淫羊藿苷对体外培养的成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响

目的:检测不同浓度淫羊藿苷(ICA)对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达的影响。方法:分别用10、20、40ng/mL的淫羊藿苷作用MC3T3-E1细胞,观察细胞生长情况;MTT法测绘细胞生长曲线;FCM法测定细胞生长周期;免疫细胞化学方法和Western bloting测定细胞BMP-2蛋白表达情况。结果:淫羊藿苷组可使细胞的生长曲线明显上移,S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少以及BMP-2蛋白表达量增加,其中20ng/mL组作用更为显著,各组间比较有显著差异(P(0.01)。结论:淫羊藿苷可以促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞BMP-2的表达。     

骨形态发生蛋白2在小鼠模型中诱导破骨细胞活化的机制

目的探讨骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）在诱导小鼠破骨细胞活化的作用以及相关的机制。方法选取20只小鼠,按照随机数字法分为对照组和实验组,每组10只,均接受小鼠脊柱后外侧入路的横突间融合手术,实验组植入骨片和BMP-2,对照组仅植入骨片,评估术后骨骼变化情况。在小鼠胫骨内提取骨髓来源的巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages,BMMs）,应用RANKL及M-CSF试剂诱导为破骨细胞,并在其中加入不同浓度的BMP-2,应用TRAP染色法检测破骨细胞情况,荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法测定Smad1及p65基因,Western blotting法测定Smad1及p65蛋白表达情况。结果微型CT仪影像检查显示,实验组小鼠术后的脊柱融合情况强于对照组。2组小鼠术后1、2、4周骨小梁体积和骨小梁厚度均呈增高趋势,骨小梁间隙呈降低趋势,差异均具有统计学意义（P < 0.01）。实验组术后1、2、4周骨小梁体积高于对照组,实验组术后2、4周骨小梁间隙低于对照组（P < 0.01）。在BMP-2浓度为60、90及120 ng/mL时破骨细胞总数和总面积均高于BMP-2浓度为0、30 ng/mL时（P < 0.01）。Smad1及p65 mRNA表达在不同浓度BMP-2诱导破骨细胞比较差异均具有统计学意义（P < 0.01）,Smad1和p65 mRNA表达呈线性相关（P < 0.05）。结论BMP-2能够促进小鼠脊柱手术模型的融合,BMP-2参与了破骨细胞活化的过程,可能通过Smad1/p65信号通路介导破骨细胞活化。     

孕期尼古丁暴露所致子代成骨细胞BMP-4/Smad信号通路的变化

目的 探究大鼠孕期尼古丁暴露对子代成骨细胞（OB）BMP-4/Smad信号通路的影响。方法 将妊娠期大鼠分为对照组与实验组,对照组受孕第9天皮下注射2mg/（kg·d）生理盐水,实验组在受孕后第9天于皮下注射2mg/（kg·d）尼古丁,新生3天乳鼠处死后收集颅骨,采用钙钴法对OB碱性磷酸酶进行染色,反转录聚合酶链反应法（RT-PCR）测定OB细胞中骨形态发生蛋白4 （BMP-4）、Smad1、Smad5、Smad8、Runt相关转录因子2（Runx-2）、成骨相关转录因子（Osterix）、Smads泛素化调节因子1（Smurf1）表达,免疫印迹法（Western blot）检测OB中BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix、Smurf1蛋白表达。结果 ALP染色显示OB细胞胞体较大,细胞核染色呈蓝紫色,细胞质呈淡紫色,对照组ALP细胞阳性率为42.69%±5.16%,高于实验组（18.67%±3.19%）,差异有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR结果显示实验组BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix mRNA表达量均低于对照组,Smurf1mRNA表达量高于对照组,差异有统计学意意义（P<0.05）。Western blot法检测结果显示,实验组乳鼠OB中BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix 蛋白表达量均低于对照组,Smurf1蛋白表达量高于对照组。蛋白条带灰度扫描结果显示,实验组乳鼠OB中BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx-2、Osterix 蛋白相对灰度值均低于实验组,Smurf1蛋白相对灰度值高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 大鼠孕期尼古丁暴露对OB具有一定的抑制作用,可能与上调Smurf1表达、抑制BMP-4/Smad信号通路和下调转录因子Runx-2、Osterix有关。     

