应用FITC系统建立非均衡竞争游离甲状腺素化学发光法

[目的]制备抗人甲状腺素多克隆抗体并应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立非均衡竞争FT4化学发光法.[方法]以T4-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰兔,制备抗人T4多克隆抗体,亲和层析法吸附掉与3-碘-L-甲状腺原氨酸(3-iodo-L-tyrosine)、3,5-二碘-L-甲状腺原氨酸(3,5-diiodo-L-tyrosine)、D-三碘甲状腺原氨酸(D-T3)、L-三碘甲状腺原氨酸(L-T3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)有交叉反应多抗,纯化特异性的抗人T4多克隆抗体并用FITC标记T4类似物,用抗FITC抗体包被微孔板.反应时,将FT4校准品或样品、FITC-T4类似物、T4抗体-HRP依次加入包被有抗FTTC抗体的化学发光板中,FITC -T4类似物与FT4校准品或样品,非均衡竞争结合T4抗体-HRP,从而在微孔板上形成免疫反应复合物T4类似物-T4抗体-HRP,通过酶促化学发光反应,就可以显示出与样品FT4浓度负相关的相对光单位(relative light unit,RLU),建立FT4化学发光检测方法.[结果]抗体经酶联免疫吸附实验证明对T4具有高度特异性,与3-iodo-L-tyrosine、3,5-diiodo-L-tyrosine、L-T3、D-T3、rT3无交叉反应.该方法建立的试剂盒标准曲线的线性相关系数不小于0.9900;分析灵敏度为0.9 pmol/L;线性检测范围0.9～130 pmol/L;精密度测试批内变异系数CV＜ 10％;与进口发光免疫分析系统做线性相关比较,线性回归系数为1.0852,相关系数为0.9673,临床符合率良好;本方法建立的试剂盒经加速稳定性试验37℃放置7d与2～8℃放置7d无异.[结论]综上所述,应用FITC系统建立的非均衡竞争FT4化学发光免疫分析灵敏度高、特异性好适于临床诊断应用.     

建立非均衡竞争叶酸定量测定的化学发光免疫分析法

目的 制备抗人叶酸(FA)抗血清并应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立可常规应用的定量检测血清FA的化学发光免疫分析(CLIA)法.方法 FITC-FA类似物、FA抗体-HRP依次加入包被有抗FITC抗体的化学发光板,形成FITC抗体-FITC-FA类似物-FA抗体-HRP的免疫反应复合物;并进行方法学评价,同时与非FITC检测系统及罗氏化学发光免疫分析系统检测结果进行比较.结果 成功制备FA抗血清并建立基于FITC系统的非均衡竞争CLIA;经方法学评价,自研法的线性相关系数绝对值大于0.990 0,灵敏度1.21 nmol/L,线性范围1.21～38.80 nmol/L,批内变异系数小于5％,自研法定量检测性能优于非FITC系统;与罗氏检测系统结果有较好相关性(R=0.908 1).结论 建立的非均衡竞争定量检测血清FA的CLIA法,具有良好的检测灵敏度与特异性,可应用于常规检测.     

冠心病患者血清中TT3与FT3的变化

1 临床资料 在我院心内科住院的冠心病患者的血液检查中，有部分病人血清中的T3或FT3出现了不同程度的减低，以往对于血清甲状腺功能的检测多用放射免疫法，其在线性范围检测的准确性较低。目前我院是使用美国BECKMAN公司的Access化学发光仪，用化学发光法检测血清T3，FT3等甲状腺素。Access对T3检测是一种竞争抑制的酶免疫方法，样品和用以破坏T3与血清中蛋白结合的消化剂被加入到反应管中，样品中的T3与和生物素结合的T3类似物质竞争的与抗T3碱性磷酸酶标记的酶结合物相结合，形成两种抗原抗体复合物。     

不同免疫分析系统检测甲状腺癌术后甲减患者甲状腺水平的一致性分析

目的分析不同免疫分析系统检测甲状腺癌术后甲减患者甲状腺水平的一致性。方法选择48例分化型甲状腺癌术后并发甲减患者,分别应用直接化学发光免疫系统与电化学发光免疫系统对入选患者的血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGA)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO)水平进行检测。记录两种检测系统的各项甲状腺功能指标的检测结果,分析两种检测系统各项指标检测结果的一致性及TSH检测结果的相对偏差。结果两种检测系统所得血清T3、FT4水平均低于各自检测方法的正常下限值,血清T4、TSH、TGA与TPO水平均高于各自检测方法的上限值,FT3均处于正常参考范围。两种免疫检测系统的T3、T4、FT4、TSH、TGA、TPO检测结果均有良好一致性(Kappa=0.687,0.829,0.829,0.940,0.687,0.829),FT3检测结果的一致性较差(Kappa=0.266)。两种免疫分析系统所得TSH检测值在0.50μIU/m L、13.00μIU/m L处的相对偏差分别为17.53%和0.82%,均在20%以内,证实对血清TSH检测结果的一致性较佳。结论直接化学发光与电化学发光法对甲状腺癌术后甲减患者甲状腺水平的检测具有较高一致性,二者的相对偏差对甲减辅助诊断结果影响甚微,均可作为甲状腺功能的有效检测手段。     

