角膜移植患者外周血T细胞及其亚群CD69分子表达研究

目的观察角膜移植患者外周血T细胞CD69分子的表达及意义。方法应用流式细胞仪于术前第1天,术后第1,2,3,8周检测23例角膜移植患者外周血T细胞CD69表达变化。结果角膜高血管化植床组患者术后外周血T细胞CD69分子表达比角膜无血管化植床组患者明显增高,也比术前明显增高(P<0.01),6例发生排斥反应的患者均在高血管化植床组,早期外周血中以CD4 细胞为主。结论外周血T细胞CD69表达与角膜移植排斥反应密切相关,测定外周血中CD69分子表达可更早预见排斥反应的发生。     

FK506和环孢霉素A在兔角膜缘移植术后抑制免疫排斥反应的疗效比较

目的研究FK506和环孢霉素A对同种异体兔角膜缘移植术后免疫排斥反应的抑制效应。方法将30只有角膜缘干细胞缺陷症的新西兰白兔随机分成3组：FK506治疗组、环孢霉素A治疗组和对照组，同种异体角膜缘移植术后分别给予0．5％FK506滴眼液、1％环孢霉素A滴眼液和生理盐水点眼，用药5周。术后持续观察11周，以角膜缘植片水肿、混浊程度、排斥反应发生时间和角膜新生血管作为眼表评估指标。结果观察期内，FK506组在抑制新生血管指数方面低于环孢霉素A组（P〈0．05），而两组在上皮排斥反应发生时间、移植排斥指数方面无显著性差异（P〉0．05）。结论同种异体角膜缘移植术后早期应用0．5％FK506和1％的环孢霉素A滴眼液均可有效抑制免疫排斥反应，在抑制角膜新生血管发生方面，FK506的作用强于环孢霉素A。     

The kinetic level of CD4+CD25+ regulatory T cells in peripheral blood of rat with renal allograft

目的 监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化,研究其在预测排斥反应和免疫耐受中的价值.方法 流式细胞术监测CD4+CD25+ 调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化.结果 CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植急性排斥反应过程中明显低于同系对照组,而CsA组CD4+CD25+ 调节性T细胞明显高于同系对照组.结论 CD4+CD25+ 调节性T细胞在抑制肾脏移植排斥反应中发挥重要作用,动态监测外周血中CD4+CD25+ 调节性T细胞的水平可预测和判断急性排斥反应的发生,了解肾脏移植后受体和移植肾之间的免疫反应程度或耐受状态.     

外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞在大鼠肾移植中的动态变化及应用研究

目的监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化,研究其在预测排斥反应和免疫耐受中的价值。方法流式细胞术监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化。结果CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植急性排斥反应过程中明显低于同系对照组,而CsA组CD4+CD25+调节性T细胞明显高于同系对照组。结论 CD4+CD25+调节性T细胞在抑制肾脏移植排斥反应中发挥重要作用,动态监测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的水平可预测和判断急性排斥反应的发生,了解肾脏移植后受体和移植肾之间的免疫反应程度或耐受状态。     

转化生长因子-β1治疗免疫性角膜病的初步探讨

目的 观察TGF-β1局部应用治疗同种异体角膜移植术后免疫排斥反应等免疫性角膜病的临床效果,为免疫性角膜病的预防和治疗寻找有效的防治手段.方法 局部应用TGF-β1治疗免疫性角膜病患者35例(35眼).其中穿透性角膜移植术后免疫排斥反应12例,蚕蚀性角膜溃疡8例,单疱病毒性角膜基质炎晚期病变15例.全部患者均局部应用TGF-β1滴眼液,3次/日.结果 穿透性角膜移植术后免疫排斥反应组,12例植片全部透明.治疗前后外周血T淋巴细胞亚群检测均在正常范围;蚕蚀性角膜溃疡8例全部治愈;单疱病毒性角膜基质炎晚期病变15例全部治愈,治疗前后外周血T淋巴细胞亚群检测均在正常范围.结论 TGF-β1具有抑制同种异体角膜移植免疫排斥反应、延长角膜植片存活的作用;能够阻止蚕蚀性角膜溃疡的破坏过程,改善角膜表面的愈合和再上皮化;可明显提高单疱病毒性角膜基质炎晚期病变的治愈率,缩短病程.     