淫羊藿苷对大鼠阴茎海绵体压力和周围血压的影响

目的　了解淫羊藿苷对阴茎勃起功能的效果。方法　成年雄性Wistar大鼠 ,体重30 0～ 35 0 g。游离右侧颈总动脉和右侧阴茎海绵体 ,分别插管和 2 6G针头连接后与电生理仪连接。游离左侧海绵体神经 (CN ) ,采用电生理仪刺激器双极电极刺激 ,检测神经刺激下阴茎海绵体压力(ICP)和平均周围动脉压 (MBp)变化作为基础数值。通过左侧阴茎海绵体 2 6G针头插管注射 10 0 μl不同浓度淫羊藿苷、西地那非和罂粟碱作为对照组 ,10min后刺激CN并记录ICP和MBp变化。根据ICP与MBp的比值计算各种药物的EC50 。为了解淫羊藿苷的药物作用机制是否与NO cGMP有关 ,观察可溶性环鸟苷酸 (sGC)抑制剂H [1,2 ,4 ]二唑 [4 ,3 A]喹喔啉 (ODQ)和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂Nω 硝基 L 精氨酸 (LNNA)对淫羊藿苷 (10 -4mol/L)诱发ICP/MBp变化的影响。结果　淫羊藿苷、西地那非和罂粟碱均显著提高ICP ,差异有显著意义 (P <0 0 1) ,淫羊藿苷、西地那非对MBp影响无显著意义 (P >0 0 5 ) ,而罂粟碱显著降低MBp ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。淫羊藿苷、西地那非和罂粟碱对ICP/MBp变化的半数有效浓度 (EC50 )分别为 2 2 3μmol/L ,0 2 4 μmol/L ,9 73μmol/L。LNNA、ODQ显著抑制淫羊藿苷诱发增加ICP变化 (P <0 0 1)。结论　淫羊藿苷呈剂     

雷奈酸锶通过骨形态发生蛋白-2/Smad通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨骨形态发生蛋白-2（BMP-2）/Smad通路在雷奈酸锶（Sr）促进大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为成骨细胞
过程中的作用。方法体外分离培养大鼠BMSCs,根据实验目的加入不同浓度Sr、BMP-2 的拮抗剂noggin 及Smad1 小干扰
RNA（SiRNA）。酶标法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,茜素红染色检测钙结节,Western blotting法检测磷酸化Smad1/5/8及Runt
相关转录因子-2（Runx2）蛋白的表达。结果应用0.1~10 mmol/L Sr处理BMSCs细胞1 h后,细胞内磷酸化Smad1/5/8表达增
高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用BMP-2拮抗剂noggin预处理细胞2 h能抑制Sr对磷酸化
Smad1/5/8表达的上调作用;应用0.1~5 mmol/L Sr处理细胞6 h后,细胞内Runx2表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到
高峰;在Sr处理BMSCs前,应用Smad1 SiRNA转染细胞后能下调Smad1/5/8、磷酸化Smad1/5/8的表达,并抑制Sr对Runx2表
达的上调作用,还拮抗Sr对ALP活性及钙化结节形成的促进作用。结论BMP-2/Smad通路参与了Sr促进BMSCs成骨分化。
     

淫羊藿苷对去卵巢大鼠骨质疏松症的保护作用及其机制

目的：观察淫羊藿苷对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响,并探讨其作用机制。方法：50只6月龄雌性大鼠,随机分为假手术组、模型组、阳性药组、低剂量和高剂量淫羊藿苷组,每组10只。阳性药组大鼠每周灌胃给予1 mg·kg^-1尼尔雌醇;低和高剂量淫羊藿苷组大鼠每天灌胃给予50和100 mg·kg^-1淫羊藿苷。手术摘除双侧卵巢建立骨质疏松动物模型,术后2周开始给药,给药12周后麻醉状态下腹主动脉取血处死大鼠,观察大鼠骨密度（BMD）、骨组织形态学、血清生化指标和细胞凋亡相关蛋白的变化。结果：与假手术组比较,模型组大鼠BMD降低（P<0.01）,血清中钙水平下降（P<0.05）,血清磷水平升高（P<0.05）,血清骨钙素（BGP）、血清碱性磷酸酶（ALP）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与模型组比较,阳性药组和高剂量淫羊藿苷组大鼠BMD明显升高（P<0.01）,血清钙水平升高、血清磷水平下降（P<0.05）,BGP和ALP水平明显升高（P<0.05）。与假手术组比较,模型组皮质变薄,骨小梁宽度变窄,Bax和caspase-3表达水平上调（P<0.01）,Bcl-2表达水平下调（P<0.01）;与模型组比较,低和高剂量淫羊藿苷组大鼠可见骨皮质增厚,骨小梁宽度变宽,Bax和caspase-3表达水平下调（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2表达水平上调（P<0.05或P<0.01）。结论：淫羊藿苷对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症具有保护作用,该作用可能与抑制细胞凋亡有关。     

