99mTc直接法标记αvβ3受体拮抗剂RGD-4CK的方法学初步研究

目的建立一种直接标记RGD-4CK的方法.方法以酒石酸亚锡为还原剂,预先设定初始标记方法.改变其中某一主要标记因素,以寻找最佳标记条件.结果在最佳标记条件下,标记率可达92%～95%,标记物体外稳定性好,能满足显像要求.结论初步建立了直接标记RGD-4CK的方法,为今后其他含二硫键环形多肽的99mTc直接法标记奠定了基础.     

Implication of Expression of Osteopontin and Its Receptor Integrin αvβ3 in the Placenta in the Development of Preeclampsia

To investigate the expression of osteopontin (OPN) and its receptor integrin αvβ3 in the placental tissue from pregnant women complicated with preeelampsia,the expression of OPN and αvβ3 in the placenta of the pregnant women with preeclampsia and healthy pregnant women was detected by immunohistochemistry,Western blotting and RT-PCR. Our results showed that OPN and αvβ3 protein were expressed in the placenta from normal pregnant woman and those with preeclampsia. OPN was located in the placental syncytiotrophoblasts and the cytoplasm of capillary endothelial cells and integrin αvβ3 was mainly expressed on the surface of trophoblast cells. Expression of OPN and integrin αvβ3 in the placental tissue from preeclampsia subjects was significantly lower than that from the control group (P＜0.05). Compared with the control group,expression of OPN in the placental tissue from preeclampsia group was significantly lower (P＜0.05) but there was no significant difference in the expression of αv and β3 between the preeclampsia group and the controls. It is concluded that OPN and its receptor integrin αvβ3 may be involved in the pathogenesis of preeclampsia.     

Galectin-3及整合素αvβ3mRNA在脑胶质瘤细胞中的表达及其意义

目的:探讨半乳糖凝集素-3 (Galectin-3)及整合素αvβ3 mRNA在胶质瘤细胞中的表达及二者在胶质瘤的发生及恶性进展中的作用.方法:采用原位杂交法检测5例正常脑组织及40例不同级别胶质瘤中Galectin-3mRNA、整合素αvβ3 mRNA的表达情况,并分析二者之间的关系.结果:正常脑组织中Galectin-3 mRNA、整合素αvβ3mRNA的表达均为阴性.Galectin-3 mRNA主要表达于脑胶质瘤细胞的胞浆中,在23例Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤标本中阳性2例、弱阳性4例、阴性17例,阳性表达率为29.09％(6/23),阳性指数(LI)值为(4.80±3.22)％;在17例Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤标本中强阳性4例、阳性6例、弱阳性1例、阴性6例,阳性表达率为64.71％(11/17),LI值为(27.30±22.72)％,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤Galectin-3 mRNA阳性表达率低于Ⅲ-Ⅳ级(P＜0.05).整合素αvβ3mRNA主要表达于脑胶质瘤细胞的胞浆中,在23例Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤标本中阳性3例、弱阳性4例、阴性16例,阳性表达率为34.43％(7/23),LI值为(5.35±3.79)％;在17例Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤标本中强阳性4例、阳性6例、弱阳性3例、阴性4例,阳性表达率为76.47％(13/17),LI值为(29.24±21.10)％,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤整合素αvβ3 mRNA阳性表达率低于Ⅲ-Ⅳ级(P＜0.05).直线相关分析结果显示,Galectin-3 mRNA与整合素αvβ3 mRNA的阳性细胞表达率呈正相关(r=0.718,P＜0.05).结论:Galectin-3 mRNA、整合素αvβ3mRNA的表达在Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤组明显低于Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组,提示Galectin-3及整合素αvβ3mRNA检测可作为从分子水平判定人脑胶质瘤恶性生物学行为的指标.     

