腹泻症候群致泻性大肠埃希氏菌血清型及毒力基因检测

目的：通过对腹泻症候群中致泻大肠埃希菌的血清型和多重PCR检测,了解本地区致泻大肠埃希菌的血清群、型分布规律,所携带毒力基因及相互之间的相关性,为腹泻症候群中致泻大肠埃希菌的检测、鉴定提供科学依据,以提高阳性株的检出率。方法：对本地区2012-2013年腹泻症候群监测医院门诊未使用过抗生素腹泻患者的稀便、水样便、黏脓便或脓血便标本通过増菌、各种选择性培养基筛选出病原菌,后经生化试验、多重PCR试验和血清型分型试验进行鉴定。结果：本次检测共检出65株血清凝集致泻大肠埃希菌,分属EPEC、EIEC、ETEC,以EPEC为主,占83.08%,共8个血清型,其中血清型O55：H59、O128：H67占58.47%;共检出4种相关毒力基因,其中escV 49株（75.38%）。未分血清型菌株27株,检出相关毒力基因共5种,分属EPEC、EIEC、ETEC、EAEC,其中escV 15株（55.56%）。结论：本地区腹泻症候群中血清学阳性致泻大肠埃希菌以EPEC为主,常见血清型为O55：H59、O128：H67,毒力基因为escV、escV＋bfpB、invE、elt。未分血清型致泻大肠埃希菌毒力基因为escV、escV＋bfpB、invE、elt、astA,与已分型菌株携带基因基本一致。腹泻患者的大肠埃希菌检测中,在传统的细菌分离培养、生化试验、血清学鉴定的基础上,有必要进行大肠埃希菌的毒力基因检测,以提高阳性检出率,避免漏检,提高致泻性大肠埃希菌的诊断。     

2015-2016年江阴市致泻性大肠埃希菌监测及其毒力基因分析

目的了解2015-2016年江阴市致泻性大肠埃希菌[肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)]的感染、分布及其毒力基因的携带情况。方法对2015-2016年哨点医院提供的感染性腹泻样本进行实时荧光定量PCR检测,确定其致病型别及其携带的毒力基因。结果 359份腹泻标本中,检出致泻性大肠埃希菌31份,检出率8.64%,其中EAEC 15份,检出率4.18%,EPEC 13份,检出率3.62%,ETEC 3份,检出率0.84%,未检出EIEC及EHEC。15株EAEC中,携带astA基因8株,携带aggR+pic基因6株,携带astA+aggR+pic基因1株。13株EPEC均携带eae基因,3株ETEC均携带estI基因。致泻性大肠埃希菌主要集中在夏秋季节高发,2015年主要以EPEC为主,2016年主要以EAEC为主。结论江阴市致泻性大肠埃希菌主要以EAEC和EPEC两个型别为主,携带的毒力基因呈多态性,显示其致病力和侵袭力具有多样性和复杂性,应加强监测。     

社区腹泻患者感染致泻大肠埃希菌分布与耐药性分析

目的了解社区腹泻患者感染致泻大肠埃希菌(Diarrheagenic E.coli,DEC)的常见类型及耐药性,为制定有效治疗措施提供参考依据。方法收集医院2013年7-11月442例门诊腹泻患者粪便标本,采用针对肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、非典型EPEC(ATEC)、肠产毒素性大肠埃希菌(ETEC)、肠凝聚性大肠埃希菌(EAEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)6种类型DEC共11对致病基因(escV、bfpB、stx1、stx2、elt、estIa、estIb、invE、astA、aggR、pic)的特异性引物对分离得到的大肠埃希菌进行多重PCR测定;应用微量稀释法检测DEC对常用抗菌药物的敏感性。结果 442例门诊腹泻患者中130例分离到DEC,占29.4%,其中10例同时分离到两种致病菌,6例分离到同一种致病菌包括两种基因型;共分离到147株DEC,包括EAEC100株占68.0%、ETEC7株占4.8%、ATEC9株占6.1%、EIEC和STEC各1株,未分型29株占19.7%。结论社区DEC以EAEC最为常见,且出现ATEC感染;DEC对常用抗菌药物的耐药性因致病性不同而异,临床治疗需考虑DEC类型并加强耐药性监测。     