A single nucleotide polymorphism in the human bone morphogenetic protein-2 gene (109T>G) affects the Smad signaling pathway and the predisposition to ossification of the posterior longitudinal ligament of the spine

Background Although various systemic and local factors such as abnormal carbohydrate or calcium metabolism,aging,and hormonal disturbances have been suggested as causes of ossification of the posterior...     

淫羊藿苷介导MAPK信号通路促进间充质干细胞株C3H10T1／2成骨分化的体外研究

目的：探索补肾中药淫羊藿有效成分淫羊藿苷对间充质干细胞株C3H10T1／2的促成骨分化作用,及该作用与丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路的相关性。方法：体外培养间充质干细胞株C3H10T1／2,给予淫羊藿苷（0、10^-7、10^-6、10^-5和10^-4mol／L）联合成骨诱导液干预26d后,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色观察成骨分化情况。10^-5mol／L淫羊藿苷干预C3H10T1／2细胞2、8、24与48h后,实时荧光定量聚合酶链式反应法（polymerase chain reaction,PCR）检测p38、细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated protein kinase,p42／44）mRNA的表达。10^-5mol／L淫羊藿苷干预C3H10T1／2细胞10、30、60和120min后,蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogenactivated proteinkinase,p38）、p42和p44,以及翼式转录因子氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）及其磷酸化产物的蛋白表达情况。结果：10^-5mol／L淫羊藿苷联合成骨诱导液的促进C3H10T1／2细胞成骨分化能力最强。PCR结果显示,淫羊藿苷作用2h后p38基因表达显著下调（P〈0．01）;p42和p44mRNA水平在淫羊藿苷干预2h后均显著下调（P〈0．01）,而在淫羊藿苷干预48h后表达均上调（P〈0．05,P〈0．01）;其他时间点各通路基因表达情况均无显著变化（P〉0．05）。10^-5mol／L淫羊藿苷作用10min后,磷酸化p42／44蛋白表达减弱,磷酸化p38蛋白表达增强,并持续到30min,但对JNK蛋白的表达无明显影响。结论：淫羊藿苷促进间充质干细胞株C3H10T1／2向成骨细胞分化,其作用可能与激活p38和抑制ERK蛋白的表达有关。     

淫羊藿苷对大鼠肝药物代谢Ⅱ相酶和药物转运体的影响

目的揭示淫羊藿苷(icariin,ICA)对大鼠药物代谢Ⅱ相酶和药物转运体的影响,并比较月龄差异。方法6月龄和18月龄SD雄性大鼠随机分为6月龄大鼠生理盐水组(6NS)和ICA组(6ICA),18月龄大鼠生理盐水组(18NS)和ICA组(18ICA),每组8只,灌胃ICA(60 mg.kg-1)4 w后取肝脏,钙沉淀法提取肝微粒体,BCA法测定微粒体蛋白浓度。比色法测定谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase,GSTs)活性;紫外分光光度法测定尿苷-5’-二磷酸葡醛酰转移酶(uridine 5’-diphosphate glucuronosyl transferase,UGTs)活性;ELISA法测定有机阴离子转运多肽2(organic anion transporting polypeptide 2,Oatp2)和有机阴离子转运体2(organic anion transporter2,OAT2)含量;Real-Time RT-PCR检测UGT1A6、UGT2B7、GST-π、OAT2和Oatp2 mRNA表达。结果 ICA(60mg.kg-1)明显增加Oatp2和OAT2含量,上调OAT2和Oatp2 mRNA的表达,但未见明显月龄差异;对GSTs和UGTs活性以及UGT1A6、UGT2B7、GST-πmRNA的表达未见明显影响。结论 ICA对大鼠肝组织OAT2和Oatp2具有诱导作用,该作用未见明显月龄差异,对GSTs和UGTs无明显影响。     

