HPLC非手性柱—手性柱联用技术和直接进样法在体内手性药物分…

本文对体内手性药物分析中的ＨＰＬＣ非手性柱－手性联联用技术和直接样法两方面进行综述，主要报道了非手性柱－手性柱切换联用模式及其流动相匹配，峰展宽现象和非手性柱－手性直接相连模式，以及叙述了柱切换直接进样，特殊手性固定相直接进样，固相衍生化直接要进样。     

一类新的手性柱:糖肽抗生素手性柱

介绍了糖肽抗生素手性柱的折分机制并对此类手性柱在手性分析应用中具有的多模式操作，互补拆分原则和通用性强等特点进行评述。     

手性流动相HPLC法拆分氟比洛芬对映体研究

目的:建立氟比洛芬手性药物的高效液相色谱拆分方法.方法:利用C18柱,以β-环糊精及其衍生物作为手性流动相添加剂,调节有机修饰剂比例和添加不同量的峰型修饰剂对氟比洛芬对映体进行拆分.结果:采用单6-L-脯氨酸-β-环糊精作为手性流动相添加剂,利用C18柱可直接拆分S,R-氟比洛芬对映体.最佳色谱分离条件为:流动相为1.4％的6 -L - proline -β - CD甲醇溶液(w/v):pH为4.0,体积分数1.0％的三乙胺水溶液(V/V) =25:75(V/V);柱温t=25℃;流速1.0ml/min;进样量10ul,检测波长254nm.S,R-氟比洛芬对映体获得了良好分离,分离度为1.65.结论:建立的手性流动相添加剂法能有效拆分氟比洛芬对映体.     

HPLC法测定左舒必利的手性杂质

目的:建立左舒必利原料手性杂质测定方法并检测手性杂质的含量。方法:采用正相高效液相色谱法,使用DAICEL OJ-H手性柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以正己烷-乙醇-二乙胺(90∶10∶0.1)为流动相,流速1.0 m L·min-1,检测波长230nm,柱温30℃,进样量20μL。结果:在本文色谱条件下舒必利的分离度为2.1,线性范围为1.648~16.48μg·m L-1,检测限(S/N=3)为0.099μg·m L-1,定量限(S/N=10)为0.198μg·m L-1,采用该方法检测3批原料手性杂质的结果为0.47%~0.50%。结论:本法经方法学验证可用于左舒必利中手性杂质含量的分析测定。     

维拉帕米对映体在纤维素氨基甲酸酯类手性柱上的拆分特性

目的研究维拉帕米对映体在氨基甲酸酯类(ChiralcelOJ)手性柱上的拆分特性和规律。方法色谱柱为ChiralcelOJ手性柱(250mm×4.6mm,10μm),流动相为正己烷-无水乙醇-三乙胺,紫外检测波长为236nm。用溶质计量置换保留模型考察固定相和流动相中置换剂强度对拆分的影响,同时考察三乙胺及温度对保留与拆分的影响。结果维拉帕米对映体在选定色谱条件下均得到了基线分离,置换剂无水乙醇、三乙胺及温度对各对映体拆分有不同的影响,分离度在三乙胺浓度为0.6%、柱温为15℃时出现极大值。结论溶质计量置换保留模型的计量置换参数lgI和Z值,可以分别表征ChiralcelOJ柱的拆分能力和各对映体空间效应,适当增加三乙胺浓度和适当提高柱温可以改善和提高拆分效果。     

HPLC万古霉素手性柱和手性流动相添加剂法分离酮洛芬对映体

目的以万古霉素为手性选择子,建立酮洛芬对映体以手性柱法和流动相添加剂法进行手性分析的方法。方法考察万古霉素用量、有机改性剂用量及缓冲液pH值对酮洛芬对映体手性拆分的影响,并进行了定量分析的方法验证。结果两种拆分方法都使酮洛芬对映体达到了基线分离,都适合于酮洛芬对映体的定性和定量分析。结论所建立的两种方法均可用于S-(+)-酮洛芬的光学纯度检测。     

手性配体高效液相色谱拆分肌肽对映体

目的建立手性配体高效液相色谱法对肌肽对映体进行拆分。方法在Phenomenex chirex 3126手性色谱柱上,以硫酸铜为手性配体流动相,考察了进样量、流动相有机添加剂、流速、柱温、Cu2+浓度等因素下肌肽色谱拆分行为和热力学特性,并初步探讨了溶质在配体手性柱上的识别机制。结果检测波长在254nm,流动相为2mmol.L 1CuSO4水溶液-乙腈(96∶4),流速1.0mL.min-1可实现肌肽对映体的基线分离。其在色谱柱分离的焓变差值ΔΔHo与熵变差值ΔΔSo对手性识别都有贡献,拆分过程为焓控过程。其中L-肌肽与手性配体及Cu2+形成的络合物呈现出不稳定性,与典型的构像异构色谱行为一致。结论肌肽对映体可采用手性配体色谱法实现基线分离,其中L-肌肽形成的配位体具不稳定性。     

