八种人类肿瘤细胞系IL—6基因表达的研究

采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测了八种人类肿瘤细胞系ＩＬ－６基因转录产物的表达，并用依赖ＩＬ－６的ＭＨ６０．ＢＳＦ２细胞增殖ＭＴＴ染色法检测其中５种细胞系培养上清液中ＩＬ－６活性水平，结果发现，八种细胞系中有七种ＩＬ－６基因为阳性表达，其中５种细胞系培养上清液中有不同水平的ＩＬ－６活性。以上结果可为进一步研究提供依据。     

肝部分切除促进肿瘤细胞生长的机制研究

作者为验证肝部分切除对肿瘤细胞生长的促进作用，探讨其发生机制，将１８只ＢＵＦ大白鼠接种了７３１６Ａ肝癌细胞，并分为三组：Ａ组施行单开腹；Ｂ组行７０％肝切除；Ｃ组行单开腹并加转化性生长因子（ＴＧＦ－β）治疗。术后测量肿瘤体积；取Ａ组及Ｂ组术后５天的血清和脾粘着细胞加入混合淋巴细胞培养（ＭＬＲ）及ＣＣＬ－６４细胞培养中；将ＴＧＦ－β也加入ＭＬＲ和７３１６Ａ肝癌细胞培养中。结果表明，Ｂ组及Ｃ组大白鼠，肿瘤细胞生长速度明显增快（Ｐ＜０．０１）；Ｂ组的血清及脾粘着细胞明显抑制ＭＬＲ及ＣＣＬ－６４细胞增殖（Ｐ＜０．０５）；ＴＧＦ－β也显著抑制ＭＬＲ，但对７３１６Ａ肝癌细胞增殖无作用。提示肝部分切除后的血清中存在着ＴＧＦ－β生物活性，ＴＧＦ－β抑制了免疫活性细胞的增殖，从而造成了有利于肿瘤细胞生长的生物环境。     

吸入性麻醉药对乳腺和大脑肿瘤细胞基因表达的调控

在临床实践中,基因表达技术已广泛应用于疾病的诊断、预后和治疗。我们假设吸入性麻醉药（volatileanesthetics,VA）能够影响肿瘤细胞的基因表达。在体外条件下,分别将神经元细胞系的SH-SY5Y细胞和乳腺细胞系的MCF7细胞暴露于各种吸入性麻醉药,如恩氟烷、异氟烷、地氟烷、氟烷、七氟烷或氧化亚氮（N2O）,然后对所得的微阵列基因表达谱进行分析研究。我们发现,不同的挥发性麻醉药对不同水平的细胞培养基和不同时间点的基因表达有显著影响。吸入性麻醉药对一些用于预测乳腺癌遗传特征的基因也能产生影响。本研究提示VA以一种独特的、时间依赖的方式调节乳腺和大脑肿瘤培养细胞的基因表达。     

腹腔镜中不同膨腹气体对肿瘤细胞体外及动物模型体内生长的比较

目的 :研究不同膨腹气体 :二氧化碳 (CO2 )、氦气 (He)、一氧化二氮 (N2 O)在模拟气腹条件下对肿瘤细胞体外及动物模型体内生长有无影响。方法 :第 1组用MTT法测定人肝癌细胞株SMMC 772 1在CO2 、He、N2 O“气腹”后及对照组 2 4、4 8、72h的比色值。第 2组观察带瘤Wister大鼠在CO2 、He、N2 O“气腹”后肿瘤生长情况和血清谷丙转氨酶 (AST)、谷草转氨酶 (ALT)、碱性磷酸酶 (ALP)和 -谷氨酰转肽酶 (γ -GT)的变化及穿刺点转移情况。结果 :第 1组实验中 ,CO2 组在“气腹”后 4 8h内肿瘤细胞明显增殖 ,而He组肿瘤细胞生长则显著受抑。第 2组实验中 ,CO2 组肿瘤体积、重量及腹水体积均显著增加 ,血清ALT、AST、ALP值显著升高 ,而He组肿瘤体积、重量及腹水体积均显著减少 ,血清ALT、AST、ALP值较低。N2 O组肿瘤体积、重量及腹水体积和血清ALT、AST、ALP值亦较CO2 组减少。 4组穿刺点转移率没有显著差别。结论 :不同膨腹气体引起的肿瘤细胞生长及代谢功能的改变可能与“气腹”后细胞生存环境 ,特别是腹腔内环境的 pH值改变有关。腹腔镜用于恶性肿瘤患者时 ,应注意CO2 对肿瘤细胞和机体可能产生的不良影响 ,可选择He或N2 O代替     