淫羊藿苷对人卵巢癌细胞株的肿瘤恶性行为的抑制作用研究

目的 探讨淫羊藿苷对人卵巢癌细胞SKOV3及多药耐药细胞株SKVCR增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。 方法 以不同质量浓度淫羊藿苷溶液分别作用于SKOV3细胞和SKVCR细胞,CCK8实验检测其抑制率及半数抑制浓度（IC₅₀）;并以0.8倍IC₅₀质量浓度淫羊藿苷处理细胞,流式细胞仪检测对细胞增殖和凋亡的影响;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法检测Caspase-3蛋白表达水平。 结果 淫羊藿苷抑制SKOV3及SKVCR细胞增殖,且在5~100 μg/mL质量浓度范围内呈量效正相关趋势;淫羊藿苷分别以19.5 μg/mL和48.4 μg/mL（0.8倍IC₅₀）质量浓度作用于SKOV3细胞及SKVCR细胞后,SKOV3及SKVCR细胞凋亡率均较对照组增加（P<0.05）;同时,与对照组相比,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降（P<0.05）,免疫印迹结果显示,淫羊藿苷可增加卵巢癌细胞Caspase-3蛋白表达（P<0.05）。 结论 淫羊藿苷能抑制人卵巢癌细胞SKOV3及多药耐药细胞株的增殖、迁移和侵袭能力,并上调Caspase-3蛋白表达,诱导细胞凋亡。     

淫羊藿对肾阳虚雄性大鼠股骨骨形态发生蛋白-7表达的实验研究

目的 观察淫羊藿对醋酸泼尼松所致的肾阳虚雄性SD大鼠股骨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的影响.方法 3月龄雄性SD大鼠24只,随机分为正常组、肾阳虚模型组、淫羊藿组,灌胃给药90 d后,RT-PCR检测股骨BMP-7 mRNA的表达,免疫组化检测股骨BMP-7的表达.结果 醋酸泼尼松致肾阳虚大鼠股骨BMP-7 mRNA和BMP-7的表达明显下降(P＜0.05),淫羊藿能在mRNA水平(P＜0.05)和蛋白水平上提高股骨BMP-7的表达.结论 淫羊藿可提高股骨中BMP-7的表达来诱导成骨,修复骨损伤.     

续断对兔骨缺损修复中BMP-2基因表达的影响

[目的]观察续断在兔桡骨骨缺损修复过程中对BMP-2基因表达的影响.[方法]取30只家兔随机分成5个组,在双侧桡骨中段制作20mm长骨缺损模型.取自体松质骨颗粒,植骨于骨缺损处.实验组用续断按照20g/kg剂量混合于饲料中喂养,对照组单纯喂养饲料.于术后1,2,4,6,8周行X线检查后取骨痂用免疫组织化学及Real Time RT-PCR方法检测BMP-2基因的表达变化.[结果]实验组1周时BMP-2呈弱阳性表达,2周时呈阳性表达,4周时呈强阳性表达,6周及8周时呈阳性表达.对照组4周时呈阳性表达外1,2,6,8周时均呈弱阳性表达.实验组1周时较对照组BMP-2基因表达量无明显差异,2,4,6,8周时实验组BMP-2基因表达量均较对照组明显增加(P<0.05),4周时表达量增加最明显.[结论]续断在骨缺损修复过程中有明显的增加BMP-2基因表达的作用,可促进骨缺损的修复.     

