膜联蛋白A_2介导β_2糖蛋白Ⅰ/抗β_2糖蛋白Ⅰ复合物刺激单核细胞上调表达组织因子

目的探讨膜联蛋白A2是否介导β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)/抗β2糖蛋白Ⅰ结合于单核细胞表面,从而诱导单核细胞表达组织因子。方法利用纯化的抗磷脂综合征(APS)患者血清IgG、单克隆抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、抗膜联蛋白A2抗体等刺激血液单核细胞及THP-1单核细胞株,通过凝血因子Ⅹa的生成量,判断细胞组织因子活性的表达;把带有膜联蛋白A2cDNA的载体转染入HEK293T细胞,然后用β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ复合物刺激,观察转染前后HEK293T细胞的组织因子表达情况;采用RNA干扰技术封闭单核细胞株THP-1膜表面的膜联蛋白A2,观察组织因子的表达情况。结果 APS患者血清IgG和抗β2糖蛋白Ⅰ抗体显著增强单核细胞组织因子的表达;HEK293T细胞转染膜联蛋白A2cDNA后组织因子的mRNA和蛋白的表达量较转染前增高;采用RNA干扰降低膜联蛋白A2表达后单核细胞株THP-1的组织因子表达显著降低。结论细胞表面膜联蛋白A2介导β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ诱导单核细胞表达组织因子活性,是APS血栓形成的机制之一。     

急性淋巴细胞性白血病的免疫学分型和临床的关系

人淋巴细胞从功能上可分为T、B两个细胞群。目前常用抗T细胞血清和羊红细胞玫瑰花试验鉴定T细胞;用表面膜免疫球蛋白(SmIg)检查、IgG—Fc段受体和补体C_3受     

IL-2基因修饰对树突状细胞表面粘附分子的影响

为研究白细胞介素 2 (IL -2 )基因修饰后对树突状细胞 (DC)表面粘附分子的变化 ,分析白细胞介素 -2对树突状细胞的活化作用。制备小鼠骨髓树突状细胞 ,用重组腺病毒介导白细胞介素 -2基因修饰 ,通过流式细胞仪分析树突状细胞表型特征。结果 ,树突状细胞经IL -2基因修饰后 ,能分泌高水平的白细胞介素 -2〔3.2 5ng·(1× 1 0 6)·m1 - 1·2 4h- 1〕 ,其表面MHC -Ⅱ、B7-1、B7-2和CD4 0表达明显上调。提示IL -2基因修饰树突状细胞 ,能促进树突状细胞的成熟 ,上调树突状细胞表面与抗原提呈相关的免疫粘附分子的表达     

用抗受体抗体诱生带有内影象的抗独特型抗体:一种可能的AIDS疫苗

作者提出,用抗T4细胞上人类免疫缺陷症病毒(HIV)受体的抗体(Id或Ab-1)诱生的抗独特型抗体(抗-Id或Ab-2)可作为AIDS疫苗。Ab-2具有T4细胞表面受体的内影象,在功能上与受体一致,且Ab-2对HIV抗原的变异不敏感,故能与HIV发生毒株非依赖性的交叉反应,阻碍HIV对T4的粘附,中和其感染性。为了验证这一假说,作者制备了抗T4受体的小鼠单克隆Ab-2,并在体外检测其特性。结果表明,小鼠Ab-2不能提供主动保护作用。有效的疫苗应按下述方法进行研制:     

接种重组牛痘病毒的恒河猴对人AIDS病毒的T细胞应答

作者用表达AIDS病毒(LAV)包膜糖蛋白gp41和gp110的重组牛痘病毒(V-env5)免疫恒河猴,产生了抗LAV env 抗原的抗体,并首次证明了对AIDS病毒的T细胞免疫。用V—env5 2×10~7或2×10~8PFU皮内接种8只恒河猴,其中7只在12周后加强免疫1次,加强免疫后4周取血清,用蛋白质印迹法证明7只加强免疫的恒河猴血清全部与     

单克隆抗胸腺细胞球蛋白的制备、检定和动物试验

[Bieber CP et al:Transplantation 31(4):283,1981(英文)] 最近发展的单克隆抗体技术提出了一种适于临床使用的高滴度、标准化、有效的抗人T细胞抗血清的生产方法。加上对T细胞花环抑制活性的快速而敏感的功能测定方法的应用,有可能用花环抑制滴度对许多细胞系所产生的抗体同时进行筛选。本文报告对人T细胞有特异性的抗人胸腺细胞单克隆抗     