BCG激活淋巴细胞对膀胱肿瘤细胞的抗肿瘤作用研究

利用ＢＣＧ激活的外周血单核细胞（ＰＢＭＮＣ）作为肿瘤杀伤细胞———ＢＡＫ细胞，观察其对移行上皮肿瘤细胞系ＢＴＡ和１１例原代培养细胞的细胞毒作用。结果表明，单独ＢＣＧ对培养肿瘤细胞没有细胞毒作用；ＮＫ细胞仅表现较低的细胞毒作用，在效靶比４０∶１对ＢＴＡ的特异性杀伤率为１７．６３％，对原代细胞为１２．４９％；ＢＡＫ细胞分别为３１．２６％和１９．１６％（Ｐ＜０．０５）；ＬＡＫ细胞分别为３５．５３％和２４．２１％；对ＢＴＡ细胞的细胞毒作用ＬＡＫ细胞＞ＢＡＫ细胞（Ｐ＜０．０５），对原代细胞的细胞毒作用ＬＡＫ细胞和ＢＡＫ细胞之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。认为ＢＡＫ细胞是不同于ＬＡＫ细胞的一类肿瘤杀伤细胞，在ＢＣＧ抗肿瘤的过程中起着重要作用。     

含人γ-干扰素基因真核表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的 构建含人γ-干扰素（IFN-γ）基因的真核表达载体（pcDNA3-IFN-γ),并观察其在肝癌细胞株中的表达情况。方法 将IFN-γ的cDNA亚克隆于哺乳动物载体（pcDNA3）上，经脂质体介导将pcDNA3-IFN-γ导入人肝癌细胞株SMMC-7721和QGY-7701中，通过高剂量G418选择培养得出抗性克隆。RT-PCR检测IFN-γ基因在转染细胞内有无转录，ELISA法检测转染细胞内IFN-γ的表达水平。结果 IFN-γ基因在转染细胞内有无转录，ELISA法检测转染细胞内IFN-γ的表达水平。结果 IFN-γ基因的mRNA仅存在于pcDNA3-IFN-γ导入的肝癌细胞内。其细胞培养上清液存在高水平的IFN-γ。结论 含IFN-γ基因的真核表达载体能在肝癌细胞中稳定表达。     

骨肉瘤体外多药耐药模型（R—OS—732）的建立及其意义

目的：体外建立骨肉瘤多药耐药模型（Ｒ－ＯＳ－７３２）。方法：小剂量递增阿霉素浓度与骨肉瘤细胞（ＯＳ－７３２）连续培养，使阿霉素浓度达３０ｎｇ／ｍｌ，总体培养６个月，共传代４９次，初步建立体外骨肉瘤多药耐药模型（Ｒ－ＯＳ－７３２）应用组织学技术判断Ｒ－ＯＳ－７３２和ＯＳ－７３２细胞的形态学差异，应用免疫组化技术检测Ｐ－糖蛋白（Ｐ－１７０蛋白）拓扑异构酶－Ⅱ（ＴＯＰＯ－Ⅱ）谷胱甘肽－巯基转移酶（ＧＳＴ     

人类胰腺癌Ki—67基因表达的研究

目的 应用原位杂交结合免疫组化分析胰腺癌Ｋｉ－６７基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译，研究该基因结构和功能表达的关系。方法 胰腺癌４０例，正常胰腺及良性病变９例；扁桃体组织及Ｈｅｌａ细胞作为阳性对照。通过地高辛标记的Ｋｉ－６７ｃＲＮＡ探针原位杂交和Ｋｉ－６７等效单克隆抗体的免疫组化分析该基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译。结果正常胰腺及良性病变Ｋｉ－６７ 指数均小于２０％；胰腺主分化腺癌、低分化腺癌各２０例，     

人类胰腺癌Ki—67基因表达的研究

目的 应用原位杂交结合免疫组化分析胰腺癌Ｋｉ－６７基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译,研究该基因结构和功能表达的关系。方法 胰腺癌４０例,正常胰腺及良性病变９例;扁桃体组织及Ｈｅｌａ细胞作为阳性对照。通过地高辛标记的Ｋｉ－６７ｃＲＮＡ探针原位杂交和Ｋｉ－６７等效单克隆抗体的免疫组化分析该基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译。结果正常胰腺及良性病变Ｋｉ－６７ 指数均小于２０％;胰腺主分化腺癌、低分化腺癌各２０例,     

