正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养、生物学特征及超微结构的比较研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构，阐明其应用价值。方法采用成纤维细胞体外培养技术，从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、细胞形态、细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞生长率和形态学相同，细胞遗传学特征和超微结构相似。结论据此结果和其他学者的观点，认为建立体外培养的正常皮肤成纤维细胞的细胞实验模型，可用于瘢痕防治的研究。     

正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养、生物学特征及超微结构的比较研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构,阐明其应用价值。方法采用成纤维细胞体外培养技术,从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、细胞形态、细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞生长率和形态学相同,细胞遗传学特征和超微结构相似。结论据此结果和其他学者的观点,认为建立体外培养的正常皮肤成纤维细胞的细胞实验模型,可用于瘢痕防治的研究。     

巢蛋白(nestin)在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达

目的探讨巢蛋白（nestin）在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达。方法采用免疫组织化学技术方法检测8例正常皮肤、7例扁平瘢痕、8例瘢痕疙瘩、8例增生性瘢痕中nestin^＋细胞，计数分析nestin^＋细胞在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达。结果①nestin在8例正常皮肤组织中表皮基底细胞和棘细胞、汗腺、毛囊、皮脂腺、血管内皮细胞和7例成纤维细胞的胞浆中表达。nestin在扁平瘢痕、瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织中表皮基底细胞和棘细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞的胞浆及残留的汗腺、毛囊、皮脂腺中表达。②瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织中nestin^＋表皮细胞、nestin^＋成纤维细胞和nestin^＋血管内皮细胞的数量明显高于正常皮肤和扁平瘢痕（P〈0．05），而正常皮肤与扁平瘢痕组织中nestin^＋细胞的表达差异无显著性（P〉0．05）。结论巢蛋白在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕表皮、成纤维细胞和血管内皮细胞中表达增高提示瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的过度增生可能与巢蛋白相关。     

异常瘢痕成纤维细胞在低血清及白介素1β作用下的细胞凋亡研究

目的 明确低血清及白介素1β（IL-1β）对瘢痕疙瘩,增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞诱导细胞凋亡的作用。方法 对6例瘢痕疙瘩、6例增生性瘢痕及6例正常皮肤标本采用细胞培养、免疫组织化学及凝胶电泳方法,通过检测Bax,Bcl-2蛋白及特异性DNA梯形条带,对不同成纤维细胞在低血清中及IL-1β作用后的细胞凋亡进行了研究。结果 （1）在低血清中,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的Gax/Bcl-2蛋白表达比值没有明显改变,但增生性瘢痕成纤维细胞出现程度较轻的细胞凋亡,而瘢痕疙瘩成纤维细胞未见明显细胞凋亡;正常皮肤成纤维细胞出现细胞凋亡,且Bax/Bcl-2比值升高,表明发生细胞凋亡,（2）IL-1β作用下,三者成纤维细胞均发生凋亡,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕凋亡比正常皮肤严重。但Bax/Bcl-2比值在瘢痕疙瘩升高,在正常皮肤降低。增生性瘢痕无明显变化。结论 不同的成纤维细胞特性存在差异。     

瘢痕成纤维细胞凋亡及p5 3基因的表达

目的探讨瘢痕成纤维细胞凋亡及p53基因表达及其意义.方法取正常皮肤和增生性瘢痕各8例、瘢痕疙瘩9例行成纤维细胞培养,应用流式细胞仪检测成纤维细胞凋亡,用p53cDNA探针对抽提的DNA点迹印迹杂交观察p53基因表达情况.结果 3组成纤维细胞凋亡细胞分别为(10.8±1.2)%,(10.6±1.8)%,(5.5±0.8)%,瘢痕疙瘩较正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞凋亡少,差异具有显著性意义(P＜0.05),且p53基因有明显的表达.结论瘢痕疙瘩成纤维细胞是具有肿瘤性质的一类细胞.     

异常瘢痕成纤维细胞在低血清及白介素1_β作用下的细胞凋亡研究

目的　明确低血清及白介素 1β(IL - 1β)对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞诱导细胞凋亡的作用。方法　对 6例瘢痕疙瘩、6例增生性瘢痕及 6例正常皮肤标本采用细胞培养、免疫组织化学及凝胶电泳方法 ,通过检测Bax、Bcl 2蛋白及特异性DNA梯形条带 ,对不同成纤维细胞在低血清中及IL 1β作用后的细胞凋亡进行了研究。结果　①在低血清中 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的Bax Bcl 2蛋白表达比值没有明显改变 ,但增生性瘢痕成纤维细胞出现程度较轻的细胞凋亡 ,而瘢痕疙瘩成纤维细胞未见明显细胞凋亡 ;正常皮肤成纤维细胞出现细胞凋亡 ,且Bax Bcl 2比值升高 ,表明发生细胞凋亡。②IL 1β作用下 ,三者成纤维细胞均发生凋亡 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕凋亡比正常皮肤严重 ,但Bax Bcl 2比值在瘢痕疙瘩升高 ,在正常皮肤降低 ,增生性瘢痕无明显变化。结论　不同的成纤维细胞特性存在差异。     

瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞分布特征及其增殖活性

目的：初步探讨瘢痕疙瘩周围皮肤中是否有异常成纤维细胞存在，以期为临床提供一个更为准确的治疗范围。方法：采用体外培养成纤维细胞技术比较瘢痕疙瘩及其周围皮肤与正常皮肤成纤维细胞的形态及分布特征，用MTT比色法比较其细胞增殖活性。结果：瘢痕疙瘩周围皮肤（距边缘0.5cm范围内）成纤维细胞形态与正常皮肤一致，但在其散在分布区域存在交错重叠生长现象，与瘢痕疙瘩相似。瘢痕疙瘩周围皮肤成纤维细胞增殖活性与瘢痕疙瘩中央部相似，介于瘢痕疙瘩边缘部与正常皮肤之间。结论：瘢痕疙瘩周围皮肤中存在生物活性异常的成纤维细胞。     

圆盘状受体在病理性瘢痕成纤维细胞中表达

目的探讨圆盘状受体(discoidin domain receptors,DDRs)在病理性瘢痕形成中的作用。方法取13例瘢痕疙瘩,10例增生性瘢痕,10例正常皮肤,体外培养成纤维细胞,经荧光定量PCR,定量检测成纤维细胞中DDR1、DDR2水平。结果瘢痕疙瘩、增生性瘢痕成纤维细胞中DDR1水平明显高于正常皮肤成纤维细胞(20.98对4.2,P<0.01;7.9对4.23,P<0.05),瘢痕疙瘩与增生性瘢痕成纤维细胞中DDR1相比,有统计学意义(20.98对7.9,P<0.01),DDR2在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞中差异无统计学意义(358,332对278,P>0.05)。结论荧光定量PCR可准确测定组织中DDR含量,病理性瘢痕成纤维细胞的细胞学行为与DDR有关。     

内质网分子伴侣GRP94、GRP78和XBP1在病理性瘢痕中的表达初探

目的：检测内质网应激反应的关键分子葡萄糖调节蛋白94（GRP94）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和X-盒结合蛋白1（XBP1）mRNA在病理性瘢痕的表达,探讨其基因表达及内质网应激反应与病理性瘢痕形成及转归的关系。方法：用RT-PCR法检测GRP94、GRP78和XBP1mRNA在：①瘢痕疙瘩（13例）、增生性瘢痕（17例）和正常皮肤（15例）组织以及体外培养的瘢痕疙瘩（5例）、增生性瘢痕（5例）和正常皮肤（6例）成纤维细胞中的表达;②体外培养瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞（各5例）中经0.1mg/ml氢化可的松作用前后的表达。结果：①GRP94、GRP78和XBP1mRNA在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤组织及其成纤维细胞中的表达均无显著性差异（P〉0.05）;②0.1mg/ml氢化可的松作用后,GRP94mRNA在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕来源的成纤维细胞中的表达量均显著下降,具有统计学意义（P〈0.01）;而GRP78和XBP1mRNA在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕来源的成纤维细胞中的表达量改变均无显著性差异（P〉0.05）。结论：内质网分子伴侣GRP94、GRP78和XBP1在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织及其成纤维细胞中基因转录与正常皮肤组织及其成纤维细胞中基因转录水平一致;GRP94mRNA的表达量显著下降可能是糖皮质激素治疗病理性瘢痕的机制之一。     

肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成中的机制

目的 探讨肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成机制中的作用。方法 对1998年～2000年门诊或住院的13例增生性瘢痕，14例瘢痕疙瘩及7例成熟瘢痕患者的相应组织，应用光镜、电镜及免疫组织化学染色，进行观察、检测。结果 增生性瘢痕的超微结构中均可见典型的肌成纤维细胞；免疫组织化学染色可见有不同程度表达的肌成纤维细胞。瘢痕疙瘩及成熟瘢痕的超微结构和免疫组织化学结果均未见肌成纤维细胞。结论 肌成纤维细胞的生物学行为可能与增生性瘢痕的形成及瘢痕畸形有关，并可用于增生性瘢痕与瘢痕疙瘩的鉴别。     

瘢痕成纤维细胞培养及其生物学行为的实验研究

为探讨不同瘢痕在体外培养情况下，其成纤维细胞生物学特性，切取正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩分别行体外成纤维细胞原代和传代培养，观察成纤维细胞形态学和生长动力学变化。结果发现，三类细胞的形态学方面没有明显差异，但瘢痕疙瘩成纤维细胞排列更加紊乱，极性消失，有交叉重叠现象。在接种相同的细胞密度和相同的培养条件下，其细胞生长率、分裂指数、克隆形成及ＤＮＡ含量无明显差别。认为，三类细胞在体外培养状态下，其形态学和生长动力学无显著差异，且具有相似的生物学特性。     