心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4+ CD25+Treg与FOXP3的变化

目的行Wistar(供体)到SD(受体)大鼠的腹部异位心脏移植建立自发免疫耐受模型,探讨CD4 CD25 Treg与FOXP3在同种异体心脏移植大鼠自发免疫耐受形成过程中的作用。方法以光镜、电镜观测移植心肌的病变特点、以流式细胞术检测外周血CD4 CD25 T淋巴细胞数量变化、RT-PCR检测其功能基因FOXP3的表达情况。结果CD4 CD25 T淋巴细胞在对照组中无明显变化,在心脏移植组(实验组)中CD4 CD25 T淋巴细胞术后第1天开始上升,第3天[(6.07±1.55)]达峰值,第5天[(5.44±1.47)]、第7天[(3.35±0.46)]逐渐下降,术后第3,5天明显高于对照组(P<0.05);FOXP3在对照组中无明显表达,在实验组中术后第3、5天表达明显,第7天表达下降。移植心脏的心肌病理改变在第1,3天逐渐加重,第5天时病变最重,第7天减轻,第7天移植心脏排斥反应减轻提示移植心脏产生免疫耐受。结论心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4 CD25 T与FOXP3均上调。且基本与移植心脏排斥反应呈负相关,提示CD4 CD25 T细胞的数量与功能变化可能参与自发免疫耐受的形成。     

SD大鼠同种异体结膜移植的免疫组织化学

用免疫组织化学方法观察ＳＤ大鼠同种异体结膜移植术后结膜植片的临床和局部免疫情况。结果显示：实验组动物结膜移植片的ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭΦ、ＢＣ在术后第１天与术后４周出现２个峰值，ＤＣ在术后４周也明显升高，至１２周时以上各指标恢复到正常结膜水平。第１天的结果应为同种异体结膜移植术后发生的创伤性反应所致。第４周的结果揭示受体动物受异体抗原刺激后，有发生免疫排斥反应的可能性。１２周后各指标恢复正常，说明机体通过某种机制抑制了免疫排斥反应的发生。     

心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4+CD25+Treg与FOXP3的变化及意义

目的 行Wistar（供体）到SD（受体）大鼠的腹部异位心脏移植建立自发免疫耐受模型,探讨CD4＋CD25＋Treg与FOXP3在同种异体心脏移植大鼠自发免疫耐受形成过程中的作用。方法 以光镜、电镜观测移植心肌的病变特点、以流式细胞术检测外周血CD4＋CD25＋T淋巴细胞数量变化、RT－PCR检测其功能基因FOXP3的表达情况。结果 CD4＋CD25＋T淋巴细胞在对照组中无明显变化,在心脏移植组（实验组）中CD4＋CD25＋T淋巴细胞术后第1天开始上升,第3天（6.07±1.55）达峰值,第5天（5.44±1.47）、7天（3.35±0.46）逐渐下降,术后3、5天明显高于对照组(P<0.05);FOXP3在对照组中无明显表达,在实验组中术后第3、5天表达明显,第7天表达下降。移植心脏的心肌病理改变在第1、3天逐渐加重,第5天时病变最重,第7天减轻,第7天移植心脏排斥反应减轻提示移植心脏产生免疫耐受。结论 心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4＋CD25＋T与FOXP3均上调。且基本与移植心脏排斥反应呈负相关,提示CD4＋CD25＋T细胞的数量与功能变化可能参与自发免疫耐受的形成。     

SD大鼠同种异体结膜移植的免疫组织化学

用免疫组织化学方法观察ＳＤ大鼠同种异体结膜移植术后结膜植片的临床和局部免疫情况，结果显示：实验组动物结膜移植片的ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８，ＭΦ，ＢＣ在术后第１天与术后４周出现２个峰值，ＤＣ在术后４周也明显升高，至１２周时以上各指标恢复到正常结膜水平，第１天的结果应力同种异体结膜移植术后发生的制伤性反应所致，第４周的结果揭示受体动物受异体的抗原刺激后，有发生免疫排斥反应的可能性，１２周后各指标恢复正常     

同种异体手移植患者术后粘附分子的变化

目的探讨同种异体手移植患者术后外周血粘附分子的动态变化及意义.方法用流式细胞仪对3例同种异体手移植患者术前和术后1～180d外周血粘附分子水平进行动态观察.结果患者外周血粘附分子CD4、CD8、CD28、CD54、CD11a的水平于术后第1天开始降低,至术后第6天为最低.术后第7天始,上述粘附分子水平逐渐回升,至180d,CD4、CD28、CD54水平仍低于术前水平,CD11a于术后20d回升到术前水平,而CD8则持续升高,于术后30d,明显超过术前水平(P＜0.05).结论免疫抑制剂对粘附分子具有明显抑制作用.同种异体手移植术后患者无明显排斥反应与临床观察相符,提示粘附分子可作为排斥反应的监测指标.     

