鱼鳔膜的制备及其理化特性的研究

目的采用交联技术制备鱼鳔膜材料,检测其理化性能及细胞毒性。方法取鱼鳔经脱细胞处理后随机分为两组,交联组采用碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC]/N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)法交联处理后,行表面制孔及冻干处理;未交联组仅行表面制孔及冻干处理。观测两组材料理化性能,包括扫描电镜观察微观结构,电子万能材料试验机测试力学性能(拉伸强度及断裂伸长率),接触角测量仪检测材料亲水性,乙醇浸润法测定材料孔隙率,体外降解性能及热稳定性检测,以及红外光谱分析支架成分。取小鼠成纤维细胞L929与两组材料浸提液培养,细胞检测试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)测定细胞毒性。结果扫描电镜观测两组支架均具有多孔结构,且表面粗糙。与未交联组相比,交联组材料拉伸强度明显增高、断裂伸长率降低、孔隙率增大,差异有统计学意义(P0.05);接触角差异无统计学意义(P0.05)。两组材料降解趋势一致,最初7 d内降解较快,之后趋于平缓;各时间点交联组降解率低于未交联组,差异均有统计学意义(P0.05)。差示扫描量热法检测显示,交联组材料变性温度为(75.2±1.3)℃,高于未交联组的(68.5±0.4)℃,差异有统计学意义(t=4.586,P=0.002)。红外光谱分析,与未交联组相比,交联组生成了酰胺键中新的C=O键和N-H键,并且未引入其他新的基团。CCK-8法检测示,交联组及未交联组A值与阳性对照组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论经EDC/NHS法交联处理获得的鱼鳔膜材料具有优良的理化性能,无细胞毒性,有望作为硬膜修复材料。     

碳化二亚胺交联同种异体肌腱修复兔前交叉韧带损伤的实验研究

目的 探讨利用碳化二亚胺(EDC)交联的方法对同种异体肌腱进行预处理,改善其修复效果.方法 获取兔同种异体跟腱,应用EDC交联并肝素化,应用Ⅱ型胶原酶酶解法检测交联组和未交联组肌腱的降解率并进行比较.应用四氮唑蓝法检测EDC交联(EDC交联组)对细胞增殖率(1、3、7 d)的影响,其结果与生理盐水(阴性对照组)及苯酚(阳性对照组)进行比较.取28只雄性SD大鼠,每组14只,随机分为EDC交联组(埋植EDC交联肌腱)和未交联组(埋植未交联肌腱),分别于术后1、4周取材(每一时间点取7只),行HE染色观察免疫反应并进行炎症反应分级比较.用交联组和未交联组肌腱对兔前交叉韧带损伤进行修复,1、3、6个月取材做光镜和扫描电镜观察,对比不同时间段腱骨愈合情况.结果 EDC交联并肝素化组降解率[(6.26±3.16)%]低于未交联组[(30.70±10.24)%],差异有统计学意义(t=14.200,P=0.025).培养1、3、7 d.阴性对照组和EDC交联组的相对增殖度分别与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,表1),EDC交联组肌腱无明显细胞毒性作用;1、4周未交联组和交联组炎症反应分级,差异有统计学意义(P＜0.05).移植后组织学和电镜扫描观察可见未交联组愈合比交联组慢.结论 EDC交联并肝素化的肌腱,其稳定性增强,抗酶降解能力提高,免疫原性降低,且腱骨愈合加快.

