人牙周膜成纤维细胞的体外培养

目的：建立人牙周膜成纤维细胞体外培养的方法。方法：采用组织块贴附法原代培养人牙周膜成纤维细胞并传代。结果：牙周膜成纤维细胞体外培养成功率为20％。5代后细胞生长旺盛。经免疫组织化学SABC法证实为来源于中胚层的成纤维细胞。结论：采用组织块贴附法培养原代人牙周膜成纤维细胞。胰酶消化传代后，生长状况良好，可作为人牙周膜成纤维细胞的实验模型。     

人循环成纤维细胞的体外培养和初步鉴定

自1994年Bucala等\[1\]首次确认了外周血中循环成纤维细胞这一白细胞亚群的存在后,其便逐渐成为了创伤及纤维化病变领域的研究热点。循环成纤维细胞以同时表达部分造血来源细胞（CD34、CD45RO、CD11等）和间质细胞分子（CollagenⅠ、Ⅲ等）标记为特征,可继续分化为肌成纤维细胞。此外,循环成纤维细胞还能够提呈抗原,启动炎症反应;分泌转化生长因子（TGF）-β等纤维形成因子,促进定植于组织中的成纤维细胞增殖、转化及迁移\[2-3\];分泌基质金属蛋白酶（MMPs）和血管内皮生长因子（VEGF）等血管形成因子,促进内皮细胞增殖、迁移,加快新生血管的形成\[4\]。通过以上多种作用参与创伤修复、脏器纤维化及血栓形成等病理过程。目前国内尚鲜有此方面研究。     

人皮肤成纤维细胞的分离和体外培养

基因治疗方式可分为间接体内法 (ｅｘｖｉｖｏ)和直接体内法(ｉｎｖｉｖｏ)。离体基因治疗方法亦称间接法是将患者的某种组织或细胞取出体外 ,在短期培养的条件下转入目的基因 ,进行筛选和富集整合有外源基因的阳性细胞 ,然后再回输到患者体内。该方法具有靶细胞明确 ,转染效率高的优点 ,因此在基因治疗中被较多采用。目前 ,国际上已有 10余种疾病的基因治疗研究采用皮肤成纤维细胞为靶细胞 ,并且越来越多的研究已进入临床Ⅰ期试验。本实验探讨了人皮肤成纤维细胞的分离及体外培养方法 ,观察总结了体外培养的生长特征 ,以获得在体外稳定生长的正常皮肤成纤维细胞 ,从而为自体皮肤成纤维细胞基因治疗的研究提供充足、可     

积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用

目的 探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。方法 采用光镜、电镜、∧3H－TdR、∧3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合成和胶原蛋白的合成。结果 积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构,布且能抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。结论 积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作用,其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。     

体外培养大鼠肾脏组织骨髓来源的成纤维细胞

目的：观察大鼠肾脏是否有骨髓来源的成纤维细胞。方法：以大鼠肾组织为材料,采用胰酶消化,分离、培养细胞,倒置显微镜观察,同时进行Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）和CD34、CD45分子免疫荧光双染色鉴定。结果：培养的细胞呈梭形、长条形,免疫荧光双染色鉴定表达CollagenⅠ和CD34、CD45分子。结论：通过体外培养证实大鼠肾脏存在骨髓来源的成纤维细胞。     

儿童外周血成纤维细胞集落培养方法初探

取健康儿童无菌外周血，用１．１１９ｇ／ｍｌ淋巴细胞分离液分离细胞，制成单细胞悬液进行培养，培养开始时加入１，２５双羟基维生素Ｄ２和碱性成纤维细胞生长因子，刺激促进成纤维前体细胞分化增殖，形成成纤维集落，建立了培养方法，为儿童血循环中存间充质干细胞的假说提供了初步实验依据，并为儿童骨骼，肌肉营养代谢性疾病和造血系统疾病研究了提供了新的途径。     

人肝癌细胞和成纤维细胞共育时超微结构的改变

采用定位培养技术 ,将人肝癌细胞和成纤维细胞有序地接种在同一容器内培养 ,电镜下观察 2种细胞接触时细胞切面超微结构的变化。结果 :与肝癌细胞伪足接触的成纤维细胞膜下出现多个吞饮泡 ,使骨架纤维下移 ,局部断裂。 2种细胞的线粒体肿胀 ,溶酶体增多 ,胞质中出现许多泡状结构。提示 ,在肝癌细胞侵袭成纤维细胞早期、成纤维细胞膜尚未受到破坏时 ,细胞内的结构已发生了改变。     