白细胞介素-1受体拮抗剂抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

OBJECTIVE: To observe the roles of subconjunctival administration of interleukin-1 receptor antagonist (IL-1ra) promoting corneal graft survival in rat models of high-risk penetrating keratoplasty. METHODS: Corneal vascularization was induced in 40 Sprague-Dawley rats (40 eyes) by passing 10-0 silk suture through the corneal stroma, and 30 of these rats received corneal grafts from Wistar rats to establish high-risk keratoplasty models and were divided into 3 groups to receive their respective treatment with IL-1ra eye drops (50 microg/ml), 1% CsA eye drops, administered 3 times a day, or no treatment. All the rats were treated by Tobra Dex eye drops and Tropicamid eye drops, 3 times a day for 14 consecutive days after the operation. During the 30-day observation, the survival of the grafts was recorded, and all the grafts were evaluated for signs of rejection. RESULTS: The mean survival times (MST) of the grafts of the treatment groups with IL-1ra and CsA were 12.00+/-1.50 d and 10.44+/-1.13 d respectively, significantly longer than that in the untreated model group (8.00+/-1.25 d, t=0.00, P<0.01), and the difference in the MST between the 2 treatment groups was also significant (t=0.00, P<0.01). CONCLUSION: Treatment with IL-1ra may significantly prolong high-risk corneal allograft survival.     

Immunological studies on the cellular phenotype involved in corneal allograft rejection

ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｅｌｕｌａｒｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｏｒｎｅａｌａｌｏｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎｕｓｉｎｇｗｈｏｌｅｍｏｕｎｔｓａｎａｌｙｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｏｒｎｅａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ...     

Interleukin-1 receptor antagonist eye drops promoting high-risk corneal allografts survival in rats

Background Immune rejection is the main reason of grafts failure after corneal transplantation. This study was to determine whether interlerkin-1 receptor antagonist (IL-1ra) eye drops could prolong corneal allografts survival in high-risk corneal orthotopic allotransplantation in rat model and to study the effect of IL-1ra on the expression of CD1-positive cells in the grafts. Methods For all experiments, the Sprague-Dawley (SD) rats’ corneas were transplanted into Wistar rats’ eyes. High-risk transplants included those that had been sutured into Wistar recipient beds with corneal neovascularization induced by placement of three interrupted sutures in the host cornea 7 days earlier. All the animals were divided, in a masked fashion, into three treatment groups and one control group. Each treatment group received IL-1ra eye drops of different concentrations (1 mg/ml, 3 mg/ml, or 5 mg/ml, respectively) four times a day for 30 days. The control group received 0.9% normal saline (NS) eye drops in the same way as the treatment groups. All allografts were evaluated for signs of rejection from the first day after surgery. Ten days later, corneal specimens were processed to examine the expression of CD1-positive cells and histopathological changes. Results The survival time of the transplants was 5.80±0.79, 5.89±1.05, 6.78±0.83, and 9.00±2.36 days respectively in the control or three treatment groups. Compared with the control group, 1 mg/ml IL-1ra eye drop did not prolong the survival time of the allografts (t=0.210, P&gt;0.05). However, 3 mg/ml and 5 mg/ml IL-1ra eye drop did prolong the survival time of the grafts (t≥2.627, P&lt;0.05), with the latter showing more obvious effect. Immunohistochemical examinations showed a significant decrease in inflammatory cell and CD1-positive cell infiltration in IL-1ra treated groups compared with the control group. Conclusions IL-1ra can promote corneal allograft survival in a dose-dependant manner by reducing the infiltration of CD1-positive cells in high-risk corneal transplantation.     