大肠埃希菌所致儿童急性腹泻流行病学调查及耐药性分析

目的 分析大肠埃希菌在急性腹泻儿童中的流行病学和耐药性特征.方法 收集2019年1-12月期间于芜湖市第五人民医院就诊的564例急性腹泻儿童的粪便样本,培养后鉴定,用PCR法扩增大肠埃希菌的毒力基因uida、eae、aggR、bfpB、escV、stx1,用血清凝集法鉴定致病性大肠埃希菌,用琼脂稀释法进行常见抗生素的药...     

2010年福建南平及永安监测点致泻大肠杆菌的监测报告

目的:为了解福建省腹泻病人中致泻大肠杆菌的感染情况。方法:应用多重PCR或单重PCR方法检测致泻大肠杆菌的EPEC/EHEC eaeA基因、EHEC stx基因、EAEC aggR基因、EIEC ipaH、EIEC virA、ETEC ST、ETEC LT、EPEC bfp基因。API 20E生化鉴定条进行生化试验。血清学鉴定。结果:2010年度共分离得19株致泻大肠杆菌,检出率为10.9%。1株EAEC;1株tEPEC;4株aEPEC;13株ETEC。19株分离的致泻大肠杆菌经API 20E鉴定均为大肠埃希菌。1株tEPEC与EPEC三种多价诊断血清型均不凝集,而1株aEPEC血清型为O111:K58(B4)。13株ETEC菌株血清型:多数为O6:K15,1株O25:K19(L),3株未能分型。结论:监测结果对于我们了解福建省致泻大肠杆菌感染情况,预警潜在发生疫情的可能性有其重要性。这些菌种的获得可以为下一步研究其毒力特征、分子分型及耐药性积累原始材料。     

北京市通州区致泻性大肠埃希菌病原特征分析

目的 了解北京市通州区2016年—2019年腹泻患者致泻性大肠埃希菌病原学特征和耐药情况。方法 对通州区2016年—2019年门诊腹泻监测病例的粪便标本进行致泻性大肠埃希菌的分离培养,利用荧光PCR方法进行菌株毒力基因检测,应用MIC法进行耐药试验。结果 2016年—2019年通州区DEC菌株检出率为13.05%(217/1 663),检出率逐年增高。20岁～39岁年龄组DEC检出率最高,其次为0岁～5岁组和≥60岁组。EAEC为主要型别,其次为ETEC和EPEC,不同年龄组的DEC型别构成不同。ast A和pic是EAEC主要的毒力因子,ETEC以lt、sth、stp基因为主,部分菌株也含有ast A和pic基因。DEC菌株对头孢唑林、氨苄西林、磺胺异恶唑耐药率较高,对碳青霉烯类、多肽类及三代头孢较为敏感,多重耐药菌株占60.37%。结论 通州区DEC以EAEC为主,毒力基因组合具有多样性,ast A和pic可在不同型别菌株中转移。菌株多重耐药情况比较严重,耐药基因易传播,应重视临床抗生素的使用。     

感染性腹泻样本中致泻性大肠埃希菌的检测结果分析

致泻性大肠埃希氏菌可导致人、动物感染,引起食物中毒、尿道感染、肠道感染、脓毒症或脑膜炎症等。主要分为5类,即肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）、肠粘附性大肠埃希菌（EAEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）。为了解平罗县感染性腹泻样本中致泻性大肠埃希氏菌的感染情况,2011年4—12月对平罗县3家哨点医院收集到的感染性腹泻监测病例的粪便标本进行致泻性大肠埃希氏菌的检测和分析。     