白介素-6化学发光检测方法的建立

目的:建立一种快速、准确和灵敏的基于微孔板化学发光免疫分析平台的白介素-6(IL-6)定量检测方法并评估其性能。方法:以链霉亲和素包被微孔板,加入待检血清样本,偶联生物素和辣根过氧化物酶的配对抗体建立分析体系,采用双抗体夹心模式,建立IL-6抗原定量检测方法,并对其进行条件优化和性能评估。结果:生物素化抗体和酶标抗体的工作浓度分别为2.00μg/mL和1.75μg/mL,孵育时间选为12.5 min,分析灵敏度为2.00 pg/mL,检测范围为2.5～2 000 pg/mL,样本回收率在(100±10)%以内,重复性<8%,中间精密度<10%,116份临床血清样本测值与罗氏测值相关性较高(R²=0.987 7),不同疾病患者血清IL-6水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论:建立了IL-6微孔板化学发光定量检测方法,且各项性能指标良好,可满足临床检测的需要。     

癌抗原125化学发光免疫定量分析方法的建立

目的 建立癌抗原125(cancer antigen 125,CA125)的化学发光免疫定量分析方法. 方法 采用双抗体异位点一步夹心法,以CA125单克隆抗体作为固相包被,采用改良的过碘酸钠法进行CA125多克隆抗体与碱性磷酸酶偶联制备酶标抗体,并优化标记条件;以金刚烷胺衍生物(CSPD)及增强剂(SapphireⅡ)作为底物;用国家标准品校定定量标准品,建立了人血清CA125的化学发光免疫定量分析法.用该法检测500份正常人血清,确定正常值参考范围,将临床血清标本126份与Bayer ACS:180全自动发光体系统进行比较. 结果 本方法的最低检出量为0.1 U/ml,特异性100%,线性范围0.1-960.0 U/ml,检测内和检测间的变异系数分别为3.6%和5.3%,回收率在86.5% -96.2%之间.与CA50的交叉≤0.1%,与CA153≤0.1%,与CA199≤0.5%,与CEA≤0.1%,与Bayer ACS:180相关系数r=0.993(P＜0.001). 结论 建立的CA125化学发光免疫定量分析法结果可靠,可用于临床检测.     

高灵敏血清HER2蛋白检测方法的建立及临床应用

本研究采用双抗体夹心ELISA法,以前期研制的抗人表皮生长因子受体2 (HER2)单克隆抗体HuA21与生物素标记HerA分别为包被抗体与检测抗体,培养CHO细胞进行转染HER2胞外区(HER2-ECD)基因的表达载体,选择抗性克隆进行培养,并分离、纯化抗原作为标准抗原,建立可定量检测人血清中HER2含量的技术,为肿瘤患者的治疗及预后评估提供参考.建立的ELISA法检测灵敏度为7.8 pg/ml,检测范围为0 ～ 500 pg/ml,其批内变异系数为0.2％～10.9％,批间变异系数为1.4％ ～12.4％,在人血清中的抗原回收率为86.84％ ～ 116.40％.使用本方法检测临床标本,结果显示HER2阳性的转移性乳腺癌患者血清HER2含量明显高于早期乳腺癌患者及健康人的平均水平(P＜0.05).因此本研究成功建立了双抗体夹心ELISA法检测人血清HER2技术,其检测结果特异、稳定、可靠,可定量检测肿瘤患者血清HER2水平.     

肝病患者110例血清甲状腺相关物质的检测及临床意义

目的:探讨慢性肝炎、肝硬化、重症肝炎对甲状腺分泌相关激素水平的影响及肝病患者甲状腺自身抗体存在状况。方法:AXSYM化学发光仪分别检测慢性肝炎48例、肝硬化35例、重症肝炎27例、健康体检者30例的血清促甲状腺激素(TSH)、甲状腺素(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(抗TPO)、抗甲状腺球蛋白抗体(抗TG)的含量。结果:慢性肝炎组TSH、T3、T4显著降低(P<0.05),肝硬化组TSH、T3、T4、FT3显著降低(P<0.01),重症肝炎组TSH、T3、T4、FT3、FT4显著降低(P<0.01),肝病患者血清抗TPO、抗TG含量显著升高(P<0.01)。结论:肝病患者血清相关物质的检测在一定程度上可以评估肝功能、判断病程及预后。     

