烫伤大鼠早期小肠内热休克蛋白70表达的研究

目的探索大鼠烫伤早期小肠内热休克蛋白70（HSP70）的表达规律及临床意义。方法将30只健康Wistar大鼠分为6组：烫伤后2h．8h、24h、3d．7d和正常对照组。各组大鼠分别取小肠标本,HE染色观察组织结构变化,免疫组化染色结合图像分析测定HSP70的表达。结果大鼠烫伤后各组小肠组织HSP70的表达均迅速增加,与正常对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;烫伤大鼠早期HSP70在小肠表达强弱与其病理损伤评分成正相关关系（rs=0．943／1．000,P〈0．05）。结论大鼠烫伤后组织器官内HSP70的表达情况在一定条件下可以作为判断其损伤程度的指标。     

热休克蛋白70在高脂血症大鼠肾脏中表达及意义

目的探讨高脂血症大鼠肾脏内热休克蛋白70(HSP70)的表达变化。方法 10只健康大鼠适应性喂养一周后随机分成正常组和高脂血症组。12周后取血,检测血脂;取肾组织分别进行HE染色和HSP70免疫组织化学染色,应用计算机图像分析系统检测HSP70的平均光密度变化。结果血脂检测结果显示:正常组TG、TC和HDL-C与高脂血症组存在差异。HE染色结果显示:高脂血症组部分肾小管上皮细胞破碎,核固缩,胞浆轻微肿胀变性,细胞排列紊乱。肾小囊周围有少量炎性细胞浸润,肾小囊内细胞有空泡形成。免疫组化结果显示:高脂血症组肾小管HSO70表达强于正常组。图像分析结果显示:与正常组HSP70的平均光密度值(0.1185±0.0078)比较,高脂血症组HSP70平均光密度值(0.3106±0.0484)增高,有统计学差异(P0.05)。结论高脂血症可导致大鼠肾组织内HSP70表达增高,高脂血症大鼠肾组织形态学损伤与HSP70含量的增高具有一致性。     

睡眠剥夺对HSP70表达及脑超微结构的影响

目的：观察睡眠剥夺（SD）后大鼠脑组织HSP70表达的变化及对超微结构的影响。方法：44只雄性SD大鼠随机分为11组，每组4只，免疫组织化学方法检测HSP70的表达，电镜观察海马超微结构的变化。结果：睡眠剥夺后12小时即可在大脑皮质及海马观察到HSP70阳性细胞，2—3天数量达到高峰，7天时明显下降。白天睡眠剥夺12小时（SDd12h）组HSP70阳性细胞数较夜晚睡眠剥夺12小时（SDn12h）组多（P〈0．05）。RS组大脑皮质HSP70阳性细胞数较白天睡眠剥夺1天（SDd1d）组减少（P〈0．05）。白天睡眠剥夺3天（SDd3d）海马出现超微结构改变，白天睡眠剥夺7天（SDd7d）后改变更加明显。结论：睡眠剥夺可影响大鼠脑组织HSP70表达及超微结构。     

银杏叶制剂对脑缺血再灌注后热休克蛋白、c-fos表达的影响

目的： 研究银杏叶制剂对大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白（HSP）、c-fos表达的影响，探讨其神经保护机制。 方法： 采用改良Longa法复制大鼠局灶脑缺血再灌注模型。56只实验大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组及银杏叶制剂预处理组。银杏组大鼠在实验前灌服银杏制剂2 mL，1日3次，连用5 d。应用HSP70及c-fos免疫组化染色、c-fos mRNA原位杂交、原位细胞凋亡及HE染色等方法观察缺血再灌注不同时点（1 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d）两者的变化，并对其阳性结果进行半定量分析。 结果： 银杏制剂预处理组各时段神经细胞缺血程度明显轻于未处理组、TUNEL阳性细胞数明显少于未处理组，HSP70及c-fos表达的阳性细胞数则明显多于未处理组（P<0.01）。脑缺血再灌注组1 h 时c-fos即有表达，6 h达高峰，后逐渐下降。再灌注6 h组HSP70在缺血侧皮质及基底节开始表达，24 h达高峰。再灌注6 h细胞凋亡最显著。 结论： 银杏制剂可能通过诱导HSP70及c-fos的表达，发挥其神经保护作用。     