IFN-γ、IL-12对B7-1转染肝癌细胞诱导T淋巴细胞活化的影响

目的探讨B7—1基因转染肝癌细胞与IFN-γ、IL-12联合在体外诱导T细胞活化的能力。方法酶联免疫吸附反应(ELISA)检测联合诱导瘤苗刺激淋巴细胞IFN-γ、IL-12蛋白合成及细胞表面CD4、CD8、CD25的表达。MTT法检测瘤苗对淋巴细胞增殖作用的影响。结果HepG2／B7—1细胞诱导淋巴细胞表达IL-2、IFN-γ,其蛋白质含分别为875pg／ml和1246pg／ml;而联合IL-12、IFN-γ后能进一步诱导IL-2、IFN-γ的蛋白质合成,较各自无细胞因子组明显提高(P＜0．05)。细胞表面CD4、CD8、CD25的表达显著增加。两者联合促进了淋巴细胞的增殖,在E／T=10：1时,较HepG2组明显增大。结论IL-12、IFN-γ增强经B7—1基因转染的肝癌细胞(HepG2／B7—1)诱导淋巴细胞产生IL-2、IFN-γ的能力;IL-12、IFN-γ可能通过调节B7—1分子的生物学活性影响其对T细胞的活化。     

兔抗乐果抗血清制备的初步实验研究

目的:对制备兔抗乐果抗血清进行初步研究。方法:采用生产乐果的中间体硫磷酯与1,4-二氨基丁烷反应合成乐果半抗原,利用碳二亚胺法,将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和包被原。将合成的免疫原免疫新西兰白兔6次,制备抗乐果的抗血清。用间接ELISA检测抗血清的效价,用间接竞争ELISA检测与其他结构类似物的交叉反应率。结果:通过偶联,获得免疫原和包被原,半抗原与BSA和OVA的偶联比分别为13∶1和11∶1。免疫原免疫新西兰白兔获得的抗乐果抗血清效价分别为1∶256和1∶128;与氧化乐果的交叉反应率为23%,与其他所测结构类似的农药交叉反应率均小于2%。结论:通过免疫原免疫新西兰白兔,获得抗乐果的抗血清,但其抗血清效价较低,与制备检测试剂盒的要求尚存在较大的差距。     

健康血清阳性者对5种HCMV蛋白的T细胞增殖应答

细胞介导免疫在宿主抗人巨细胞病毒(HCMV)感染应答中起重要作用,为了开发HCMV亚单位疫苗,有必要确定哪一种HCMV蛋白能诱导人类保护性免疫应答。为此作者评估了23名血清阳性和6名血清阴性健康者的外周血单核细胞(PBMC)对5种HCMV融合蛋白的T细胞增殖应答,并探讨了HCMV感染者的人白细胞抗原(HLA)型别与T细胞对特异性HCMV蛋白的反应性间是否存在联系。制备的5种纯化蛋白经十     

与伤寒杆菌Vi抗原具有交叉反应的大肠杆菌B多糖的纯化及免疫化学特性:B多糖与大肠杆菌Kl抗原交叉反应的初步证据

大肠杆菌B含有与抗Vi抗体起反应的多糖。本文叙述其血清学和物理化学特性以及与K1抗血清的反应。大肠杆菌B多糖是以悬浮于生理盐水中的菌细胞用澳化十六烷基三甲按及牛血清白蛋白沉淀、并经DEAE一琼脂糖层析等程序制备的酸性多糖。     

用于发展合成口服疫苗的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的表位图

不耐热肠毒素B亚单位(LT-B)含有引起LT-特异性抗体应答的大部分优势免疫表位.作者用天然LT和重组LT-B免疫小鼠,检测分泌物和血清中抗LT-B抗体应答的特性,并确定抗LT-B的T细胞或B细胞的表位图,以期构建既能刺激粘膜又能产生血清抗LT-B抗体应答的合成肽.作者从产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)H10407株及大肠杆菌K-12株JM83转化体中分别制备LT及重组LT-B,并在都柏林沙门菌中表达重组LT-B.小鼠或于0天口服含25μgLT的磷酸缓冲盐水(PBS)0.25ml,或于0、1和2天各口服含10~(10)CFU都柏林沙门菌EL23株的PBSO.25ml,或于0、7和14天各免疫含50μg合成肽的PBSO.25ml.采集粪浸液及血清,用ELISA测定抗LT-B抗体.体外刺激LT-B特异性T细胞以评估LT-B特异性T细胞的增殖和细胞因子分布.通过细胞因子特异性ELISA检测由LT     