放射性标记RGD肽行肿瘤αvβ3受体显像研究的进展

恶性肿瘤的持续生长、侵袭转移与肿瘤血管生成密切相关,在这个过程中整合素αvβ3起着重要的作用。αvβ3主要通过和细胞外基质(ECM)中的一些含RGD的三肽序列配体结合发挥作用,文献报道其在新生血管内皮细胞有强烈表达,而在正常细胞表达极少或缺乏,因此,放射性标记RGD肽作为高特异性的标记物对恶性肿瘤进行核医学显像,能够达到早期诊断和治疗目的。本文就近年来国内外RGD肽的标记方法和αvβ3受体显像研究进行了综述。     

高度近视糖尿病豚鼠视网膜中骨桥蛋白及整合素αvβ3受体的表达

目的:通过观察糖尿病豚鼠视网膜中骨桥蛋白(OPN)及整合素αvβ3受体的表达水平受高度近视的影响情况,初步探讨高度近视影响糖尿病视网膜病变进展的机制。方法:选取出生1周龄雄性豚鼠90只,随机分为正常对照组(Ⅰ组)、高度近视组(Ⅱ组)、糖尿病组(Ⅲ组)、糖尿病合并高度近视组(Ⅳ组)。Ⅰ组18只,余3组每组24只。Ⅱ组为半透明眼罩遮盖右眼20周;Ⅲ组为饲养8周时左下腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 280 mg/kg;Ⅳ组为半透明眼罩联合注射STZ。每组随机选择18只完成实验测量,摘除眼球后行HE染色、免疫组化染色,观察视网膜组织形态,并对OPN和整合素αvβ3受体阳性细胞率完成计数。结果:各组豚鼠均造模成功。HE染色观察Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的视网膜组织形态,与Ⅰ组相比均有组织学差异,Ⅲ、Ⅳ组可见发生糖尿病视网膜改变,Ⅳ组较Ⅲ组程度轻。免疫组化染色观察,有糖尿病组(Ⅲ组、Ⅳ组)与无糖尿病组(Ⅰ组、Ⅱ组)比较,OPN、整合素αvβ3受体表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。另Ⅳ组与Ⅲ组相比,OPN及整合素αvβ3受体阳性表达率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:OPN及整合素αvβ3受体在糖尿病合并高度近视豚鼠视网膜组织中的表达较其在糖尿病模型中表达低,可能在高度近视影响DR进程中新生血管的发展中发挥作用。     

99Tcm-3P4-RGD2显像探测肺癌骨骼转移的临床价值研究

目的:探讨99Tcm-HYNIC-PEG4-E[PEG4-c(RGDfk)]2(99Tcm-3P4-RGD2)显像探测肺癌骨骼转移灶的临床应用价值?方法:回顾性分析2012年7月—2013年9月45例经病理证实的肺癌患者,所有患者均接受99Tcm-3P4-RGD2显像(RGD显像,包括平面和断层显像)?99Tcm-MDP显像(MDP显像,包括平面和断层显像),同时行SPECT-CT融合显像?所有病灶均以病史?病理检查或6个月以上的影像学随访为最终诊断结果?探讨RGD显像对肺癌骨骼转移病变的诊断效能?结果:45例肺癌并发骨骼病灶122处,成骨性转移病灶102处,溶骨性病灶20处 (其中5处尚未出现明显骨质密度改变),良性骨病变51处?溶骨性转移灶对99Tcm-3P4-RGD2摄取(T/NT:6.90 ± 2.31)显著高于99Tcm-MDP(1.18 ± 1.24,P=0.010),RGD显像对溶骨性?成骨性转移灶的探测灵敏度(84.8%和55.9%)分别与MDP显像(25.0%和91.2%)差异显著(P均<0.05),融合CT显像后,两种显像方法对骨转移的诊断特异性无统计学差异,但MDP融合显像对骨转移灶的探测灵敏度(92.6%)和准确性(93.4%)均高于RGD融合显像(78.7%,P=0.008;80.3%,P=0.010)?另外,RGD融合显像可对骨骼病变原发肺癌灶和其他转移灶进行有效探测?结论:99Tcm-3P4-RGD2靶向结合肿瘤细胞?破骨细胞的整合素αvβ3受体,在肺癌溶骨性骨转移的早期发现中具有一定优势,是常规骨显像的有效补充?     

