表达水平,且受NF-κB通路的调节。     

H_2O_2下调miR-21对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的研究

目的探讨H_2O_2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制。方法取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验。取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H_2O_2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测细胞活性,选择H_2O_2最合适实验浓度。取MC3T3-E1细胞分为空白对照组(A组)、H_2O_2组(B组)、成骨诱导组(C组)、H_2O_2+成骨诱导组(D组),对应培养后实时荧光定量PCR检测miR-21表达以及成骨标志基因Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1a1)表达,Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况,分析H_2O_2对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。然后再取MC3T3-E1细胞,分为H_2O_2组(A1组)、H_2O_2+成骨诱导组(B1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂+成骨诱导组(C1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂阴性对照+成骨诱导组(D1组);以及H_2O_2组(A2组)、H_2O_2+成骨诱导组(B2组)、H_2O_2+ siRNA-PTEN阴性对照+成骨诱导组(C2组)、H_2O_2+siRNA-PTEN+成骨诱导组(D2组);对应培养后检测成骨标志基因(Runx2、OPN、Col1a1)表达以及细胞外钙基质沉积情况,分析下调miR-21或沉默PTEN对细胞成骨分化的影响。结果结合实时荧光定量PCR检测以及MTS法结果,选择160μmol/L H_2O_2进行实验。第1、2周B组miR-21相对表达量低于A组(P0.05),D组低于C组(P0.05);第2周C组PTEN蛋白相对表达量均低于A、D组(P0.05);第1、2周D组Runx2、OPN及Col1a1 mRNA相对表达量均低于C组(P0.05),茜素红染色显示D组钙基质沉积少于C组。C1组PTEN蛋白相对表达量高于D1组(P0.05);第1、2周B1、D1组Runx2、OPN mRNA相对表达量均高于C1组(P0.05),第2周B1、D1组Col1a1 mRNA均高于C1组(P0.05);茜素红染色显示C1组钙基质沉积少于B1、D1组。第1周D2组OPN、Col1a1 mRNA相对表达量高于B2、C2组(P0.05),第3周茜素红染色显示D2组钙基质沉积明显多于B2、C2组。结论 H_2O_2抑制MC3T3-E1成骨分化可能与miR-21下调有关。     

miR-187-5p 对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调控作用

目的利用小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化模型,探讨miR-187-5p在成骨分化中的表达趋势及调控作用。方法通过切除雌性小鼠双侧卵巢构建小鼠骨质疏松模型;应用qRT-PCR技术检测组织和细胞中miR-187-5p的表达;应用基因转染技术观察过表达或敲减miR-187-5p对BMSCs向成骨分化的影响;应用茜素红和碱性磷酸酶染色检测BMSCs中矿化结节的数量和矿化区域的染色面积。结果 qRT-PCR结果显示miR-187-5p在骨质疏松模型小鼠的骨组织及BMSCs中均表达下降。过表达miR-187-5p可提高ALP、Collagen-1、Runx2、BMP4、OCN和OPN等成骨分化相关基因mRNA的表达,促进BMSCs向成骨分化;而敲减miR-187-5p降低ALP等成骨分化相关基因mRNA的表达,抑制BMSCs向成骨分化。在体实验同样证实,过表达miR-187-5p可以显著促进骨质疏松小鼠BMSCs向成骨分化,改善小鼠的骨质疏松表型。结论过表达miR-187-5p促进BMSCs向成骨分化,敲减miR-187-5p抑制BMSCs向成骨分化。     

LncRNA ZBED3-AS1/miR-339-5p/Notch 1轴调控骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化

目的:探究LncRNA ZBED3-AS1调控miR-339-5p/Notch 1在骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化中的作用。方法:构建假手术（Sham）组和模型（Model）组大鼠模型,对大鼠的骨密度进行检查观测大鼠建模情况。分离大鼠成骨细胞,qRT-PCR检测细胞中ZBED3-AS1、miR-339-5p的表达。对Sh...     

miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖

目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制。方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3'端非编码区(UTR)。将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响。结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12±0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P0.05)。荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR。转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P0.05)。MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强。转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)%和(82.10±6.35)%(P0.05)、(49.34±2.37)%和(70.10±5.80)%(P0.05)。结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。     

lncRNA HAGLR通过靶向miR-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLR通过靶基因微小RNA(miR)-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(HS-746T、BGC823、SGC7901、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中HAGLR的表达水平。选择HA...     

miR-134-5p靶向MRPL58调控乳腺癌细胞MCF7的凋亡研究

目的:探讨miR-134-5p靶向MRPL58调控乳腺癌细胞MCF7凋亡的潜在分子机制。方法:通过高通量测序检测正常乳腺上皮细胞MCF10A与乳腺癌细胞MCF7中的差异miRNA。在乳腺癌细胞MCF7中过表达差异倍数大于7的miRNA,检测其凋亡水平。通过miRDB在线分析miRNA潜在的靶标基因。通过过表达或敲低miRNA和荧光素酶报告实验确定miRNA的靶标基因。结果:正常乳腺上皮细胞MCF10A与乳腺癌细胞MCF7的总miRNA高通量测序结果发现,MCF10A细胞中miRNA比乳腺癌细胞MCF7表达量大于7倍的有30种。过表达上述miRNA后,miR-134-5p增强了乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平(P<0.05)。敲低miR-134-5p后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平下降(P<0.05)。miR-134-5p在癌旁组织中的表达水平高于乳腺癌组织(P<0.05)。过表达miR-134-5p后,KIAA0040,ZMAT5,RAB27A,TESMIN,MRPL58,ZFPM2,NUP98的表达水平下降(P<0.05)。敲低上述基因后,敲低MRPL58时乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平下降。敲低miR-134-5p后,MRPL58的表达水平上升。过表达miR-134-5p后,MRPL58的表达水平下降。同时,miR-134-5p靶向MRPL58的3端非编码区(P<0.05)。同时敲低miR-134-5p和MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平没有显著改变(P>0.05)。同时过表达miR-134-5p和MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平没有显著改变(P>0.05)。结论:miR-134-5p通过靶向MRPL58 mRNA的3端非编码区以降低MRPL58的翻译水平,最终促进了乳腺癌细胞MCF7的凋亡。     

H_2O_2下调miR-21对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的研究北大核心CSCD

目的探讨H_2O_2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制。方法取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验。取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H_2O_2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测细胞活性,选择H_2O_2最合适实验浓度。取MC3T3-E1细胞分为空白对照组(A组)、H_2O_2组(B组)、成骨诱导组(C组)、H_2O_2+成骨诱导组(D组),对应培养后实时荧光定量PCR检测miR-21表达以及成骨标志基因Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1a1)表达,Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况,分析H_2O_2对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。然后再取MC3T3-E1细胞,分为H_2O_2组(A1组)、H_2O_2+成骨诱导组(B1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂+成骨诱导组(C1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂阴性对照+成骨诱导组(D1组);以及H_2O_2组(A2组)、H_2O_2+成骨诱导组(B2组)、H_2O_2+ siRNA-PTEN阴性对照+成骨诱导组(C2组)、H_2O_2+siRNA-PTEN+成骨诱导组(D2组);对应培养后检测成骨标志基因(Runx2、OPN、Col1a1)表达以及细胞外钙基质沉积情况,分析下调miR-21或沉默PTEN对细胞成骨分化的影响。结果结合实时荧光定量PCR检测以及MTS法结果,选择160μmol/L H_2O_2进行实验。第1、2周B组miR-21相对表达量低于A组(P<0.05),D组低于C组(P<0.05);第2周C组PTEN蛋白相对表达量均低于A、D组(P<0.05);第1、2周D组Runx2、OPN及Col1a1 mRNA相对表达量均低于C组(P<0.05),茜素红染色显示D组钙基质沉积少于C组。C1组PTEN蛋白相对表达量高于D1组(P<0.05);第1、2周B1、D1组Runx2、OPN mRNA相对表达量均高于C1组(P<0.05),第2周B1、D1组Col1a1 mRNA均高于C1组(P<0.05);茜素红染色显示C1组钙基质沉积少于B1、D1组。第1周D2组OPN、Col1a1 mRNA相对表达量高于B2、C2组(P<0.05),第3周茜素红染色显示D2组钙基质沉积明显多于B2、C2组。结论 H_2O_2抑制MC3T3-E1成骨分化可能与miR-21下调有关。     