增殖瘢痕成纤维细胞接触后增殖及生物合成特性对异常瘢痕形成的机理

目的 为明确不同异常瘢痕成纤维细胞在体外完全接触后其增殖活性及生物全成功能的特性。方法 以瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤（各6例）为材料，通过细胞培养、免疫组织化学及分子生物学等方法，对不同成纤维细胞在细胞接触及未接触时通过检测增殖细胞核内抗原、P16、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及前胶原基因表达对成纤维细胞的增殖、抑制及生物合成进行了研究。结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞接触表现为细胞交叉重叠及较高的增殖活性及旺盛的生物合成功能，提示其失去了接触性抑制及密度抑制。皮肤成纤维细胞接触后则增殖及生物合成功能明显下降。增生性瘢痕成纤维细胞接触后表现为旺盛的生物合成功能，但其增殖活性处于瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞之间。结论 不同瘢痕成纤维细胞接触后增殖及生物合成的特性可能是形成不同瘢痕的机理之一。     

Fibronectin gene expression differs in normal and abnormal human wound healing

The overproduction of fibronectin and type I collagen in keloids and hypertrophic scars implicates altered regulation of extracellular matrix components as an important aspect of these wound healing pathologies. However, little is known about the similarities and differences in extracellular matrix gene expression during normal and abnormal wound healing. This study compared the content of fibronectin messenger RNA and rates of fibronectin protein biosynthesis in fibroblasts derived from normal skin, normal scar, keloid, and hypertrophic scar. Fibronectin expression was enhanced in cells from both normal and abnormal wounds relative to cells from quiescent normal skin. Matched pairs of normal and keloid fibroblasts from the same individuals were also compared, and three of the four pairs showed higher fibronectin expression by the keloid cells at the levels of messenger RNA and protein synthesis. This was consistent with previous studies showing elevated steady state content of fibronectin in keloid cells relative to normal cells from the same individual. Fibronectin messenger RNA and protein content in the tissues from which these cells were derived was examined by in situ hybridization and immunohistochemistry. These studies revealed that in vivo, the steady state content of fibronectin messenger RNA and protein was highest in abnormal wounds, less in most normal scars, and lowest in normal skin. Thus, fibroblasts from keloids and hypertrophic scars overexpressed fibronectin in vivo relative to normal skin and normal scar and retain this characteristic in vitro relative to normal skin. Although normal scars contained little fibronectin protein and messenger RNA, cultured fibroblasts derived from these scars had contents of fibronectin messenger RNA and rates of biosynthesis in vitro similar to those of keloid fibroblasts. This indicates that the fibronectin regulatory pathway in scar fibroblasts is influenced by the tissue environment. These results are discussed with respect to the relationship of fibronectin expression in keloids, hypertrophic scars, and normal wounds in human beings.     

TGF-beta2 activates proliferative scar fibroblasts

BACKGROUND. Cytokines, such as the transforming growth factor beta (TGF-beta) isoforms, have been linked to the formation of proliferative scars. This study examines the stimulating effects of exogenous TGF-beta2 on cultured keloid, burn hypertrophic scar, and normal skin fibroblasts and whether such effects can be suppressed with TGF-beta2 antibody. METHODS. In vitro, the fibroblast-populated collagen lattice (FPCL) is used in the evaluation of fibroblast activation by measuring contraction of the lattice over time. Primary cultures of fibroblasts were grown from keloids, burn hypertrophic scars, and normal skin using standard cell culture techniques. TGF-beta2 (10 ng/ml) was added to each of the three types of cell cultures and placed on prefabricated FPCLs. Each was tested against their normal control counterparts. TGF-beta2 antibody (100 ng/ml) was then placed on the TGF-beta2-treated FPCLs. All lattices were allowed to contract and areas were measured for 5 days. RESULTS. Compared to controls, keloid fibroblasts were most affected by the addition of exogenous TGF-beta2. Normal skin fibroblasts did not show a significant increase in contraction early on, yet a significant difference was seen as time progressed. The addition of TGF-beta2 antibody inhibited the function of keloid and burn hypertrophic scar fibroblasts. It also reversed the increased contraction of the TFG-beta2-treated proliferative scar fibroblasts. CONCLUSION. By utilizing an in vitro model, we have demonstrated that TGF-beta2 antibody reverses the increased contraction of FPCLs by proliferative scar fibroblasts treated with TGF-beta2. This points to a possible treatment modality in patients afflicted with this disfiguring problem.     