内皮素-1在烫伤大鼠脑血管损伤中的表达

目的 探讨内皮素-1（ET-1）在烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化；应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达；应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1的表达；应用放射免疫分析检测48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 水平的变化。结果 烫伤大鼠脑基底动脉呈现病理学组织结构变化；烫伤后3h大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA表达较正常对照组开始升高，6h 达高峰；烫伤后6h大鼠脑基底动脉ET-1 表达较正常对照组增强，12h 达高峰；烫伤后各组大鼠脑基底动脉ET-1水平较正常对照组明显升高，6h 达高峰。结论 烫（烧）伤可诱发大鼠脑血管ET-1表达增加，增加表达的ET-1可能与烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的病理发生有关。     

增殖细胞核抗原在小鼠生后肾脏发育中的表达

目的：观察小鼠出生后肾脏发育过程中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达特征,探讨出生后小鼠肾脏发育过程中细胞增殖的规律。方法：应用免疫组织化学技术检测小鼠出生后1、3、7、14、21、28和70d肾脏PCNA的表达。结果：小鼠出生后1～70d,皮质中的生肾区、肾小体、肾小管、髓放线以及髓质中的肾小管和集合管PCNA阳性细胞的表达具有一定的规律,早期PCNA阳性表达丰富,随着肾脏发育逐渐成熟而表达减弱直至消失。在70d成年小鼠肾脏中,没有检测到PCNA阳性细胞。结论：出生后小鼠肾脏皮质中的生肾区、肾小体、肾小管、髓放线以及髓质中小管的细胞增殖规律是由高逐渐降低的,直至成年完全停止。     

肌肽对大鼠缺血-再灌注损伤后热休克蛋白70及炎性因子表达水平的影响

目的通过失血性休克大鼠血液回输后造成的缺血-再灌注损伤(IRI)模型,研究肌肽对IRI后丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度、热休克蛋白70(HSP70)及炎性因子表达水平的影响。方法27只Wistar大鼠随机分成3组制作IRI模型,大鼠失血至40mmHg→维持20min→放置1h→全血回输→维持3h→处死。大鼠处死后取血浆检测MDA浓度,取肝、脑、肺、心、肾、脾组织制作石蜡切片,通过免疫组化染色比较肝、脑、肺、心、肾、脾组织切片HSP70阳性细胞数;取肝组织提取RNA比较肝组织HSP70及炎性因子mRNA表达量。结果与再灌损伤组相比,肌肽治疗组肝、脑、肺、心、肾、脾组织切片HSP70阳性细胞数及HSPa5、HSPalamRNA表达量明显升高;MDA浓度及IL-6、TNF-α、NF-κB1、SCYA2、SCYA3mRNA表达量明显降低。结论肌肽可以抑制IRI后MDA的生成、从mRNA水平促进HSP70的表达、抑制炎性因子mRNA的表达。     

山莨菪碱对过度训练大鼠急性肾损伤的保护作用

目的 研究过度训练致急性肾损伤的特点及山莨菪碱的保护作用。方法 采用大鼠游泳至力竭建立过度训练致急性肾损伤模型。将大鼠随机分为7组，即安静对照组、力竭即刻组、力竭6h组、力竭12h组、力竭24h组、山莨菪碱6h组、山莨菪碱24h组，用全自动生化仪检测各组大鼠血Cr、Ur、CK及尿γ-GT的改变；光镜观察各组肾组织结构的改变：用TUNEL法检测各组大鼠肾组织细胞凋亡，采用图像分析仪计算肾组织细胞凋亡率。结果 力竭后大鼠站立不稳，对声光刺激反应淡漠。力竭后即刻组大鼠血Ur、CK明显升高（P〈0．05），力竭6h后血Ur、CK继续升高（P〈0．01），力竭12h后血ur、Cr、CK均有所下降，尿γ-GT明显升高（P〈0．01），力竭24h后血Ur、Cr、CK均恢复到正常，尿γ-GT继续升高（P〈0．01）。光镜下力竭后即刻组大鼠肾组织结构仅见部分肾小球囊及肾小管扩张．在皮髓质交界处及髓质小血管内可见大量红细胞堆积，力竭12h大鼠可见肾小管上皮细胞刷状缘不规整，部分脱落，肾小管管腔内可见颗粒管型和透明管型，在皮髓质交界处及髓质可见大量细胞核深染，有固缩现象；力竭后即刻、6、12、24h组大鼠肾组织凋亡细胞数逐渐增多，多位于皮髓质交界处及髓质的肾小管和集合管，各组大鼠尿γ-GT与肾组织细胞凋亡率有明显相关性（P〈0．01）。应用山莨菪碱后，力竭大鼠精神状态较好，游泳时间明显延长（P〈0．01）；力竭后6h及24h血Ur、Cr、CK及尿γ-GT均明显降低（P〈0．05），肾组织结构改善，肾组织凋亡细胞数明显减少。结论 过度训练可引起急性肾损伤，肾组织细胞捌亡是其损伤的主要表现形式：山莨菪碱可提高运动能力，同时可减少肾组织细胞凋亡，进而对肾损伤起到明显的保护作用。     