多糖聚合物手性固定相高效液相色谱法拆分二苯甲醇类手性化合物

目的：对6个氯取代的二苯甲醇类手性化合物建立HPLC分析方法。对拆分反应进行监测,并用于拆分产物光学纯度的分析测定。方法：在正相高效液相模式下,采用Chiralcel OD—H和Chiralcel OB-H两种纤维素类手性柱以及Chiralpak AD—H直链淀粉类手性柱,以正己烷-异丙醇或正己烷-异丙醇-三氟乙酸溶剂系统为流动相,流速：0．5ml·min^-1,检测波长：210nm。结果：采用上述方法,基线拆分了合成手性中枢性镇咳药左旋盐酸氯哌啶[（-）cloperastine hydrochloride]的主要原料4-氯二苯甲醇等6个氯取代的二苯甲醇类手性化合物,建立了快速的手性高效液相色谱法。结论：本方法简便准确,可对手性合成反应进行监测和中间体质量控制;同时．对4-氯二苯甲醇和3-氟二苯甲醇的高效液相手性分析方法进行了对比研究。     

柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法拆分布洛芬对映异构体

目的：建立一种柱前手性衍生化-反相高效液相色谱紫外法检测布洛芬的异构体。方法：以N′N-羰基二咪唑（CDI）作为活化剂活化布洛芬的羧基基团,再以（R）-（+）-1-（1-萘基）乙胺（R-NEA）作为手性衍生化试剂进行反应。选用Kromasil C18色谱柱,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,以乙腈-0.05%磷酸（68∶32）为流动相,检测波长225 nm。结果：布洛芬的非对映异构体色谱峰的保留时间分别为25.6 min和27.9 min。结论：本方法操作简单,条件温和,衍生化产物稳定,且衍生化试剂价格便宜,更准确地实现了对布洛芬对映异构体的分离检测。     

在卵类粘蛋白手性柱上拆分药物对映体西替利嗪的研究

目的:建立利用卵类粘蛋白手性固定相拆分西替利嗪对映异构体的反相高效液相色谱分析方法,研究色谱条件对拆分结果的影响和该蛋白柱的部分拆分机理。方法:西替利嗪溶解在流动相中配成浓度为22μg·mL-1的溶液,用Ultron Es-OVM柱(5μm,150 mm×4.6 mm),流动相为磷酸二氢钾缓冲溶液与有机改进剂(甲醇或乙醇或乙腈)的混合溶液,紫外器波长230 nm,柱温25℃。结果:首次利用卵类粘蛋白手性柱成功拆分了西替利嗪药物对映体,最佳分离条件:乙腈-20 mmol·L-1磷酸二氢钾(pH 6.20,用磷酸和氢氧化钾溶液调节)(18:82),流速0.5 mL·min-1,出峰时间在20 min内,分离度达到1.68。结论:本方法简单、快速,无需柱前衍生,可方便用来拆分和检测西替利嗪对映体。     

用液相色谱法分析生物体液中的手性药物

用液相色谱法直接分析生物体液中的手性药物对映体，往往由于谱带增宽和手性固定相被污染等问题而缺乏应有的灵敏度。本文论述了基于非手性聚合衍生化试剂的衍生化方案，对手性药物生物分析的优点，也提出了基于非手性聚合试剂对药物对映体进行直接分析的方法。对外消旋化和态分离等问题，以及在线法的简便，快速，高分辨和高灵敏度等优点进行了评价。     

高效液相色谱法测定度鲁特韦的手性杂质

目的建立高效液相色谱法测定度鲁特韦的手性杂质。方法色谱柱为DAICEL OJ-RH(150 mm×4.6 mm,5.0 μm),0.2%磷酸水溶液为流动相A,甲醇为流动相B,乙腈为流动相C,梯度洗脱,柱温40℃,流速0.4 mL·min-~1,进样量10 μL,检测波长254 nm。结果度鲁特韦与各手性杂质之间的分离度均>1.5;手性杂质A～C的检测限和定量限分别在25～30 ng·mL-~1和83～100 ng·mL-~1;度鲁特韦和手性杂质A～C在相应质量浓度范围内与峰面积线性关系良好,r均>0.999;手性杂质A～C平均加样回收率均在81.38%～100.7%,RSD<5.0%。1批制剂手性纯度100.0%;3批原料药手性纯度结果均为99.98%,手性杂质A、B均未检出,手性杂质C均为0.02%。结论该方法专属性强,重复性好,准确度高,可作为度鲁特韦手性杂质的控制方法。     

高效液相色谱中的蛋白质类手性固定相

在高效液相色谱中以蛋白质作手性固定相进行药物拆分已被广泛采用,因为这类手性固定相能提供多种作用和识别位点。本文综述了蛋白质类手性固定相的性质及其在药物拆分中的应用,重点讨论了各种影响药物拆分的因素,如固定相状况、流动相的pH值、有机改性剂、色谱柱温度等。     