血清FT3、FT4联合放免检测法的建立

目的研究一种可以联合检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)的固相放射免疫分析(放免)(Radioimmunoassay RIA)方法.方法用葡萄球菌蛋白A(SPA)分别制备T3抗体包被管和T4抗体包被珠,在同一体系中与各自抗原作用,最后管、珠分别进行放射性测定,建立联合RIA,并与独立检测的液相RIA试剂盒对照.结果FT3、FT4最小检测值分别为0.34 pmol/L、0.76 pmol/L;回收率均值为99.6%和98.2%;变异系数符合RIA要求;与对照试剂盒检测48份血清,结果进行t检验t=-0.918,P＞0.2及t--0.897,P＞0.2.结论本方法比传统方法简单,所得结果无统计学差异,具有应用价值.     

夹心ELISA检测血清结缔组织生长因子及其初步临床应用

目的 应用抗结缔组织生长因子(CTGF)单克隆抗体和抗CTGF多克隆抗体,建立CTGF免疫分析方法,用其方法检测血清中CTGF含量初步验证其临床应用价值.方法 使用抗CTGF的单克隆抗体包被反应板,辣根过氧化物酶标记兔抗人CTGF多克隆抗体(二抗)建立双抗体夹心方法,通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法.使用该检测系统和进口试剂盒对照,检测其准确性和可比性.利用该系统检测临床有肝纤维化症状的患者血清标本,初步评价其临床应用价值.结果 该方法有较高的灵敏度、特异性及稳定性,最低检测限批间和批内变异系数分别为0.98 ng/ml、9.8%、4.9%.与进口试剂盒有很强的可比性,两者的相关系数r=0.988.初步临床标本检测证实,肝硬化、慢性肝炎急性肝炎患者的血清CTGF含量明显高于建康对照者(P<0.01),肝硬化患者的血清CTGF水平明显高于慢性肝炎和急性肝炎患者(P<0.01).结论 成功地建立了一种测定血清CTGF的双抗体夹心方法,该反应系统有较高的灵敏度和特异性,和进口试剂盒有很强的可比性,为临床广泛使用打下了基础.     

先天性甲状腺功能减退症对儿童肝功能的影响

目的观察先天性甲状腺功能减退症（CH,甲低）儿童的肝功能改变,及与血清甲状腺激素（TH）水平的相关性,探讨TH对儿童肝功能的影响。方法对40例CH儿童和35例健康儿童进行肝脏彩超及肝功能检查,同时用化学发光法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（TT4）、总三碘甲状腺原氨酸（TT3）、总甲状腺素（讯）和促甲状腺素（TSH）水平,对肝功能指标和血清TH水平进行相关性分析。结果与健康儿童组相比,CH组血清FT3、TT3、FT4、TT4水平显著下降,TSH水平显著升高（P〈0．001）;CH组肝功能异常明湿高于健康组（P〈0．001）,且肝功能异常与FT3、FT4、TT3、TT4呈显著负相关,与TSH呈显著正相关（P〈0．05）,两组肝脏彩超检查无显著差异（P〉0．05）,表明先天性甲状腺功能减退症会对患儿的肝功能造成一定的损伤。结论CH对儿童肝功能产生显著影响,临床医师应加强对此类疾病的重视。     

老年慢性阻塞性肺病患者血清甲状腺激素水平的临床观察

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清甲状腺激素水平的变化及其临床意义。方法选择40例急性加重期及稳定期老年COPD患者为研究对象,30例年龄匹配的健康体检者为对照组。应用化学发光免疫分析法测定血清甲状腺激素（TT3、TT4、FT3、FT4）及促甲状腺激素（TSH）水平。并测定动脉血气分析水平。结果COPD急性加重期患者血清TT3水平显著低于稳定期患者及对照组（P〈0．05）,缓解期患者TT3水平与对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。急性加重期患者TT3与PaO2呈显著正相关（P〈0．05）。结论老年COPD急性加重期患者血清TT3水平低于同年龄健康对照组,测定血清TT3水平对COPD患者病情判断及其预后估计具有一定临床参考价值。     

老年慢性阻塞性肺病患者血清甲状腺激素水平的临床观察

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清甲状腺激素水平的变化及其临床意义。方法选择40例急性加重期及稳定期老年COPD患者为研究对象。30例年龄匹配的健康体检者为对照组。应用化学发光免疫分析法测定血清甲状腺激素（TT3、TT4、FT3、FT4）及促甲状腺激素（TSH）水平,并测定动脉血气分析水平。结果COPD急性加重期患者血清TT3水平显著低于稳定期患者及对照组,缓解期患者TT3水平与对照组比较差异无显著性意义。急性加重期患者TT3与PaO2呈正相关。结论老年COPD急性加重期患者血清TT3水平低于同年龄健康对照组,测定血清TT3水平对COPD患者病情判断及其预后估计具有一定临床参考价值。     