层黏连蛋白α4链中αvβ3整合素结合肽的精细鉴定与功能分析

目的 利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基.方法 采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨基酸残基,缺失突变确定αvβ3整合素结合的最小肽段,并通过人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)管样结构形成实验及鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验验证鉴定肽的生物学功能.结果 同源性比较分析发现,G19肽中共存在10个保守性氨基酸残基位点.点突变分析发现第4位的I、第10位的H及第16位的Y是αvβ3整合素结合的关键位点,缺失突变分析确定G1124-1137肽段(G14肽)是αvβ3整合素结合的最小肽段, 合成的G14肽可以浓度依赖性地促进HUVEC管样结构的形成及CAM的血管生成.结论 成功鉴定了αvβ3整合素在LNα4中的最小结合位点及关键氨基酸残基.所鉴定的肽段具有促HUVEC成管样结构及促CAM血管生成的生物学功能.     

IVF周期中高雌、孕激素水平对着床期子宫整合素αvβ3表达及子宫内膜容受性的影响

目的 探讨IVF超促排卵过程中,超生理剂量的雌、孕激素对着床期整合素αvβ3表达的影响,从而推测IVF超促排卵所致的高雌、孕激素对子宫内膜容受性的影响.方法 2012年5月至2013年10月于云南省第一人民医院生殖—科行IVF的33例因卵巢过度刺激综合征或过高孕酮水平取消新鲜周期胚胎移植的不孕症妇女为研究组,根据HCG日雌孕激素水平将研究对象分为3组:高E2组(E2≥5 210 pg/mL、P＜ 1.05 ng/mL);高P组(P≥1.05 ng/mL、E2＜5 210 pg/mL);高E2并高P组(P≥1.05 ng/mL、E2≥5 210 pg/mL),于取卵后7～8d用宫腔负压吸管(Pipe11e管)取内膜组织.对照组为11例正常妇女,于超声监测排卵后7～8 d同法取内膜,采用免疫组化SP法和组织学积分H-score法对整合素α v β 3在种植窗期子宫内膜中的表达进行定位和半定量分析,比较不同雌孕激素水平在着床期对整合素αvβ3表达的影响,从而推测IVF超促排卵中高雌、孕激素对子宫内膜容受性的影响.结果 种植窗期高E2组、高P组、高E2并高P组患者与对照组比较整合素α vβ 3的表达差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 仅仅依靠整合素αvβ3的表达来推测子宫内膜的容受性是不可靠的.     

整合素αvβ3拮抗剂SB-273005抗小鼠胚胎着床的作用

【目的】探讨整合素αvβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床的影响。【方法】雌雄小鼠2：1合笼,次晨检查阴栓,阳性者定为妊娠第1天．记为D1。步骤①取D3小鼠40只,随机分为2组,每组20只,实验组连续2d上午灌胃给SB-273005,于D4下午观察囊胚发育情况。②取D3小鼠80只．随机分为4组．每组20只,A、B、C组为实验组,连续3d分别灌胃给SB-2730050．3、1、3mg&#183;kg^-1&#183;d^-1,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率。③取D4小鼠40只,随机分为两组,每组20只,实验组双侧宫角注射SB-273005,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率。④各对照组用与其相应实验组同方法给同体积二甲亚枫（DMSO）。取上述D8处死各组小鼠子宫,观察内膜组织学及D4处死小鼠内膜免疫组化变化。【结果】步骤①中实验组与对照组囊胚发育率分别为64．7％和84．5％（P〈0．01）。步骤②中A、B、C、D组妊娠率分别55％、40％、35％、88％（P〈0．05）。步骤③中实验组妊娠率为15％,对照组妊娠率为70％,两者相比差异有显著性（P〈0．01）。说明SB-273005能降低囊胚发育率、小鼠胚胎着床数及妊娠率。组织学及免疫组化结果表明．SB-273005能引起蜕膜细胞退化解体,抑制整合素αvβ3在蜕膜组织中的表达。【结论】整合素αvβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床有抑制作用。     