Abstract：

Objective To explore a new way to improve the repairing effect of tendon allograft by pretreatment with ethyldimethylaminopropyl carbodiimide (EDC) cross-linking. Methods Rabbits' tendon allografts were obtained by lyopyilization.The allografts were then cross-linked and heparinized by EDC and N-hydroxy-succinimide (NHS) respectively.The degradation rate,cytotoxicity and histocompatibility of the cross-linked allografts were detected and compared with those of untreated at different time points.The injured anterior cruciate ligaments (ACL) were repaired by tendon allografts with and without cross-linking pretreatment in rabbits.The tendon-bone healing was observed and compared by light microscopy and scanning electron microscopy (SEM) at 1,3,6 months. Results The degradation rate of the pretreated tendon allografts [(6.26 ± 3.16)％] was significantly lower than that of the unpretreated [(30.70 ± 10.24)％]( t = 14.200,P = 0.025 ).The pretreated tendon allografts were atoxigenic and produced significantly lower inflammatory reaction ( P ＜ 0.05 ).The pretreated tendon allografts also showed more powerful capability of repairing ACL injury and shorter time of tendon-bone healing. Conclusion Tendon allografts cross-linked and heparinized by EDC/NHS may promote tendon-bone healing with improved stability,degradation and biocompatibility.     

脱细胞牛心包构建引导骨再生膜的初步研究

目的制备具有良好生物相容性和适宜降解吸收时间的引导骨组织再生（guided bone regeneration，GBR）膜材料。方法采用0．25％Trypsin＋0．5％Triton X-100酶联脱细胞法对新鲜牛心包进行脱细胞处理，将脱细胞牛心包（A组）、甘油保存脱细胞牛心包（B组）、碳化二亚胺[1-ethyl-3-（3-dimethylamino propyl）carbodiimide hydrochloride，EDAC]交联脱细胞牛心包（C组）、甘油保存EDAC交联脱细胞牛心包（D组）4种膜材料分别植入38只SD大鼠背部皮下，不植人材料为E组。于2、4、8和16周分别处死大鼠7、12、12和7只，观察周围组织反应及材料的降解吸收情况。结果4种材料植入动物体内均有不同程度的炎性反应和纤维囊膜形成。术后4周，A组和C组的炎性反应轻微，纤维包膜变薄。A组膜材料吸收替代时间为8周左右，C组吸收替代时间为16周左右；16周时B组和D组材料仍有纤维包膜。结论EDAC交联脱细胞牛心包具有良好的生物相容性和理想的降解性能，在动物体内能顺利被自体组织替代。     

经碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺交联的Ⅱ型胶原海绵的制备

[目的]用碳化二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethyl ami-nopropyl)carbodiimide,EDC]/N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)对Ⅱ型胶原海绵进行交联,评价了交联前后材料理化性能的改变,探讨其在软骨组织工程方面应用的可行性。[方法]提取Ⅱ型胶原后,通过真空冷冻干燥法冻干成多孔海绵材料后,室温下交联24h,再次冻干成为Ⅱ型胶原海绵支架材料。采用激光共聚焦显微镜、扫描电镜、拉力测试机等手段对海绵材料的结构及性能进行分析。将绿色荧光蛋白(GFP)标记的兔软骨细胞种植到交联后的Ⅱ型胶原支架材料后,观察细胞生长状况。[结果](1)交联后的海绵材料的力学性能与未交联组相比明显提高,达到(2.18±0.47)MPa;(2)交联组材料的抗胶原酶降解能力显著提高,4h后仅降解了8.28%。交联后孔径大小约为90μm,孔隙率和平衡含水率平均为93.39%和97.78%;(3)软骨细胞在Ⅱ型胶原海绵上生长状况良好。[结论]交联后的Ⅱ型胶原海绵保持其优良的理化特性和生物相容性,同时又有效地提高了力学性能和抗降解能力。     