挛缩性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的测定

钙离子在细胞的生命活动中起着重要的作用，参与了细胞运动、肌肉收缩等过程。为了探讨钙离子浓度与瘢痕挛缩的关系，应用近年来发展起来的Ｆｕｒａ２／ＡＭ技术，采用图像分析处理系统，检测了培养的增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮肤的成纤维细胞内的钙离子浓度。结果表明，增生性瘢痕中钙离子浓度明显高于瘢痕疙瘩和正常皮肤，有显著性差异（Ｐ＜０．０１），而后二者则无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。认为，钙离子浓度的升高与瘢痕挛缩有着密切的关系     

TNFR1及Bcl-2在病理性瘢痕组织细胞凋亡中的表达及意义

目的　研究TNFR1和Bcl- 2在病理性瘢痕组织细胞中的表达及其对成纤维细胞凋亡与增殖的影响。方法　取手术切除的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩患者各 15例标本 ,正常皮肤 12例标本 ,应用免疫组织化学方法进行检测 ,分析TNFR1和Bcl- 2的表达及分布规律。结果　TNFR1在正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩中成纤维细胞的表达阳性率分别为 10 .70 %、3.2 3%和 7.72 % ,TNFR1在正常皮肤组中的阳性表达率明显高于增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组 ,而瘢痕疙瘩组阳性表达率却又明显高于增生性瘢痕组 ,三组间阳性表达率相互比较差异均有显著意义 (P <0 .0 1) ;Bcl- 2在增生性瘢痕组 (19.35 % )和瘢痕疙瘩组 (48.33% )的阳性表达率明显高于正常皮肤组 (4.0 7% ) ,三组间阳性表达率相互比较差异亦均有显著意义 (P <0 .0 1)。结论　Bcl- 2的持续过表达可能是瘢痕疙瘩呈瘤样增生的原因之一。介导的死亡受体凋亡通路受阻及TNFR1介导核转录因子NF -kB的激活 ,表明TNFR1对成纤维细胞的增殖与凋亡具有双重的调节作用。     

细胞信号传导在激素和干扰素诱导的增殖瘢痕成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞在激素和干扰素α-2b(IFNα-2b)作用后是否产生凋亡,以及相关细胞信号传导通路的激活或抑制是否一致.方法 对6例瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及6例皮肤标本,采用细胞培养、免疫组织化学、凝胶电泳及FACE ELISA方法通过检测Bax和Bcl-2蛋白表达、特异性DNA梯状条带以及激活(磷酸化)的ERK1/2和JNK的吸光度A值,对不同成纤维细胞在地塞米松(0.1 mg/ml)和干扰素α-2b(1000U/ml)作用后的细胞凋亡及相关细胞信号传导通路进行了研究.结果 地塞米松可通过激活ERK1/2和JNK细胞传导通路诱导三类不同来源成纤维细胞发生细胞凋亡;干扰素α-2b不能诱导这三类不同来源成纤维细胞发生明显细胞凋亡,且IFN α-2b抑制增殖瘢痕的ERK1/2通路,而对JNK通路无影响,其不引起正常皮肤成纤维细胞ERK1/2和JNK通路的变化.结论 激素类药物和干扰素α-2b对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的作用机制不同.     

miR-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原分泌及细胞增殖的影响

目的 探讨mi R-21(micro RNA-21)在瘢痕疙瘩中的表达及其生物学作用,为瘢痕疙瘩的防治提供新的思路。方法 收集临床患者正常皮肤及瘢痕疙瘩标本,部分进行组织学检测;部分进行体外细胞培养,Real-time PCR检测体外培养的正常皮肤来源和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞中,mi R-21、Smad7(mi R-21靶基因)、Col 1 A1、Col 3 A1(纤维化相关基因)的表达;应用mi RNA-21的模拟物和抑制剂,以Western-Blot和Real-time PCR分别检测Col 1 A1、Col 3 A1及Smad7的蛋白和核酸水平表达变化,结晶紫实验检测细胞增殖能力的变化。结果 瘢痕疙瘩标本组织学检测,其胶原的含量明显高于正常皮肤;瘢痕疙瘩成纤维细胞中mi R-21、Col 1 A1、Col 3 A1表达高于正常皮肤组织,Smad7表达低于正常皮肤组织;正常皮肤来源成纤维细胞转染mi R-21模拟物后,Smad7表达降低,纤维化相关基因的表达、细胞增殖能力增加;瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞转染mi R-21抑制剂后,Smad7表达增加,纤维化相关基因的表达、细胞增殖能力降低。结论 瘢痕疙瘩中mi R-21表达升高,促进了细胞外基质中纤维化相关胶原基因的表达,促进成纤维细胞的体外增殖能力,可能是导致瘢痕疙瘩形成的重要原因。