单侧输尿管梗阻大鼠模型中p38MAPK表达与细胞凋亡

目的： 探讨p38MAPK在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的表达及其在肾小管间质细胞凋亡和纤维化过程中可能发挥的作用。方法: 将25只Wistar大鼠中的18只行左侧输尿管结扎术，另外7只行假手术。分别于术后第3、7和14 d处死各组大鼠，行HE和Masson染色，观察肾脏病理变化；免疫组织化学方法测定增殖细胞核抗原（PCNA）表达；原位末端标记法（TUNEL）与DNA电泳观察肾小管间质细胞凋亡情况；Western blotting检测肾组织半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和p38丝裂素激活蛋白激酶（p38MAPK）及其磷酸化产物（p-p38MAPK）的表达。结果: 与假手术组比较，UUO模型组肾脏病理改变加重，TUNEL染色及DNA琼脂糖凝胶电泳可见大量的肾小管间质细胞凋亡，肾间质细胞PCNA表达明显增加，肾组织caspase-3的表达也显著增加（P<0.05）。p38MAPK蛋白水平在各组之间比较没有明显差别（P>0.05）。p-p38MAPK蛋白在正常肾脏有低水平表达，UUO模型组随着梗阻时间延长表达逐渐增多；第7 d达高峰，第14 d开始下降（P<0.05）。结论: p38MAPK信号通路可能参与了UUO致肾小管间质细胞凋亡和肾间质纤维化过程。     

大鼠严重烧伤后脑内胶质原纤维酸性蛋白表达变化及意义

目的:探讨严重烫伤早期脑内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达变化与血脑屏障通透性变化的关系.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、假烫组、烫伤组,其中烫伤组又分为烫伤后3、 6、 12、 24、 48 h等5组,建立30% Ⅲ度烫伤模型.应用免疫组织化学方法检测脑内GFAP表达变化,用化学法测量脑组织内伊文蓝的含量及脑百分含水量,并分析它们之间的关系.结果:烫伤3～6 h GFAP阳性细胞数目明显增多,染色增强,平均积分光密度较假烫组明显升高,烫伤后12～24 h阳性细胞数达高峰,48 h脑组织内阳性细胞数与对照组比较仍明显增多.严重烫伤后脑百分含水量及脑内伊文蓝含量增高,以6～12 h最为显著.结论:严重烫伤后GFAP表达上升可能与血脑屏障通透性增高有关.     

大鼠局灶性脑梗死后细胞凋亡及热休克蛋白70表达的变化

目的 探讨大鼠局灶性脑梗死后热休克蛋白70(HSP70)及细胞凋亡的变化。方法采用光化学法诱导制作大鼠局灶性脑梗死模型，冰冻切片行HSP70免疫组化染色，并用TdT-介导duTP-生物缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞。结果免疫组化显示对照组和假手术组动物无HSP70免疫反应；局灶性脑梗死组12h即有：HSP70的表达，48h时HSP70表达至高峰，阳性反应局限于半暗带。TUNEL结果显示，对照组和假手术动物无凋亡细胞；局灶性脑梗死组6h时在半暗区凋亡细胞出现，3d达高峰。结论局灶性脑梗死可诱导HSP70的表达、神经细胞凋亡，两者的分布一致，但HSP70的表达高峰明显早于细胞凋亡。     

Stress Response of Pancreatic Islets from Diabetes Prone BB Rats of Different Age