2014—2015年淮安市腹泻患者致泻大肠埃希氏菌病原学特征分析

目的了解淮安市腹泻患者中致泻大肠埃希菌感染情况、毒力基因、耐药性以及分子分型,为致泻大肠埃希氏菌防治提供依据。方法对2014—2015年淮安市各哨点医院和社区医院腹泻门诊患者的粪便标本运用多重PCR筛查和生化试验检测致泻大肠埃希菌,检测出菌株的进一步做药敏试验和分子分型。结果在549份腹泻标本中共检出致泻大肠埃希菌39株,检出率为7.10%。其中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)18株(46.15%)检出最高,其余依次为肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)8株(20.51%)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)7株(17.95%)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)5株(12.82%)和侵袭性大肠埃希菌(EIEC)1株(2.56%)。药敏结果显示,39株致泻大肠埃希菌中1种以上耐药菌27株,占41.25%;最高耐药达到9耐,其中四环素和萘啶酸耐药率,分别为53.84%、51.28%。脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果显示,39株致病性大肠埃希菌有不同的带型,且带型有密切的亲缘关系。EAEC单独聚类,除zx14352和zx14395外,其他带型的相似度都超过50%。结论淮安市2014—2015年致泻大肠埃希菌感染主要以EAEC为主。菌株耐药性强,多重耐药谱广。菌株的基因型呈多态性分布,有流行相关性。     

2021年浙江省湖州市致泻性大肠埃希菌病原学特征分析

目的 研究2021年浙江省湖州市致泻性大肠埃希菌分离株的检出情况、主要毒力基因、耐药性以及分子分型特征。方法 对2021年哨点医院腹泻患者粪便标本和市场采集的食品标本进行分离,运用多重荧光定量PCR方法检测其毒力基因,并对其中104株进行耐药性检测和脉冲场凝胶电泳分子分型。结果 病例源中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)检出率最高为60.66%,食品源中也是EAEC检出率最高,为92.86%。DEC引起的发病人群以20岁～39岁年龄组最高,发病高峰在6月—8月。耐药率最高依次为氨苄西林(63.46%)、四环素(62.50%)、萘啶酸(57.69%)。经Xba I酶切后,对EAEC和ETEC进行分别聚类,EAEC相似度为41.7%～100.0%,ETEC相似度为40.7%～100.0%。结论 2021年湖州市检出的致泻性大肠埃希菌以EAEC为主,对氨苄西林的耐药率最高。建立本地PFGE分子分型数据库,为DEC防控提供数据支撑。     

泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染状况及 病原学特征分析

摘要:目的　了解泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染状况、毒力基因、分子分型以及耐药性情况,为致泻大肠埃希氏菌防治提供依据。方法　对2013年泰州市215份腹泻病人粪便标本进行多重PCR鉴定和分离培养,并对分离的致泻大肠埃希氏菌菌株进行生化鉴定、脉冲场凝胶电泳（Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE）分子分型以及药敏试验。结果　215份腹泻病人粪便标本共检测出致泻大肠埃希氏菌30株,其中EPEC 20株（占9.30%）,EAEC 5株（占2.33%）,ETEC 5株（占2.33%）;PFGE结果表明,30株致泻大肠埃希氏菌PFGE带型种类多,各亲缘关系较近,但无100%的同源菌,同时PFGE分析结果表明在同一个粪便中有2种不同致泻大肠埃希氏菌感染情况存在;药敏试验表明,30株致泻大肠埃希氏菌对阿莫西林、四环素耐药性最高,3耐以及以上占63.33%。结论　泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染普遍存在,并以EPEC、EAEC、ETEC感染为主,菌株的耐药性较强,耐药谱广;基因型呈多态分布,且具有流行相关性。     