miR-642a-5p靶向KRT19调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的研究

目的：探讨miRNA调控甲状腺癌细胞TPC-1细胞周期的潜在机制。方法：通过过表达甲状腺癌中异常表达的miRNA,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过siRNA敲低潜在靶标,检测甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力和细胞周期。通过荧光素酶报告实验检测miRNA与潜在靶标之间的关系。结果：过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降（P<0.05）。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著上升（P<0.05）。过表达miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量上升（P<0.05）、G2-M期和S期的细胞数量下降（P<0.05）。敲低miR-642a-5p后,甲状腺癌细胞TPC-1处于G1期的细胞数量下降（P<0.05）、G2-M期和S期的细胞数量上升（P<0.05）。当敲低KRT19后,甲状腺癌细胞TPC-1的细胞活力显著下降（P<0.05）。过表达miR-642a-5p后,KRT19的蛋白水平下降（P<0....     

C3H1OT1/2细胞向神经元诱导分化的方法研究

目的探讨体外诱导间充质干细胞（mesenchymal stemc ells,MSCs）系C3H1OT1/2细胞分化为神经元细胞的方法。方法取3月龄SD大鼠1只,体重200g,进行神经元细胞的原代培养及诱导上清液的收集,用细胞免疫组织化学方法进行鉴定。将C3H1OT1/2细胞进行培养,分别用β巯基乙醇（A组）和神经元原代细胞上清液（B组）作为诱导剂,对C3H1OT1/2细胞进行诱导分化;对照组（C组）不加诱导剂进行培养。采用细胞免疫组织化学方法对分化的细胞进行鉴定。结果细胞免疫化学检测原代培养细胞为神经元,表达特异标志物：神经丝蛋白（neurofilament protein,NF）和神经元特异性烯醇化酶（neuronspecifi enolase,NSE）。A组C3H1OT1/2细胞经β巯基乙醇诱导2h即表达NF和NSE,5h表达强度增强。B组C3H1OT1/2细胞经原代神经元培养上清液诱导,1d有NF和NSE表达,但表达强度比A组弱。各组NSE表达阳性率和强度均高于NF。结论化学分子和微环境体液因素均可诱导MSCs向神经元细胞分化;为MSCs通过神经分化参与脑创伤的修复提供了理论依据。     

miR-429在低氧环境中对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

目的 探讨在低氧环境中,miR-429对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。方法 在体内、外用氯化钴(CoCl₂)模拟低氧环境,采用免疫蛋白印迹(western blot, WB)检测低氧诱导因子(hypoxia inducible factor, HIF)-1α的表达验证低氧情况,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)观察骨折部位及细胞组织中miR-429的表达情况,同时检测MC3T3-E1细胞在低氧状态下的增殖与凋亡情况;通过慢病毒转染技术在MC3T3-E1细胞中过表达miR-429作为实验组,对照组为转染空载质粒细胞,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性检测、茜素红染色、WB等方法观察细胞中ALP活性、矿物质含量以及多种成骨标志物蛋白表达情况,对比两组MC3T3-E1细胞的成骨分化;在骨折模型局部注射过表达miR-429的慢病毒载体,通过Micro-CT及qRT-PCR观察骨折愈合情况。结果 在低氧环境MC3T3-...