中华眼镜蛇毒膜毒素对人类膀胱癌细胞EJ-m3作用的体外研究

目的 研究中华眼镜蛇毒膜毒素(MT-12)对人膀胱癌细胞株EJ-m3的作用,并探讨其作用机制.方法 以穿透人工基底膜能力为依据筛选具有体外高侵袭能力的膀胱癌细胞;采用四氮唑蓝(MTY)法检测MT-12不同浓度对EJ-m3细胞的生长抑制率;同时流式细胞仪检测不同浓度MT-12作用24h后细胞中趋化因子受体CXCR4的表达.结果 经过反复筛选获得膀胱癌细胞EJ的体外高侵袭力亚系,EJ-m3.MT-12可有效抑制FJ-m3细胞的生长,具有浓度依赖性特点.MT-12对EJ-m3作用72h的ICSO是0.66ug/mL;流式细胞仪检测结果 显示,在0.125～0.5ug/mL,MT-12组随着药物浓度的增加Cx-CR4的表达逐渐减弱(P=0.020).结论 MT-12可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制可能与CXCR4在膀胱癌细胞中高表达有关.MT-12有潜力成为新的抗膀胱癌药物.     

高表达微小RNA145前列腺癌细胞系PC-3的建立

目的建立高表达微小RNA145前列腺癌骨转移细胞系,为研究其在骨转移中的作用机制提供依据。方法构建pMSCV-miR-145质粒,制备逆转录病毒pMSCV-vector和pMSCV-miR-145并感染前列腺癌骨转移细胞株PC-3,筛选并鉴定稳定细胞株PC-3/pMSCV-vector与PC-3/pMSCV-miR-145。结果转染pMSCV-miR-145实验组和pMSCV-vector对照组的质粒转染率均为80%～90%。荧光实时定量RT-PCR显示实验组细胞miR-145表达水平与对照组比较差异达2000倍,差异有统计学意义（P〈0.05）。表明筛选出的稳定细胞株中,miR-145的表达水平升高。结论高表达微小RNA145前列腺癌细胞系的成功建立,为探索miR-145在前列腺癌骨转移中的作用奠定基础。     

透析器复用时IL—1β,TNF—α和IL—6基因表达及其血浆水平的研究

目的 观察透析器复用对白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)基因表达及其血浆水平的影响。方法 22例维持性血透患者随机分为铜仿膜(7例)、PMMA膜(7例)与聚砜膜(8例)组,采用ELISA、反转录多聚酶链反应及细胞原位杂交方法对细胞因子水平进行自身对照研究。结果 透析器复用后各细胞因子水平均有下降,但无显著差异;而其基因表达水平较初用有显著下降。结论 在一定的质量控制条件下,应用福尔马林消毒复用透析器可能会改善透析膜的生物相容性,这对减少透析费用及长期透析的有关并发症的发生有利。     

Texosome的研究进展

肿瘤细胞源Exosome（Texosome）是多种肿瘤细胞分泌的小囊泡。含有肿瘤的共同抗原,富含热休克蛋白分子、MHCI类分子等免疫信息分子以及信号转导分子等,在肿瘤的生物学活动中具有重要。地位。深入研究,将对许多肿瘤生物学现象的解释、新型疫苗的开发和肿瘤免疫逃避机制的阐述产生重大影响。     

阿霉素上调肿瘤细胞Fas基因表达并诱导凋亡的实验研究

目的 研究化疗药物阿霉素(ADM)对肿瘤细胞Fas凋亡基因的调控，并探讨其致凋亡机制。方法 逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)比较经。ADM处理前后肿瘤细胞胃癌ADM细胞系SGG-7901、MGC-803和肺癌细胞系A-549的Fas mRNA的表达水平，同时观察其对抗Fas抗体的敏感性，并用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率。结果 所有3种肿瘤细胞在ADM作用下Fas表达水平显著增强，差异有统计学意义(P＜0．05)，同时肿瘤细胞凋亡率明显增加(凋亡率分别为40．3％、43．6％、54．4％)。ADM能增加肿瘤细胞对Fas抗体的敏感性。结论 ADM上调肿瘤细胞Fas的表达，ADM与Fas抗体联合应用将增强肿瘤细胞的凋亡率，有一定的抗肿瘤临床应用前景。     