食品中致泻性大肠埃希菌PCR确认试验检测的探讨

目的 建议修订GB 4789.6—2016《食品安全国家标准食品微生物学致泻大肠埃希氏菌检验》PCR确认试验中，大肠埃希菌ATCC25922不宜作为检测肠道集聚性大肠埃希菌(EAEC)毒力基因的阴性对照菌株。方法 参照GB 4789.6—2016,采用市面在售的2种不同品牌规格致泻性大肠埃希菌核酸检测试剂盒进行PCR确认试验。结果 阴性对照菌株大肠埃希菌ATCC25922在2种不同品牌规格致泻性大肠埃希菌核酸检测试剂中均检测出pic基因，存在PCR确认实验过程中阴性对照失控现象。结论 PCR确认试验中大肠埃希菌ATCC25922作为阴性对照菌参与检测EAEC毒力基因，会影响试验结果的判读，建议采用等效标准菌株(如ATCC8739)作为阴性对照菌株参与试验。     

2018-2019年江苏省食源性疾病中致泻大肠埃希氏菌流行特征及耐药性分析

目的 了解江苏省食源性疾病患者中致泻大肠埃希氏菌的病原学特征、流行状况和耐药性特征,为其预防控制和指导临床合理用药提供科学依据。 方法 从江苏省各设区市哨点医院共收集24 292例食源性疾病患者的粪便或肛拭子标本进行致泻大肠埃希氏菌检测,采用实时荧光定量PCR进行毒力基因分型,采用微量肉汤稀释法进行药敏实验。 结果 致泻大肠埃希氏菌检出率为2.48%。EAEC(36.48%)、EPEC(31.85%)及ETEC(30.00%)为主要毒力基因型。致泻大肠埃希氏菌在不同年龄（x2=33.428, P <0.001）、不同季节（x2=131.452, P <0.001）间检出率差异有统计学意义,<1岁年龄段及夏季检出率最高。致泻大肠埃希氏菌对氨苄西林耐药率最高（71.85%）;多重耐药率为64.81%。 结论 EAEC在江苏省食源性致泻性大肠埃希菌中最常见。夏季感染ETEC可能性大。多重耐药率高于往年,应加强耐药性监测。     

多重实时荧光PCR检测食品中致泻性大肠埃希菌

目的快速诊断鉴定致泻性大肠埃希菌及其毒力基因和型别情况,为疾病预防控制提供快速、准确的实验室依据。方法依据《GB 4789.6-2016食品微生物学检验致泻性大肠埃希菌检验》和《2017年国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》,采用多重实时荧光PCR技术,根据扩增曲线的荧光信号类型确定待测目标菌是否含致泻性大肠埃希菌,并判断其致病型别。结果于2017年上半年,按国家食源性致病菌监测计划,抽检42份市售生畜肉、水果、蔬菜食品,结果检出5份样品含致泻性大肠埃希菌,5株菌均为肠聚集性大肠埃希菌(EAEC),其中4株毒素类型是uid A、ast A,另1株毒素类型是uid A、agg R+pic。结论在食品微生物及致病因子监测工作中,应用PCR技术深入分子水平检测致泻性大肠埃希菌,有助于建立致泻性大肠埃希菌的快速准确检验机制,有效控制传染源,为今后细菌鉴定工作提供参考。     

盐城市2018年婴幼儿腹泻病原因子及其特征分析

目的了解盐城市婴幼儿腹泻的病原因子及其特征,为婴幼儿腹泻病防控提供参考依据。方法对盐城市2018年202例腹泻婴幼儿粪便标本进行肠道致病菌和诺如病毒检测,并对检出致病菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药敏试验。结果 202份婴幼儿腹泻粪便标本,共36份检出致病菌,其中沙门菌19株,阳性率为9.4%;致泻性大肠埃希菌16株[含astA的肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)15株和含escV的肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)1株],阳性率为7.9%;肠产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)、肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)和肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)未检出;福氏志贺菌1株,阳性率为0.5%;诺如病毒Π型24份,阳性率为11.9%,诺如病毒其他基因型未检出。结论盐城市婴幼儿腹泻病原因子以诺如病毒Π型、沙门菌和肠聚集性大肠埃希菌为主,肠聚集性大肠埃希菌和沙门菌对阿米卡星和庆大霉素耐药率高,对亚胺培南高度敏感。     