白细胞介素-1受体拮抗剂抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的 观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠高危角膜移植后免疫排斥反应、促进植片存活的作用。方法 对40只SD大鼠(40眼)用缝线法诱导角膜新生血管增生,选取其中的30只大鼠(30眼)并随机分为实验Ⅰ、Ⅱ组及对照组Ⅲ组,每组均接受同种异系(Wistar大鼠)供体角膜,行穿透性角膜移植术。实验组于术后第1日起分别滴用50 μg/ml的IL-1ra滴眼液(Ⅰ组)和1%的CsA滴眼液(Ⅱ组),每日3次。受试动物术后均每日滴用典必殊滴眼液及托品卡胺滴眼液3次,连续14 d。术后比较各组大鼠免疫排斥反应发生的时间,对角膜植片存活情况进行评分,观察其效果。结果 两实验组角膜植片平均存活时间分别为(12.00±1.50) d和(10.44±1.13) d,明显高于对照组(8.00±1.25) d,差异有显著性(P<0 01);两实验组间比较,差异亦有显著性(P<0 01)。结论 IL-1ra可抑制高危角膜移植后的免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间。     

基质细胞衍生因子-1与趋化因子受体4在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）与基质细胞衍生因子-1（CXCR4）在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后 免疫排斥反应中的作用。方法取15只Wistar大鼠作为正常对照组;取22只Wistar大鼠行自体角膜移植术作为自体组;取22只 SD大鼠与44只Wistar大鼠,以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体行穿透性角膜移植,术后随机抽取22只归入典必殊组,术眼滴 典必殊眼液（每日2次）,剩余22只归入异体组,术眼滴同等量生理盐水,共一个月。参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评 估;分别于术后第5、9天取术眼角膜植片,行组织病理学观察、免疫组化检查、实时荧光定量PCR检测。结果自体组不发生排 斥反应,典必殊组角膜存活时间为24±0.32 d,远高于异体组10±0.36 d（P<0.001）。组织病理学检查发现异体组角膜有大量炎 性细胞浸润以及新生血管形成。SDF-1和CXCR4 mRNA在异体组角膜组织中表达水平明显升高（第5天P<0.001,第9天P< 0.01）,典必殊组较异体组明显降低。免疫组化检查发现SDF-1/CXCR4主要表达在角膜植片的上皮层与基质层,异体组角膜组 织SDF-1和CXCR4含量明显升高。结论SDF-1/CXCR4可能参与了大鼠角膜移植术后早期的排斥反应,其机制可能为SDF-1 特异性诱导CXCR4+细胞成熟和朝着排斥部位趋化,并促进角膜新生血管形成。     

免疫毒素IL-2-PE66抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应的研究

目的 观察新型免疫抑制毒素白细胞介素-2-绿脓杆菌外毒素(interleukin-2-pseudomonas exotoxin66,IL-2-PE66)对小鼠角膜移植排斥反应的免疫抑制疗效.方法 建立小鼠同种异体穿透性角膜移植模型.36只鼠随机分为IL-2-PE66治疗组及生理盐水对照组,临床观察两组角膜植片免疫排斥反应发生的时间和程度,并在术前及术后第10、15、25、35天分别取出鼠眼行组织病理学检查,同时收集外周血行T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞集落形成数分析.结果 治疗组与对照组植片存活时间分别为(31.2±2.9)d和(15.8±2.1)d,术后第15天治疗组与对照组T淋巴细胞亚群CD_4~+/CD_8~+比率分别为(1.26±0.23)和(2.01±0.23),T淋巴细胞集落形成数分别为(201±18.2)和(286±16.8). 结论 IL-2-PE66可推迟角膜移植排斥反应的发生时间;有明显减少外周血中辅助T淋巴细胞百分率的作用;并能减弱小鼠外周血T淋巴细胞集落形成能力.提示IL-2-PE66是一种高特异性的免疫抑制剂.

Abstract：

Objective To study the immunosuppressive effect of the interleukin-2-pseudomonas exotoxin 66(IL-2-PE66) on murine corneal allograft rejection. Methods Thirty-six recipient female BALB/c mice received corneal allografts from C57BL/6 mice and were divided randomly into treatment and control groups. The condition of the grafts was observed twice a week. On days 10, 15, 25 and 35 after the transplantation, the operated eyes were removed for pathological examinations. Peripheral blood samples were also collected for analysis of T cell subsets and T lymphocyte colony forming unit (T-CFU) assay. Results The survival time of corneal allograft averaged 15.8±2.1 days in the control group and 31.2±2.9 days in the treatment group. The CD_4~+/CD_4~+ of the T cell subsets 15 days after the operation was 1.26±0.23 in the treatment group and 2.01 ±0.23 in the control group, with T-CFU of 201 ±18.2 and 286+16.8, respectively. Conclusion IL-2-PE66 can delay the development of comeal graft rejection, significantly reduce the percentage of T helper cells, and weaken the aggregation of the peripheral T cells.     