成纤维细胞超微结构的研究

本文用实验组织学的方法系统地观察了成纤维细胞的六种基本细胞形态的超微结构。发现成胶原细胞有前、中、后期三个功能阶段,中期细胞又有合成期和分泌期之分;破纤维细胞可区分出吞噬型和溶酶体型两种亚型;纤维细胞亦存在静止型和衰老型两种亚型。成胶原细胞和破纤维细胞分别是胶原合成和胶原降解的主要细胞。本文还证实了成纤维细胞来源于毛细血管旁未分化间充质细胞,少分化成纤维细胞是其他形态的成纤维细胞的始祖。成纤维细胞各种成熟的细胞形态可以互相转化,在功能上互相协调。本文提出了“成纤维细胞系统”的概念,该系统包括上述成纤维细胞的六种基本细胞形态,系统的主要机能是合成胶原蛋白和其他细胞间质,降解胶原和使结缔组织(包括疤痕组织)收缩。     

表皮细胞体外培养过程中生物学特性改变的观察

目的 通过观察表皮细胞体外增殖与老化规律，为选择合适的纽织工程化皮肤种子细胞提供依据。方法 取正常年轻人表皮细胞进行传代培养，以不同代龄细胞为实验对象，采用形态学观察、群体倍增时间(PDT)、免疫细胞化学及β-半乳糖苷酶染色等一系列方法，检测表皮细胞老化规律。结果 体外单层培养9代，P2的PDT最短，前5代增殖能力较强，P5以后PDT明显延长，P8细胞不再增殖；随着细胞的连续传代培养，SA-β-Gal表达呈现从弱(在年轻细胞中占9％)到强(在老化细胞中占65％)的趋势。结论 建立了体外培养正常人表皮细臆的衰老模型，第1-5代表皮细胞(拱者年龄16～18岁)可作为构建组织工程化皮肤的种子细胞。     

成纤维细胞体外培养过程中β-半乳糖苷酶的变化

目的 观察正常人成纤维细胞老化过程中β-半乳糖苷酶的变化规律。方法 取正常人二倍体成纤维细胞进行传代培养，以不同代次的细胞为实验对象，通过细胞生长曲线、群体倍增时间和β-半乳糖苷酶染色等一系列检测方法，对成纤维细胞老化过程进行了观察。结果 随着成纤维细胞的连续传代培养，SA-β-Gal表达呈现从弱(在年轻细胞中占4％)到强(在老化细胞中占60％)的趋势、结论 为建立成纤维细胞衰老模型提供了实验依据。     

正常人成纤维细胞老化过程中活性氧水平的变化

目的研究正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平的变化. 方法取常规体外培养的原代人成纤维细胞,按不同传代数(PD22-24和PD50-52)分为两组,代表老化过程中两个阶段(早期和中-晚期),用流式细胞仪检测罗丹明123显示细胞活性氧水平,同时用β-半乳糖苷酶组化染色,形态观察衰老细胞,用群体倍增时间和流式细胞周期分析显示细胞增殖情况. 结果中-晚期细胞中衰老细胞增多,活性氧水平增高,未出现增殖阻滞. 结论正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平呈升高趋势.     

正常人成纤维细胞老化过程中活性氧水平的变化

目的 研究正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平的变化。方法 取常规体外培养的原代人成纤维细胞,按不同传代数（PD22－24和PD50－52）分为两组,代表老化过程中两个阶段（早期和中－晚期）,用流式细胞仪检测罗丹明123显示细胞活性氧水平,同时用β-半乳糖苷酶组化染色,形态观察衰老细胞,用群体倍增时间和流式细胞周期分析显示细胞增殖情况。结果 中－晚期细胞中衰老细胞增多,活性氧水平增高,未出现增殖阻滞。结论 正常人成纤维细胞在老化过程中细胞活性氧水平呈升高趋势。     