色谱法拆分手性药物在我国的应用

目的:为药物研发及质量控制提供参考。方法:根据文献,综述了色谱法拆分手性药物的主要分类、方法及其应用。结果与结论:色谱法拆分药物对映体一般分为直接法和间接法。主要方法包括薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、超临界流体色谱(SFC)和毛细管电泳(CE)法等。能用于TLC法的手性载体很少;HPLC法是目前的常用方法,但手性固定相的成本太高,手性流动相添加剂使色谱条件复杂化;GC法对药物的沸点要求严格,且非对映体制备困难,应用有限;SFC法正处于迅速发展阶段,具有检测方式和固定相种类多样等特点,将在手性药物分离、分析等方面发挥重大作用;CE法在手性拆分中显示了兼有高压电泳的高速、高分辨率及HPLC的高效率的优点,但适用的手性固定相不多。随着各种分离原理、方法的深入研究以及色谱联用技术的不断完善,色谱法在手性药物拆分中将会发挥越来越重要的作用。     

手性拆分柱法用于佐匹克隆对映体的拆分

目的:建立佐匹克隆对映体的反相高效液相色谱拆分方法。方法:使用Ch iralcel OD手性柱分离佐匹克隆对映体,考查了不同流动相组分、流动相中乙腈含量、pH值、柱温和流速对手性拆分结果的影响,优化了佐匹克隆手性拆分的液相色谱条件。结果:找到了反相高效液相色谱拆分佐匹克隆对映体的最佳色谱条件。结论:本法可用于测定合成右旋佐匹克隆过程中对映体过量(ee)和右旋佐匹克隆中手性杂质的含量[1]。     

聚合物手性固定相的研究新进展

聚多糖，聚硅氧烷类等作为聚合物手性固定相具有较高的手性拆分能力和良好的耐用性，而这些性质与聚合物结构密切相关。本文旨在通过对这种结构的研究，有助于研制出适合药物对映体分析的高效，价廉，适用范围的广的手性色谱柱。     

β-环糊精手性流动相添加剂法拆分佐匹克隆对映体

目的:建立HPLC手性流动相添加剂法拆分佐匹克隆对映体。方法:选用ZorbaxRx-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为0.12mol/L磷酸二氢钠缓冲液甲醇(7525,V/V),其中含9.0mmol/L的β-环糊精,pH为6.0,流速为0.8ml/min;检测波长305nm;进样量20μl;柱温为20℃。结果:建立了β-环糊精手性流动相添加剂法拆分佐匹克隆对映体的方法。结论:该方法可以达到基线分离,且操作简便,比手性柱法更经济。     

α1—酸糖蛋白手性柱拆分泮托拉唑对映体

目的:建立泮托拉唑对映体拆分和对映体光学纯度测定方法。方法:用α1-酸糖蛋白手性固定相,考察了缓冲液的种类和pH、有机改性剂的种类和比例、流速及柱温对泮托拉唑对映体拆分的影响。采用Chiral-AGP柱(150 mm×4.6 mm,5μm,配有手性AGP预柱),以10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 5.5)-乙腈(93:7)为流动相,在流速为0.9 mL·min-1,检测波长为290 nm,柱温为20℃的条件下拆分泮托拉唑对映体。结果:用α1-酸糖蛋白手性固定相能完全分离泮托拉唑对映体,分离度达1.77,并测定了泮托拉唑对映体过量百分率。结论:流动相pH和有机改性剂含量是影响对映体分离的重要因素,可以以调节流速和柱温来提高柱效、改善分离。     

柱切换在线除盐DGLC-MS联用鉴定克林霉素磷酸酯中杂质

目的 利用柱切换在线除盐DGLC-MS联用鉴定克林霉素磷酸酯中的杂质.方法 采用Thermo Ultimate 3000二维色谱DGLC(双三元泵液相)系统串联TSQ Vantage MS正负离子同时扫描测定:左泵,一维分析柱Acclaim C18柱(150mm×4.6mm,5μm),含非挥发性盐流动相,流速1.1mL/min;右泵,二维分析柱Acclaim PA2柱(3.0mm×50mm,3μm),含挥发性盐溶液流动相,流速0.3mL/mim柱温:30℃;进样量:20μL;检测波长:210nm.结果 在不改变克林霉素磷酸酯国家药典方法的前提下,通过柱切换在线除盐技术使得分析条件能够兼容质谱并鉴定出克林霉素磷酸酯中9种杂质,其中一种新杂质分子量为504.结论 该方法巧妙地解决了液相条件和液质联用仪不兼容的难题,并具有稳定性、重现性、可追溯性的优点,值得推广应用.     

柱前衍生-手性高效液相色谱法测定R-3-奎宁环醇的光学纯度

目的 建立准确、可靠的测定R-3-奎宁环醇光学纯度的柱前衍生-手性高效液相色谱法。方法 采用苯甲酰氯对(R,S)-3-奎宁环醇进行柱前衍生化,以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)Daicel ChiralpakAD-H手性色谱柱为手性固定相,流动相为正己烷∶乙醇∶二乙胺(80∶20∶0.1,V/V/V),流速为1.0 m L/min,检测波长为232 nm,柱温为25℃。结果 (R,S)-3-奎宁环醇衍生物纯度不低于98%,对映异构体的衍生产物在上述色谱条件下能达到良好分离(R≥4.0)。结论 该方法准确、可靠,可用于测定R-3-奎宁环醇的光学纯度。