去甲二氢愈创木酸交联猪去细胞脊髓支架及其相关特性研究

目的 :观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)交联猪去细胞脊髓支架的结构及性能。方法:取成年猪胸段脊髓,采用2次冻融化学萃取法对脊髓行去细胞处理,再用2.5g/L NDGA溶液进行交联处理。在体视显微镜及扫描电镜下分别观察猪去细胞脊髓支架及NDGA交联猪去细胞脊髓支架的结构。采用Instrong生物力学测试仪检测正常猪脊髓(正常组)、猪去细胞脊髓支架(未交联支架组)及NDGA交联猪去细胞脊髓支架(交联支架组)的极限抗拉强度和弹性模量。取第4代SD大鼠星形胶质细胞分别与未交联支架和NDGA交联支架联合培养,采用CCK8法检测细胞生长率,评价支架的细胞毒性。将未交联支架和交联支架分别包埋至SD大鼠背部皮下,在1、2、4周取出检测其包埋后的降解率,并取包埋4周的组织行HE染色,评价支架的生物相容性。结果:正常组脊髓组织为圆柱状,呈乳白色,横切面可见灰质与白质分界明显;未交联支架基本保持原组织外形,呈白色半透明状,白质与灰质无明显分界;交联支架质地稍变硬,呈棕黄色。扫描电镜显示未交联支架与交联支架内的基质纤维保存完好,相互交织成网状三维结构,内部孔洞连通。未交联支架的抗拉强度及弹性模量较正常组显著性下降(P0.05);交联支架抗拉强度和弹性模量较未交联支架显著性增强,两组比较有统计学差异(P0.05),但仍低于正常组(P0.05)。星形胶质细胞在交联支架及未交联支架中均生长良好,共培养时间越久,OD值越大,两组相同时间点OD值比较无统计学差异(P0.05)。相同时间点交联组在体内降解率明显低于未交联组(P0.05)。包埋4周后未交联组支架HE染色可见炎症细胞及成纤维细胞浸润,并且有肉芽组织聚集在内部孔隙中;交联组支架炎症细胞明显减少,且可见新生血管状结构。结论:NDGA交联猪去细胞脊髓支架与未交联猪去细胞脊髓支架比较三维结构未见明显改变,但生物力学性能和体内抗降解能力显著性增强,生物相容性提高,且无明显细胞毒性,可作脊髓损伤修复的支架材料。     

碳化二亚胺交联犬颈总动脉脱细胞基质的组织相容性初步研究

目的应用碳化二亚胺交联同种异体的犬颈总动脉脱细胞基质，对其进行组织相容性评价。方法应用多步骤除垢剂-胰酶作用制备犬颈总动脉脱细胞基质，按脱细胞基质与碳化二亚胺质量比1：1和1：2制备不同交联程度的脱细胞基质。通过体外降解率，细胞毒性MTT实验和大鼠皮下埋置实验对交联效果和组织相容性进行评价。结果经碳化二亚胺交联的脱细胞基质形态上无明显变化，HE染色纤维排列规则无断裂。0．1％Ⅱ型胶原酶作用下，交联的脱细胞基质的降解率较单纯脱细胞基质显著降低，交联程度高的脱细胞基质较交联程度低的脱细胞基质降解率低。细胞毒性MTT结果显示碳化二亚胺交联的脱细胞基质细胞毒性分级为0-1级，无细胞毒性。大鼠皮下埋置实验显示交联的脱细胞基质抵抗组织酶降解的能力显著提高，同时免疫反应减轻。交联程度高，效果越明显。结论碳化二亚胺交联的脱细胞基质具有良好的组织相容性和抗组织酶解能力，作为血管移植物和组织工程化血管的支架材料有广阔的应用前景。     

脱细胞牛心包羊肺动脉补片的实验研究

目的　评价脱细胞牛心包构建有活性的组织工程羊肺动脉补片的可行性。　方法　将新鲜牛心包采用酶 -去污剂联合脱细胞处理作为血管补片材料 ,从小尾寒羊颈外静脉分离血管内皮细胞和成肌纤维细胞进行传代扩增培养 ,然后分层种植到已消毒的脱细胞牛心包 ,体外培养 7d后 ,自体细胞 -脱细胞牛心包补片作为实验组 (n=5 )植入羊肺动脉 ,分别于 4周 ,6周 ,8周 ,12周和 2 4周取材 ;单纯脱细胞牛心包补片作为对照组 (n=3) ,于 4周 ,12周和 2 4周取材 ,对两组牛心包补片均进行大体观察和组织学检查 ;测定钙、胶原和弹性蛋白的含量。　结果　所有动物均存活 ,羊肺动脉补片内未见血栓 ,无明显动脉瘤样扩张 ,两组补片钙含量与正常肺动脉比较无明显差别。随补片植入时间的推移 ,弹性蛋白含量逐渐增加 ,与正常肺动脉弹性蛋白含量相似 ,显示进行性的组织重塑。　结论　自体细胞 -脱细胞牛心包羊肺动脉补片与单纯脱细胞牛心包补片在体内通过组织重塑在一定程度上均可形成有活性的血管壁组织。     