Protective and/or repair mechanisms are thought to be activated in pancreatic beta cells in response to injury during insulitis. Manifestation of type-1 diabetes may depend on an imbalance between beta cell damage and repair. To prove this hypothesis, the ability of collagenase-isolated islets to respond to heat stress depending on the age of BB rats was investigated. The islets were exposed either to 44°C (HS) or 37°C (control) for 30 min and then kept at 37°C for 5 h. Immediately and 5 h after heat shock, insulin secretion in response to 20 mmol/l glucose and total protein synthesis of heat-exposed islets were significantly diminished as compared with controls. The islet proteins were separated by SDS-PAGE followed by immunoblotting. Islets from BB rats at an age of 6-90 days responded to heat shock with the expression of major heat shock protein 70 (HSP 70). Islets from 3-day old rats, however, did not respond with induction of HSP 70. In contrast we could detect inducible HSP 70 in islets from 3-day old diabetes-resistant LEW rats. In islets from 90-day old BB rats we observed a decreased amount of HSP 70 compared with islets from 9-, 12-, 30- and 60-day old animals. There was also a higher extent of HSP 70 to observe in islets from 90-day old LEW rats as compared with 90-day old BB rats. Differences in HSP 70 expression between islets of 3-day old BB and LEW rats and other age groups of BB rats might represent distinct stages of maturation of islets whereas diminished expression of HSP 70 in islets of 90-day old BB rats at the age of high probability of developing diabetes might result from reduced ability to induce protective mechanisms.     

大鼠局灶性脑缺血-再灌注时ε型蛋白激酶与热休克蛋白70表达变化及相关性

目的探讨大鼠脑缺血—再灌注时ε型蛋白激酶C（PKCε）与热休克蛋白70（HSP70）表达间关系。方法60只大鼠，随机分成缺血-再灌注组及假手术组，根据再灌注时间的不同，分别分为再灌注1、6、12、24、48、72h亚组，应用蛋白印迹法观察缺血皮层、基底节区各时间点胞浆内PKCε及HSP70及胞膜PKCε的表达。结果脑缺血后再灌注1h胞浆内PKCε含量开始下降，至再灌注24h达最低点，持续至再灌注72h。而膜内PKCε变化趋势与此相反，含量逐渐上升，于再灌注24h达到最高。再灌注1hHSP70有少量表达，再灌注6h即增高，至再灌注48h达最高，再灌注72h稍有减弱。假手术组各时间点均低含量表达。脑缺血-再灌注时HSP70与胞膜PKCε表达呈正相关，但无差异性，（r=0．55，P〉0．05）；HSPT0与胞浆内PKCε表达间呈显著负相关（r=-0．672，P〈0．05）。结论脑缺血再灌注时缺血皮层、基底节区PKCε发生了膜转位激活现象，同时有HSP70的表达，两者间呈一定的相关性。     

Influence of L-arginine on expression of HSP70 and p-53 proteins – early biomarkers of cellular danger in renal tubular cells. Immunohistochemical assessment

Introduction

The aim of the present study was to investigate expression of HSP70 and p-53 proteins as mechanisms of protection of the renal tubular epithelial cells from l-arginine that induces cellular stress.

Material and methods

The study material consisted of 16 white Wistar female rats. The rats were divided into 2 equal groups. The rats in the experimental group received L-arginine 40 mg/kg body weight per capita every other day for 2 weeks and were decapitated after 3 weeks of the experiment. After decapitation, specimens from the kidney were collected, fixed in 10% formalin, and then embedded in paraffin blocks. Proteins HSP70 and p-53 on slides were detected using the standard three-step immunohistochemical method.

Results

The quantitative evaluation of HSP70 and p-53 expression showed that the area occupied with positive HSP70 and p-53 reaction in the rat renal tubular cells of the experimental group (p-53: 2835.44 ±254.72 µm²; HSP70: 24111.42 ±4290.88 µm²) was more statistically significant than the control group (p-53: 1882.05 ±466.43 µm²; HSP70: 11388.63 ±1455.24 µm²). In the present study, the dose of L-arginine was similar to the one that was used in the gestosis treatment of pregnant women.