太原地区携带OI一28毒力基因组岛致泻大肠埃希菌性小儿腹泻

目的探讨携带OI-28毒力基因组岛致泻大肠埃希菌在小儿腹泻中的病原学作用。方法在山西省儿童医院采集257例腹泻病患儿粪便,做肠道病原菌常规培养和致泻大肠埃希菌血清学分型鉴定,用PCR和DNA斑点杂交检测致泻大肠埃希菌EHEC OI-28毒力基因组岛中与RTX相关的5个毒力基因。结果257例腹泻病患儿检出病原菌206株(80.16%)。其中大肠埃希菌149株(57.98%),其他肠道致病菌57株(22.18%)。血清分型检出致泻大肠埃希菌EPEC 3株(2.01%)、ETEC 2株(1.34%)、EHEC 2株(1.34%),其余142株为"疑似致泻大肠埃希菌"(55.25%)。149株大肠埃希菌中OI-28 5个基因全阳性者21株(14.09%),1个基因阳性者8株(5.37%),2个基因阳性者2株(1.34%)。21例携带OI-28毒力基因组岛大肠埃希菌感染的腹泻患儿,以3岁以下小儿为主(80.95%)。结论携带OI-28毒力基因组岛大肠埃希菌是夏季小儿腹泻的重要病原菌之一。     

福建省致泻大肠埃希菌的实验室考核分析

目的分析福建省疾控中心微生物检验科实验室致泻大肠埃希菌的质控考核结果,总结经验,促进监测工作质量提高及防控疫情暴发中实验室检测的作用。方法福建省CDC微生物检验科实验室于2014—2016年参加4次国家相关部门组织的致泻大肠埃希菌考核,依据每次考核作业指导书及相关国家标准要求选择检测方法,对考核株进行分离培养、生化鉴定、血清分型及多重PCR或荧光多重PCR基因检测。结果各考核结果均获满意,考核株均为肠出血性大肠埃希菌,但血清型有些不同,包括O55:H7、O157:H7、O26:H11,检出毒力基因存在uidA、escV、eae、stx1、stx2的不同组合。结论福建省CDC微生物检验科实验室质控考核结果,具备致泻大肠埃希菌检测能力。随着病原的变异,今后应加强产志贺毒素大肠埃希菌亚型分型能力及其他类致泻大肠埃希菌的考核。     

分子生物学方法鉴定由自毙鼠分离的细菌

目的 对1株由自毙鼠分离的细菌（X175菌株）进行属、种及型的鉴定。方法 ①采用16S rDNA对X175菌株进行种属鉴定;②应用荧光PCR检测X175菌株是否存在致泻性大肠埃希菌常见毒素基因（stx1/stx2/eae、lt/st、aggR/ipaH）及大肠埃希菌O104、H4基因;③应用PCR检测X175菌株是否存在肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O104∶H4的9个毒力基因。结果 ①经16S rDNA鉴定,X175菌株与大肠埃希菌埃希菌属的一些菌株相似度达99%,进化树显示X175菌株与大肠埃希菌O104∶H4菌株的亲缘关系较近;②大肠埃希菌O104基因和ipaH基因检测结果均为阳性,stx1/stx2/eae、lt/st、aggR、志贺菌/沙门菌、H4等基因检测结果均为阴性;③肠出血性大肠埃希菌O104∶H4九个毒力因子检测结果均为阴性。结论 X175菌株为大肠埃希菌O104弱毒型菌株,H抗原和其他一些特性还需进一步研究。     