正常早孕及稽留流产患者NK细胞中整合素αvβ3的表达分析

目的分析正常早孕妇女和稽留流产患者外周血及蜕膜组织中CD56+CD16-和CD56+CD16+自然杀伤(NK)细胞比率以及细胞表面整合素αvβ3的表达。方法分别采集15例正常早孕妇女和7例稽留流产患者外周血和蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞悬液,流式细胞术检测样本CD56+CD16-和CD56+CD16+NK细胞的比率以及其细胞表面αvβ3表达。结果 与早孕妇女外周血相比,蜕膜组织中CD56+CD16-NK细胞比率增高而CD56+CD16+NK细胞的比率却降低(P<0.01);正常早孕妇女及稽留流产患者外周血和蜕膜组织中CD56+CD16-和CD56+CD16+NK细胞的比率均无差异(P>0.05)。与正常早孕妇女相比,稽留流产患者蜕膜组织CD56+CD16-NK细胞表面αvβ3阳性表达率降低而其平均荧光强度(GM)值却增高(P<0.05)。结论 NK细胞及其所表达的整合素αvβ3在早孕期胚胎植入及胎盘形成过程中发挥重要作用,稽留流产患者NK细胞表面整合素αvβ3的表达异常,可能是稽留流产发生的免疫致病因素。     

白药主要成分对骨折修复过程中整合素αvβ3及CD31表达的影响及意义

目的:探讨白药主要成分对整合素αvβ3以及CD31在兔骨折修复过程中表达的影响及意义.方法:新西兰大白兔75只,随机分为5组,每组15只,手术制作双侧桡骨中段骨干缺损模型,在左侧缺损间分别植入含有白药1～5号粉剂的医用明胶海绵,作为实验组,分别为白药1、2、3、4、5号组.右侧同样手术处理,只是骨缺损中植入不含白药粉的...     

输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异

目的：探讨输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素 αvβ3表达的差异。方法：收集行手术治疗的9例内异症性不孕患者和进行IVF/ICSI-ET的20例输卵管阻塞患者黄体中期子宫内膜应用免疫组化方法检测整合素αvβ3的表达。结果：子宫内膜腔上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分内异症组较输卵管组低,差异有统计学意义（P<0.05）,而两组间腺上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分比较差异无显著性（P>0.05）。结论：内异症不孕患者和输卵管阻塞不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异,可能提示内异症对子宫内膜容受性存在不利影响。     

雌?孕激素对牛子宫内膜上皮细胞αvβ3 体外诱导差异表达的影响

目的 研究体外培养的牛子宫上皮细胞内整合素αvβ3 基因诱导差异表达的变化,以期为探究牛子宫容受态的标志蛋白提供参考?方法 运用RT-PCR 方法分析不同浓度雌激素?孕激素以及雌?孕激素协同作用对牛子宫内膜上皮细胞中整合素αvβ3 的诱导表达变化情况?结果< /b> 单独添加孕激素10^-7 mg/ mL 时,整合素αvβ3表达量均最高,10 ^-7 mg/ mL 组内αv 和β3 的表达量均显著高于对照组( P < 0.05)?单独添加雌激素10 ^-10 mg/ mL组,αv 的表达量最高,而β3 的表达量最低?协同添加雌?孕激素组中,整合素αvβ3 的表达量均高于对照组,其中αv 的表达量显著高于对照组( P <0.05);β3 的表达量与对照组相比差异不显著( P >0.05)?结论 单独添加孕激素和协同使用雌?孕激素时,均可以促进牛子宫内膜上皮细胞中整合素αvβ3 的mRNA 表达量上升;单独添加雌激素的作用则与之相反?由此,整合素αvβ3 在“种植窗”期的牛子宫内膜上皮中可作为一个潜在的子宫容受态参考标志基因?     