CD28~+T淋巴细胞的表达与心脏移植急性排斥反应的相关性研究

目的:检测CD28+T淋巴细胞在心脏移植急性排斥反应(AR)期的表达变化情况,探讨该变化与AR相关性。方法:用流式细胞仪检测正常大鼠组(T0组)、手术创伤组(T1组)、同系心脏移植组(SD→SD)(T2组)、同种心脏移植组(Wistar→SD)(T3组)CD28+T淋巴细胞的表达百分率;并对心脏移植组AR进行分级;同时分析CD28+T与AR的相关关系。结果:T1组与T0组CD28+T淋巴细胞的表达无显著差异;T2组总体CD28+T淋巴细胞的表达水平较T0组、T1组显著增加(P<0.05)。T3组总体CD28+T淋巴细胞的表达水平较T0组、T1组增加更显著(P<0.01)。同种心脏移植组AR显著高于同系心脏移植组。T2、T3心脏移植组CD28+T与AR严重程度成显著正相关。结论:心脏移植AR严重程度与CD28+T表达增高成正相关,CD28+T表达增高预示急性排斥反应的发生。     

角膜缘上皮联合羊膜移植治疗眼表疾病的临床研究

目的探讨角膜缘上皮联合羊膜移植治疗眼表疾病的临床效果.方法对本院复发性翼状胬肉6例(6眼),睑球粘连3例(3眼),陈旧性碱烧伤3例(4眼),角膜缘外伤2例(2眼),角巩膜大面积皮样囊肿1例(1眼),采用甘油保存的人羊膜联合自体或异体角膜缘移植进行治疗.结果复发性翼状胬肉6例(6眼),术后随访4月～2年,上皮愈合稳定,角膜光滑透明,无1例复发.视力提高或保持不变.陈旧性碱烧伤3例(4眼),分别随访3、8、12个月,眼表面保持安静,角膜中央无血管生长,周边部有少许的新生血管;1例手术失败,出现广泛的角膜血管生长,基质溶解.1例角巩膜大面积皮样囊肿,术后角膜半透明,外观正常.视力除1例失败外,视力均有不同程度提高,从术前光感～0.05提高至0.02～0 8不等.结论保存的人羊膜无抗原性,具有抗炎和抑制新生血管及纤维化、阻止结膜源组织再侵入的作用.用角膜缘上皮联合羊膜移植是一种有效的治疗眼表疾病的手段.     

环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响

【目的】 通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达?心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响?【方法】 SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受体?实验分为心脏移植对照组和环孢素A干预+心脏移植组实验组两组?在移植前及移植后24 h?3 d?7 d?10 d和12 d时间点免疫荧光测定淋巴细胞在心肌组织中浸润能力?实时定量PCR检测淋巴细胞编码基因CD4?CD8 和酪氨酸激酶P59 mRNA表达水平?心肌组织病理学检查判断排斥反应程度?【结果】 ①心脏移植后24 h内,外周血淋巴细胞基因的转录与表达为一过性降低;②心肌组织CD4+?CD8+ 淋巴细胞浸润和Ⅱ级排斥反应病理改变,主要出现于心脏移植后的d3 ~ d7;③环孢素A不能有效抑制移植后3 d内心肌组织CD4+?CD8+淋巴细胞浸润程度的快速增加,但可明显降低移植后d3 ~ d7的心肌组织CD4+ 淋巴细胞的浸润程度;④环孢素A不能完全阻断淋巴细胞P59基因的表达;⑤环孢素A不能有效抑制淋巴细胞CD4基因正调表达,但可抑制CD8基因的转录?【结论】环孢素A的移植排斥反应的抑制作用在大鼠移植后d3 ~ d7?淋巴细胞基因表达?心肌组织淋巴细胞浸润与排斥反应病理改变有关?这将有助于同种移植病人环孢素A的临床应用?