N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘小鼠模型肺脏树突状细胞功能的影响

目的 观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预支气管哮喘模型后,其肺脏树突状细胞(DC)表面分子表达的变化及其对T淋巴细胞分化的影响.方法 卵蛋白(OVA)致敏、激发裸鼠(BALB/C)哮喘模型后随机分成对照(C)组、地塞米松干预(B)组和NAC干预(A)组,每组16只.ELISA法进行检测血清总IgE、肺泡灌洗液(BLAF)和肺脏DC和DO11.10(OVA特异性转基因小鼠)脾脏T淋巴细胞共培养液上清中白细胞介素(IL)13和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 A、B组血清IgE水平低于C组(P<0.01).A、B组BALF中IL-13低于c组,而IFN-γ水平升高于C组(P<0.01).A、B组肺脏DC表面分子CD80、CD86、MHC Ⅱ下调.与C组比较,小鼠肺脏DC和T淋巴细胞共培养后,A、B组上清IL-13水平明显降低,IFN-γ水平明显升高(P<0.01).结论 NAC可以抑制哮喘免疫应答反应向Th2方向偏移,且它的治疗作用可能是通过肺脏DE来实现的.     

一种用鲎试验测定灭活内毒素的新方法(英文)

本文建立了一种用鲎试验测定灭活内毒素的新方法,其主要步骤包括:(1)样品与内毒素的预保温反应;(2)反应混合物的有限稀释;(3)用ELISA鲎试验测定残留的内毒素,样品灭活内毒素的活性(EIA50)定义为能灭活加入的内毒素的50％时的初始内毒素浓度。采用这种方法,可以观察到人血清和血浆,鲎血浆,鲎阿米巴细胞溶解物(LAL)以及多粘菌素B对内毒素的定量灭活作用。LAL对不同菌株的革兰氏阴性菌产生的内毒素的灭活作用有显著不同。本文建立的方法可以消除样品对鲎试验的干扰,适用于筛选和评价抗内毒素物质。     

新生牛小肠粘膜细胞轮状病毒受体的研制——Ⅰ.新生牛肠粘膜轮状病毒受体抗体的制备

利用新生牛小肠粘膜细胞为抗原,免疫纯系 Balb/C 鼠。获得鼠抗牛小肠粘膜细胞血清。用提纯的抗 BRV-IgG,建立 ELISA 方法,用以检测以上抗血清。结果表明,抗血清中含有抗 BRV 受体抗体,这种抗体可以在体外模拟 BRV 和兔抗 BRV-IgC 发生特异性结合。该方法可用于抗 BRV 受体单克隆抗体的筛选。     

狼疮肾炎患者肾组织核因子-κB和外周血树突状细胞的表达

目的探讨狼疮肾炎（LN）肾核因子（NF）-κB（NF-κB）的表达和外周血树突状细胞（DCs）表面标志的改变。方法对40例LN患者肾组织,用碱性磷酸酶-小鼠抗碱性磷酸酶免疫复合物法（APAAP）测定NF—κB表达。采用密度梯度离心法分离外周血DCs。结果LN患者肾组织中,NF-κB在肾小球及肾小管均呈高水平的表达;他克莫司处理后的DCs较未处理组CD80^＋、CD86^＋、HLA—DR^＋表达下降;他克莫司处理前后对DCs的形态无明显影响;他克莫司处理后的DCs能明显抑制T细胞增殖及T细胞向Th2细胞转化。结论他克莫司在体外可抑制LN患者外周血DCs的成熟,NF—κB在LN肾组织局部的表达与LN的发生和发展有关。     

树突状细胞诱导免疫效应细胞对胰腺癌细胞PC3凋亡和抑制的实验研究

目的 观察人树突状细胞(Dendritic cells，DC)体外扩增及其诱导免疫效应细胞对胰腺癌细胞系(PC3)凋亡和抑制作用。方法 用淋巴细胞分离液分离抗凝新鲜全血以获得单核细胞(Peripheral blood mononudear cells，PBMC)，用贴壁法获取DC和去DC的单核细胞(即免疫效应细胞)，并分别用人粒／巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)、人白介素4(IL-4)、人肿瘤坏死因子(TNF—α)、PC3肿瘤相关抗原(PC3TAA)和人白介素2(IL-2)培养正常人或胰腺癌病人DC和免疫效应细胞，5—6天后将DC和免疫效应细胞混合培养1—2天并计数细胞。观察DC生长状况，检测DC表型(CD1a、CD80、CD83、CD86)。用乳酸脱氢酶法(1actate dehydrogenase)和MTT法检测DC诱导免疫效应细胞对PC3的抑制作用，TdT法检测培养上清液对PC3细胞的凋亡作用。结果 体外多种细胞因子和肿瘤相关抗原能有效引起DC增殖，并高表达CD80、CD83、CD86；体外实验中，酶法：最大抑制(杀伤)效率为62．4％，MTT法：最大抑制(杀伤)效率为98．1％；DC培养上清液和DC混合免疫效应细胞培养上清液均能有效地引起PC3凋亡。结论 DC在抗胰腺肿瘤中有重要作用。     