microSPECT/CT显像定量评价肿瘤99mTc－3P4－RGD2摄取及整合素αVβ3表达水平的实验研究

目的:探讨99mTc－HYNIC－PEG4－E[PEG4－c(RGDfk)]2(简称99mTc－3P4－RGD2)microSPECT/CT显像定量肿瘤放射性摄取及整合素αvβ3表达水平的可行性研究?方法:对不同99mTc样品进行microSPECT/CT显像,评价样品体积?活度对放射性计数的影响;对荷脑胶质瘤裸鼠行99mTc－3P4－RGD2 microSPECT/CT显像,对比基于CT?SPECT及融合图像测定的肿瘤体积与肿瘤实际体积一致性,并评价肿瘤整合素αvβ3表达水平,由病理证实?结果:99mTc样品microSPECT/CT显像放射性计数与其放射性活度呈直线相关(R2 = 0.999 7),Bland－Altman一致性分析显示,基于microSPECT/CT测定的肿瘤体积与肿瘤实际体积差异(%)为-2.48 ± 8.17,显著低于microCT(15.04 ± 79.53,t = 5.60,P = 0.005)和microSPECT(17.04 ± 36.27,t = 7.17,P = 0.002);microSPECT/CT显像肿瘤99mTc－3P－RGD2摄取与整合素αvβ3表达呈正相关?结论:microSPECT/CT显像可定量99mTc放射性活度和成活肿瘤组织体积,有效评估整合素αvβ3受体表达,为肿瘤整合素受体靶向治疗患者筛选及药物剂量个体化提供影像学数据?     

壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌移植瘤模型整合素αvβ3表达的影响

目的 研究壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌骨转移整合素αvβ3表达的影响。方法 将32只裸鼠接种乳腺癌细胞后,再随机分为壮骨镇痛胶囊预防组(下称预防组)、壮骨镇痛胶囊治疗组(下称治疗组)、氯磷酸二钠胶囊对照组(下称对照组)和模型组,每组各8只,分别予以上述相应药物干预,测定各组的抑瘤率,将移植瘤分离后进行切片,HE染色,并用光镜观察其病理形态,采用免疫组化方法检测移植瘤组织细胞黏附迁移相关的整合素αvβ3表达。结果 预防组抑瘤率最高,与其他各组相比,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组和对照组抑瘤率相当,两者比较(P>0.05)。与模型组比较,各组整合素αvβ3表达差异有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组比较(P>0.05),而预防组αvβ3表达显著低于治疗组及对照组(P<0.05)。结论 壮骨镇痛胶囊能抑制裸鼠乳腺癌移植瘤的生长,其作用机制可能与移植瘤组织整合素αvβ3表达有关,预防组的效应比治疗组效应强。     

慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3表达及与甾体激素关系的研究

[目的]研究慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3的表达,并分析其体内甾体激素与整合素αvβ3表达的相关性.[方法]选取25例慢性盆腔炎性不孕症患者,同时选择15例具有正常生育能力的育龄妇女,分别设为实验组和对照组,采用流式细胞荧光标记测量技术对子宫内膜中整合素αvβ3的表达进行定量检测.在同期内取血清检测实验组及对照组体内雌孕激素水平,分析甾体激素与子宫内膜整合素αvβ3表达在植入窗口期(种植期)的相关性.[结果](1)两组黄体中期血清雌二醇(E2)水平及雌二醇/孕酮(E2/P)比值比较均无显著性差异(P>0.05),而血清P水平比较有显著性差异(P<0.05).(2)两组黄体中期(分泌中期)子宫内膜整合素αvβ3表达比较差异有显著性意义(P<0.05).(3)雌激素与子宫内膜整合素αvβ3无相关性,而孕激素与整合素αvβ3显示正相关性,孕激素的表达水平越高,整合素αvβ3表达水平相应也越高.[结论]整合素αvβ3在正常育龄妇女子宫内膜种植窗期的表达高于慢性盆腔炎性不孕患者;整合素的表达水平与卵巢分泌的甾体激素孕激素的表达呈一致性,孕激素影响着整合素αvβ3表达的水平.     