聚乙二醇预处理脂血标本前后FT3和FT4的变化

目的：探讨用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）预处理脂血标本前后游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）和游离甲状腺素（FT4）的变化。方法：将28名正常人组和20例脂血组的血清分两份,一份直接测定,另一份用95g/LPEG液处理标本后,再以放射免疫法测定FT3和FT4。结果：正常人组PEG处理前后,FT3和FT4检测结果差异均无统计学意义（P〉0.05）;而脂血标本组用PEG处理前FT3和FT4检测结果显著高于PEG处理后（P〈0.001）。结论：正常情况下,PEG处理标本不影响FT3和FT4检测。标本经PEG处理后,去除脂质、甲状腺激素自身抗体的干扰,提高结果的准确性。     

慢性阻塞性肺疾病患者血浆甲状腺激素水平的临床观察

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者血浆甲状腺素水平的含量变化及其临床意义。方法:选择40例COPD急性加重期及稳定期患者为研究对象,35例年龄匹配健康体检者为对照组。检测3组血浆甲状腺激素(TT3、FT3、FT4、TT4)及超敏促甲状腺激素(hTSH)水平。同时检测COPD急性加重期患者动脉血氧分压水平,并分析其与PaO2的相关性。结果:COPD患者急性加重期及稳定期血清TT3、FT3、FT4水平显著低于健康对照组(P<0.05)。COPD急性加重期血浆TT3、FT3、FT4水平显著低于稳定期(P<0.05)。COPD患者急性加重期PaO2与血浆TT3、FT3、FT4水平呈正相关。结论:COPD急性加重期血浆TT3、FT3、FT4水平显著低于同龄健康对照组,血浆甲状腺素水平测定及动态观察有利于COPD病情严重程度的判断及预后估计。     

早产儿与足月儿新生儿期血清甲状腺激素水平比较

目的：了解早产儿和足月儿新生儿期血清甲状腺激素水平。方法用化学发光免疫分析法测定新生儿血清T3、T4、FT3、FT4和TSH水平,按胎龄分早产儿组和足月儿组,并进行组间比较,作胎龄与甲状腺激素水平间的相关性分析。结果早产儿组T3、T4和FT3水平分别为（1.34±0.40）、（141.50±39.62）nmol/L和（4.11±1.10）pmol/L,明显低于足月儿组的（1.70±0.50）、（160.88±37.59）nmol/L和（4.87±1.42）pmol/L,（均P＜0.01）。胎龄与血清T3水平（r=0.36,P＜0.01）、T4水平（r=0.30,P＜0.01）和FT3水平（r=0.27,P＜0.01）明显相关。结论新生儿出生时T3、T4、FT3水平与胎龄有关,早产儿甲状腺激素水平明显低于足月儿。     

湖南省106 224例新生儿先天性甲状腺功能减低症筛查

目的:早期诊断先天性甲状腺功能减退症(congenital hypothyroidism,CH)患儿,预防智力低下儿的发生.方法:采用时间分辨荧光免疫法测定促甲状腺素(thyroid-stimulating hormone,TSH)浓度,如果TSH筛查呈阳性,则使用化学发光免疫法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)测定血清TSH、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxin,FT4),并结合临床确诊.结果:湖南省1997年4月至2003年12月106 224份标本中共检出CH患儿68例,检出率1/1 562,明显高于全国平均水平(1/3 009).结论:(1)新生儿筛查是早期诊治CH患儿,预防CH发生智力低下的关键;(2)湖南为CH高发地区;(3)检出率与科学技术的发展呈相关性,累加检出率能更真实地反映发病率;(4)选择适当切值有助于防止漏筛.     

EEG及血清中FT_3、FT_4和TSH含量与招飞考生高考通过率关系研究

目的探讨招飞考生脑电图(EEG)、游离甲状腺素3(FT3)、游离甲状腺素4(FT4)和促甲状腺激素(TSH)含量与高考通过率之间的关系。方法随机抽取300名参加空军招飞考生的EEG,按标准分为具有典型意义正常(225名)、异常(75名)两组;用放射免疫测定法分别测定其血清中FT3、FT4和TSH含量,统计高考通过情况。结果 EEG正常组FT3和FT4(pmol/L)含量分别显著高于异常组[(6.2±2.1)pmol/L vs(4.8±1.4)pmol/L,P<0.01;(17.8±3.4)pmol/L vs(14.8±4.3)pmol/L,P<0.05];而TSH含量显著低于异常组[(3.6±1.7)U/L vs(5.7±2.5)U/L,P<0.05]。EEG正常组与异常组间高考通过率无明显差异(P>0.05)。结论 EEG及血清中FT3、FT4和TSH含量可作为招飞考生高考通过率的预测指标之一。