光氧化处理脱细胞牛心包构建组织工程心肌补片的实验研究

目的 探讨经染料介导光氧化处理的脱细胞牛心包构建组织工程心肌补片的可行性。方法 新鲜牛心包先脱细胞,再经光氧化法处理,消毒后种植雄性SD骨髓间充质干细胞(MSCs)。结扎雌性大鼠左冠状动脉前降支,制作心肌梗死模型,1周后将符合心肌梗死标准的大鼠随机分成3组,心肌梗死对照组(MI)、补片组(P)、种细胞补片组(P+C)分别进行干预。4周后,超声评价心功能;2周、4周取材行组织学和免疫组化检查。结果 脱细胞处理完全去除了牛心包组织中的细胞,光氧化处理使组织结构致密;种植的细胞在组织表面形成连续的细胞层。P+C组牛心包心肌补片降解程度、微血管密度在2周、4周时均较P组大。超声评价补片4周后大鼠心功能,P+C组左室射血分数(LVEF)、左室缩短分数(LVFS)均较MI组和P组大,与MI组的差异有统计学意义。结论 光氧化处理脱细胞牛心包构建的组织工程心肌补片可以延缓心功能恶化,该处理方法具有良好的应用潜力。     

EDC交联结合化学萃取制备脱细胞脊髓支架及其生物学特性研究

[目的]采用EDC(碳化二亚胺)交联结合化学萃取法制备脱细胞脊髓支架,探讨脱细胞脊髓支架制备效率,分析支架的生物学特性,观察支架能否保留细胞外基质黏多糖成分。[方法]采用EDC交联结合化学萃取法(液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1%Triton X-100+1%脱氧胆酸钠+EDC交联+液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1%Triton X-100+1%脱氧胆酸钠)处理正常脊髓20根,得到脱细胞脊髓支架(支架组);对照于正常大鼠脊髓组织(对照组)。通过HE染色检验支架组脱细胞效果,统计脱细胞脊髓支架的等级评分"优"、"良"、"一般"、"差"的百分比;选取HE染色脱细胞彻底、评分为"优"的脊髓支架,DAPI染色验证其内部细胞残留情况的等级评分是否一致为"优";通过电镜扫描观察两组内部三维结构并分析其孔径;分析脊髓组织脱细胞处理前后的含水率、孔隙率、抗酶解性的变化;通过免疫组化的方法,观察两组材料细胞外基质中黏多糖分布情况。[结果]支架组通过HE染色观察到脱细胞彻底、评分为"优"的百分比为80%;HE染色观察评分为"优"支架经DAPI染色验证其内部细胞残留量评分也为"优";其三维结构完整,其孔径均值为9.07μm;含水率为(228.14±19.39)%;孔隙率为(71.82±2.10)%;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(35.904±1.911)%;免疫组化分析鉴定细胞外基质中包含一定的黏多糖。对照组中正常脊髓经HE染色和DAPI染色观察到大量细胞;三维网孔状结构,孔径均值为40.7μm;含水率和孔隙率分别为(109.32±12.44)%和(61.18±4.19)%;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(25.704±1.030)%;细胞外基质中包含大量的黏多糖成分。[结论]EDC交联结合化学萃取法制备的支架脱细胞彻底、制备效率高,具有三维网状结构、良好的含水率、空隙率、抗酶解性,一定程度上保留细胞外基质中黏多糖成分,符合组织工程学支架制备要求,为脊髓支架提供了一种新的选择。     