Expression of claudin-3 and β-catenin in borderline ovarian tumors and its clinicopathological significance

目的 研究claudin-3和β-连环素(β-catenin)蛋白在卵巢交界性肿瘤(borderline ovarian tumors,BOTs)组织中的表达及临床病理意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测claudin-3和β-catenin蛋白在69例BOTs组织中的表达,并与其在17例正常卵巢组织、31例卵巢上皮性良性肿瘤、39例卵巢上皮性恶性肿瘤组织中的表达进行比较.结果 BOTs组织中claudin-3蛋白的阳性表达率(59.4％,41/69)低于卵巢癌组织中的阳性表达率(89.7％,35/39),而高于良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达率(22.6％,7/31;5.9％,1/17),差异均有统计学意义(P＜0.01);正常卵巢组织与良性肿瘤相比,差异无统计学意义(P＞0.05).BOTs组织中β-catenin蛋白的阳性表达率(52.2％,36/69)低于卵巢癌组织中的阳性表达率(84.7％,33/39),而高于良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达率(29.0％,9/31;11.8％,2/17),差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);而正常卵巢组织与良性肿瘤相比,差异无统计学意义(P＞0.05).Claudin-3和β-catenin蛋白的表达与BOTs患者的临床病理分期以及腹腔有无种植相关(P＜0.05),而与组织学类型和患者年龄无关(P＞0.05).Claudin-3与β-catenin在BOTs组织中的表达呈正相关(r=0.439,P=0.000).结论 Claudin-3与β-catenin在BOTs的发生、发展中可能起着协同作用,对其进行联合检测有助于BOTs的诊断和治疗.     

整合素αvβ3小分子拮抗药的二维定量构效关系

整合素αvβ3在肿瘤组织中的新生血管内皮细胞膜有高度特异性表达,在静息期的内皮细胞以及大部分正常器官系统缺失表达,当其功能受到抑制时,血管内皮细胞凋亡,肿瘤生长受到抑制。通过对20个非肽类整合素αvβ3小分子拮抗药进行二维定量构效关系研究,发现整合素αvβ3小分子拮抗药的活性与零阶价分子连接性指数、偶极矩、最大正电荷、最大负电荷存在良好的线性关系（r=0.91）,获得较好的定量构效关系方程,并经分子对接验证,为进一步设计合成新的非肽类小分子提供理论指导。     

应用琼脂糖流动腔模型评价携αvβ3-整合素单抗超声微泡靶向血栓效能

目的体外评价携αvβ3-整合素单抗超声微泡(MBp)靶向血栓的黏附效能。方法将采用亲和素-生物素桥接法构建的MBp和同型对照微泡(MB)随机注入自制琼脂糖流动腔模型内,与人血栓孵育30min后,PBS液15cm/s流速不间断冲洗血栓,分别在冲洗血栓2﹑4﹑6﹑8﹑10min时行对比超声检查并测量声强度(VI)值。结果MBp孵育组血栓VI值较冲洗前减小了28%～66%,而对照MB孵育组血栓VI值减小了87%～94%。VI值在各时间点MBP组均较MB组大(P<0.05)。结论MBp具有较好的靶向结合血栓效能,靶向血栓黏附后能抵抗一定的剪切应力。体外模拟体内剪切应力血流环境评价MBp的靶向血栓黏附效能将有助于预测MBp应用于体内血栓超声分子成像的效果。