淫羊藿苷对大鼠成骨细胞核结合因子α1、骨形成蛋白-2、骨形成蛋白-4 mRNA表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化以及对核心结合因子α1(Cbfαl)、骨形成蛋白-2(BMP2)、骨形成蛋白-4(BMP4)mRNA表达的影响.方法:以酶序列消化法从新生大鼠颅骨分离、培养成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色和钙结节茜素红染色法鉴定细胞.取第3-5代细胞,用CCK-8法检测经0 mol/L、10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L、10~(-4)mol/L的淫羊藿苷处理24、48、72 h后成骨细胞的增殖情况.分别用流式细胞技术和对硝基苯酚法检测上述各浓度的淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞的增殖指数和碱性磷酸酶(ALP)活性.用real-timePCR法检测10～(-6)mol/L淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA表达的改变.结果:10~(-8)～10~(-4)moL/L的淫羊藿苷对成骨细胞均无增殖促进作用,但可促进成骨细胞的ALP活性;10~(-6)mol/L淫羊藿苷可以上调成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可能是通过上调Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达而促进成骨细胞的分化.     

骨形态发生蛋白7在肾脏发育及肾脏疾病中的作用

骨形态发生蛋白7(BMP-7)作为一种成骨蛋白,是转化生长因子β超家族的成员。BMP-7起初被认为具有诱导骨的生成,随后发现其具有明显的肾脏保护作用。在肾脏发育过程中,BMP-7可以诱导输尿管芽的发生及肾小球的形成。此外,在肾脏疾病中BMP-7可以通过Smad通路拮抗转化生长因子β诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化,而在肾脏纤维化、糖尿病肾病等肾脏疾病中发挥重要作用。     

淫羊藿苷药理作用的分子机制研究进展

淫羊藿苷是补肾要药淫羊藿的主要药效成分之一,具有抗神经元损伤、促神经突触生长、促成骨、抗炎症、抗肿瘤、提高性功能和抗抑郁等作用。为了解淫羊藿苷发挥药理效应的分子机制,本文检索了1995年1月1日至2011年5月1日PubMed数据库中收录的题目中含“icariin”的文献共122篇,发现淫羊藿苷可通过影响丝裂原活化蛋白激酶／p38信号通路和磷脂酰肌醇3激酶／Akt信号通路,作为磷酸二酯酶5抑制剂和核受体调节剂发挥作用。本文还进一步分析了研究淫羊藿苷分子机制的主要方向。     

miR-125b通过靶向抑制Smad4调控骨髓间充质干细胞成骨分化

目的: 研究miR-125b是否通过调控其预测的靶基因Smad4表达而调节骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化。方法: 构建Smad4 3'-UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-125b对Smad4 3'-UTR-荧光素酶活性的影响;分离培养人骨髓MSCs,在MSCs中转染miR-125b mimics并进行成骨诱导,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测Smad4表达水平;Smad4 siRNA转染MSCs并进行成骨诱导,通过检测碱性磷酸酶(AKP)活性及RUNX2 mRNA表达水平变化考察Smad4下调对MSCs成骨分化的影响。结果: 双荧光素报告检测显示miR-125b能特异性地与Smad4 mRNA的3'-UTR结合,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。过表达miR-125b能抑制MSCs成骨分化过程中Smad4表达水平。干扰Smad4表达能抑制AKP活性及RUNX2 mRNA表达水平,它能部分模拟miR-125b调控MSCs成骨分化的功能。结论: miR-125b通过抑制靶基因Smad4的表达调控MSCs成骨分化。     

胃癌组织中骨形成蛋白4的表达

目的:研究骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)在胃癌中的表达及其与临床病理参数间的关系.方法:以免疫组织化学法(SP法)检测90例胃癌及30例癌旁组织胃黏膜石蜡切片中BMP-4的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果:胃癌组织中BMP-4阳性表达率23.3％(21/90),癌旁组织胃黏膜阳性表达率为3.3％(1/30),两组间比较差异有统计学意义(χ2=6.011,P=0.014).此外,胃癌组织中BMP-4蛋白的阳性表达在不同性别、年龄(≥60岁或<60岁)及肿瘤大小(≥5 cm或<5 cm)的患者中无统计学差异;胃窦部的肿瘤及肿瘤浸润深、分化程度差及有淋巴结转移的胃癌患者BMP-4阳性表达率分别明显高于其他部位肿瘤及肿瘤浸润浅、分化程度高及无淋巴结转移者(P<0.05).结论:胃癌组织中存在BMP-4的阳性表达,其表达与胃癌的恶性程度有关.