SH2B1沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默Src同源性2B衔接蛋白1(SH2B1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10a与乳腺癌细胞MCF-7,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达水平。采用RNAi技术将SH2B1阴性对照质粒、si-SH2B1分别转染至MCF-7细胞,分别命名为si-NC组、si-SH2B1组,未经处理的MCF-7细胞命名为空白对照组。采用RT-PCR法检测各组MCF-7细胞中SH2B1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)mRNA表达水平;CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K及其磷酸化蛋白(p-PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p-Akt)等蛋白表达情况。结果:与MCF-10a细胞相比,MCF-7细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-SH2B1组SH2B1 mRNA及蛋白表达、S期与G_2/M期DNA量、Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著降低(P0.05);MCF-7细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G_0/G_1期DNA量、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);WB法显示,si-SH2B1组MCF-7细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达均显著低于空白对照组、si-NC组(P0.05)。结论:SH2B1沉默可抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。     

靶向干扰骨架蛋白Transgelin抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长

目的 探讨靶向干扰骨架蛋白Transgelin对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 设计并体外合成靶向Transgelin的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,将其转染人胰腺癌细胞BxPC3,采用RT-PCR、Western印迹法检测转染前后Transgelin表达的变化.成功造模胰腺癌裸鼠24只,按皮下注入细胞不同均分为3组:实验组(接种BxPC3/shRNA)、阴性对照组(接种空质粒转染细胞BxPC3/Neo)和空白对照组(接种未转染细胞BxPC3).每周测量肿瘤大小,术后第28天处死所有裸鼠,计算瘤体体积,治疗前、后裸鼠体重的变化以及抑瘤率.免疫组织化学法检测移植瘤组织切片中Transgelin和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达.结果 实验组、阴性对照组和空白对照组在各时间段的肿瘤体积增长差异有统计学意义(均P ＜0.05).实验组在第21,28天肿瘤体积显著小于阴性对照组和空白对照组(均P＜ 0.05).实验组第28天瘤重为(0.74±0.21)g,阴性对照组为(1.42±0.28)g,空白组为(1.59±0.24)g.实验组瘤重与阴性、空白对照组相比差异均有统计学意义(均P ＜0.05),抑瘤率达53.5％.实验组PCNA指数显著低于阴性对照组和空白对照组(均P＜0.05).结论 靶向封闭Transgelin基因能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在裸鼠体内的增殖及肿瘤生长.     

环状RGDfK肽对肌成纤维细胞整合素αVβ3表达调控的实验研究

目的 探讨环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-脯氨酸-赖氨酸短肽(Cyclo-RGDfK)能否提高去细胞瓣对肌成纤维细胞(myofibroblast)的黏附性能,以及RGD肽对Integrin αVβ3基因表达的调控.方法 组织块培养法获取大鼠主动脉壁肌成纤维细胞(myofibroblast),免疫荧光染色检测波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)分子在培养myofibroblast中的表达.将去细胞瓣随机分为3组(每组7个),A组:去细胞瓣未接受任何处理;B组:去细胞瓣与交联剂1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)反应36h;实验组:去细胞瓣与EDC反应36h后,再与Cyclo-RGDfK反应24h,使RGD肽共价结合于去细胞瓣.将第5代myofibroblast分别接种至各组瓣膜上.HE染色和扫描电子显微镜观察细胞黏附增殖状况,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Integrin αVβ3基因在各组的表达.结果 免疫荧光染色显示原代培养的myofibroblast生长良好,高表达Vimentin和α-SMA分子.HE染色和扫描电子显微镜显示myofibroblast在实验组的生长好于A组和B组,半定量PCR示Integrin αVβ3 mRNA在实验组的表达高于A组和B组,差异有统计学意义(P＜0.05),而A组与B组比较差异无统计学意义(P=0.900).结论 Cyclo-RGDfK促进myofibroblast在去细胞瓣上黏附,此效应可能与RGD肽上调Integrin αVβ3基因表达有关.     