人皮肤角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养和鉴定的实验研究

目的建立人皮肤角质形成细胞(keratinocyte)成纤维细胞(fibmblast)原代培养和体外连续培养的模型，为组织工程化皮肤提供充足的种子细胞。方法以5-15岁小儿包皮为材料，胰蛋白酶消化后，分离两种细胞，分别用无血清表皮培养液(K-SFM)、DMEM(10％血清)培养，对年轻细胞(2-4代角质形成细胞，10-40代成纤维细胞)均用倒置显微镜进行大体观察，透射电镜进行超微结构观察，并拍照记录，同时进行免疫细胞化学鉴定。结果消化后得到大量细胞，在培养2周后开始传代，光镜下角质形成细胞呈典型铺路石状，透射电镜下呈多边形，符合角质形成细胞特征；成纤维细胞光镜下呈梭形，放射状或漩涡状排列，电镜证实是成纤维细胞。免疫细胞化学检测：角质形成细胞鼠抗人角蛋白(AE1／AE3)单克隆抗体(mouse anti-cytokeratin)染色阳性；成纤维细胞鼠抗人Ⅰ型，Ⅲ型胶原单克隆抗体(mouse anti-TypeⅠ，ⅢCollagen)和鼠抗人波形蛋白单克隆抗体(mouse anti-vim-entin)染色阳性。结论用简便易行，经济实用的方法在体外对角质形成细胞和成纤维细胞进行分离、培养和传代，能同时得到足够数量的组织工程皮肤的种子细胞。     

成纤维细胞三维培养物的超微结构

目的：研究成纤维细胞在疤痕形成中的作用。方法：采用可渗性胶原膜（Ｃｅｌｇｅｎ○Ｒ）作为底物,改进成纤维细胞的三维培养,６周培养后的培养物用醋酸铀和硝酸铅双重染色后用电镜进行观察。结果：发现培养物不仅有多层化结构、细胞外间质和肌成纤维细胞,而且培养物底层有肌成纤维细胞和大量胶原。结论：本文所揭示的成纤维细胞培养模型有利于创伤愈合,尤其是增生性疤痕和疤痕疙瘩的研究     

地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响。方法：采用体外培养人眼球后成纤维细胞（ＨＲＯＦｂ）,用ＭＴＴ比色法测定ＨＲＯＦｂ增殖程度,并观察了不同浓度地塞米松、氨甲喋呤单独及联合使用对ＨＲＯＦｂ生长、增殖的影响。结果和结论：ＭＴＴ比色法能精确反映ＨＲＯＦｂ的增殖程度,所测定吸收值与细胞数目成正相关（ｒ＝０．９９６,Ｐ＜０．００１）,地塞米松、氨甲喋呤均可抑制ＨＲＯＦｂ的增殖,且随剂     

白黎芦醇对人皮肤成纤维细胞及兔耳增生性瘢痕的影响

目的了解白黎芦醇对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及兔耳增生性瘢痕的影响。方法用FCM法检测及建立兔耳增生性瘢痕动物模型，用不同浓度的白黎芦醇作用不同时间后，成纤维细胞的增殖指数及兔耳瘢痕增生指数进行了研究。结果①随着白黎芦醇浓度增大和作用时间延长而人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖指数呈下降趋势。②白黎芦醇在150μmol/L、300μmol/L、400μmol/L时能明显降低瘢痕增生指数，分别为对照组的78．8％、61．2％、47．0％。结论①白黎芦醇降低成纤维细胞增殖指数是其抑制瘢痕增生的途径之一，且呈剂量时间依赖性。②随着白黎芦醇浓度增大，兔耳瘢痕增生指数下降，与瘢痕的体外实验相吻合。     

人子宫旁韧带成纤维细胞原代培养的初步研究

目的:初步探索和建立人子宫旁韧带成纤维细胞原代培养的方法,为盆腔器官脱垂的基础研究提供成熟的体外人盆底成纤维细胞系。方法:临床搜集因盆腔器官脱垂(POP)或非POP的良性妇科疾病而行子宫切除患者的子宫旁韧带(包括主韧带和骶韧带),组织剪碎后采用改良的Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化法进行原代培养,待细胞长至贴满培养瓶底面80%以上时,消化传代,对所培养的成纤维细胞进行形态学观察及免疫荧光鉴定其来源。结果:原代培养第3-4天开始,可见有单个成纤维细胞迁出、生长,7-10d时可见少部分细胞逐渐贴壁形成较小的成纤维细胞团,第25天左右多个细胞团生长中心爬出的成纤维细胞互相连接聚集成片,铺满培养瓶底;采用免疫组化染色进行细胞鉴定,细胞波形蛋白表达阳性,角蛋白表达阴性,证实其为成纤维细胞。结论:本研究确立了体外人子宫旁韧带成纤维细胞原代培养,为后续研究POP发病机制提供成熟的体外宫旁韧带成纤维细胞。