反义c－Ha－rasDNA对人胃癌转化细胞致癌性的抑制

作者人工合成了一条１５聚反义ｃ－Ｈａ－ｒａｓＤＮＡ，此反义ＤＮＡ与ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因转录起始区域的序列互补。其可以在转录和翻译水平上阻断ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因表达，使胃癌转化细胞的一些恶性表型（包括生长速度、软琼脂中集落形成，裸鼠致瘤性和分化程度）发生逆转。在反义ＤＮＡ的５’－端共价连接一个补骨脂素基团后，其生物学活性显著增强，和靶基因序列不完全配对的对照寡聚核苷酸链不具有上述肿瘤抑制效应。结果提示：反义ＤＮＡ及其衍生物是进行肿瘤基因治疗有效工具之一。     

RNA干扰抑制yrdC蛋白表达对人胃癌细胞株BGC-823体外增殖能力的影响

目的:构建针对人yrdC基因siRNA的重组腺病毒Ad-shyrdC并观察其转染人胃癌细胞株BGC-823后对细胞体外增殖能力的影响。方法:筛选高效抑制yrdC蛋白表达的RNAi位点,并构建表达siRNA的重组腺病毒,转染人胃癌细胞株BGC-823后以Western印迹法鉴定细胞yrdC蛋白表达的变化;同时通过MTT法、流式细胞术分别测定BGC-823细胞增殖活性和增殖指数的变化。结果:成功构建了抑制人yrdC基因siRNA的重组腺病毒Ad-shyrdC;转染BGC-823细胞后可明显抑制yrdC蛋白表达,并使所测定的细胞MTT值和细胞增殖指数提示BGC-823细胞增殖活性下降(P<0.05)。结论:腺病毒介导的RNAi能有效地抑制BGC-823细胞中yrdC蛋白表达,并降低其增殖活性。     

人肝细胞癌细胞系HCC-9903的建立及其生物学特性研究

目的 新建1株人体肝细胞肝癌细胞系,为肝癌研究提供新的、理想的实验模型。方法 以手术切除肝癌标本作原代培养,建立细胞系。通过光镜、电镜、倍增时间、生长曲线、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体分析、刀豆球蛋白凝集试验、裸鼠接种、AFP、HBV及端粒酶检测,对其生物学特性进行分析。结果 第29天完成原代培养。形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征。染色体数目分布在49－135,众数为60－67,1q^(i)和t(6,11)等为其标记染色体;有四射体和核内复制出现。裸鼠接种成瘤,瘤细胞形态与原病人的病理切片相似。端粒酶检测强阳性。结论 该细胞系符合建系标准,是1株新建的人体肝细胞肝癌细胞系,命名为HCC－9903。其生物学特性研究内容及检测手段较国内外已建肝恶性肿瘤细胞系更为全面。     

联合应用c－Ha－ras，c－myc反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的抑制作用

作者联合应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ，ＡＳＯ－ｍ）对人膀胱癌细胞株进行作用，观察到ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ能明显抑制癌细胞中ｒａｓＰ２１、ｍｙｃＰ６２的表达，抑制了癌细胞ＤＮＡ合成及生长增殖，经ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ处理后癌细胞裸鼠致瘤力下降。这一结果表明：针对多个癌基因联合应用反义寡聚脱氧核苷酸，可能给膀胱癌的治疗提供新的途径，有进一步探索的价值     

体外构建的小片段发夹RNA对肿瘤细胞端粒酶基因表达的干扰

目的:探讨针对端粒酶hTERT基因的小片段发夹RNA对人肿瘤细胞（HeLa）端粒酶基因的干扰及对肿瘤端粒酶的抑制作用。方法:体外合成制备shRNA，并用磷酸钙转染法转染HeLa细胞，分别用TRAP－银染法和PCR－EIA法检测端粒酶活性。结果:将制备的46个碱基的小片段发夹RNA转染HeLa细胞后端粒酶活性明显下降。结论:shRNA对肿瘤端粒酶hTERT基因表达有明显的干扰作用, 可望为临床开展对其他肿瘤端粒酶基因干扰抑制的实验研究奠定基础。     

乳腺癌循环肿瘤细胞临床应用的相关研究

乳腺恶性肿瘤的复发和转移,是乳腺癌患者的主要致死原因。如何早期发现乳腺恶性肿瘤细胞的转移并及时予以治疗,是目前研究的热点。循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的发现有望为乳腺癌的诊断和治疗提供新的思路。检测CTC有助于早期发现肿瘤的微转移,指导个体化治疗,评价治疗效果及预后。我们对CTC的研究进展进行综述。