碳化二亚胺交联并肝素化的血管脱细胞基质的组织相容性

目的应用碳化二亚胺交联同种异体犬颈总动脉脱细胞基质,并且利用其双功能交联特性将肝素共价结合于脱细胞基质上,评价其组织相容性。方法应用多步骤除垢剂-胰酶作用制备犬颈总动脉脱细胞基质,按脱细胞基质、碳化二亚胺和肝素的质量比1∶2∶1制备交联并肝素化的脱细胞基质,采用甲苯胺蓝染色法定性检测肝素结合;采用细胞毒性四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测其细胞相容性;采用大鼠皮下埋植实验检测其体内组织相容性,并进行免疫组织化学和透射电镜检测。结果碳化二亚胺交联并肝素化的脱细胞基质的形态和强度无明显变化,甲苯胺蓝染色定性地显示了肝素与支架的结合;细胞毒性实验显示碳化二亚胺交联并肝素化的脱细胞基质浸提液提高了内皮细胞的增值率;大鼠皮下埋植实验显示,交联并肝素化的脱细胞基质有良好的组织相容性,并且促进成肌纤维细胞浸润。结论碳化二亚胺交联并肝素化的脱细胞基质具有良好的组织相容性,同时能够促进细胞的再分布过程。     

肝细胞肝癌SMMC-7721细胞中FOXQ1基因沉默对奥沙利铂的化疗增敏作用

目的观察沉默肝癌SMMC-7721细胞中叉头框Q1(FOXQ1)基因的表达对奥沙利铂敏感性的影响。方法 (1)构建靶向FOXQ1基因的shRNA重组慢病毒载体及阴性对照重组慢病毒载体,再筛选最佳的干扰序列。(2)将细胞分为3组:干扰组(转染FOXQ1-sh RNA-1重组慢病毒载体)、阴性对照组(转染阴性对照重组慢病毒载体)及空白对照组(未做任何处理)。检测3组细胞中FOXQ1 mRNA及其蛋白的表达。(3)将另一部分细胞分为干扰组、阴性对照组、空白对照组、干扰+奥沙利铂、阴性对照+奥沙利铂组与空白对照+奥沙利铂组,给予相应处理,培养48 h后检测细胞凋亡率。细胞活力实验方法同细胞凋亡率实验。结果 (1)FOXQ1-shRNA-1组细胞中FOXQ1 mRNA及其蛋白的表达水平均低于FOXQ1-shRNA-2组和FOXQ1-shRNA-3组(P0.05),为最佳干扰序列。(2)干扰组细胞中FOXQ1 mRNA及其蛋白的表达水平均低于阴性对照组和空白对照组(P0.05),但阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。(3)不管是在加入OXA条件下,还是在未加入OXA条件下,干扰组细胞的凋亡率均高于阴性对照组与空白对照组(P0.05),细胞活力均低于阴性对照组和空白对照组(P0.05),但同条件下阴性对照组和空白对照组的细胞凋亡率和细胞活力比较差异均无统计学意义(P0.05);在干扰组、阴性对照组和空白对照组中,均是加入OXA组的细胞凋亡率高于未加入OXA组(P0.05),加入OXA组的细胞活力低于未加入OXA组(P0.05)。结论沉默FOXQ1基因的表达能够有效诱导SMMC-7721细胞的凋亡,并增加其对奥沙利铂的化疗敏感性。     