肿瘤特异性独特型疫苗对B细胞淋巴瘤的长期疗效

位于肿瘤细胞表面的免疫球蛋白(Ig)具有独特性(独特型,Id),可为免疫系统识别.动物和人体试验表明,抗独特型单克隆抗体可使肿瘤消退,但可能会因为编码独特型抗原决定簇的基因突变而使肿瘤逃逸.接种源于肿瘤细胞的独特型疫苗可以避免此种情况发生,并且可诱生多克隆抗体和T细胞免疫应答,保护动物免受肿瘤的攻击,为此,作者对肿瘤特异性独特型疫苗治疗B细胞淋巴瘤的疗效进行了临床研究.作者选取了41例非何杰金B细胞淋巴瘤患者,每个病人都行淋巴结活检获取肿瘤细胞.将肿瘤细胞与K6H6B5细胞融合制备Ig,利用免疫学和分子生物学方法筛选与肿瘤基因型相配的Ig.将Ig用亲和层析纯化     

慢性乙型肝炎患者不同免疫状态下外周血T细胞表面程序性死亡受体1的表达

目的 检测慢性乙型肝炎(CHB)患者不同免疫状态下外周血CD4+、CD8+T细胞表面程序性死亡受体1(PD-1)表达,探讨其与血清HBV DNA载量、ALT之间的关系.方法 收集CHB患者免疫耐受期(A组,24例)、免疫活化期(B组,64例)、HBeAg阴性(C组,23例)和11例健康对照者(D组)外周血,采用流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达,以实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA,同时检测ALT.结果 B、C组CD4+、CD8+细胞表面PD-1表达显著高于A、D组(P＜0.05).C组CD8+T细胞表面PD-1表达显著高于B组(P＜0.05).相关性分析发现,不同免疫状态下CHB患者CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达水平与HBV DNA载量及ALT均无相关性.结论 CHB患者外周血T细胞表面PD-1表达与机体免疫状态有关.肝脏炎症损伤是影响PD-1表达的重要因素,HBV DNA载量不是主要影响原因.     

在重组活菌上表达乙型肝炎病毒前S2区的两个表位

作者用大肠杆菌外膜LamB蛋白载体,在大肠杆菌表面表达了乙型肝炎病毒前S2区的两个表位,并对它们的特性和免疫原性进行了研究。分别将编码前S2A区132-145氨基酸残基和前S2B区153-171氨基酸残基的DNA,插到经PAJC264质粒修饰的LamB蛋白第153位氨基酸的位置,内切酶位点是BamHI。然后纯化DNA,亚克隆,培养克隆的细菌。用兔抗-LamB血清、兔多克隆抗-HBs血清和抗变性HBsAg颗粒的抗血清(含抗-HBs和抗-前S2)检测表达产物。用表达LamB-前S2A和LamB-前S2B的活菌体,分别免疫BALB/c     

异品系皮肤移植大鼠γδT细胞数量和细胞因子分泌

目的 观察异品系大鼠皮肤移植排斥反应发生发展过程中外周血γδT细胞数量变化及其γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素4(IL-4)的分泌情况.方法 建立Wistar→SD大鼠异晶系皮肤移植模型,以SD大鼠自体皮肤再植为对照,于术后0、4、8 d和10～13 d(排斥时)取外周血用免疫荧光染色和流式细胞仪检测γδT细胞数量,并于体外扩增该细胞,用ELISA双抗夹心法测定培养上清中IFN-γ及IL-4的含量.结果 异晶系皮肤移植大鼠术后外周血γδT细胞数量和培养上清中IFN-γ和IL-4水平均显著升高,且显著高于自体皮肤再植同时间点对照组.结论 异品系皮肤移植排斥反应早期外周γδT细胞即可被活化,数量增多,且能同时分泌IFN-γ和IL-4,或同时存在分泌Th1和Th2类细胞因子的2个亚群,参与排斥反应的发生过程.