Conclusions

The renal epithelial cells responded to L-arginine therapy, increasing expression of HSP70 and p-53 proteins. The study showed that L-arginine as a donor of exogenous nitric oxide has a disruptive effect on the renal tubular cells of rat kidneys. Thus it is going to be a subject of the author''s future investigations.     

pEGFP-HSP70重组质粒的构建及其在大鼠神经干细胞中的表达*

 目的：构建重组pEGFP-HSP70质粒并观察其在神经干细胞中的表达。方法：采用RT-PCR方法从SD胎鼠肝组织中获取总RNA,扩增出热休克蛋白70（HSP70）基因的全序列cDNA,并克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2上, 经EcoRⅠ、BamHⅠ酶切及测序分析对重组质粒pEGFP-HSP70进行鉴定。采用Nucleofector转染技术将重组质粒pEGFP-HSP70转染至胎鼠神经干细胞中。结果：(1) 胎鼠HSP70 cDNA序列被正确地克隆到真核表达载体pEGFP-C2中, 成功构建重组大鼠pEGFP-HSP70质粒。荧光强度检测空质粒转染组（pEGFP-C2组）、pEGFP-HSP70组与对照组相比显著升高（P<0.01）;pEGFP-HSP70组内24 h的荧光强度与7 d（P<0.05）、14 d（P<0.05）和21 d（P<0.01）相比降低明显。(2) 转染后HSP70的表达在1 d（P<0.05）、7 d（P<0.01）和14 d（P<0.01）与对照组相比均明显升高。结论：神经干细胞可直接作为基因靶细胞, 能有效地表达重组质粒pEGFP-HSP70,且HSP70在神经干细胞中的表达与转染时间密切相关。     

谷氨酰胺对脂多糖血症大鼠热休克蛋白70和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的：观察谷氨酰胺对脂多糖血症大鼠热休克蛋白70和肿瘤坏死因子-α的影响。 方法: 将大鼠分为脂多糖组（LPS）、谷氨酰胺组（Gln）和对照组(C)。各组动物均在给予LPS前（对照组在给予生理盐水）和后2、4、6 h采血。用放射免疫法测定血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。于术后6 h处死，取肺、肝、肠组织，采用SABC方法，免疫组织化学染色进行HSP70检测，并HE染色，观察组织变化。 结果： 注射LPS后2 h，LPS组血浆TNF-α表达显著升高（P<0.01），Gln可显著抑制其升高（P<0.01）。而注射LPS后4、6 h，两组血浆TNF-α浓度没有明显差异。LPS组肺、肝、肠组织的HSP70灰度值分别为（107.94±10.96）、（120.04±5.73）和（123.31±14.81）。Gln组的HSP70灰度值显著降低，分别为（89.71±9.64）、（89.38±12.03）和（107.61±14.02）（均P<0.05）。病理学观察显示, Gln组肺、肝、肠组织损伤程度比LPS组轻。 结论： 谷氨酰胺可提高热休克蛋白70的表达，对脂多糖血症大鼠有防治作用。     

Effects of minocycline on the expression of NGF and HSP70 and its neuroprotection role following intracerebral hemorrhage in rats

The present study was aimed to investigate the effects of minocycline (MC) on the expression of nerve growth factor (NGF) and heat shock protein 70 (HSP70) following intracerebral hemorrhage (ICH) in rats,and explore the neuroprotective function of MC.Seventy-eight male SD rats were randomly assigned to three groups:the ICH control group (n=36),ICH intervention group (n=36) and sham operation group (n=6).The ICH control group and ICH intervention group were subdivided into 6 subgroups at 1,2,4,5,7 and 14 d after ICH with 6 rats in each subgroup.Type IV collagenase was injected into the basal nuclei to establish the ICH model.All rats showed symptoms of the nervous system after the model was established,and the sympotsm in the ICH control group were more serious than the ICH intervention group.The number of NGF-positive cells and HSP70-positive cells in the ICH intervention group was higher than that of the ICH control group.MC administration by intraperitoneal injection can increase the expression of NGF and HSP70.MC may inhibit the activation of microglia,the inflammatory reaction and factors,matrix metalloproteinases and apoptosis,thus protecting neurons.The change of the expression of NGF and HSP70 may be involved in the pathway of neuroprotection by MC.     

食管癌组织中HSP70的基因表达及其多肽复合物的分离

目的研究食管癌组织中HSP70的表达情况,探索HSP70-多肽复合物分离的可行性途径。方法采用人HSP70基因探针P17与人食管癌组织中提取的RNA进行Northern杂交;用亲和柱层析法分离HSP70-多肽复合物。结果癌组织提取物出现了比正常组织较强的杂交信号,从食管癌组织中提取蛋白质,经一系列层析柱(Con-Asepharose、ADP-agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱),分离到HSP70-多肽复合物。结论HSP70基因在食管癌组织中的高表达,为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了可行性方法。