异种脱细胞真皮基质在深Ⅱ度烧伤创面处理中的应用分析

目的分析在深Ⅱ度烧伤创面处理中异种脱细胞真皮基质的应用效果。方法随机选取2017年8月至2019年8月本院深Ⅱ度烧伤患者90例,随机分为异种脱细胞真皮基质敷料覆盖创面组(研究组,n=45)和凡士林纱布覆盖创面组(对照组,n=45)两组,统计分析两组患者的临床疗效、换药次数、愈合时间、瘢痕评分、并发症发生情况。结果在治疗的总有效率方面,研究组为95.6%(43/45),对照组为80.0%(36/45),前者显著高于后者(P0.05)。研究组患者的换药次数显著少于对照组(P0.05),愈合时间显著短于对照组(P0.05)。研究组患者治疗后较治疗前的色泽、厚度、柔软度、血管分布评分及温哥华瘢痕评定量表总分降低幅度均显著高于对照组(P0.05)。在并发症发生率方面,研究组为6.7%(3/45),对照组为22.2%(10/45),前者显著低于后者(P0.05)。结论在深Ⅱ度烧伤创面处理中异种脱细胞真皮基质的应用效果较凡士林纱布好。     

17-AAG联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡的影响。方法 1采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT比色法)测定不同浓度(17-AAG:0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0及5.000 0μmol/L;紫杉醇:0.001 0、0.010 0、0.100 0及1.000 0μmol/L)、不同时间(24、48及72 h)17-AAG、紫杉醇单药和联合处理(17-AAG:0.625 0μmol/L,紫杉醇:0.001 0、0.010 0、0.100 0及1.000 0μmol/L)后FRO细胞的增殖抑制率。2采用流式细胞仪检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0μmol/L、紫杉醇:0.100 0μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0μmol/L,紫杉醇的浓度为0.100 0μmol/L)FRO细胞的细胞周期变化及凋亡率。3采用胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9检测试剂盒检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0μmol/L、紫杉醇:0.100 0μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0μmol/L,紫杉醇的浓度为0.100 0μmol/L)后FRO细胞中的Caspase-3和Caspase-9活性。空白对照组均不加任何药物,只加培养液。结果 1同时点空白对照组、各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率随浓度升高而逐渐升高,任2组比较差异均有统计学意义(P0.05);各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率在24、28及72 h逐渐增高,任2组比较差异均有统计学意义(P0.05);同时点同浓度情况下,17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率均高于单独用药组(P0.05)。各时点17-AAG与紫杉醇联合的q值均大于1.15,两者之间呈协同作用。2 17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率均明显高于空白对照组(P0.05),且17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率高于17-AAG组和紫杉醇组(P0.05)。3 17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于空白对照组(P0.05);且17-AAG联合紫杉醇组细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于17-AAG组和紫杉醇组相应指标(P0.05)。结论 17-AAG和紫杉醇均可明显抑制FRO细胞的增殖并诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系。     

牛磺酸治疗通过激活自噬介导对老年大鼠骨量和骨强度的保护作用

目的探讨牛磺酸(NHS)对老年大鼠骨量流失的影响,并探讨可能的机制。方法将30只大鼠随机分为对照组(CON)、模型组(MOD)以及牛磺酸组(NHS),每组10只;其中NHS组大鼠每天接受牛磺酸(2 g/kg)治疗12周;待治疗结束后通过Micro-CT检测、HE染色切片、血清指标、蛋白质印迹观察治疗效果,探讨可能的机制。结果治疗12周后,与MOD组相比,三点弯曲试验、Micro-CT和HE染色切片结果显示NHS组大鼠的骨小梁数量、骨强度和骨密度(bone mineral density,BMD)得到明显改善。NHS组大鼠最大载荷和弹性模量、BMD、TV/BV、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp较OVX组明显改善(P<0.05)。和MOD组比较,NHS治疗后大鼠血清BLAP、P1NP、TRACP-5b和β-CTX水平明显降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。和MOD组比较,NHS组Runx2、BMP2、Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平明显上调,而P62表达水平显著下调,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论NHS可能通过激活自噬,从而对年龄引起的骨量丢失起到保护作用。     

TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用的实验研究

目的探讨TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用。方法 TNF-α重组慢病毒感染SGC-7901胃癌细胞为实验组,并设立阴性对照组以及空白对照组,采用RT-PCR检测3组细胞中TNF-αmR NA的表达情况,ELISA检测3组细胞上清液中TNF-α蛋白含量,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况。结果 PCR实验观察到TNF-αmR NA荧光条带24h后稳定表达。测得三组培养液中TNF-α含量,实验组[(2.6926±0.7563)ng/ml]明显高于阴性对照组[(0.9326±0.3091)ng/ml]和空白对照组[(0.8552±0.2768)ng/ml],且差异均有统计学意义(P均0.01),而阴性对照组和空白对照组之间差别无统计学意义(P0.05)。在流式细胞实验中,实验组细胞凋亡率明显高于其他组,差异有统计学意义(P0.05),而阴性对照组和空白对照组差别无统计学意义(P0.05)。结论TNF-α重组慢病毒可以感染SGC-7901胃癌细胞,并在胃癌细胞中稳定表达并自分泌TNF-α,诱导杀伤胃癌细胞。     

ω-3多不饱和脂肪酸对老年股骨骨折术后免疫反应的影响

[目的]探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFA)对老年股骨骨折患者术后炎性介质及T淋巴细胞亚群的影响。[方法]将42例股骨骨折手术治疗老年患者随机分为常规胃肠外营养组(TPN组)及ω-3 PUFA+TPN治疗组(PUFA组),每组21例。两组患者于术后第1、3、5 d分别抽取静脉血,检测血清淀粉样蛋白(SAA)、C反应蛋白(CRP)和8-异前列腺素F_2a (8-iso-PGF_2a),此外,流式细胞仪检测T细胞亚群。[结果]术后1 d两组间SAA、CRP及8-iso-PGF_2a的差异无统计学意义(P0.05),但是术后3 d和5 d,PUFA组的SAA、CRP和8-iso-PGF_2a均显著低于TPN组(P0.05)。随术后时间推移,两组患者的SAA、CRP和8-iso-PGF_2a均显著下降(P0.05)。术后1 d两组间CD4、CD8、CD4/CD8和NK比率的差异无统计学意义(P0.05);术后3 d PUFA组的CD4、CD4/CD8和NK比率显著高于TPN组(P0.05),而两组间CD8比率的差异无统计学意义(P0.05);术后5 d PUFA组的CD4、CD4/CD8和NK比率显著高于TPN组(P0.05),而PUFA组CD8比率显著低于TPN组(P0.05)。随术后时间推移,两组患者的CD4、CD4/CD8和NK比率均显著增加,而两组的CD8比率均显著下降,不同时间点间差异有统计学意义(P0.05)。[结论]ω-3 PUFA可显著抑制老年股骨骨折患者术后炎性介质的表达,改善细胞免疫功能。     

槲皮素对软骨肉瘤线粒体抑制机制的研究

[目的]探讨槲皮素对软骨肉瘤细胞线粒体功能的影响及作用机制。[方法]软骨肉瘤细胞培养传代后随机分为加药组、激动剂组和空白对照组,加药组加入槲皮素,激动剂组加入槲皮素及740Y-P,空白对照组仅保留肿瘤细胞。干预48 h后检测细胞活性,线粒体膜电位(ΔΨ_m),细胞内活性氧(ROS)水平,Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。[结果]加药组细胞活力低于激动剂组(P0.05)。加药组线粒体ΔΨ_m低于激动剂组及空白对照组(P0.05);加药组ROS含量高于激动剂组及空白对照组(P0.05)。加药组p-Akt表达水平低于激动剂组及空白对照组(P0.05)。Bax表达水平加药组高于激动剂组及空白对照组(P0.05);Bcl-2表达水平加药组低于激动剂组及空白对照组(P0.05)。[结论]槲皮素能够通过调节PI3K/Akt通路,降低软骨肉瘤细胞线粒体的生理功能,启动线粒体诱导的细胞凋亡程序。