一起疑似大肠埃希菌所致食物中毒的实验室检测分析

目的 通过对广东省某地某学校发生的一起疑似食物中毒事件的采样样品的实验室检测和分析,为今后做好食源性疾病的病原体检测工作提供参考依据。方法 采集广东省某地某学校发生的一起疑似食物中毒事件中病例和从业人员肛拭子、剩余食物留样和环境样本,进行包括致泻性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、副溶血弧菌等常见食源性致病菌,以及产气荚膜梭菌、邻单胞菌和气单胞菌属等检测,对分离到的致泻性大肠埃希菌采用PCR法进行毒力基因检测,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对肠集聚性粘附大肠埃希氏菌（EAEC）进行分子分型分析。结果 66份样本经分离培养和生化鉴定,其中6份样品检出致泻性大肠埃希氏菌,检出率9.09%（6/66）;对检出样本进行致泻性大肠埃希菌PCR检测,分离EAEC毒力基因阳性30株以及产气荚膜梭菌3株,其余病原体均未检出。PFGE分析显示30株EAEC菌种间相似性<70％,不具有同源性。结论 在食源性疾病暴发中,需加强流行病学调查、病例临床症状的分析和总结,同时规范采样方法以提高实验室的检出率,真正发挥实验室检测的作用。     

浙江省腹泻患者致泻性大肠埃希菌血清型分布及其鉴定效率的评价

目的 了解浙江省致泻性大肠埃希菌（DEC）血清型分布并探讨其血清学鉴定分类方法的鉴定效率。方法 对2009年7月至2013年6月浙江省腹泻症候群病原谱监测网络菌株库中的696株DEC菌株（通过毒力基因鉴定）开展血清学凝集试验,比较毒力基因和血清学鉴定分类的结果。结果 696株DEC中288株（41.4%）能明确O抗原型别,分属于35种O血清群。171株（24.6%）H血清凝集,分属于21种H型。肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）、产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）和肠出血性大肠埃希菌（EHEC）凝集率分别为31.9%（130/408）、70.6%（127/180）、31.5%（29/92）和14.3%（2/14）,分属于30、18和15种O血清群,1株EHEC为O157∶H7。EAEC和EPEC血清群相对较多样化,而ETEC则相对集中,不同类型DEC可具有同一血清群/型。根据血清学结果可分类的75株DEC中,42株毒力基因和血清学分类结果一致,33株不一致。结论 浙江省DEC血清群/型种类多样,单纯采用血清学筛查可造成极大的漏检或误分,建议采用毒力基因鉴定分类。     

多重实时PCR检测沙门菌、志贺菌和致泻性大肠埃希菌

目的 建立多重实时荧光PCR检测沙门菌侵袭蛋白A基因（invA）、肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）不耐热肠毒素基因（elt）、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌侵袭力基因（ipaH）的方法。方法 优化多重实时荧光PCR的反应条件,检测系列10倍稀释的阳性菌DNA提取物。90份腹泻患者粪便样品经缓冲蛋白胨水（buffered peptone water,BP）增菌6h后进行多重实时荧光PCR检测,并对阳性标本进行菌株分离和鉴定。结果 多重实时PCR方法最低可以检测到10CFU／μl的福氏2aF301株、10。CFU／μl的鼠伤寒沙门菌和ETEC44815株。检测腹泻患者粪便样品,elt基因阳性率为14．4％（13／90）,ipaH基因阳性率为5．6％（5／90）;并从阳性样品中分离到3株elt基因阳性大肠埃希菌和4株ipaH基因阳性大肠埃希菌。整个检测过程可在10h内完成,其中包括BP增菌6h。结论 建立了同时检测invA、elt、ipaH毒力基因的多重实时荧光PCR方法,具有高度的特异性,可用于沙门菌、肠产毒性大肠埃希菌、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌菌株的毒力基因鉴定及临床腹泻粪便标本的快速筛检。